结核分支杆菌五种耐药基因检测的临床应用及评价 被引量：11

1

作者 王巍 李洪敏 +8 位作者 吴雪琼 王安生 王仲元 刘金伟 陈红兵 林明贵 王金河 叶一秀 李素梅 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期670-673,共4页

目的　检测结核分支杆菌rpoBkatG、rpsL、pncA和embB耐药基因 ,评价其临床应用价值。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析和药敏试验 (比例法 ) ,了解 10 9例肺结核患者结核分支杆菌耐药情况 ,并分析、比较临床治疗... 目的　检测结核分支杆菌rpoBkatG、rpsL、pncA和embB耐药基因 ,评价其临床应用价值。方法　采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析和药敏试验 (比例法 ) ,了解 10 9例肺结核患者结核分支杆菌耐药情况 ,并分析、比较临床治疗效果。结果　 1/ 2以上的肺结核患者至少耐两种抗结核药物 ,对RFP、INH、SM、PZA和EB总耐药率分别为 80 7%、71 5 %、78 8%、5 7 7%和48 6%。rpoB、katG、rpsL、pncA和embB基因突变率分别为 76%、68%、71%、5 1%和 3 0 %。结核分支杆菌耐药基因突变率与耐药水平联系密切 ,多数结核分支杆菌耐药基因突变易发生在高耐药株 ,也有少数基因突变发生在低耐药株。根据药敏试验和耐药基因检测结果 ,6个月耐多药结核治愈率分别达到 5 4 8%和 62 8% ,治疗效果满意 ,两种方法差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　耐药基因检测指导治疗是一种新探索 ,PCR SSCP方法敏感、特异 ,可以快速检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、pncA和embB耐药基因突变 。 展开更多

关键词 结核分支杆菌 耐药基因 结核病 检测 临床应用 评价

原文传递

母牛分支杆菌制剂通过一氧化氮进行免疫调节的作用 被引量：47

2

作者 王国治 赵桂芳 +6 位作者 李晓明 刘勇 沈小兵 庄玉辉 李国利 张小刚 吴雪琼 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期140-142,共3页

目的用母牛分支杆菌制剂作用于不同状态的动物，通过产生一氧化氮（ＮＯ）而达到不同的效果。方法在第一组实验中，用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过检测ＮＯ－２间接反映ＮＯ的变化。在第二组实验中，用结核杆... 目的用母牛分支杆菌制剂作用于不同状态的动物，通过产生一氧化氮（ＮＯ）而达到不同的效果。方法在第一组实验中，用不同剂量的母牛分支杆菌制剂免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过检测ＮＯ－２间接反映ＮＯ的变化。在第二组实验中，用结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染豚鼠，１０天后给受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂。结果受免疫小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平明显高于未免疫小鼠（Ｐ＜０．０１）。不同剂量母牛分支杆菌制剂免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠间腹腔巨噬细胞产生ＮＯ－２水平差别不显著（Ｐ＞０．０５）。受染豚鼠注射母牛分支杆菌制剂后，ＮＯ－２产生水平明显低于单纯结核杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染组。结论母牛分支杆菌制剂不但能提高机体免疫水平，而且可以在结核分支杆菌Ｈ３７Ｒｖ感染造成组织细胞破坏的条件下，调整免疫反应，进而减少组织损伤。 展开更多

关键词 一氧化氮 母牛分支杆菌 免疫调节 结核病

原文传递

聚合酶链反应-反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种 被引量：28

3

作者 李国利 庄玉辉 +4 位作者 赵铭 王国治 陈保文 沈小兵 胡忠义 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期241-243,共3页

