怀地黄内生细菌的分离鉴定及抗菌活性 被引量：11

1

作者 王瑞飞 康春晓 +1 位作者 许圆圆 杨清香 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第13期82-86,共5页

从药用植物怀地黄的根中分离出32株内生细菌,并选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、地黄斑枯病和地黄根腐病5种菌作为供试菌株,采用点菌法、平板对峙法和菌饼法测定抗菌活性。结果显示,怀地黄中分离的32株内生菌对5种供试菌具有不... 从药用植物怀地黄的根中分离出32株内生细菌,并选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉、地黄斑枯病和地黄根腐病5种菌作为供试菌株,采用点菌法、平板对峙法和菌饼法测定抗菌活性。结果显示,怀地黄中分离的32株内生菌对5种供试菌具有不同的抑制能力,其中有8株细菌对供试的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和黑曲霉都有抑制作用,显示出广谱的抗菌性;有2株细菌DH-10和DH-11对选取的5种供试菌都有抑制作用,且抗菌活性较强,具有生防菌开发潜力。所分离的活性内生菌通过16S rRNA基因序列分析,主要分布在芽孢杆菌属、假单胞菌属和大肠埃希氏菌属,其中对地黄斑枯病和根腐病都具有拮抗作用的内生菌主要集中在芽孢杆菌属中。 展开更多

关键词 怀地黄 内生细菌 抑菌活性 生物防治

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GUS报告系统在植物基因功能研究中的应用和优化 被引量：6

2

作者 杨丹丹 王俊杰 梁卫红 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期761-768,共8页

β-葡糖醛酸酶(GUS)报告系统是现代分子生物学研究领域中被广泛使用的一种重要工具,在解析基因时空表达调控的研究中发挥着重要作用.本文概述了报告基因GUS的生化特性及检测手段,从启动子元件鉴定、基因诱捕、无标记转基因技术等方面论... β-葡糖醛酸酶(GUS)报告系统是现代分子生物学研究领域中被广泛使用的一种重要工具,在解析基因时空表达调控的研究中发挥着重要作用.本文概述了报告基因GUS的生化特性及检测手段,从启动子元件鉴定、基因诱捕、无标记转基因技术等方面论述GUS的应用现状和优势,并针对内源GUS、GUS抑制因子等问题和改进优化手段进行了分析,为该技术在植物功能基因研究中进一步拓展提供新线索和思路. 展开更多

关键词 β-葡糖醛酸酶报告基因(GUS) 转基因植物 功能分析

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N离子束注入与DES复合诱变选育腺苷高产菌株 被引量：5

3

作者 刘国生 李金鑫 +2 位作者 刘磊 谷艳昌 许航 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第4期143-146,共4页

为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250 s与DES处理10 min为最... 为了获得腺苷高产菌株,以肌苷产生菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)HSD1206(Ade-、Thi-、SGr)为出发菌株,通过硫酸二乙酯(DES)处理、N离子束注入进行单因子和复合诱变。参照菌种致死率曲线,确定N离子束注入250 s与DES处理10 min为最佳诱变时间。经过多轮诱变和筛选,获得了黄嘌呤、硫胺素、组氨酸三重缺陷型,腺嘌呤脱氨酶活性缺失及磺胺胍抗性菌株DI4-24和DI4-182,其遗传标记为Xan-、Thi-、His-、Deam-、SGr,连续传代后性状稳定,在优化的发酵培养基中发酵后腺苷产量可分别达到18.56 g/L和17.13 g/L。由此证明,通过物理、化学复合诱变,阻断枯草芽孢杆菌营养缺陷型菌株产肌苷途径,打通合成腺苷途径的诱变思路在实验室环境下是可行的。 展开更多

关键词 腺苷 枯草芽孢杆菌 离子束注入 硫酸二乙酯 复合诱变 黄嘌呤缺陷型

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不同裂解液对血管蛋白提取和磷酸化蛋白免疫印迹的影响 被引量：4

4

作者 任向波 吴秀丽 李芬 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第5期102-106,共5页

