1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析 被引量：6

1

作者 程增青 范根成 +4 位作者 窦小龙 刘红祥 申茂欣 徐全刚 杨汉春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2463-2471,共9页

旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显... 旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。 展开更多

关键词 I群禽腺病毒 鉴定 Fiber-2蛋白 亚单位疫苗

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五株鸡传染性支气管炎病毒流行株的分离鉴定 被引量：3

2

作者 宋新宇 马爽 +4 位作者 李陆梅 赵鹏 窦小龙 王红 范跟成 《湖北农业科学》 2016年第23期6187-6189,6266,共4页

2012年1月-2014年8月,从全国多地出现传染性支气管炎发病养鸡场(户)中采集病(死)鸡气管、肾脏和腺胃进行流行病学调查。根据各地分离株与YB160株S1基因分子进化树分析,筛选出5个代表性的毒株,在SPF鸡胚中传至第5代,分别进行毒价测定、... 2012年1月-2014年8月,从全国多地出现传染性支气管炎发病养鸡场(户)中采集病(死)鸡气管、肾脏和腺胃进行流行病学调查。根据各地分离株与YB160株S1基因分子进化树分析,筛选出5个代表性的毒株,在SPF鸡胚中传至第5代,分别进行毒价测定、无菌检验及对SPF鸡的致病力研究。结果,所筛选出的5个流行株在SPF鸡胚传至第5代时,毒价均大于或等于106.1EID50/0.1 m L,菌检阴性,人工感染试验接种1日龄SPF鸡,可引起试验鸡出现典型传染性支气管炎症状。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎 分离鉴定 流行株 QX型

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一例兔支气管败血波氏杆菌病的鉴别诊断 被引量：3

3

作者 张恒 郭玉广 +1 位作者 李芳 范根成 《黑龙江畜牧兽医（下半月）》 北大核心 2017年第4期193-196,293,共5页

2016年4月份,山东省某公司购买的拟做猪瘟脾淋苗试验的兔子出现以发病急、死亡快,口鼻出血,肺脏出血、淤血为特征的疾病,根据发病、死亡兔的临床表现、剖检病变,初步怀疑为兔巴氏杆菌或兔支气管败血波氏杆菌感染,取肺脏组织进行细菌的... 2016年4月份,山东省某公司购买的拟做猪瘟脾淋苗试验的兔子出现以发病急、死亡快,口鼻出血,肺脏出血、淤血为特征的疾病,根据发病、死亡兔的临床表现、剖检病变,初步怀疑为兔巴氏杆菌或兔支气管败血波氏杆菌感染,取肺脏组织进行细菌的分离和培养、玻片凝集试验进行验证;对培养的菌落进行16S、巴氏杆菌（Pm）基因和波氏杆菌（Bb）基因的PCR扩增,并克隆、测序。确诊该批兔是感染了兔支气管败血波氏杆菌。 展开更多

关键词 兔 支气管败血波氏杆菌 分离 PCR 鉴别诊断

原文传递

五株鸡滑液囊支原体的分离与鉴定 被引量：2

4

作者 马爽 于国营 +4 位作者 范根成 郭莉莉 赵鹏 宫晓 宋新宇 《湖北农业科学》 2018年第14期99-101,共3页

从12份鸡滑液囊支原体临床病料中分离到5株支原体,经形态特性、生化特性、培养特性、分子生物学特性鉴定,5株支原体均为鸡滑液囊支原体。活菌计数结果表明,HN3株菌液的活菌数相对较高,为109CCU/m L;毒力试验结果表明,5株鸡滑液囊支原体... 从12份鸡滑液囊支原体临床病料中分离到5株支原体,经形态特性、生化特性、培养特性、分子生物学特性鉴定,5株支原体均为鸡滑液囊支原体。活菌计数结果表明,HN3株菌液的活菌数相对较高,为109CCU/m L;毒力试验结果表明,5株鸡滑液囊支原体对45日龄SPF鸡的发病率为50%~90%,HN3株毒力相对最高,为90%。 展开更多

