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基于高通量测序研究青藏高原茶卡盐湖微生物多样性 被引量:22
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作者 张欣 刘静 +3 位作者 沈国平 龙启福 韩睿 朱德锐 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1834-1846,共13页
【目的】茶卡盐湖(Chaka Salt Lake,CSL)是青藏高原有名的天然结晶盐湖,具有独特的石盐盐湖矿床,盛产青盐。盐湖卤水环境中存在丰富的嗜盐菌资源和潜在的新种,细菌和古菌的群落结构特征和物种多样性尚不明确。【方法】采用Illumina高通... 【目的】茶卡盐湖(Chaka Salt Lake,CSL)是青藏高原有名的天然结晶盐湖,具有独特的石盐盐湖矿床,盛产青盐。盐湖卤水环境中存在丰富的嗜盐菌资源和潜在的新种,细菌和古菌的群落结构特征和物种多样性尚不明确。【方法】采用Illumina高通量测序平台对茶卡盐湖水样和底泥混合物中的细菌和古菌群落进行16S r RNA基因(V3-V5区)高通量测序,检测4个样本的群落结构差异和微生物多样性。【结果】获得细菌和古菌总有效序列分别为117 192和110 571条。结果分析表明细菌和古菌的物种注释(Operational taxonomic unit,OTU)数目分别为421和317,获得分类地位明确的细菌种类为14门28纲170属,古菌为5门4纲34属。细菌的优势类群是厚壁菌门(Firmicutes),所占比例为68.37%,其次为变形菌门Proteobacteria(20.49%);优势种属依次为芽孢杆菌属Bacillus(41.94%)、海洋芽孢杆菌属Oceanobacillus(8.03%)、假单胞菌属Pseudomonas(7.67%)、盐厌氧菌属Halanaerobium(7.42%)和乳球菌属Lactococcus(7.38%);古菌的优势类群以广古菌门(Euryarchaeota)盐杆菌纲(Halobacteria)为主,优势菌是Halonotius(17.21%)和盐红菌属Halorubrum(16.23%)。【结论】揭示了茶卡盐湖中细菌和古菌的群落结构及物种多样性,为嗜盐菌的开发及后续微生物资源的挖掘提供了理论依据。 展开更多
关键词 茶卡盐湖 细菌 古菌 高通量测序 微生物多样性
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基于下丘脑-垂体-卵巢轴探讨藏药二十五味鬼臼丸对绝经后骨质疏松症大鼠的干预作用 被引量:16
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作者 李淑桢 王琦 +5 位作者 李沁园 申继强 李长兴 吴佩锋 张立雪 代冬芳 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期6282-6290,共9页
目的基于下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)探讨藏药二十五味鬼臼丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只SD雌性未孕大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、二十五味鬼臼丸组,每组10只。除假手术组仅... 目的基于下丘脑-垂体-卵巢轴(hypothalamus-pituitary-ovary axis,HPOA)探讨藏药二十五味鬼臼丸对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法将40只SD雌性未孕大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、二十五味鬼臼丸组,每组10只。除假手术组仅摘取卵巢旁同样大小的脂肪块,其余3组大鼠均摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis,PMOP)大鼠模型。手术1周后开始给药处理,雌二醇组ig0.1mg/kg戊酸雌二醇,二十五味鬼臼丸组ig441mg/kg二十五味鬼臼丸,假手术组和模型组ig等体积蒸馏水,1次/d,连续12周后,ELISA法检测血清雌二醇、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,GnRH)水平;RT-PCR检测下丘脑、垂体、左侧股骨远端雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)m RNA表达;免疫荧光染色法检测下丘脑、垂体和右侧股骨远端ERα、ERβ蛋白表达;HE染色法观察大鼠右侧股骨远端组织形态变化;Micro-CT检测右侧股骨远端微结构的改变。结果藏药二十五味鬼臼丸能显著降低大鼠体内血清LH、FSH、GnRH水平(P<0.05、0.01),并在HPOA轴中显著性上调下丘脑及垂体ERαm RNA及蛋白表达(P<0.01),同时显著性上调股骨ERβm RNA及蛋白表达(P<0.01),并能显著回调大鼠股骨密度及骨微结构参数(P<0.01)。结论藏药二十五味鬼臼丸可有效防治PMOP,其机制可能与药物直接作用骨组织雌激素受体或作用HPOA轴靶器官相关雌激素受体后,通过改变体内性激素的水平间接调控骨代谢有关。 展开更多
关键词 藏药 二十五味鬼臼丸 植物雌激素 骨质疏松 雌激素受体 下丘脑-垂体-卵巢轴
