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HepaCAM基因转染对肾癌细胞侵袭活性的影响 被引量：3
1
作者 荀春华 罗春丽 +3 位作者 吴小候 谢建红 杨淑哲 潘翠翠 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1029-1033,共5页
目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因转染对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞株786-0侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞后,... 目的:研究肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因转染对肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)细胞株786-0侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:将携带hepaCAM基因的重组质粒hepaCAM-pEGFPN2转染786-0细胞后,用G418筛选形成阳性克隆并扩增培养,以转染了pEGFPN2和未转染的786-0细胞作为对照。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR法检测hepaCAM和基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)-2和MMP-9 mRNA的表达,明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性变化,Transwell小室法检测786-0细胞的体外侵袭能力。结果:稳定转染hepaCAM基因后,786-0细胞的hepaCAM mRNA表达水平明显上调(P<0.01),而MMP-2和MMP-9 mRNA的表达和酶活性明显受抑(P<0.05),hepaCAM基因的导入显著削弱了RCC细胞的跨膜侵袭能力(P<0.01)。结论:hepaCAM可能通过下调MMP-2和MMP-9的表达以及抑制明胶酶的活性,进而抑制肾癌细胞786-0的侵袭力。 展开更多
关键词 肾肿瘤 细胞黏附分子 转染 肿瘤侵袭 肿瘤细胞 培养的 基因 hepaCAM
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GBLP在人脐静脉内皮细胞中差异表达的验证
2
作者 毛小琴 邱峰 +2 位作者 邱宗荫 陈世知 贾雄飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期914-916,共3页
目的验证经手性药物比较蛋白质组学筛选鉴定的差异表达蛋白G蛋白β亚单位2样1蛋白(guanine nu-cleotide-binding protein subunit beta2-like1,GBLP)。方法分别用80μmol/L的R/S-普萘洛尔(R/S-propranolol,R/S-PRO)处理人脐静脉内皮细胞... 目的验证经手性药物比较蛋白质组学筛选鉴定的差异表达蛋白G蛋白β亚单位2样1蛋白(guanine nu-cleotide-binding protein subunit beta2-like1,GBLP)。方法分别用80μmol/L的R/S-普萘洛尔(R/S-propranolol,R/S-PRO)处理人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)3h。采用比较蛋白质组学方法分离鉴定差异表达蛋白-GBLP,Western blot法和激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)分别验证经R/S-PRO作用后,HUVEC细胞中GBLP的表达丰度差异和细胞内定位。结果Western blot和LSCM都证实,GBLP在S-PRO作用后的HUVEC中的表达丰度明显低于经R-PRO作用后的表达(P=0.011);GBLP定位于HUVEC的细胞膜和细胞质中,在细胞质中呈均匀分布,在膜上有局部聚集分布现象。结论Western blot和LSCM验证结果与蛋白质组学鉴定结果一致。 展开更多
关键词 蛋白质组学 GBLP 普萘洛尔 对映异构体 人脐静脉内皮细胞 WESTERN BLOT 激光共聚焦扫描显微镜
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Mad1对膀胱肿瘤作用的体内实验研究 被引量：1
3
作者 胡宏波 罗春丽 +3 位作者 唐敏 蔡晓钟 赵培 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第9期919-921,958,共4页
目的:在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型,观察转染Mad1表达质粒后对膀胱肿瘤增殖的抑制作用。方法:MNU对SD大鼠进行膀胱灌注诱发膀胱肿瘤,荷瘤动物随机分为3组:Mad1转染组(A组),空载体转染组(B组)和生理盐水转染组(C组)。通过大鼠重量(RBW)... 目的:在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型,观察转染Mad1表达质粒后对膀胱肿瘤增殖的抑制作用。方法:MNU对SD大鼠进行膀胱灌注诱发膀胱肿瘤,荷瘤动物随机分为3组:Mad1转染组(A组),空载体转染组(B组)和生理盐水转染组(C组)。通过大鼠重量(RBW)、膀胱绝对重量(BAW)、膀胱相对重量(BRW)、Mad1和TERT mRNA表达水平等指标,用流式细胞仪等检测手段,比较转染前后Mad1和TERT的表达差异、观察Mad1对膀胱肿瘤增殖的抑制作用以及探讨相应的机理。结果:成功在原位建立膀胱肿瘤的大鼠模型。A组与B、C两组相比RBW无显著性差异(P>0.05),但BAW和BRW分别有非常显著差异性(P<0.01)及显著差异性(P<0.05);Mad1mRNA相对表达量明显增加;TERT mRNA相对表达量明显降低;流式细胞仪显示G0/G1期细胞显著增加(P<0.01),S期细胞显著减少(P<0.01).结论:高表达的Mad1能抑制膀胱肿瘤的增殖。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 动物模型 细胞周期 转染