关键词 鸡滑液囊支原体 分离 鉴定

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在小鼠体内的存留时间分析 被引量：1

5

作者 熊贝嘉 张会 +3 位作者 孙永科 范根成 张恒 杨玉艾 《动物医学进展》 北大核心 2019年第3期49-53,共5页

研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd... 研究E0-E2基因和表达蛋白及抗体水平在小鼠体内的最长存留时间,以确定表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在小鼠体内的存留规律。本试验选用30只SPF级别的健康小鼠,随机分为A、B组,各免疫组以1×106 IFU/只剂量接种rAd-E0-E2,对照组注射生理盐水。A组20只于接种后不同特定时间(2只/次)采集血液和组织进行PCR和IFA检测E0-E2基因及表达蛋白残留情况;B组10只于接种后1、3、5、7、10、14、21、28d采集血清检测猪瘟抗体水平。PCR和IFA检测显示,在接种12、24、36h后肝、脾、肾组织和血清中E0-E2基因和蛋白检出率为100%,接种48h后小鼠肝、脾组织检出率为50%,肾组织和血清检出率为100%。接种72h以后,小鼠血液和组织检测均为阴性。接种后7d试验组体内抗体阳性率为40%,接种后10d小鼠体内抗体阳性率为100%,抗体阻断率在43%～51.2%,接种后28d,猪瘟抗体阳性率为100%,抗体阻断率在75.6%～87.5%。表明rAd-E0-E2在小鼠体内的存留时间最长72h,接种时间与E2抗体水平呈正相关。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 存留规律

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禽脑脊髓炎病毒VR株的致病性研究 被引量：1

6

作者 王红 曹志 +2 位作者 韩乃君 郭伟伟 范根成 《动物医学进展》 北大核心 2016年第10期57-59,共3页

为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引... 为探索禽脑脊髓炎病毒强毒VR株对SPF鸡的致病性,开展了不同接种途径和不同日龄SPF鸡的致病力试验。不同接种途径致病力试验结果表明,AEV VR株口服后不能引起发病;刺种、肌肉注射途径接种随着日龄增大,发病率降低;脑内注射途径接种可引起试验鸡全部发病。最小致病量试验结果显示,VR株脑内注射攻毒的最小致病量为10^(2.0) EID_(50)。不同日龄SPF鸡的致病力试验结果表明,随着试验鸡日龄的增大,其致病力略有差异,日龄越小,发病率越高。结果表明,AEV VR株脑内攻毒70日龄内SPF鸡的发病率为80%及以上,攻毒剂量为10^(4.0)EID_(50)。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎病毒VR株 接种途径 日龄 最小致病量 致病性

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鹅星状病毒的分离鉴定及全基因组序列分析 被引量：28

7

作者 张玉杰 孙宁 +13 位作者 刘东 于静 刘红祥 于可超 任衍倍 高天佐 杨少燕 宫晓 邹敏 张宇龙 王玉超 钟声 马冬 杜元钊 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期2765-2777,共13页

2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同... 2017年10月—2019年5月,本实验室从广东、四川、河北、山东、安徽、辽宁等广大养鹅地区采集了67份典型雏鹅痛风样品进行了实验室检测以及病原的分离鉴定,检测结果表明:所有样品中均检测到了鹅星状病毒,并且约有94.03%的样品为两个不同种的鹅星状病毒混合感染。病原分离结果表明:鹅星状病毒FLX株的变异株病毒(命名为SCCD)可以在鹅胚上稳定增殖,并且能稳定致死10日龄鹅胚,致病力较鹅星状病毒FLX增强;新型鹅星状病毒株(命名为SDPD)不能在鹅胚和SPF鸡胚上稳定增殖。病毒的基因组测序结果表明:鹅星状病毒FLX株与鹅星状病毒FLX的变异株病毒SCCD株、新型鹅星状病毒SDPD株全基因组核苷酸相似性分别为89.7%、58.1%,ORF1b基因氨基酸相似性分别为98.4%、61.0%,ORF2基因氨基酸相似性分别为81.0%、42.5%。将新分离的鹅星状病毒株接种1日龄健康雏鹅,结果表明,鹅星状病毒SCCD株和鹅星状病毒SDPD株虽然能使雏鹅发生死亡,引起肝炎、肾肿胀和增重减少等变化,但雏鹅均无典型痛风(脏器尿酸盐沉积)表现,而两种鹅星状病毒株混合攻毒能使44%的雏鹅发生典型痛风,并与临床发病症状一致。因此,临床上引起雏鹅痛风的病原可能是两种鹅星状病毒,即新型鹅星状病毒和鹅星状病毒FLX的变异株病毒。 展开更多