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Ectoine高产菌株Halomonas sp.XH26的鉴定及紫外诱变选育 被引量:12
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作者 田磊 张芳 +3 位作者 沈国平 高翔 龙启福 朱德锐 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期31-35,共5页
通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原... 通过紫外线诱变小柴旦盐湖盐单胞菌菌株Halomonas sp.XH26,以获得高产Ectoine的突变株,为工程生产Ectoine提供优良的发酵菌源。采用形态学观察、生理生化试验及16S rRNA基因测序分析明确菌株的分类地位。紫外诱变筛选Ectoine产量超过原始菌株2倍以上的正向突变菌株,HPLC测定胞内Ectoine产量,并对突变株进行连续培养,研究Ectoine的产量稳定性。实验结果显示:原始菌株XH26(Ectoine优化产量456.82 mg/L±15.72 mg/L,CDW 0.71 g/g±0.04 g/g),经9轮紫外循环诱变处理后(50 s为最佳诱变时间),获得7株高产Ectoine突变菌,Ectoine产量均大幅提高(约200%)。其中,积聚量最大的菌株HU09-32,产量可达1351.09 mg/L±17.69 mg/L(增幅290%),将7株突变菌连续培养40 d(接种2 d/次),胞内Ectoine产量稳定,生长特性、增殖速度与积聚量明显优于原始菌株XH26,具有很好的发酵生产和工业应用潜力。 展开更多
关键词 盐单胞菌 ECTOINE 紫外诱变 积聚量 突变育种
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天然产物Ectoine与Hydroxyectoine的生物工程及医学应用研究进展 被引量:11
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作者 张欣 刘静 朱德锐 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期882-887,共6页
四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等... 四氢嘧啶及衍生物(Ectoines,Ects)是嗜盐或耐盐细菌胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的有机相容溶质(Compatible solute),主要包括四氢嘧啶(Ectoine)与羟基化四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)。在高温、干旱、高pH值、高压和高盐等极端环境条件下,Ects不仅能够平衡细胞的渗透压,而且对蛋白质、DNA、细胞膜以及整个细胞提供抗逆协助作用。本文综述了Ects对生物大分子和细胞的保护与稳定作用,以及在临床疾病治疗应用方面的辅助作用,并讨论与展望了Ects在生物医药制剂和生物保健开发等方面的应用前景。 展开更多
关键词 ECTOINE 羟基化四氢嘧啶 有机相容溶质 生物工程 医学应用
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黄芪多糖联合5-FU对肝癌HepG2细胞EMT转化的影响 被引量:10
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作者 白芸 李永臻 +1 位作者 祁艳娟 龙启福 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期8-15,共8页
目的探讨黄芪多糖(APS)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌Hep G2细胞上皮细胞间质转型(EMT作用的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)、Transwell法分别检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用对Hep G2细胞增殖、侵袭的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白... 目的探讨黄芪多糖(APS)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对肝癌Hep G2细胞上皮细胞间质转型(EMT作用的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)、Transwell法分别检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用对Hep G2细胞增殖、侵袭的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪多糖与5-FU单独或联合使用时对Hep G2细胞EMT相关因子表达的影响。结果黄芪多糖与5-FU单独或联合使用均能抑制Hep G2细胞的增殖、迁移;均能上调Hep G2细胞内钙粘附蛋白E(E-cadherin)表达、下调波形蛋白(vimentin)和趋化因子受体4(CXCR4)表达;总体趋势为785.26μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖+23.90μmol/L 5-FU>392.63μmol/L黄芪多糖>23.90μmol/L5-FU>空白对照。结论黄芪多糖联合5-FU具有协同抑制肝癌细胞生长转移的作用,其机制可能与抑制EMT有关。 展开更多