为寻找一种适合血管组织蛋白提取的裂解液配方以及用于磷酸化蛋白的免疫印迹分析,运用3种不同的细胞裂解液A,B和C,分别对经预处理的等量猪冠状动脉血管样品进行总蛋白的提取,BCA法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分... 为寻找一种适合血管组织蛋白提取的裂解液配方以及用于磷酸化蛋白的免疫印迹分析,运用3种不同的细胞裂解液A,B和C,分别对经预处理的等量猪冠状动脉血管样品进行总蛋白的提取,BCA法测蛋白含量,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白进行分离,免疫印迹法检测pERK,p-AKT,p-MLC和p-MYPT1 4种磷酸化蛋白表达以比较3种裂解液的裂解效果.结果表明,3种裂解液均可以满足一般免疫印迹分析的要求,其中C液提取的蛋白浓度最低,B液提取的蛋白含量最高,但不适于低含量的小分子磷酸化蛋白p-MLC的检测,A液用于免疫印迹检测大、中、小3种分子量的磷酸化蛋白效果最佳.即细胞裂解液A(50mmol·L-1 pH 7.4Tris-HCl,150mmol·L-1 NaCl,0.1%SDS,1%NP-40,1mmol·L-1 EDTA,1mmol·L-1 EGTA,临用前加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂)可作为提取血管组织总蛋白进一步用于Western检测的一种理想配方. 展开更多

关键词 细胞裂解液 血管 总蛋白提取 免疫印迹

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淡水生态系统中反硝化型厌氧甲烷氧化微生物的研究进展 被引量：3

5

作者 王瑞飞 王亚利 杨清香 《环境污染与防治》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1443-1448,共6页

反硝化型厌氧甲烷氧化(DAMO)是在淡水生态系统中发现的一种全新的厌氧甲烷氧化途径,偶联了全球碳循环和氮循环,与NC10门细菌、DAMO古菌及厌氧氨氧化菌密切相关。首先介绍DAMO途径在淡水生态系统中的发现及其功能微生物。其次,重点阐述D... 反硝化型厌氧甲烷氧化(DAMO)是在淡水生态系统中发现的一种全新的厌氧甲烷氧化途径,偶联了全球碳循环和氮循环,与NC10门细菌、DAMO古菌及厌氧氨氧化菌密切相关。首先介绍DAMO途径在淡水生态系统中的发现及其功能微生物。其次,重点阐述DAMO功能微生物在湖泊、湿地和河流等淡水环境中的研究进展,并对聚合酶链式反应(PCR)、荧光原位杂交(FISH)及高通量测序技术在DAMO功能微生物检测中的应用及发展进行总结与分析。最后,展望DAMO在淡水生态系统中的研究前景。 展开更多

关键词 反硝化型厌氧甲烷氧化 NC10门细菌 厌氧氨氧化菌 反硝化型厌氧甲烷氧化古菌

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连作地黄根际土壤中固氮耐酚酸细菌的分离鉴定 被引量：3

6

作者 王瑞飞 王妍 +2 位作者 姜恬 李学梅 杨清香 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第10期229-232,共4页

以连作地黄根际土壤中的微生物为对象,筛选既能够固氮又能够耐受酚酸类物质的细菌,并对其进行鉴定,为克服连作障碍的菌剂开发提供菌种资源。通过阿须贝无氮培养基平板涂布及分离纯化试验,最终获得菌落形态特征鲜明的2株固氮菌:7号菌菌... 以连作地黄根际土壤中的微生物为对象,筛选既能够固氮又能够耐受酚酸类物质的细菌,并对其进行鉴定,为克服连作障碍的菌剂开发提供菌种资源。通过阿须贝无氮培养基平板涂布及分离纯化试验,最终获得菌落形态特征鲜明的2株固氮菌:7号菌菌落湿润、边缘光滑、个体较大,橘黄色;12号菌菌落边缘光滑、个体较小,乳白色。耐酚酸试验结果显示,在125、250 mg/L对羟基苯甲酸浓度下,7号菌液的D_(600 nm)分别是对照组的2.78、1.93倍,12号菌液的D_(600 nm)分别是对照组的3.66、4.66倍,因此,2株固氮菌能有效耐受一定浓度的对羟基苯甲酸。生理生化分析结果显示,2株菌均具备水解淀粉、分解丙酮酸和产生吲哚的能力。16S rRNA测序及遗传进化分析结果显示,7号菌、12号菌分别与芽孢杆菌属的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、假单胞菌属的地中海假单胞菌(Pseudomonas mediterranea)聚到一起,相似度均高于99%。 展开更多