关键词 雏鹅痛风 两种鹅星状病毒 分离鉴定 序列分析

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检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用 被引量：3

8

作者 陈杨 孟林春 +6 位作者 郭梦娇 张成成 薄宗义 楚电峰 曹永忠 吴艳涛 张小荣 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2062-2072,共11页

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血... 本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法,结合HI试验,为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原,使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R^(2)=0.9176,S/P临界值为0.32,临界滴度是1200。经验证,rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性,最低能检出1∶2000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测,IDEXX-MG方法作为对照,借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致;rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示,本研究建立的rVlhA-ELISA方法和HI试验具有较好的临床应用价值,可以初步应用于MG感染的临床大规模、快速筛查并对结果进行复核。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 VlhA蛋白 抗体检测 间接ELISA

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三种血清学方法和qPCR方法在鸡滑液囊支原体检测中的综合应用研究 被引量：1

9

作者 郭婷婷 赵佳 +7 位作者 马爽 陈杨 樊鹏程 毕涛旭 楚电峰 郭梦娇 吴艳涛 张小荣 《中国家禽》 北大核心 2024年第4期113-119,共7页

为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、... 为评价不同方法对鸡滑液囊支原体(MS)活疫苗免疫和非免疫状态鸡群的监测效果,研究分别采用HI、SPA与ELISA三种抗体检测方法和qPCR方法同步对某养殖场A、B和C三组鸡群进行MS感染和抗体水平监测,其中A鸡群23日龄免疫MS活疫苗(MS-H株),B、C鸡群不免疫MS疫苗。结果显示:三种血清学检测方法所测MS抗体阳性率趋势基本一致,HI抗体效价变化规律和ELISA抗体效价变化规律相似,但血清学方法相对于qPCR方法具有一定的滞后性,qPCR可以最早发现MS野毒感染,且在使用活疫苗免疫的情况下对疫苗和野毒进行鉴别检测。研究提示:在条件允许的情况下,qPCR可以作为MS首选的监测方法;当检测条件受限时,上述三种血清学方法同样也可以用于评估MS野毒感染状况,但对结果的判断受母源抗体水平、疫苗免疫状况、野毒感染时间等多重因素的影响,在结果判断时应进行综合分析。 展开更多

关键词 鸡滑液囊支原体 血凝抑制试验 血清平板凝集试验 酶联免疫吸附试验 qPCR

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2020年我国部分地区禽偏肺病毒流行病学调查 被引量：5

10

作者 肖志宇 王素春 +5 位作者 赵成龙 黄禹丰 陈海燕 崔成都 孙福亮 王楷宬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期712-717,共6页

为调查我国部分地区禽偏肺病毒(a MPV)的感染情况,本研究从福建、四川、广东、江苏4省的8个地区采集鸡、鸭、鹅、鸽的咽喉/泄殖腔双拭子样品共1 920份,利用四重荧光定量RT-PCR方法检测A、B、C、D亚群的aMPV。结果显示,1 920份样品中共检... 为调查我国部分地区禽偏肺病毒(a MPV)的感染情况,本研究从福建、四川、广东、江苏4省的8个地区采集鸡、鸭、鹅、鸽的咽喉/泄殖腔双拭子样品共1 920份,利用四重荧光定量RT-PCR方法检测A、B、C、D亚群的aMPV。结果显示,1 920份样品中共检出aMPV阳性样品51份,其中,B亚群39份,C亚群7份,B亚群和C亚群混合感染5份。4个省aMPV的总阳性率为2.67%(51/1 920),各省aMPV阳性率为0.63%~3.96%;场点阳性率为21.21%(7/33),其中批发市场、零售市场、养殖场和屠宰场场点阳性率分别为80%(4/5)、23%(3/13)、0(0/14)和0(0/1)。鸡a MPV阳性率为3.42%(47/1 373),其中B亚群阳性率为2.78%(38/1 373),C亚群阳性率为0.29%(4/1 373),B和C亚群混合感染阳性率为0.36%(5/1 373),未检测到A和D亚群aMPV。鸽B亚群阳性率为2.63%(1/38),未检测到A、C和D亚群aMPV。鸭C亚群阳性率0.64%(3/466)。研究表明,我国鸡、鸭、鸽中存在aMPV感染,鸡为其主要宿主,B亚群aMPV为优势流行亚群,并首次发现国内鸡群存在B、C亚群aMPV的混合感染。本研究不仅丰富了a MPV的流行病学资料,也为其疫苗研制提供数据参考。 展开更多