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血管性痴呆大鼠行为学及海马CA1区CREB改变的研究 被引量：7
4
作者 韦永琼 曾照芳 +1 位作者 陈力学 申崇标 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期78-80,共3页
目的:观察缺血性痴呆(VD)大鼠神经行为学及海马CREB的改变,并探讨两者间的关系。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎(2 vessels obstruction,2-VO)法建立血管性痴呆模型,8周后采用Morriss水迷宫实验测试大鼠记忆行为,海马HE染色检测神经... 目的:观察缺血性痴呆(VD)大鼠神经行为学及海马CREB的改变,并探讨两者间的关系。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎(2 vessels obstruction,2-VO)法建立血管性痴呆模型,8周后采用Morriss水迷宫实验测试大鼠记忆行为,海马HE染色检测神经元损伤,PCR及免疫组化检测海马CAl区CREB表达的变化。结果:模型组与正常组相比,大鼠认知功和神经元损伤程度明显,海马区CREB表达也明显降低(P<0.01)。结论:2-VO法成功制作了缺血性痴呆大鼠模型。模型大鼠脑内海马区CREB水平明显下降,其空间学习记忆障碍可能与海马区CREB表达下降有关。 展开更多
关键词 血管性痴呆 CREB 海马CAL区 水迷宫
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补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原及转化生长因子p1的影响 被引量：2
5
作者 刘伟 马庆波 +3 位作者 陈娟娟 孔海霞 魏茂提 王世鑫 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期61-63,共3页
目的 观察补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）表达和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及转化生长因子（TGF）-β1的影响.方法 将人工合成的17肽片断C3f加入培养基中刺激MRC-5细胞,通过细胞免疫组化和ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1细胞内、外... 目的 观察补体片段C3f对人胚肺成纤维细胞（MRC-5）表达和分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原及转化生长因子（TGF）-β1的影响.方法 将人工合成的17肽片断C3f加入培养基中刺激MRC-5细胞,通过细胞免疫组化和ELISA法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1细胞内、外表达情况.结果 随着C3f浓度的增加,MRC-5细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达量逐渐降低,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）.MRC-5胞质中TGF-β1的表达量随C3f浓度增加降低趋势,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 C3f能够抑制MRC-5细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原和TGF-β1的形成,减轻肺组织的纤维化程度. 展开更多
关键词 成纤维细胞 补体 胶原 转化生长因子Β1
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microRNAs在肾透明细胞癌组织中的异常表达
6
作者 彭武建 黄远帅 +1 位作者 张丽 戴勇 《临床泌尿外科杂志》 北大核心 2011年第12期940-943,957,共5页
目的:应用microRNAs芯片筛选肾透明细胞癌细胞差异表达microRNAs,并寻找差异表达microRNAs调控的靶基因,为进一步研究其在肾透明细胞癌发病机制中的作用打下基础。方法:应用哺乳动物microRNAs表达谱芯片检测11位肾透明细胞癌患者癌组织... 目的:应用microRNAs芯片筛选肾透明细胞癌细胞差异表达microRNAs,并寻找差异表达microRNAs调控的靶基因,为进一步研究其在肾透明细胞癌发病机制中的作用打下基础。方法:应用哺乳动物microRNAs表达谱芯片检测11位肾透明细胞癌患者癌组织及非肿瘤肾组织中microRNAs差异表达。结果:81种microRNAs在肾透明细胞癌组中有效表达,其中48种microRNAs仅在肾透明细胞癌组中有效表达;42种microRNAs在对照组中有效表达,9种microRNAs仅在对照组中有效表达。33种microRNAs在两组中均表达,其中19种microRNAs表达分析有显著差异。芯片显示结果经northern blot分析确认。结论:microRNAs在肾透明细胞癌细胞中异常表达,提示它们可能在肾透明细胞癌的发生发展中起着重要的调控作用。 展开更多