关键词 地黄 连作障碍 固氮 耐酚酸 短小芽孢杆菌 地中海假单胞菌

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肌苷发酵过程腺嘌呤含量变化规律 被引量：3

7

作者 刘国生 王玉娟 +3 位作者 黄倩 侯瑛 曹倩 谷艳昌 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第15期194-197,共4页

通过高效液相色谱法测定肌苷发酵过程发酵液中胞外、胞内和总腺嘌呤含量。结果表明:发酵液总腺嘌呤含量在发酵过程中变化不大,影响肌苷产量的主要因素是培养基中酵母细胞内外腺嘌呤类物质的比例、胞外腺嘌呤含量。发酵培养基中的腺嘌呤... 通过高效液相色谱法测定肌苷发酵过程发酵液中胞外、胞内和总腺嘌呤含量。结果表明:发酵液总腺嘌呤含量在发酵过程中变化不大,影响肌苷产量的主要因素是培养基中酵母细胞内外腺嘌呤类物质的比例、胞外腺嘌呤含量。发酵培养基中的腺嘌呤类物质在灭菌后60%～70%释放到胞外,30%～40%仍留存在酵母菌体内。胞外腺嘌呤是发酵前期细菌增殖的基础,酵母细胞释放到胞外的腺嘌呤比例高则有利于菌体增殖和肌苷积累。酵母菌体内腺嘌呤是形成和维持发酵中后期腺嘌呤亚适量水平的关键。在本条件下腺嘌呤的亚适量水平为31.92mg/L。 展开更多

关键词 高效液相色谱 腺嘌呤 枯草杆菌 肌苷发酵

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以p-TEFb为靶点抗HIV药物高通量筛选模型建立及在中药初筛中的应用 被引量：2

8

作者 李芬 李玉会 +5 位作者 吴秀丽 胡岩岩 马瑜 贾盼盼 岳晓杰 李明军 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期679-685,共7页

目的建立以正向转录延伸因子(p-TEFb)为靶点的抗HIV药物快速高通量筛选模型,并运用此模型筛选抗艾滋病中药。方法构建BD-Tat和AD-CyclinT1融合的酵母双杂交质粒,分别转入AH109和Y187,经接合实验获得二倍体菌株并对其进行毒性检测、自激... 目的建立以正向转录延伸因子(p-TEFb)为靶点的抗HIV药物快速高通量筛选模型,并运用此模型筛选抗艾滋病中药。方法构建BD-Tat和AD-CyclinT1融合的酵母双杂交质粒,分别转入AH109和Y187,经接合实验获得二倍体菌株并对其进行毒性检测、自激活实验和报告基因表达检测,建立基于酵母双杂交的筛选模型。结果运用此系统筛选具有提高机体免疫功效的20种中药,获阳性中药2种,其抗HIV活性已被体外抑制HIV实验证实。结论该筛选模型可成功用于抗艾滋病化合物和中药的高效筛选,得到的2种阳性中药狗脊和黄连,值得进一步进行干扰HIV Tat和CyclinT1互作的有效成分分离研究。 展开更多

关键词 正向转录延伸因子 靶点 HIV 高通量筛选模型 狗脊 黄连

原文传递

miRNA对水稻非生物胁迫的应答 被引量：2

9

作者 郝雨帆 王俊杰 +3 位作者 杨丹丹 张静 闫鑫甜 梁卫红 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第19期5-9,共5页

MicroRNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,它主要通过对转录后水平靶mRNA的切割以及抑制mRNA的翻译调控基因表达,参与植物的生长发育和胁迫应答等多种生物学过程。综述了miRNA的发生和调控机制,重点介绍了miRNA对水稻非生物胁迫应答的研究进... MicroRNA(miRNA)是一类小的非编码RNA,它主要通过对转录后水平靶mRNA的切割以及抑制mRNA的翻译调控基因表达,参与植物的生长发育和胁迫应答等多种生物学过程。综述了miRNA的发生和调控机制,重点介绍了miRNA对水稻非生物胁迫应答的研究进展,并对研究过程中存在的问题进行讨论,为更好地了解miRNA及其靶基因在提高水稻产量和抗逆方面的作用,进一步解析miRNA在水稻中的调控机制提供参考。 展开更多