目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法　以 16SrDNA为靶序列 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 反向斑点杂交检测 2 5种分枝杆菌、11种非分枝杆菌标准株、10株分枝杆菌临床分离株和 2 6份临床痰标本。结果　分枝... 目的　建立一种简便、快速、敏感和特异的分枝杆菌菌种鉴定方法。方法　以 16SrDNA为靶序列 ,采用聚合酶链反应 (PCR) 反向斑点杂交检测 2 5种分枝杆菌、11种非分枝杆菌标准株、10株分枝杆菌临床分离株和 2 6份临床痰标本。结果　分枝杆菌、非分枝杆菌标准株经DNA扩增 ,分枝杆菌均出现 5 78bpDNA片段 ,非分枝杆菌除假白喉棒状杆菌可见同样片段外 ,其余菌种均未见扩增。敏感性试验可检测出 10 0fg结核分枝杆菌DNA。探针特异性试验表明 ,17种寡核苷酸探针除pTub1、pFor1、pSme探针可见交叉杂交外 ,其余探针均是特异的。 10株结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌临床分离株PCR 反向斑点杂交结果与常规鉴定结果相符。 2 6份涂片阳性痰标本经该法直接鉴定为结核菌复合体。结论　 16SrDNAPCR 反向斑点杂交鉴定分枝杆菌菌种快速、有效 ,具有较高的应用价值。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 聚合酶链反应 反向斑点杂交法

原文传递

结核生物蛋白芯片在结核病中的应用 被引量：8

4

作者 李洪敏 吴雪琼 +8 位作者 王巍 樊博 安慧茹 苏轮 张辉 王台虎 陈武雄 刘京 项军 《中国医师杂志》 CAS 2005年第11期1556-1557,共2页

作者采用CCD原理结合视频采集技术,将蛋白生物芯片标本信息输入计算机,通过分析软件对结核LAM、16-kDa、38-kDa蛋白芯片检测信号的定量分析和定性结果进行判定。结果表明1623人的三项指标中住院病人检出率53.2%(396/744);门诊病人30.0%(... 作者采用CCD原理结合视频采集技术,将蛋白生物芯片标本信息输入计算机,通过分析软件对结核LAM、16-kDa、38-kDa蛋白芯片检测信号的定量分析和定性结果进行判定。结果表明1623人的三项指标中住院病人检出率53.2%(396/744);门诊病人30.0%(264/879)。认为蛋白芯片检测对诊治结核病有一定价值。 展开更多

关键词 结核 分支杆菌 蛋白芯片

原文传递

结核菌耐药pncA和embB基因突变与临床治疗的研究 被引量：4

5

作者 李洪敏 吴雪琼 +3 位作者 王巍 安慧茹 李燕锋 刘瑞杰 《中国医师杂志》 CAS 2004年第6期742-744,共3页

目的　分别了解结核分枝杆菌耐吡嗪酰胺和乙胺丁醇的pncA和embB基因突变情况 ,研究其治疗对策。方法　通过传统药敏实验和聚合酶链反应 (PCR)一单链构象多态性 (SSCP)技术初步鉴定 10 6株临床分离株的药敏和embB、pncA基因。结果　与结... 目的　分别了解结核分枝杆菌耐吡嗪酰胺和乙胺丁醇的pncA和embB基因突变情况 ,研究其治疗对策。方法　通过传统药敏实验和聚合酶链反应 (PCR)一单链构象多态性 (SSCP)技术初步鉴定 10 6株临床分离株的药敏和embB、pncA基因。结果　与结核菌标准株H3 7RV对照分析 94例TB菌耐吡嗪酰胺 (PZA)的pncA基因突变率为 44 69%( 4 2 / 94) ,分析 83例耐乙胺丁醇 (EMB)的embB基因突变率为 5 4 2 %( 4 5 / 83 ) ,两种基因同时突变率为 11 8%( 11/ 94) ,其中embB基因均在传统药敏的高耐药区域。根据上述分析建立的个体化化疗方案治疗 ,痰菌转阴率为 65 9%( 62 / 94) ,病灶治疗有效率为 69 1%( 65 / 94) ,空洞治疗有效率为 5 6 4%( 5 3 / 94)。结论　临床部分结核分枝杆菌耐EMB和PZA是由于其embB、pncA基因突变所致 ,临床根据传统药敏的高、低耐药浓度和基因突变的情况制定的治疗方针 。 展开更多