关键词 肾肿瘤 透明细胞癌 微小RNA 差异表达
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自身淬灭荧光技术定量检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA 被引量：1
7
作者 王箭 罗进勇 +1 位作者 王虹 尹一兵 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第4期224-226,230,共4页
目的 探讨自身淬灭荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA的临床应用价值。方法 以建立的淋病奈瑟菌自身淬灭FQ-PCR方法为基础，对59例疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本进行检测，并与分离培养法进行分析比较。结果... 目的 探讨自身淬灭荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床分离的淋病奈瑟菌DNA的临床应用价值。方法 以建立的淋病奈瑟菌自身淬灭FQ-PCR方法为基础，对59例疑为淋病奈瑟菌感染患者的标本进行检测，并与分离培养法进行分析比较。结果自身淬灭FQ-PCR标准品浓度为10^2～10^7拷贝／μ时，方法能够保持良好的线性关系，标准曲线为：Y=-0．273X＋10．781，相关系数为0．9895。自身淬灭FQ-PCR阳性检出率为64．41％，高于培养法52．54％（χ^2=5．14，P〈0．05）；两者特异性均为100％。结论 自身淬灭FQ-PCR用于临床分离的淋病奈瑟菌DNA检测，敏感性、特异性均高，对淋病的诊断有较高价值，实现了PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化，简便省时。 展开更多
关键词 淋病奈瑟菌 自身淬灭探针 荧光定量聚合酶链反应 实验室技术与方法
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核酸纯化对蝎型探针定量PCR准确检测结核分枝杆菌DNA的必要性研究
8
作者 王虹 王箭 +2 位作者 阳强 朱旦 尹一兵 《中国感染控制杂志》 CAS 2007年第1期9-11,15,共4页
目的探讨经煮沸、Chelex 100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测中的有效性，以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的... 目的探讨经煮沸、Chelex 100树脂处理、核酸纯化三种方法平行处理的标本在进行结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测中的有效性，以得到标本的最佳处理效果。方法收集42例结核确诊患者的多种标本和14例非肺结核患者的痰标本，对其分别用上述3种方法平行处理后，采用蝎型探针荧光定量PCR法进行检测，并分析其结果。结果核酸纯化法处理的标本阳性检出率为100％，明显高于煮沸法57．14％和Chelex 100树脂法52.38％（分别为P=0．0103，P=0．0233）；尤其是外观呈血性和菌阴性的标本，采用核酸纯化法处理标本后检测所得结核DNA量较其他方法处理所得量高约1～2个数量级。结论标本的处理对于结核分枝杆菌蝎型探针荧光定量PCR检测十分重要，煮沸（裂解）法和Chelex 100树脂法不适合用以处理临床标本，而应使用核酸纯化法。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 结核 诊断 实验室技术与方法
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二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA 被引量：2
9
作者 王虹 钟敏 +2 位作者 舒朝忠 陈淑惠 尹一兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期661-663,666,共4页
目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧... 目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础,对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测,并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在102～106copies/μl时,方法能够保持良好的线性关系(相关系数为0.9994),阳性检出率(100%)显著高于抗酸染色法(16.28%)和培养法(37.21%)的检出率,与MTD试验的检出率(100%)一致。MTD试验检测时间约4～5h,而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果,检测费用仅为MTD的1/4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点,该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 荧光定量PCR 二聚体蝎型探针
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