关键词 黄芪多糖 5-FU EMT转化 HEPG2细胞 肝癌
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lncRNA LINC00339通过下调miR-149-5p表达调控ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤 被引量:10
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作者 王进鹏 龙启福 +2 位作者 雷延成 张豪 林存山 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期277-283,共7页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制。方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00339对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及分子机制。方法:将HBMEC分为对照组(未经任何处理)、ox-LDL(50 mg/L)组、ox-LDL+si-NC组(转染si-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339组(转染si-LINC00339+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-NC组(转染miR-NC+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+miR-149-5p组(转染miR-149-5p+50 mg/L ox-LDL)、ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-NC组(共转染si-LINC00339和anti-miR-NC+50 mg/L ox-LDL)及ox-LDL+si-LINC00339+anti-miR-149-5p组(共转染si-LINC00339和anti-miR-149-5p+50 mg/mL ox-LDL)。RT-qPCR检测LINC00339和miR-149-5p的表达水平;分别检测丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bcl-2和Bax蛋白表达;双萤光素酶报告基因实验检测LINC00339和miR-149-5p的靶向关系。结果:ox-LDL诱导的HBMEC中LINC00339的表达水平升高,miR-149-5p的表达水平降低(P<0.05)。抑制LINC00339表达或过表达miR-149-5p可致HBMEC的MDA含量降低,SOD和CAT活性升高,细胞凋亡率降低,Bcl-2表达水平升高,Bax表达水平降低(P<0.05)。LINC00339靶向调控miR-149-5p,敲减miR-149-5p表达逆转了抑制LINC00339表达对ox-LDL诱导的HBMEC氧化损伤的作用。结论:抑制LINC00339表达可能通过上调miR-149-5p表达抑制ox-LDL诱导的HBMEC凋亡和氧化应激反应,从而减轻细胞损伤。 展开更多
关键词 LINC00339 微小RNA-149-5p 人脑微血管内皮细胞 氧化应激 细胞凋亡
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相容溶质四氢嘧啶的微生物合成研究进展 被引量:8
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作者 张鑫 舒志万 +4 位作者 李永臻 邢江娃 王嵘 沈国平 朱德锐 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期868-881,共14页
四氢嘧啶(ectoine)作为一种氨基酸的衍生物,是嗜盐微生物胞内重要的天然次级代谢物,具有保护细胞和稳定生物大分子的功能,可广泛应用于药物制备佐剂、器官移植与保存、皮肤创伤修复与新型化妆品研发等生物医学领域。由于四氢嘧啶的医用... 四氢嘧啶(ectoine)作为一种氨基酸的衍生物,是嗜盐微生物胞内重要的天然次级代谢物,具有保护细胞和稳定生物大分子的功能,可广泛应用于药物制备佐剂、器官移植与保存、皮肤创伤修复与新型化妆品研发等生物医学领域。由于四氢嘧啶的医用价值和商业市场需求,文中从野生菌株的筛选与诱变育种、构建基因工程菌株与系统代谢整合工程菌株、四氢嘧啶的优化发酵与生产工艺以及抽提纯化工艺等方面,系统论述了四氢嘧啶高效积聚和过量化生产研究策略,并展望多组学、计算生物学及“细胞工厂”等技术在后续四氢嘧啶高效生产上的应用前景。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 紫外诱变 基因工程 系统代谢 分批发酵
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青藏高原小柴旦盐湖微生物群落结构及多样性 被引量:9
8
作者 刘静 张欣 +3 位作者 沈国平 封希媛 龙启福 朱德锐 《水生态学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期55-64,共10页