关键词 结核菌 耐药性 pncA基因 EMBB基因 基因突变 乙胺丁醇

原文传递

细胞膜脂质流动性和超氧化物歧化酶在肺结核和肺癌鉴别诊断中的应用 被引量：1

6

作者 刘金伟 金关甫 +4 位作者 孙海光 孟晶晶 王安生 王金河 金光海 《中华结核和呼吸杂志》 CSCD 北大核心 1997年第5期307-310,共4页

目的研究细胞膜脂质流动性和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）在肺结核和肺癌鉴别诊断中的价值。方法采用荧光标记（ＤＰＨ）技术测定膜脂质流动性；采用生物发光法测定ＳＯＤ。结果肺结核、肺癌患者淋巴细胞及肺腺癌和肺鳞癌癌细胞的膜脂质流... 目的研究细胞膜脂质流动性和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）在肺结核和肺癌鉴别诊断中的价值。方法采用荧光标记（ＤＰＨ）技术测定膜脂质流动性；采用生物发光法测定ＳＯＤ。结果肺结核、肺癌患者淋巴细胞及肺腺癌和肺鳞癌癌细胞的膜脂质流动性分别为４．０２６±０．７２２、３８．２５４±０．１００、２２．５５７±３．７７１和３２．８７５±９．７０９。肺结核和肺癌患者淋巴细胞的ＳＯＤ含量分别为１７０．７和６５．１４ｍｇ／Ｌ。肺结核和肺癌患者比较，差异统计学上有显著意义（Ｐ＜０．０５）。其中轻、中、重度肺结核患者淋巴细胞的ＳＯＤ含量分别为２７０．８±４．１ｍｇ／Ｌ、１６０．２±１．９ｍｇ／Ｌ和９０．４±１．６ｍｇ／Ｌ，其变化随病情加重而降低。结论膜脂质流动性和ＳＯＤ测定对辅助临床鉴别诊断肺结核和肺癌是有用的手段。 展开更多

关键词 肺结核 肺肿瘤 细胞膜脂质 流动性 SOD 诊断

原文传递

结核病实验室检查技术的研究进展

7

作者 庄玉辉 《新医学》 1993年第11期565-566,共2页

近年来,分子生物学基因诊断技术及其他新技术引入临床实验室,使结核病病原学诊断等进入了一个崭新的阶段。目前,我国在这方面的研究工作方兴未艾。本文就结核病实验室检查的几项新技术作一介绍。聚合酶链式反应脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶... 近年来,分子生物学基因诊断技术及其他新技术引入临床实验室,使结核病病原学诊断等进入了一个崭新的阶段。目前,我国在这方面的研究工作方兴未艾。本文就结核病实验室检查的几项新技术作一介绍。聚合酶链式反应脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶链式反应(PCR)又称DNA体外扩增技术。 展开更多

关键词 结核病 实验室诊断

下载PDF 职称材料

结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究 被引量：21

8

作者 吴雪琼 张俊仙 +5 位作者 李洪敏 史迎昌 张灵霞 梁建琴 金关甫 由昆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期17-19,22,共4页

目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检... 目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。 展开更多

关键词 DNA疫苗 结核分支杆菌 结核病 免疫治疗

下载PDF 职称材料

应用聚合酶链反应-寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变 被引量：16

9

作者 吴雪琼 梁建琴 +3 位作者 曹立雪 李洪敏 张俊仙 陆阳 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期310-312,共3页