关键词 禽偏肺病毒 亚群 流行病学调查 感染情况

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基于VP6蛋白的牛轮状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

11

作者 刘广阔 邹敏 +5 位作者 吴发兴 于皓同 王凯茸 张锐铮 张琪 许信刚 《动物医学进展》 北大核心 2024年第1期1-6,共6页

为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western ... 为了建立牛轮状病毒(BRV)血清抗体的检测方法,从病料中克隆牛轮状病毒VP6基因,构建其表达载体,利用原核表达技术表达重组VP6蛋白,建立牛轮状病毒血清抗体间接ELISA检测方法。结果显示,重组VP6蛋白大小为40 ku,以包涵体形式表达,Western blot证实重组VP6蛋白有良好的反应原性;以4μg/mL浓度的抗原包被酶标板,一抗血清50倍稀释,酶标二抗稀释10000倍稀释,为最佳工作条件,阴阳临界值为0.233,表明该方法具有良好的特异性和敏感性。建立的检测BRV抗体的间接ELISA可用于临床BRV感染的检测。 展开更多

关键词 牛轮状病毒 VP6蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验

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引起肉种鸡产蛋下降的新型坦布苏病毒的分离和鉴定 被引量：6

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作者 刘东 刘红祥 +7 位作者 刘秋云 任衍倍 李彬 刘建涛 王群义 刘平 宋姗姗 杜元钊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2114-2120,共7页

为探究2020年底在南方部分地区出现的肉种鸡群以产蛋下降为主要特征的传染性疾病,本研究通过分子生物学、病毒分离、血清学、动物回归试验,并对分离到的坦布苏病毒E基因进行测序分析,结果显示,从样本中检测到坦布苏病毒,并通过接种鸡胚... 为探究2020年底在南方部分地区出现的肉种鸡群以产蛋下降为主要特征的传染性疾病,本研究通过分子生物学、病毒分离、血清学、动物回归试验,并对分离到的坦布苏病毒E基因进行测序分析,结果显示,从样本中检测到坦布苏病毒,并通过接种鸡胚和细胞分离到该病毒;攻毒试验显示该病毒可以对SPF蛋鸡造成严重的产蛋下降,与临床发病症状一致;血清学检测分析显示发病鸡群坦布苏病毒抗体血清学变化显著;E基因测序分析发现该坦布苏病毒区别于目前国内水禽流行毒株,与泰国坦布苏病毒的同源性较高。以上研究结果分析表明造成近期肉种鸡群产蛋下降的病因为一种新型坦布苏病毒。该研究为家禽产蛋下降案例的分析与防控提供了方向与思路,为不同易感宿主坦布苏病毒的分离鉴定及其遗传变异分析提供了理论基础。 展开更多

关键词 肉种鸡 产蛋下降 新型坦布苏病毒

原文传递

肉鸡呼肠孤病毒的分离鉴定及致病性研究 被引量：6

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作者 张玉杰 刘东 +6 位作者 刘红祥 宫晓 李陆梅 赵子曈 邹敏 范根成 杜元钊 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2020年第4期41-48,55,共9页