通过探究小柴旦盐湖微生物群落结构与多样性,为盐湖微生物资源的开发利用和生态保护提供重要的理论参考依据。利用Illumina Mi Seq测序平台对小柴旦盐湖细菌和古菌的16S rRNA基因(V3~V5区)进行高通量测序,获得细菌和古菌的物种注释OTU(O... 通过探究小柴旦盐湖微生物群落结构与多样性,为盐湖微生物资源的开发利用和生态保护提供重要的理论参考依据。利用Illumina Mi Seq测序平台对小柴旦盐湖细菌和古菌的16S rRNA基因(V3~V5区)进行高通量测序,获得细菌和古菌的物种注释OTU(Operational Taxonomic Units)数目分别为870和410,其中分类地位明确的细菌有18门、24纲、135属,古菌2门、4纲、22属。细菌优势类群依次是厚壁菌门(Firmicutes,34.05%)、变形菌门(Proteobacteria,32.91%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,18.01%)和蓝细菌门(Cyanobacteria,8.46%);优势种群依次是芽孢杆菌属(Bacillus,21.53%)、Chloroplast-norank(6.65%)和海杆菌属(Marinobacter,4.05%)。古菌的优势类群和优势种群主要是未确定分类地位的沃斯古菌门(Woesearchaeota DHVEG-6,80.84%),相关的系统分类学尚需深入研究。小柴旦盐湖微生物的种群结构复杂、类群丰富,细菌Shannon多样性指数(4.77±0.45)显著高于古菌(2.79±0.45),且存在大量的新种资源。 展开更多
关键词 小柴旦盐湖 高通量测序 微生物多样性 种群结构 聚类分析
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青海户用沼气池料液温度变化特征及对产气的影响 被引量:6
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作者 韩睿 朱德锐 陈来生 《中国沼气》 北大核心 2016年第6期95-100,共6页
文章以青海省乐都县5户运行状况基本稳定的沼气池为研究对象,收集了2014年7月~2015年6月沼气池内外温度数据,系统研究了沼气池料液温度随环境温度变化的变化特征,分析了温度变化对沼气产气的影响。结果表明,料液温度受环境温度影响较大... 文章以青海省乐都县5户运行状况基本稳定的沼气池为研究对象,收集了2014年7月~2015年6月沼气池内外温度数据,系统研究了沼气池料液温度随环境温度变化的变化特征,分析了温度变化对沼气产气的影响。结果表明,料液温度受环境温度影响较大,出现特殊的“极值延后”现象,且料液温度越高,沼气池的产气状况越好。该研究结果将为调控青海省户用沼气池料液温度,进而提高沼气产气效率提供理论依据。 展开更多
关键词 青海 户用沼气池 温度 变化特征 产气
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西藏扎布耶盐碱湖真核浮游生物的群落结构与多样性分析
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作者 陶宇杰 乔丽娟 +5 位作者 郭敏 薛彬娟 逯心玥 王嵘 韩睿 朱德锐 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1970-1982,共13页
【背景】西藏扎布耶盐碱湖(Zabuye saline-alkali Lake,ZL)是以水体富含高浓度CO_(3)^(2-)、HCO_(3)^(-)和Na^(+)为显著特性的盐碱湖,涉及真核浮游生物多样性的相关研究尚未深入。【目的】系统探究扎布耶盐碱湖真核浮游生物的多样性,明... 【背景】西藏扎布耶盐碱湖(Zabuye saline-alkali Lake,ZL)是以水体富含高浓度CO_(3)^(2-)、HCO_(3)^(-)和Na^(+)为显著特性的盐碱湖,涉及真核浮游生物多样性的相关研究尚未深入。【目的】系统探究扎布耶盐碱湖真核浮游生物的多样性,明确真核浮游生物的群落结构组成和真菌的营养方式。【方法】采用18S r RNA基因序列(V5-V7区)高通量测序分析扎布耶盐碱湖真核浮游生物的群落结构组成和物种多样性;基于盐碱湖水化学特征和Spearman相关系数分析属类群与环境因子的相关性,并使用FUNGuild数据库预测真菌的营养方式。【结果】Illumina测序获得真核浮游生物共计两界(原生动物界和真菌界) 12门20纲25属。优势真核浮游生物门类群依次是Aphelidea (0.12%-51.84%)、Nucleariidae-Fonticula超类群(0%-91.70%)、子囊菌门(Ascomycota,1.38%-9.04%)和担子菌门(Basidiomycota,0.20%-10.16%)。常见属(相对丰度≥1%)主要有Nuclearia (0%-91.70%)、镰孢菌属(Fusarium,1.38%-4.32%)、Paraphelidium (0%-4.57%)和纤毛虫属(Homalogastra,0%-4.39%)。纤毛虫属、Protosporangium和Nuclearia与Na^(+)、K^(+)、Ca^(2+)等离子浓度及总盐度呈极显著正相关,与温度(T)、总磷(TP)、总有机碳(TOC)和p H呈极显著负相关。各样本中浮游真菌的功能大多数未知,并且均存在腐生营养型真菌(saprotroph,1.38%-5.24%)。【结论】扎布耶盐碱湖真核浮游生物群落结构与其他地区盐碱湖相似,即优势门是子囊菌门和担子菌门,但是存在Aphelidea和Nucleariidae-Fonticula超类群等特殊的优势门类群;群落结构与扎布耶盐碱湖的离子特征参数密切相关;浮游真菌的主要营养类型是腐生营养型。 展开更多
关键词 扎布耶盐碱湖 真核浮游生物 群落结构 生物多样性 高通量测序