目的　应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法　以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、r... 目的　应用聚合酶链反应 (PCR) 寡核苷酸探针快速检测结核菌耐药基因突变,建立一种新的分子药敏试验方法。方法　以传统药敏试验、PCR 单链构象多态性和PCR 直接测序方法为对照,对利福平、链霉素(SM)和乙胺丁醇耐药的结核菌基因rpoB、rpsL、rrs和embB的寡核苷酸探针,通过反向斑点杂交检测 78株结核菌临床分离株PCR产物。结果　18株结核菌药物敏感株的 4种耐药基因均为野生型。60株结核菌耐药分离株中, 59株为耐RFP株,rpoB基因突变率为 93. 2%,最常见的突变位点为 531位和 526位密码子, 33株为耐SM株,rpsL基因突变率为 75. 8%,均为 43位密码子AAG→AGG突变,rrs基因突变率为 9 .1%,均为 513位A→C突变,rpsL和rrs基因总突变率为 84 .8%; 43株为耐EMB株,embB基因突变率为 58 .1%,均为 306位密码子突变。结论　应用PCR 寡核苷酸探针反向斑点杂交技术可简便、快速、准确地分析大多数结核菌耐药基因突变,检测其耐药性。 展开更多

关键词 结核菌 突变 耐药基因 寡核苷酸探针 快速检测 聚合酶链反应 药敏试验 密码子 PCR产物 RPSL基因

原文传递

结核分枝杆菌多价核酸疫苗的构建及免疫原性 被引量：12

10

作者 蔡宏 潘怡 +2 位作者 朱玉贤 李国利 庄玉辉 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第13期966-971,共6页

将编码结核分枝杆菌MPT-64,Ag85B和ESAT-6分泌蛋白的结构基因或包括信号肽的全基因序列定向克隆到真核表达载体pJW4303中,转化到TOP10大肠杆菌,提取质粒DNA,经限制性核酸内切酶鉴定及序列分析证实含有正确的上述3种分泌蛋白的结构基因... 将编码结核分枝杆菌MPT-64,Ag85B和ESAT-6分泌蛋白的结构基因或包括信号肽的全基因序列定向克隆到真核表达载体pJW4303中,转化到TOP10大肠杆菌,提取质粒DNA,经限制性核酸内切酶鉴定及序列分析证实含有正确的上述3种分泌蛋白的结构基因（包括信号肽）全序列.用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并进行瞬时表达,收集表达细胞或浓缩上清液,12％或15％的 SDS-PAGE电泳分离,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹杂交,证明上述3种重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白.3种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠21d后,Ag85B抗体的平均滴度即达到 1:3200,第2次免疫21d后达到1:102400.MPT-64抗体的平均滴度在首免21d后为1:50.第2次免疫21后为1:200.两次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体.三免21后Ag85B的特异性细胞因子γ-干扰素的浓度为110pg/mL;而 MPT-64和ESAT-6的γ-干扰素浓度未检测到.实验在国内首次用结核杆菌多价DNA疫苗对小鼠进行了免疫实验,二免后的抗体水平已达到或超过国内外已报道的单价苗最高抗体水平,表明多价核酸疫苗和分泌型蛋白载体有利于增强疫苗的保护性应答. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 分泌蛋白抗原 多价核酸疫苗 免疫原性 细胞应答 结核病 体液免疫应答

原文传递

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分子机制的研究 被引量：16

11

作者 吴雪琼 梁建琴 +5 位作者 李洪敏 张俊仙 由昆 金关甫 刘佳文 闫国蕊 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期49-54,共6页

