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ABCE1特异性siRNA慢病毒载体的构建与鉴定

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摘要 目的构建并鉴定ABCE1基因短发夹状干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,以便进一步研究ABCE1的功能。方法针对已经筛选确定的ABCE1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/GFP载体连接、转化,产生pLV-sh-ABCE1慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pLV-sh-ABCE1、pHelper 1.0和pHelper 2.0 3种质粒共转染包装细胞人胚肾293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果PCR和测序证实,成功构建ABCE1shRNA的慢病毒载体pLV-sh-ABCE1。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为2×108TU/ML。结论成功构建ABCE1基因shRNA慢病毒载体,为应用RNAi研究ABCE1功能奠定基础。
作者 任翼 刘永煜 郭微 田大力
机构地区 辽宁省肿瘤医院胸外科 中国医科大学第四临床学院胸外科
出处 《辽宁医学杂志》 2010年第2期64-66,共3页 Medical Journal of Liaoning
关键词 ABCE1 慢病毒载体 RNAI
分类号 R346 [医药卫生—基础医学]
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共引文献4

辽宁医学杂志
2010年 第2期

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