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青藏高原盐湖细菌群落与超盐环境因素的相关性 被引量:6
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作者 朱德锐 韩睿 +3 位作者 石晴 沈国平 龙启福 双杰 《中国环境科学》 EI CAS CSSCI CSCD 北大核心 2017年第12期4657-4666,共10页
以青藏高原极端盐湖为研究对象,采用16S r RNA基因(V3~V4区)高通量测序方法分析盐湖细菌的群落结构差异和超盐环境因子的制约相关性.结果显示,超盐环境样本中细菌的群落结构组成相对稳定,进化趋同,且复杂度和多样性指数显著低于非超盐环... 以青藏高原极端盐湖为研究对象,采用16S r RNA基因(V3~V4区)高通量测序方法分析盐湖细菌的群落结构差异和超盐环境因子的制约相关性.结果显示,超盐环境样本中细菌的群落结构组成相对稳定,进化趋同,且复杂度和多样性指数显著低于非超盐环境.青藏高原超盐环境中细菌的优势类群是厚壁菌门Firmicutes(74.04%~81.04%)、次为变形菌门Proteobacteria(15.51%~20.06%)、拟杆菌门Bacteroidetes(2.68%~4.84%)和放线菌门Actinobacteria(0.71%~2.45%).比较分析其它类型超盐环境,青藏高原超盐环境具有高丰度的特色属群芽孢杆菌属Bacillus(50.63%~58.35%)、乳球杆菌属Lactococcus(9.28%~11.81%)和海洋芽孢杆菌属Oceanobacillus(8.41%~10.52%).基于典范对应CCA分析,表明优势属群(Bacillus、Lactococcus、Pseudomonas、Oceanobacillus、Stenotrophomonas、Psychrobacter、Myroides、Brochothrix和Arthrobacter)和超盐样本的聚集,与环境因子(总盐度、Cl^-、K^+、Mg^(2+)和CO_3^(2-)浓度)呈明显的正相关. 展开更多
关键词 青藏高原 极端盐湖 嗜盐细菌 超盐环境 环境因子
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青藏高原4类典型水化学特征湖泊的细菌多样性差异及影响因素 被引量:5
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作者 沈国平 韩睿 +4 位作者 缪增强 邢江娃 李永臻 王嵘 朱德锐 《生物多样性》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期85-99,共15页
青藏高原分布着我国最密集的极端环境湖泊群,湖泊类型和水化学特征多样,而不同类型湖泊的细菌群落组成与多样性差异的系统研究相对较少。本文以青藏高原4类典型水化学特征湖泊(即氯化物型、MgSO_(4)亚型、Na_(2)SO_(4)亚型、碳酸盐型)... 青藏高原分布着我国最密集的极端环境湖泊群,湖泊类型和水化学特征多样,而不同类型湖泊的细菌群落组成与多样性差异的系统研究相对较少。本文以青藏高原4类典型水化学特征湖泊(即氯化物型、MgSO_(4)亚型、Na_(2)SO_(4)亚型、碳酸盐型)为研究对象,借助Illumina测序16S rRNA基因(V_(3)‒V_(4)区)分析细菌多样性、群落组成差异及其优势属与环境因素的制约关系。结果表明:MgSO_(4)亚型与氯化物型湖泊多属于超盐环境,而大多数Na_(2)SO_(4)亚型与碳酸盐型湖泊属于咸水、微咸水或淡水环境。4类湖泊获得分类地位明确的细菌共计45门81纲1,148属(52,031个OTUs),细菌Shannon指数为碳酸盐型(5.27±0.57)>Na_(2)SO_(4)亚型(4.96±0.51)>氯化物型(4.12±0.80)>MgSO_(4)亚型(3.64±1.04)。优势细菌门是变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门。变形菌门的相对多度总体较高,优势纲是γ-、α-和β-变形菌纲;厚壁菌门多分布于MgSO_(4)亚型和氯化物型湖泊,优势纲是芽孢杆菌纲;拟杆菌门主要分布于碳酸盐型和Na_(2)SO_(4)亚型湖泊,优势纲是黄杆菌纲。全部氯化物型和少数MgSO_(4)亚型湖泊的细菌组成相似,优势属是假单胞菌属(Pseudomonas)、乳球菌属(Lactococcus)和不动杆菌属(Acinetobacter),其聚集分布与总盐度、主要离子(Mg^(2+)、Cl^(–)、Na^(+)与K^(+))和温度相关;MgSO_(4)亚型湖泊独有的常见属是芽孢杆菌属(Bacillus)、气单胞菌属(Aeromonas)、大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus)等,其聚集分布与SO_(4)^(2–)浓度正相关;Na_(2)SO_(4)亚型与碳酸盐型湖泊的细菌组成相似,优势属是水弯曲菌属(Aquiflexum)、海仙菌属(Haliea)与苍黄杆菌属(Luteolibacter),其聚集分布与HCO_(3)^(–)浓度、pH值和海拔高度呈显著正相关。与世界上其他湖泊组/群相比,青藏高原湖泊具有独特的细菌优势属和常见属,不同类型湖泊的细菌群落组成存在显著差异,可能与水化学类型或地 展开更多
关键词 青藏高原 高原湖泊 细菌 生物多样性 水化学特征
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低氧条件下Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖和黏附能力影响的研究 被引量:3