目的　了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分子机制 ,建立快速分子药敏试验方法。方法　通过聚合酶链反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)、PCR-限制性片段长度多态性 (RFL P)和 PCR-直接测序 (DS)技术分析 10 7株结核分枝杆菌临床分离株 emb B... 目的　了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分子机制 ,建立快速分子药敏试验方法。方法　通过聚合酶链反应 (PCR) -单链构象多态性 (SSCP)、PCR-限制性片段长度多态性 (RFL P)和 PCR-直接测序 (DS)技术分析 10 7株结核分枝杆菌临床分离株 emb B基因。结果　以 H3 7Rv标准株为对照 ,10 7株结核分枝杆菌临床分离株的 16 S r DNA SSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准相同。 38株药物敏感株的 emb B基因、SSCP均泳动正常 ,RFL P和 DS分析与对照株相同。 6 9株耐乙胺丁醇 (EMB)分离株中 ,2 5株 (36 .2 % ) emb B基因 SSCP泳动异常 ;8株 RFL P分析异常 ;DS分析 2 5株均为 30 6位密码子突变 ,其中 1株合并有 2 74位 CGC→ CCC突变 ,其 EMB MICs均≥ 2 0 μg/ml;8株为 30 6位 ATG→ATA或 ATT突变 ,17株为 ATG→GTG或 CTG突变 ,后者 EMB MICs均≥ 30μg/ml。结论　部分结核分枝杆菌耐乙胺丁醇是由于其 emb B基因 (尤其是 30 6位密码子 )突变所致 ,PCR- SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌乙胺丁醇耐药基因型的简便。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 药物耐受性 聚合酶链反应 单链构象多态性 DNA序列分析 乙胺丁醇

下载PDF 职称材料

结核病分子生物学研究进展 被引量：10

12

作者 庄玉辉 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期289-291,共3页

关键词 分子生物学研究 结核病 DNA双螺旋结构 DNA重组技术 人类基因组学 相关学科 生命科学 技术引进

原文传递

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇分离株embB基因突变的研究 被引量：8

13

作者 吴雪琼 梁建琴 +5 位作者 李洪敏 张俊仙 闫国蕊 刘佳文 由昆 金关甫 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期214-216,共3页

目的　了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇 (EMB)分离株embB基因突变情况 ,研究其应用价值。方法　通过聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)、PCR 限制性片段长度多态性 (RFLP)和PCR 直接测序技术分析 10 2株结核分枝杆菌临床分离株embB... 目的　了解结核分枝杆菌耐乙胺丁醇 (EMB)分离株embB基因突变情况 ,研究其应用价值。方法　通过聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)、PCR 限制性片段长度多态性 (RFLP)和PCR 直接测序技术分析 10 2株结核分枝杆菌临床分离株embB基因。结果　以H3 7Rv标准株为对照 ,10 2株结核分枝杆菌临床分离株的 16SrDNASSCP电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同。 41株药物敏感株的embB基因SSCP均泳动正常 ,RFLP和测序分析与对照株相同。 6 1株耐EMB分离株中 ,2 3株 (37.7% )embB基因SSCP泳动异常 ;8株RFLP分析异常 ;测序分析 2 3株均为 30 6位密码子突变 ,其EMBMICs均≥ 2 0 μg/ml,其中 8株为ATG→ATA或ATT突变 ,13株为ATG→GTG或CTG突变 ,后者EMBMICs均≥ 30 μg/ml。 结论　部分结核分枝杆菌耐EMB是由于其embB基因突变所致 ,PCR SSCP技术可能成为测定部分结核分枝杆菌EMB耐药基因型 ,简便。 展开更多

关键词 结核 抗多种药物性 聚合酶链反应 多态现象 单链构象 序列分析 基因突变 结核分枝杆菌 乙胺丁醇 EMBB基因

原文传递

中枢神经系统结核球 被引量：11

14

作者 王巍 王安生 张敦熔 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第7期438-439,共2页

近年来，随着临床诊断水平的提高，中枢神经系统结核球报道增多。为进一步了解本病诊断、治疗现状，就结核球概况、临床特点、实验室检查、诊断和治疗分别加以介绍。一、概况中枢神经结核球是中枢神经系统结核病的表现形式之一，临床并... 近年来，随着临床诊断水平的提高，中枢神经系统结核球报道增多。为进一步了解本病诊断、治疗现状，就结核球概况、临床特点、实验室检查、诊断和治疗分别加以介绍。一、概况中枢神经结核球是中枢神经系统结核病的表现形式之一，临床并非罕见。在发展中国家，约占颅内占位... 展开更多

