摘要
为了建立一种便捷、灵敏的犬流感病毒(CIV)检测技术,本研究根据CIV相对保守的M片段设计3对特异性引物,建立CIV的RT-LAMP检测方法,对反应体系中的MgSO4、Betaine、Bst DNA PoLymerase、dNTP、引物浓度等分别进行了优化,并进行敏感性和特异性试验。结果表明:所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用45min即可得到其特有的阶梯状条带,而且对犬细小病毒、犬瘟病毒和犬副流感病毒的扩增结果均为阴性。该方法对CIV RNA的最小检测限为0.1pg,灵敏性高于一步RT-PCR方法。RT-LAMP和普通RT-PCR方法检测临床样品的符合率为93.02%。该方法为犬流感病毒的临床检测提供了一种简便、实用的方法,为基层检疫提供了方便。
In this paper, a simple, quick RT-LAMP method was established to detect canine influenza virus （C1V） using specific outer, inner and loop primers targeted the M gene conserved regions of CIV. The results showed that the RT-LAMP method developed in this experiment with a 0.1 pg detection limit of CIV RNA, was more sensitive than RT-PCR method and of high specificity, which could be easily adapted for detection of CIV.
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期36-39,共4页
Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine
基金
国家自然科学基金(30972233)
广东省科技计划项目(2008A060202017
2009B060300024)
广东省自然科学基金重点项目(8251064201000008)
教育部博士点基金(20094404110017)
关键词
犬流感病毒(CIV)
逆转录环介导等温扩增
快速检测
canine influenza virus（CIV）
reverse transcriptase loop-mediated isothermal amplification （RT-LAMP）
rapid detection