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作者 苏占海 刘永年 +3 位作者 李斌 王荣华 乔金婉 解亚丽 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2014年第16期2602-2605,共4页
目的:研究低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖、黏附能力及细胞骨架表达的调节作用。方法:用MTT方法检测常氧或低氧条件下,Ezrin对乳腺癌原代细胞增殖、黏附、侵袭的影响;免疫荧光染色法检测常氧或低氧条件下Ezrin对乳腺癌细胞骨架... 目的:研究低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖、黏附能力及细胞骨架表达的调节作用。方法:用MTT方法检测常氧或低氧条件下,Ezrin对乳腺癌原代细胞增殖、黏附、侵袭的影响;免疫荧光染色法检测常氧或低氧条件下Ezrin对乳腺癌细胞骨架、细胞形态及细胞表面微绒毛表达的影响。结果:常氧或低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞增殖均有抑制能力(P常氧<0.05,P低氧<0.05)。黏附能力检测结果显示,在常氧条件下Ezrin蛋白对乳腺癌细胞黏附能力没有明显影响(P常氧>0.05),但是低氧条件下对乳腺癌细胞黏附能力有增强作用(P低氧<0.05)。在对细胞骨架、细胞形态变化及细胞微绒毛表达实验中,观察到Ezrin在低氧条件下可加强细胞表面微绒毛表达及细胞形态变化。结论:低氧条件下,Ezrin蛋白对乳腺癌细胞的黏附能力有影响,对细胞骨架表达、细胞形态改变和细胞表面微绒毛表达的调节作用较为显著。 展开更多
关键词 EZRIN蛋白 低氧 乳腺癌细胞增殖 细胞黏附侵袭
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青藏高原尕斯库勒盐湖可培养嗜盐耐盐微生物的群落结构与分离方法对比研究
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作者 马欣 马想蓉 +3 位作者 朱德锐 李轩领 沈国平 邢江娃 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期916-930,共15页
嗜盐耐盐微生物在生物医药、生物酶等领域有着重要的应用潜力。为更好地利用青藏高原的盐湖微生物资源,以青藏高原尕斯库勒盐湖为研究对象,借助Illumina MiSeq测序平台分析盐湖微生物的群落组成,并采用寡营养培养、富集培养和梯度稀释... 嗜盐耐盐微生物在生物医药、生物酶等领域有着重要的应用潜力。为更好地利用青藏高原的盐湖微生物资源,以青藏高原尕斯库勒盐湖为研究对象,借助Illumina MiSeq测序平台分析盐湖微生物的群落组成,并采用寡营养培养、富集培养和梯度稀释等方法对嗜盐耐盐微生物进行大规模分离与培养。结果表明,高通量测序获得明确分类地位的细菌有30门50纲81目162科417属,古菌6门7纲9目15科39属。细菌优势属类群以矿生菌属(Fodinibius)和纤维单胞菌属(Gracilimonas)为主。古菌优势属类群以盐红菌属(Halorubrum)为主;纯培养法共获得502株嗜盐耐盐微生物,其中嗜盐耐盐细菌472株,分布在4门5纲7目9科13属,优势属为芽孢杆菌属(Bacillus)和盐单胞菌属(Halomonas),其中巴纽尔斯菌(Balneolota)门Fodinibius属可培养细菌是首次从盐湖中分离得到;嗜盐古菌30株,分布在1门1纲1目3科5属,优势属为Halorubrum。对比不同培养条件下的分离结果发现,1/2 TSA培养基和1/2 RCA培养基更有利于嗜盐耐盐细菌的分离,最佳富集天数为7天和30天,稀释梯度10-1和10-2可与未稀释样本互为补充来增加可培养嗜盐耐盐细菌的多样性;1/102216E培养基更适合于古菌的分离,最佳富集天数为7天和14天,且样本不稀释分离效果更好。研究结果可为青藏高原盐湖可培养微生物的分离方案优化提供理论依据和数据支撑。 展开更多
关键词 尕斯库勒盐湖 嗜盐耐盐微生物 分离培养 生物多样性 高盐环境
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西藏扎布耶盐碱湖细菌的多样性与分离菌株的生长特性 被引量:1
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作者 陶宇杰 舒志万 +5 位作者 郭敏 高翔 王嵘 沈国平 韩睿 朱德锐 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5286-5299,共14页
【背景】扎布耶湖位于青藏高原地区,是以水体中富含高浓度CO_(3)^(2−)、HCO_(3)^(−)和Na^(+)为显著特性的盐碱湖,因其地理位置高寒、高海拔,人迹罕至,涉及该盐湖微生物的研究相对较少。【目的】系统探究湖水中细菌多样性和菌种资源等,... 【背景】扎布耶湖位于青藏高原地区,是以水体中富含高浓度CO_(3)^(2−)、HCO_(3)^(−)和Na^(+)为显著特性的盐碱湖,因其地理位置高寒、高海拔,人迹罕至,涉及该盐湖微生物的研究相对较少。【目的】系统探究湖水中细菌多样性和菌种资源等,发掘可利用的潜在菌种。【方法】采用Illumina测序16S rRNA基因V3−V4区分析扎布耶湖细菌的群落结构组成、物种多样性特征;采用纯培养筛选分离可培养细菌,明确分离菌株分类学地位、生长特性及产酸能力,同时测定分离菌株四氢嘧啶(ectoine)、吲哚乙酸(3-indoleacetic acid,IAA)和胞外聚合物(extracellular polymeric substances,EPS)的积聚量。