关键词 MIRNA 水稻 非生物胁迫

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污水处理系统中染料脱色酵母菌的筛选及脱色性能 被引量：1

10

作者 张昊 李晶 +5 位作者 张帆 蒿洪欣 许园园 刘冬 韩新宽 杨清香 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第4期113-116,共4页

从某印染厂和制药厂的污水处理系统中筛选了21株脱色酵母菌,测定了各菌株对染料RB5,M-3BE、KNR的脱色能力以及锰依赖过氧化物酶(MnP)的产生情况.结果表明,培养72h时有18株酵母菌对RB5,M-3BE的脱色率超过90%,且检测到MnP活性.26SrDNA序... 从某印染厂和制药厂的污水处理系统中筛选了21株脱色酵母菌,测定了各菌株对染料RB5,M-3BE、KNR的脱色能力以及锰依赖过氧化物酶(MnP)的产生情况.结果表明,培养72h时有18株酵母菌对RB5,M-3BE的脱色率超过90%,且检测到MnP活性.26SrDNA序列分析结果表明,脱色酵母菌主要属于Rhodotorula mucilaginosa,Dipodascus capitatus,Torulaspora delbrueckii,Candida parapsilosis,Candida zeylanoides和Debaryomyces hansenii. 展开更多

关键词 污水处理 酵母菌 染料脱色 锰依赖过氧化物酶

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酿酒酵母组蛋白H3 K4L和K36L突变对细胞生长和GAL1、SSA3、PHO5表达的影响

11

作者 李芬 杨敬辉 +3 位作者 吴秀丽 张卫林 王冠峰 岳晓杰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期827-834,共8页

组蛋白甲基化和乙酰化修饰对基因表达和细胞生长至关重要,为揭示组蛋白H3第4、36位赖氨酸(K)修饰对酵母生长和诱导基因表达的重要性及两位点功能差异,文章构建了两位点单独或共同突变为亮氨酸(L)的组蛋白突变株S4、S36和D436,对其在正... 组蛋白甲基化和乙酰化修饰对基因表达和细胞生长至关重要,为揭示组蛋白H3第4、36位赖氨酸(K)修饰对酵母生长和诱导基因表达的重要性及两位点功能差异,文章构建了两位点单独或共同突变为亮氨酸(L)的组蛋白突变株S4、S36和D436,对其在正常、半乳糖为单一碳源、高温、高盐等条件下的生长及GAL1、SSA3和PHO5表达进行比较。结果显示:D436对高温最敏感,各突变株对咖啡因显著敏感;3个突变株在高温、高盐、6-AU、咖啡因存在时的生长及GAL1、SSA3和PHO5的激活均明显慢于野生型;S4在高温、高盐条件下生长及GAL1激活慢于S36。H3-K4和H3-K36的翻译后修饰对细胞生长和适应不利环境非常重要,在对高温等逆境快速适应上,K4比K36更重要,组蛋白突变株的表型缺陷是因该条件下细胞生存所必需的诱导基因表达延迟所致,同一位点突变对不同基因表达有不同影响。3个突变株的缺陷表型严格上应是相应位点突变导致组蛋白修饰模式改变所造成的综合影响。 展开更多

关键词 组蛋白甲基化 赖氨酸 突变株 细胞生长 诱导基因

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抗生素暴露对小白菜幼苗生长及内生细菌的影响 被引量：15

12

作者 王盼亮 张昊 +3 位作者 王瑞飞 杨清香 龚福利 常芳媛 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1734-1740,共7页