【目的】从临床发病的疑似感染鸡呼肠孤病毒的白羽肉鸡病料中分离鉴定获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,对SD18株进行致病性及传播特性研究,为该病毒的深入研究和综合防治奠定基础。【方法】无菌采集疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌... 【目的】从临床发病的疑似感染鸡呼肠孤病毒的白羽肉鸡病料中分离鉴定获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,对SD18株进行致病性及传播特性研究,为该病毒的深入研究和综合防治奠定基础。【方法】无菌采集疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物,分离病原物,在LMH细胞上培养,并连续盲传3代,经无菌生理盐水倍比稀释,采用Reed-Muench法测定病毒鸡胚半数致死量(ELD 50)和组织细胞半数感染量(TCID 50);对分离毒株进行理化特性和血凝特性测定;利用设计的鸡呼肠孤病毒L1和S1基因特异性引物,对提取的病毒总RNA进行RT-PCR扩增,经PCR鉴定为阳性的菌落进行基因测序以及核苷酸同源性比对和系统遗传进化分析;用该分离株病毒对SPF鸡和白羽肉鸡进行动物回归试验,并用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定攻毒后的SPF鸡血清中呼肠孤病毒抗体滴度。【结果】从疑似感染鸡呼肠孤病毒发病鸡跗关节处的肌腱和渗出物中分离获得1株鸡源呼肠孤病毒SD18,其ELD 50为10-6.5/0.1 mL,TCID 50为10-7.36/0.1 mL。RT-PCR结果显示,目的基因片段长度分别为1100,750,265 bp,依次为鸡呼肠孤病毒的S1、σC和L1基因片段。核苷酸同源性比对结果显示,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)的S1基因序列同源性达92.7%,与Ⅰ群鸡病毒性关节炎疫苗S1133株的同源性仅为59.0%。核酸序列遗传进化分析表明,该分离株SD18与Ⅴ群鸡源呼肠孤病毒TW-918(台湾株)处于同一进化分支上,与Ⅰ群鸡源呼肠孤病毒S1133株处于不同的进化分支上,说明新分离的肉鸡呼肠孤病毒SD18株属于基因Ⅴ群,可能是Ⅰ群经典鸡源呼肠孤病毒S1133株的变异毒株。SPF鸡和白羽肉鸡回归试验表明,SD18株病毒能够引起鸡病毒性关节炎,与临床发病一致,并能水平传播。接种试验表明,病毒SD18能致死鸡胚,打开死亡鸡胚可见其绒毛尿囊膜增厚、尿酸盐沉� 展开更多

关键词 鸡呼肠孤病毒 病毒分离鉴定 病毒致病性

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2012—2018年山东省部分地区猪瘟分子流行病学研究 被引量：6

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作者 邹敏 宫晓 +7 位作者 张青 杨旭兵 于可超 刘东 刘蕾 李陆梅 刘拥军 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2019年第10期20-26,共7页

为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,... 为了解山东省不同地区猪群中猪瘟病毒(CSFV)分子流行病学特点,采用RT-PCR方法,对2012—2018年收集到的79份临床疑似猪瘟病例组织样品,进行E2基因主要抗原区域扩增与序列测定,对获取的59个CSFVE2基因主要抗原区域序列进行遗传演化分析,并构建了遗传发育进化树。结果显示:7株CSFV属1.1亚型,其中有3个毒株的E2基因与疫苗株E2基因几乎一致,提示这7个毒株可能来自疫苗毒或为类疫苗毒株;SDJZ-15株归属2.1b亚型,其E2基因推导氨基酸仅A51(丙氨酸)突变为V51(缬氨酸);其他51个毒株属2.1d亚型,与2型CSFV的E2基因主要抗原区(28~90aa)氨基酸序列相比发生了4处突变,总体保持稳定。研究结果表明,2.1亚群中的2.1d分支CSFV是山东省当前的优势流行毒株。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 基因型 遗传变异

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2018—2019年山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查 被引量：5

15

作者 梁俊超 李坤 +6 位作者 袁飞 王宗升 刘红祥 郝尧光 王辉之 刘东 于录 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期13-19,26,共8页

