目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别...目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。展开更多
目的:探讨慢性HBV感染(CHI)不同临床阶段患者外周血T细胞状态,为CHI临床分期和防治提供科学依据。方法:本研究收录CHI患者,按照患者临床症状将其划分为免疫耐受(IT)、免疫活跃(IA)、免疫控制(IC)、再活化组(RA),健康志愿者(HD)为对照组...目的:探讨慢性HBV感染(CHI)不同临床阶段患者外周血T细胞状态,为CHI临床分期和防治提供科学依据。方法:本研究收录CHI患者,按照患者临床症状将其划分为免疫耐受(IT)、免疫活跃(IA)、免疫控制(IC)、再活化组(RA),健康志愿者(HD)为对照组。分离外周血单个核细胞(PBMC),使用多色流式细胞术分析患者外周血CD4^+T细胞、CD8^+T细胞亚群频率和CD8^+T细胞表面PD-1的表达量。结果:与HD相比,CHI组T细胞及亚群变化无显著差异;RA组CD3^+T细胞百分比显著下降。对于CD8^+T细胞亚型,IC和RA组初始CD8^+T细胞(Na ve T cell,Tn)频率下降;IT组效应记忆CD8^+T细胞(Tem)频率降低;而IC组效应CD8^+T细胞(Te)频率显著增高(P<0.05)。相较于高HBV DNA载量组(IT),低HBV DNA载量组(IC和RA)Tn频率降低,Te频率增高(P<0.05);IA组CD8^+T细胞PD-1表达量最高,其次是IC组(P<0.05)。对于CD4^+T细胞亚型,与HD相比,CHI中IT和RA组中枢记忆CD4^+T细胞(Tcm)频率明显升高;各组Treg频率均上升,IA组Treg频率升高较明显(P<0.05),Treg频率与ALT呈正相关(r=0.7436,P=0.0036)。结论:临床诊断指标联合CHI患者T细胞亚型频率变化及免疫抑制功能检测,对慢性HBV感染疾病的分期诊断和治疗以及预测预后转归具有重要参考意义。展开更多
文摘目的:比较不同长度的hTERT启动子以及Survivin启动子在肺癌A549细胞中的启动活性,为肺癌靶向性基因治疗提供依据。方法:用PCR法扩增1084 bp hTERT启动子、980 bp Survivin启动子和红色荧光蛋白基因;在真核表达质粒pGL3-hTERT基础上分别构建3种启动子调控的、以红色荧光蛋白CDS为目的基因的真核表达质粒pGL-H-RED、pGL-LH-RED和pGL-S-RED。将重组质粒用脂质体分别转染A549和MRC-5细胞,72h后用Imagepro-Plus6.0分析3种启动子在相同时间内启动红色荧光蛋白的表达水平。结果:重组质粒在A549细胞中观察到了红色荧光,在MRC-5细胞中无红色荧光。pGL-S-RED质粒在A549细胞中表达最强,pGL-LH-RED次之,pGL-H-RED最弱,3种质粒在A549细胞中的荧光强度(IOD)分别为201.17、171.70和136.34。结论:所克隆的hTERT启动子和Survivin启动子均表现出肿瘤特异性,其中Survivin启动子在肺癌A549细胞中具有最好的启动效应,可望开发成为肺癌靶向性基因治疗工具。
文摘目的:探讨慢性HBV感染(CHI)不同临床阶段患者外周血T细胞状态,为CHI临床分期和防治提供科学依据。方法:本研究收录CHI患者,按照患者临床症状将其划分为免疫耐受(IT)、免疫活跃(IA)、免疫控制(IC)、再活化组(RA),健康志愿者(HD)为对照组。分离外周血单个核细胞(PBMC),使用多色流式细胞术分析患者外周血CD4^+T细胞、CD8^+T细胞亚群频率和CD8^+T细胞表面PD-1的表达量。结果:与HD相比,CHI组T细胞及亚群变化无显著差异;RA组CD3^+T细胞百分比显著下降。对于CD8^+T细胞亚型,IC和RA组初始CD8^+T细胞(Na ve T cell,Tn)频率下降;IT组效应记忆CD8^+T细胞(Tem)频率降低;而IC组效应CD8^+T细胞(Te)频率显著增高(P<0.05)。相较于高HBV DNA载量组(IT),低HBV DNA载量组(IC和RA)Tn频率降低,Te频率增高(P<0.05);IA组CD8^+T细胞PD-1表达量最高,其次是IC组(P<0.05)。对于CD4^+T细胞亚型,与HD相比,CHI中IT和RA组中枢记忆CD4^+T细胞(Tcm)频率明显升高;各组Treg频率均上升,IA组Treg频率升高较明显(P<0.05),Treg频率与ALT呈正相关(r=0.7436,P=0.0036)。结论:临床诊断指标联合CHI患者T细胞亚型频率变化及免疫抑制功能检测,对慢性HBV感染疾病的分期诊断和治疗以及预测预后转归具有重要参考意义。