采用水培实验研究了不同浓度四环素、环丙沙星暴露对小白菜种子萌发和幼苗生长的影响,进一步通过微生物培养方法探讨了抗生素暴露对小白菜幼苗中抗生素耐药内生细菌的影响。结果表明,4 mg·L-1四环素暴露能促进小白菜种子萌发时的... 采用水培实验研究了不同浓度四环素、环丙沙星暴露对小白菜种子萌发和幼苗生长的影响,进一步通过微生物培养方法探讨了抗生素暴露对小白菜幼苗中抗生素耐药内生细菌的影响。结果表明,4 mg·L-1四环素暴露能促进小白菜种子萌发时的根伸长和芽伸长,高于4 mg·L-1的四环素和不同浓度环丙沙星暴露均抑制小白菜种子萌发,且暴露剂量越高抑制作用越明显。在幼苗生长阶段,两种抗生素暴露下植株的根长和株高均呈现随着暴露剂量增加抑制作用加强的趋势。同时,抗生素暴露明显提高了小白菜幼苗中耐药内生细菌的比例,且该比例随着抗生素暴露剂量的增加显著上升。 展开更多

关键词 抗生素 蔬菜 抗生素耐药内生细菌 生态毒性

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畜禽粪便中多重耐药细菌及耐药基因的分布特征 被引量：12

13

作者 张昊 王盼亮 +1 位作者 杨清香 俞宁 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第1期460-466,共7页

为了解畜禽粪便中多重抗生素耐药细菌及耐药基因的污染特征,采用微生物培养的方法调查了鸡粪、猪粪中多重耐药细菌的数量,并挑取部分菌株进行16S rDNA鉴定和抗生素敏感性试验;进一步通过高通量测序技术解析多重耐药细菌的群落结构,利用... 为了解畜禽粪便中多重抗生素耐药细菌及耐药基因的污染特征,采用微生物培养的方法调查了鸡粪、猪粪中多重耐药细菌的数量,并挑取部分菌株进行16S rDNA鉴定和抗生素敏感性试验;进一步通过高通量测序技术解析多重耐药细菌的群落结构,利用高通量定量PCR对粪便中176种耐药基因的分布情况进行研究.结果表明,不同鸡粪、猪粪中对四环素、环丙沙星和庆大霉素同时耐药的多重耐药细菌比例在7.96%~12.40%;单菌株鉴定和群落结构分析均显示,可培养的多重耐药细菌主要集中在Escherichia(埃希氏杆菌属)、Acinetobacter(不动杆菌属)和Proteus(变形杆菌属)中.与未饲用抗生素的猪粪相比,猪粪样品中耐药基因的总富集倍数达到1.96×10~4~1.54×10~5倍,各类耐药基因的富集情况为:四环素类>β-内酰胺类>MLSB(大环内酯、林可酰胺和链阳性菌素B类)>氨基糖苷类>FCA(氟喹诺酮、喹诺酮、氟苯尼考、氯霉素和酰胺醇类)>磺胺类>万古霉素类. 展开更多

关键词 畜禽粪便 多重耐药细菌 耐药基因 高通量定量PCR 可移动元件

原文传递

一株地黄根腐病病原菌的分离鉴定及生物学特性研究 被引量：6

14

作者 王亚利 康春晓 +4 位作者 杨传臻 魏艺璇 王瑞飞 李明军 杨清香 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期37-44,共8页

分离鉴定地黄根腐病的病原菌,对其致病性和生物学特性进行研究。利用平板分离法对地黄根腐病的病原菌进行分离纯化;利用测序技术和遗传进化分析对所得菌株进行鉴定;利用回接试验对所得菌株进行致病性检测;利用生长监测,确定所得菌株的... 分离鉴定地黄根腐病的病原菌,对其致病性和生物学特性进行研究。利用平板分离法对地黄根腐病的病原菌进行分离纯化;利用测序技术和遗传进化分析对所得菌株进行鉴定;利用回接试验对所得菌株进行致病性检测;利用生长监测,确定所得菌株的各项生理学特性。获得一株菌落橙黄色,边缘整齐,表面光滑、湿润菌体椭圆形,有疑似出芽现象的真菌;该菌与帕鲁迪根红酵母(Rhodotorula paludigena)簇集在一起,置信度为91,遗传距离最近,具有密切的亲缘关系;该酵母菌接种侵染20 d后,地黄块根根腐病发病率达到100%;该菌株最适生长温度为28℃,最适生长pH为5.0;该酵母菌株能耐受阿魏酸、香草酸和对羟基苯甲酸(与根腐病发病密切相关的地黄根部分泌物)的最高浓度为0.5 g/L。初步证实了Rhodotorula paludigena DH5能够引起地黄根腐病,且该病原在富含酚酸类化合物的地黄根际具较强的生态适应能力。 展开更多