【结果】Illumina测序明确分类地位的细菌有21门44纲86目583属,其中优势门类群是变形菌门(Proteobacteria,25.11%−67.60%)、拟杆菌门(Bacteroidetes,4.84%−35.02%)和厚壁菌门(Firmicutes,1.24%−11.01%),优势属类群是克雷伯氏菌属(Klebsiella,0.01%−9.53%)、盐单胞菌属(Halomonas,0.54%−8.75%)、芽单胞菌属(Gemmatimonas,2.39%−6.00%)和腈基降解菌属(Nitriliruptor,1.27%−6.26%)。纯培养法筛选获得嗜盐碱菌38株,其中芽孢杆菌属(Bacillus)23株(60.53%)和盐单胞菌属(Halomonas)10株(26.32%),菌株均具有耐盐碱和产酸能力(19.80%−29.68%)。大多数菌株能积聚四氢嘧啶、IAA和EPS,产量范围分别为1.36−175.59、0.27−8.69和0.02−0.22 g/g。【结论】扎布耶湖细菌群落结构与其他地区盐碱湖相似,但存在大量未明确分类学地位的细菌,分离菌株多具有耐盐碱及产酸特性。此外,还发现4株高效生产四氢嘧啶、3株生产吲哚乙酸和3株生产胞外聚合物的潜力菌株,为扎布耶盐湖微生物资源的开发利用奠定了基础。 展开更多
关键词 扎布耶湖 细菌多样性 高通量测序 纯培养法 次级代谢物
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青海湖盐单胞菌Ectoine合成基因簇ectABC的重组共表达 被引量:5
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作者 朱德锐 韩睿 +4 位作者 沈国平 龙启福 李丹丹 刘建 刘德立 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期358-367,共10页
盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(H... 盐单胞菌属(Halomonas)通过胞内积聚有机相容溶质(Compatible solutes)来抵抗胞外的高盐渗透压。为了探究相容溶质Ectoine合成代谢相关基因的结构特征和异源共表达的可能性,以青海湖盐单胞菌Halomonas sp.QHL1为材料,通过高效液相色谱(HPLC)分析不同盐梯度下QHL1胞内Ectoine的积聚量,并借助于染色体步移技术(Genome walking)捕获QHL1菌株的Ectoine生物合成基因簇ect ABC,利用分子克隆技术分析ect ABC基因簇的异源重组表达(E.coli BL21)。研究结果表明:胞内Ectoine的积聚量随着培养基中Na+浓度的增加而增加,最大积聚量为167.1 mg/g细胞干重(1.0 mol/L Na+),但菌体生长却受到高浓度Na+的强烈抑制作用。QHL1的ect ABC操纵子全长序列为3580 bp,结构基因ect A(579 bp)、ect B(1269 bp)与ect C(390 bp)串联排列。基于生物信息学预测分析,两个启动子(δ70与δ38因子控制)和若干未知功能的保守模序(Motifs)存在于QHL1的ect操纵子上游。构建重组表达载体p ET-28-ect ABC,并在E.coli BL21中异源表达ect ABC基因簇(2438 bp)。SDS-PAGE结果显示Ect A、Ect B和Ect C分别为27.2、52.5和20.8 k D,与预测结果一致,表明ect A、ect B和ect C基因能在E.coli BL21中实现异源共表达,为构建Ectoine合成代谢基因整合的系统代谢工程,并实现低盐发酵控制和过量化生产提供了重要的理论基础。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 ECTOINE ECT ABC基因簇 结构基因 共表达
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盐碱土壤中嗜盐微生物促进植物生长与代谢调节研究进展 被引量:4
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作者 舒志万 韩睿 +3 位作者 王智博 邢江娃 王嵘 朱德锐 《江苏农业科学》 北大核心 2022年第16期27-36,共10页
盐碱土壤是陆生生态环境的重要组成部分,其中存在多种具有特殊理化性质的微生物,参与土壤与植物根际之间的相互作用,影响植物吸收养分、种子萌发、根茎生长和功能代谢等过程。本文系统综述了嗜盐微生物胞内积聚或分泌的不同活性分子(吲... 盐碱土壤是陆生生态环境的重要组成部分,其中存在多种具有特殊理化性质的微生物,参与土壤与植物根际之间的相互作用,影响植物吸收养分、种子萌发、根茎生长和功能代谢等过程。本文系统综述了嗜盐微生物胞内积聚或分泌的不同活性分子(吲哚-3-乙酸、细胞分裂素、嗜铁素、脱落酸等),发现它们具有促进植物生长、缓解盐胁迫、促进矿物元素的吸收以及强化溶磷固氮等调节作用。此外,多种次生代谢产物对植物病原菌黑曲霉、烟曲霉、辣椒疫霉菌和马铃薯干腐病菌等,具有一定的抑制作用,并参与土壤改良和环境修复等过程。本文为后续盐碱土壤改良和农作物增产等应用研究提供一定的理论参考依据。 展开更多
关键词 盐碱土壤 嗜盐微生物 植物生长 代谢调节
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相容溶质四氢嘧啶与羟基四氢嘧啶的代谢调控研究进展 被引量:5
