摘要
目的:探讨TTF-1相关蛋白26(TAP26)磷酸化位点对SP-C基因表达调控的影响。方法:采用定点诱变PCR技术产生TAP26的4个磷酸化位点突变体TAP26(S48→A48)、TAP26(S66→A66)、TAP26(T167S168→V167A168)、TAP26(T219→V219);通过体外细胞共转染后荧光素酶报告基因活性值检测技术研究野生型TAP26及其4个突变体质粒对SP-C基因启动子表达活性的影响。结果:荧光素酶报告基因活性值检测结果显示,分别与共转染野生型TAP26和其它3个突变体质粒相比较,共转染TAP26(S66→A66)突变体质粒的荧光素酶活性值最低,经统计分析差异均有统计学意义(P<0.05,n=9)。结论:TAP26磷酸化对促进SP-C基因表达具有非常重要的作用,TAP-26的S66位点则是与TTF-1相互作用从而共同调控SP-C基因表达的一个关键PKC磷酸化位点。
Objective： To explore the effect of phospholylation of thyroid transcription factor - 1 （ TTF - 1 ） associated protein 26 （TAP26） on regulation of surfaetant protein - C （ SP - C） gene expression. Methods： Site -directed mutagenesis PCR was conducted to eliminate four phosphorylation sites of TAP26 respectively, then four mutant plasmids [ TAP26 （S^48→A^48 ） , TAP26 （S^66→A^66） , TAP26 （T^167 S^168→V^167A^168） , TAP26 （T^219→V^219）] were produced; cotransfeetion study and luciferase activity measurement were used to observe the effect of wild TAP26 and four mutant plasmids on SP - C gene expression promotor. Results： Lueiferase activity measurement results showed： the lueiferase activity value of TAP26 （S^66→A^66） was the lowest （P 〈 0. 05, n = 9） . Conclusion： Phosphorylation of TAP26 can promote SP - C gene expression greatly, and the phosphorylation site S66 of TAP26 is the key point to regulate SP - C gene expression, which interacts with TTF - 1.
出处
《中国妇幼保健》
CAS
北大核心
2009年第31期4443-4446,共4页
Maternal and Child Health Care of China
基金
湖北省自然科学基金资助项目〔2008CDB141〕
关键词
TAP26
TTF-1
SP-C基因启动子
定点诱变PCR
荧光素酶活性检测
Thyroid transcription factor - 1 associated protein 26
Thyroid transcription factor - 1
Surfaetant protein - C gene promoter
Site- directed mutagenesis PCR
Luciferase activity measurement