关键词 地黄 根腐病 酵母菌 酚酸 生物学特性

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禽畜粪肥对农田蔬菜中抗生素抗性内生菌的影响 被引量：4

15

作者 王瑞飞 郭玉晖 +1 位作者 俞宁 杨清香 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2016年第4期106-111,共6页

选取常食农田茎叶类蔬菜——上海青和芹菜为研究对象,探讨禽畜粪肥对蔬菜抗生素抗性内生菌的影响.结果表明:施加粪肥的农田上海青及芹菜样品的根、茎、叶中抗阿莫西林、头孢氨苄、四环素的单抗性内生细菌的数量均比未施加粪肥组高,它们... 选取常食农田茎叶类蔬菜——上海青和芹菜为研究对象,探讨禽畜粪肥对蔬菜抗生素抗性内生菌的影响.结果表明:施加粪肥的农田上海青及芹菜样品的根、茎、叶中抗阿莫西林、头孢氨苄、四环素的单抗性内生细菌的数量均比未施加粪肥组高,它们的相对百分比含量比未施加组高出9~19倍.其中,从施加禽畜粪肥上海青中分离获得的多重抗生素抗性细菌-嗜麦芽寡养单胞菌,可能引起多种人类疾病,尤其值得关注. 展开更多

关键词 抗生素 蔬菜 抗生素性内生细菌 禽畜粪便

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新基因NtTKR及其同源物LeTKR的生物信息学分析 被引量：4

16

作者 李芬 吴秀丽 郭君丽 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第5期110-115,124,共7页

驱动蛋白是一类与微管结合的ATPase,在细胞内执行着多种功能.序列对比分析表明,烟草不同发育时期胚cDNA文库的差异筛选分离到的在叶和发育各时期胚中优势表达的驱动蛋白家族新成员NtTKR与番茄驱动蛋白LeTKR(AF242356.1)高度同源.运用生... 驱动蛋白是一类与微管结合的ATPase,在细胞内执行着多种功能.序列对比分析表明,烟草不同发育时期胚cDNA文库的差异筛选分离到的在叶和发育各时期胚中优势表达的驱动蛋白家族新成员NtTKR与番茄驱动蛋白LeTKR(AF242356.1)高度同源.运用生物信息学方法对二者编码产物的同源性、功能结构域特点和可能的翻译后修饰等进行了比较分析,结合目前已知的实验结果预测了该基因可能参与的生物学过程.这些分析和预测将对进一步实验证实NtTKR在烟草的形态发生及胚胎发生中的提供有益的指导. 展开更多

关键词 烟草 驱动蛋白(Kinesin) 生物信息学分析 形态发生

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烟草新驱动蛋白NtTKR过表达对酵母生长的影响 被引量：3

17

作者 李芬 任向波 +2 位作者 腾飞 吴秀丽 田树娟 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第6期97-102,共6页

为了解烟草新驱动蛋白NtTKR功能信息,构建了EGFP融合的NtTKR基因酵母表达载体并转入酿酒酵母W303诱导表达,荧光显微镜观察结果表明,诱导条件下的转化细胞发出明亮的绿色荧光,表明转入的NtTKR得到了高效表达.转化株在诱导和非诱导条件下... 为了解烟草新驱动蛋白NtTKR功能信息,构建了EGFP融合的NtTKR基因酵母表达载体并转入酿酒酵母W303诱导表达,荧光显微镜观察结果表明,诱导条件下的转化细胞发出明亮的绿色荧光,表明转入的NtTKR得到了高效表达.转化株在诱导和非诱导条件下培养3d,可见NtTKR过表达菌落比对照小的多;但通过绘制8h内生长曲线发现二者细胞数目无显著差别;表明NtTKR过表达对酵母细胞生长的抑制可能更多的是因为抑制其体积增大,而非分裂速度减慢引起的细胞数目降低.已知NtTKR在烟草受精卵、发育各个时期的胚、幼叶、根尖及茎尖等细胞分裂旺盛部位均优势表达,推测该基因在烟草中可能与上述各部位新生细胞的体积增大相关. 展开更多