为了解近年来山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及分子遗传变异情况。对2018—2019年山东不同地区493份疑似PRRSV样品进行RT-PCR检测,并对34份PRRSV阳性样品进行ORF 5基因核苷酸及GP5蛋白氨基酸序列分析比较。结果显示,2018... 为了解近年来山东地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行及分子遗传变异情况。对2018—2019年山东不同地区493份疑似PRRSV样品进行RT-PCR检测,并对34份PRRSV阳性样品进行ORF 5基因核苷酸及GP5蛋白氨基酸序列分析比较。结果显示,2018年和2019年送检样品中PRRSV抗原阳性率分别为20.79%和24.09%;同源性对比及遗传进化分析,34株PRRSV主要属于谱系1和谱系8,且2018年和2019年均为谱系1中的PRRSV检出率最高,分别为50.00%和59.10%;氨基酸分析显示,34株PRRSV主要以点突变为主,未见插入突变,与不同谱系代表毒株相比,诱饵表位、中和表位、潜在毒力位点及N-糖基化位点均存在不同程度的变异。结果表明,NADC 30 like PRRSV可能已成为山东地区优势野毒毒株,且仍在不断发生变异。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 流行病学 遗传进化 抗原表位 N-糖基化位点

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鸭坦布苏病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：4

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作者 邹敏 张青 +4 位作者 王红 刘东 刘新文 范根成 吴发兴 《中国兽药杂志》 2018年第11期14-18,共5页

为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物... 为建立一种能快速检测鸭坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)的分子生物学方法,从GenBank中下载了51个具有代表性的黄病毒全基因组序列及白洋淀病毒等5个禽源黄病毒株E基因序列,进行了黄病毒E基因序列分析,应用Primer 5.0软件设计了一对引物,扩增目的片段为549 bp,进行了TMUV RT-PCR检测方法的特异性、敏感性、重复性试验,建立了TMUV RT-PCR检测方法应用该方法对收集的14份临床疑似蛋鸭鸭坦布苏病毒病发病样品进行了检测,共检出6份TMUV核酸阳性样品,检出率达42.86%。结果表明,该方法可用于水禽坦布苏病毒病的临床快速诊断、检测及流行病学调查。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 E基因 RT-PCR

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引起人工授精种鸡产蛋下降的鸭源鸡杆菌的分离鉴定 被引量：4

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作者 张玉杰 刘东 +11 位作者 孙宁 刘红祥 高天佐 郭玉广 于静 袁飞 宋姗姗 王玉超 钟声 马冬 张宇龙 杜元钊 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1604-1611,共8页

自2000年以来,我国不同地区经人工授精的蛋种鸡和肉种鸡在开产后出现产蛋下降的情况逐年增加。为确定引起该病的病原,本研究从山东、辽宁、河南地区的蛋种鸡和肉种鸡场采集发病样品66份,进行病毒和细菌的分离鉴定。结果显示,所有样品中... 自2000年以来,我国不同地区经人工授精的蛋种鸡和肉种鸡在开产后出现产蛋下降的情况逐年增加。为确定引起该病的病原,本研究从山东、辽宁、河南地区的蛋种鸡和肉种鸡场采集发病样品66份,进行病毒和细菌的分离鉴定。结果显示,所有样品中均未发现疑似病毒和支原体,而鸭源鸡杆菌检出率高达100%。对分离株16S rRNA基因序列进行核苷酸比对和遗传进化分析,结果表明所有分离株16S rRNA基因核苷酸高度同源,与已报道的鸭源鸡杆菌同源性达99.8%以上,处于同一遗传进化分支。动物回归试验结果表明,135日龄开产母鸡经生殖道2次接种鸭源鸡杆菌5 d后开始减料、产蛋下降,个别鸡精神沉郁,但无死亡现象,剖检主要表现为输卵管囊肿,卵泡破裂、变形以及肝脏黄色坏死,与自然发病症状一致。由此确定,引起人工授精种鸡产蛋下降的病原为鸭源鸡杆菌。 展开更多

关键词 人工授精 产蛋下降 鸭源鸡杆菌 分离鉴定

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基于哺乳动物细胞表达系统的猪瘟基因工程E2亚单位疫苗动物免疫效果评价 被引量：4

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作者 颜仁和 刘蕾 +7 位作者 王升尧 李安迪 万鹏飞 仇珍珍 范根成 李红卫 杜元钊 高永新 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期38-41,共4页