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作者 张芳 沈国平 +1 位作者 李永臻 朱德锐 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1548-1562,共15页
四氢嘧啶(Ectoine)及其衍生物羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是嗜盐微生物胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的相容溶质,具有细胞、细胞膜、蛋白质和核酸的保护作用,可抵抗高盐、高温、冷冻和干燥等极端环境因素的刺激,从而倍... 四氢嘧啶(Ectoine)及其衍生物羟基四氢嘧啶(5-hydroxyectoine,5-HE)是嗜盐微生物胞内合成的一类能够抵抗外界高盐胁迫的相容溶质,具有细胞、细胞膜、蛋白质和核酸的保护作用,可抵抗高盐、高温、冷冻和干燥等极端环境因素的刺激,从而倍受关注。本文对不同类型微生物Ectoine/5-HE(Ects)生物合成代谢、分解代谢以及吸收/转运系统涉及的调控机制进行综述,以期为Ects合成产量的提升与高效积聚策略的优化,提供一定的理论参考依据。 展开更多
关键词 ECTOINE 5-hydroxyectoine 调节因子 转录调控 分解代谢 转运调节
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四氢嘧啶对人皮肤成纤维细胞衰老的影响 被引量:1
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作者 李美妮 李永臻 +2 位作者 汪明香 缪增强 双杰 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期639-644,共6页
目的探究四氢嘧啶(ectoine)对人皮肤成纤维细胞(HSFs)是否具有减缓衰老的功效及其具体机制。方法采用不同浓度四氢嘧啶作用于HSFs 24 h,MTT法检测细胞活性,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况,流式细胞术检测细胞调亡和活性... 目的探究四氢嘧啶(ectoine)对人皮肤成纤维细胞(HSFs)是否具有减缓衰老的功效及其具体机制。方法采用不同浓度四氢嘧啶作用于HSFs 24 h,MTT法检测细胞活性,β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察细胞衰老情况,流式细胞术检测细胞调亡和活性氧(ROS)的水平,qPCR检测p16、p21、p53 mRNA的表达水平。结果MTT结果显示,与对照组相比,各四氢嘧啶处理组对细胞无毒性作用,随着四氢嘧啶浓度增加,HSFs细胞凋亡率、ROS水平以及p16、p21、p53 mRNA表达水平均显著降低(P<0.05)。结论四氢嘧啶可通过降低细胞凋亡率、抑制ROS活性和减少p16、p21、p53 mRNA的表达来减缓HSFs衰老,这将为今后开发以四氢嘧啶作为主要成分针对HSFs的抗衰老产品提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 四氢嘧啶 成纤维细胞 细胞衰老 活性氧 细胞凋亡
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高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性及四氢嘧啶产量评价 被引量:4
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作者 张田田 李永臻 +3 位作者 沈国平 王嵘 朱德锐 邢江娃 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期168-178,共11页
为了解柴达木盆地茶卡盐湖、柯柯盐湖和小柴旦盐湖等三大硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性,采用RM中、高盐培养基筛选分离可培养的嗜盐菌和耐盐菌,扩增16S rRNA基因序列进行种属鉴定和环境因子典范对应分析(CCA),选取优... 为了解柴达木盆地茶卡盐湖、柯柯盐湖和小柴旦盐湖等三大硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的种群多样性,采用RM中、高盐培养基筛选分离可培养的嗜盐菌和耐盐菌,扩增16S rRNA基因序列进行种属鉴定和环境因子典范对应分析(CCA),选取优势菌属构建系统发育树,并采用高效液相色谱法(HPLC)检测次级代谢产物四氢嘧啶(Ectoine)积聚量,筛选高产菌株。结果表明三大盐湖共分离获得嗜盐和耐盐菌113株,优势种属为Bacillus(42株)、Staphylococcus(30株)和Halomonas(26株),各丰度与盐湖类型相关;其中中度嗜盐菌居多,其次为耐盐菌和弱嗜盐菌。系统发育分析表明Bacillus属存在5个进化分支,由6个种组成,Halomonas属存在6个进化分支,由7个种组成。HPLC检测四氢嘧啶积聚量,获得具有高产四氢嘧啶潜力菌株7株。这些研究结果说明柴达木盆地硫酸镁亚型高盐盐湖可分离嗜盐耐盐菌的优势菌属以Bacillus、Staphylococcus和Halomonas为主,且多为中度嗜盐菌,其高产四氢嘧啶的潜力菌株可用于后续四氢嘧啶发酵应用研究。 展开更多
关键词 柴达木盆地 高盐盐湖 可培养细菌 种群多样性 四氢嘧啶
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