关键词 驱动蛋白 NtTKR 绿色荧光标记 细胞分裂 体积增大

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猪冠状动脉平滑肌细胞的分离、培养及鉴定 被引量：2

18

作者 杨敬辉 吴秀丽 +2 位作者 王冠峰 陈文伟 李芬 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第1期111-114,共4页

目的，建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞（PCASMC）的技术方法并观察其生长特征．方法：酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC，利用倒置显微镜观察细胞生长情况；免疫荧光染色法鉴定细胞；台盼蓝法、绘制生长曲线法测定... 目的，建立体外分离培养猪冠状动脉血平滑肌细胞（PCASMC）的技术方法并观察其生长特征．方法：酶联合消化法原代分离猪冠状动脉来源的CASMC，利用倒置显微镜观察细胞生长情况；免疫荧光染色法鉴定细胞；台盼蓝法、绘制生长曲线法测定冠状动脉PCASMC传代细胞的成活率和生长特征．结果：分离培养的细胞3d后呈梭形生长，7～8d后生长迅速可传代；第2代细胞在显微镜下观察3～5d即可见典型“峰-谷”状生长；免疫荧光染色显示胞浆内α-平滑肌肌动蛋白表达阳性，细胞成活率为97．5％；细胞生长曲线近似“s”形．结论：本研究建立了高效分离和培养PCASMC的方法，细胞均稳定地表达α-平滑肌肌动蛋白，为血管疾病的研究提供了理想的细胞模型． 展开更多

关键词 猪 冠状动脉平滑肌细胞 原代培养 鉴定

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发根农杆菌T-DNA诱变怀地黄突变体或品系的遗传学分析 被引量：1

19

作者 范红军 姚换灵 +4 位作者 张永华 周延清 张喻 李静云 陈娟娟 《河南师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第5期115-119,共5页

主要采用紫外吸收光谱法、高效液相色谱法、3,5-二硝基水杨酸比色法,PCR和SRAP技术,从叶绿素含量、还原糖和总糖含量、梓醇含量、毛蕊花糖苷含量和T-DNA片段的稳定性和基因组DNA的变化方面,对发根农杆菌转化怀地黄突变体或品系的变异性... 主要采用紫外吸收光谱法、高效液相色谱法、3,5-二硝基水杨酸比色法,PCR和SRAP技术,从叶绿素含量、还原糖和总糖含量、梓醇含量、毛蕊花糖苷含量和T-DNA片段的稳定性和基因组DNA的变化方面,对发根农杆菌转化怀地黄突变体或品系的变异性状进行了分析.发现怀地黄突变体或品系的叶片形态、植高、叶绿素含量、糖含量、梓醇和毛蕊花糖苷的含量均有变异,一个SRAP引物组合从其基因组DNA中扩增出一个对照中没有的约400bp的DNA片段,T1-T7代突变体或品系中均检测到rolB基因的存在.这些结果表明发根农杆菌T-DNA可以诱导怀地黄产生变异,并且稳定遗传. 展开更多

关键词 怀地黄 发根农杆菌 突变体 高效液相色谱 SRAP

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烟草新驱动蛋白基因NtTKR原核表达载体的构建、诱导表达及蛋白纯化

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作者 乔慧聪 任向波 +1 位作者 吴秀丽 李芬 《江苏农业科学》 北大核心 2017年第14期24-26,共3页

通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMX... 通过对烟草驱动蛋白家族新成员Nt Tkr尾部的酵母双杂交筛选,得到多个与Nt Tkr互作的候选蛋白。为进一步验证NtTkr与候选蛋白之间的相互作用,以p GBKT7-Nt Tkr质粒为模板,PCR扩增烟草NtTKR全长,将其克隆入原核表达载体pMXB10,重组质粒pMXB10-NtTkr-3582经生物公司测序,结果正确。将其转化为BL21(DE3),IPTG诱导其表达目的蛋白,经几丁质法纯化及SDS-PAGE检测,结果表明笔者得到了高纯度的目的蛋白。该试验为进一步运用Pull Down确定Nt Tkr与候选蛋白之间的体外互作及深入研究该蛋白的其他生物学功能奠定了基础。 展开更多

关键词 烟草 新驱动蛋白 NtTkr 诱导表达 纯化

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