猪瘟E2基因工程亚单位疫苗能诱导机体产生抗CSFV中和抗体,被认为是最具应用前景的新型猪瘟疫苗。本研究利用稳定表达重组CSFV E2蛋白的细胞系HEK-293T-E2,制备E2亚单位疫苗并在动物体内检测其免疫原性。结果显示,制备的E2亚单位疫苗能... 猪瘟E2基因工程亚单位疫苗能诱导机体产生抗CSFV中和抗体,被认为是最具应用前景的新型猪瘟疫苗。本研究利用稳定表达重组CSFV E2蛋白的细胞系HEK-293T-E2,制备E2亚单位疫苗并在动物体内检测其免疫原性。结果显示,制备的E2亚单位疫苗能成功诱导试验兔和仔猪产生抗CSFV抗体,相比对照组,试验动物能够抵抗猪瘟标准强毒石门株的攻击,并且没有产生体温升高及其他不良反应,证实了该疫苗的有效性和安全性。本研究为新型猪瘟亚单位疫苗的研发提供了重要线索。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 亚单位疫苗 HEK-293T-E2 抗CSFV抗体 免疫效果评价

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猫细小病毒聚合酶螺旋反应检测方法的建立及应用 被引量：3

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作者 刘金波 魏衍全 +3 位作者 薛惠文 邢小勇 孙鹏 张勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1068-1073,共6页

为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反... 为建立一种快速、简便检测猫细小病毒(FPV)的聚合酶螺旋反应(PSR)恒温扩增方法,本研究参考GenBank中登录的FPV基因序列(MG924893.1),以其保守基因NS1为靶基因设计并合成分别用于普通PCR和PSR方法的2对特异性引物,以及一对加速引物,经反应条件优化,建立了检测FPV的PSR方法。优化结果显示,体系内包含6 mmol/LMgSO_(4)、0.8 mol/L甜菜碱,67℃恒温反应45 min结束反应,然后加入终浓度为20×SYBRGreenI染料,肉眼在可见光下观察颜色变化即可判定检测结果。利用该方法检测猫冠状病毒(FCoV)、猫诺如病毒(FNoV)cDNA和FPV,结果显示除了FPV外,与其他病原均无交叉反应,特异性强;将提取的FPV基因组DNA 10倍倍比稀释,利用建立的PSR方法进行敏感性试验,结果显示,该方法对FPV基因组的最低检测限为6.75×10^(3)拷贝/μL,比普通PCR方法检测下限低10倍,敏感性可接受;利用本方法进行组内组间重复试验,结果显示组内与组间重复性试验检测结果一致,均为阳性,重复性好。利用建立的PSR方法对110份疑似感染FPV的猫粪便样品进行检测,结果显示PSR方法与常规PCR方法的检测结果基本一致,二者的总符合率为98.18%,表明本研究建立的PSR方法可用于检测临床样品。本研究首次建立的FPVPSR方法仅需2对引物在67℃下完成,无需复杂的变温仪器,反应后加入染料肉眼即可判定结果,整个过程在45 min内结束,设计引物简单,操作步骤少,用时较短,适合市县级宠物医院FPV感染的快速诊断。 展开更多

关键词 猫细小病毒 聚合酶螺旋反应 恒温扩增 快速诊断

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禽脑脊髓炎、鸡痘二联活疫苗安全性、最小免疫剂量及免疫效力试验 被引量：3

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作者 王红 曹志 +7 位作者 毛娅卿 吴涛 宋新宇 宫晓 张恒 马爽 李慧姣 范根成 《中国兽药杂志》 2018年第7期16-21,共6页

为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘... 为确定禽脑脊髓炎(AE)、鸡痘(AP)二联活疫苗的安全性、最小免疫剂量及免疫效力,自制3批二联活疫苗进行研究。结果显示,鸡接种10倍剂量疫苗后精神、食欲及发育均正常,临床表现和剖检均无异常;AEV YBF02株的最小免疫剂量为100 EID50,鸡痘鹌鹑化弱毒株的最小免疫剂量为10 EID50;3批疫苗AEV YBF02株的病毒含量均≥103.2EID50/羽份,鸡痘鹌鹑化弱毒株的病毒含量均≥103.4EID50/羽份,攻毒后保护指数为89~100。试验表明,自制二联活疫苗安全、有效、质量可控,可用于预防禽脑脊髓炎和鸡痘。 展开更多

关键词 禽脑脊髓炎 鸡痘 安全性 最小免疫剂量 免疫效力

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