关键词 中枢神经系统 结核球 诊断 症状 治疗

原文传递

分子诊断技术在分支杆菌菌种鉴定中的应用价值 被引量：7

15

作者 李国利 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期747-749,共3页

关键词 分支杆菌 菌种鉴定 分子诊断技术 靶基因序列

原文传递

斑点酶免疫渗滤法抗体检测对结核性脑膜炎诊断价值的评估 被引量：6

16

作者 王仲元 陈红兵 +6 位作者 何秀云 张小刚 阎世明 董亚俊 姜晓宇 何珂 张吉平 《北京医学》 CAS 2005年第2期120-121,共2页

关键词 斑点酶免疫渗滤法 抗体检测 结核性脑膜炎 诊断 评估

下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌katG蛋白的表达和纯化及血清学诊断价值 被引量：6

17

作者 吴雪琼 张俊仙 +5 位作者 哈光平 金关甫 张翠英 王巍 张妍 刘瑞 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期310-311,共2页

关键词 结核分枝杆菌 katG蛋白 基因表达 纯化 血清学诊断 结核病 免疫诊断试剂

原文传递

应用基因阵列法快速检测结核分枝杆菌rpoB基因突变 被引量：5

18

作者 曹立雪 吴雪琼 +2 位作者 梁建琴 李洪敏 张俊仙 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期332-335,共4页

目的　研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法　根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基... 目的　研制一种新型的基因阵列 ,用于结核分枝杆菌耐利福平分离株rpoB基因突变的快速检测。方法　根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并制作基因阵列 ,用生物素标记的引物扩增结核分枝杆菌rpoB基因突变热点的目的片断 ,与基因阵列杂交 ,同时以聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)技术及DNA测序法为对照。结果　 111株结核分枝杆菌临床分离株经PCR SSCP分析 ,4 1株RFP敏感株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同 ;70株耐RFP菌株中 ,6 3株(90 % )SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株不同 ,其余 7株SSCP图谱与结核分枝杆菌标准株相同。基因阵列检测结果 4 1株RFP敏感株杂交图谱与标准株完全相同 ,70株耐RFP临床分离株中 ,6 3株检测到rpoB基因突变 ,检出率为 90 % ;其中 37株 (5 3% ) 5 31位丝氨酸 (Ser)置换 ,15株 (2 1% ) 5 2 6位组氨酸(His)置换 ,11株 (16 % )其他位置的氨基酸置换。基因阵列检测结果与PCR SSCP及测序结果一致。结论　用基因阵列法可简便、快速、准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变。 展开更多

关键词 基因阵列法 快速检测 结核分枝杆菌 RPOB基因 突变 DNA探针

原文传递

无反应性结核病的临床特征与文献复习 被引量：5

19

作者 王巍 王安生 +2 位作者 王仲元 安慧茹 王玉芳 《中国综合临床》 北大核心 2004年第11期992-993,共2页

关键词 结核 无反应性 免疫抑制剂 激素治疗 化学治疗

原文传递

应用PCR-反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌耐链霉素基因型 被引量：4

20

作者 梁建琴 吴雪琼 +2 位作者 曹立雪 张俊仙 李洪敏 《中国医师杂志》 CAS 2004年第9期1170-1172,共3页

目的　应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 (SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和rrs的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进... 目的　应用膜反向斑点杂交技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 (SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐SM基因rpsL和rrs的寡核苷酸探针 ,点于硝酸纤维素膜上 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的聚合酶链反应(PCR)产物进行反向斑点杂交 ,并与PCR -单链构象多态性 (PCR -SSCP)和PCR -直接测序 (PCR -DS)结果比较。结果　 5 3株结核分枝杆菌临床分离株中 ,三种检测方法符合率为 10 0 %。 9株敏感株rpsL和rrs基因的SSCP图谱、膜杂交结果与标准株完全相同 ;44株耐SM菌株中 ,3 3株存在rpsL基因 43位密码子AAG→AGG突变 ,6株有rrs基因 5 13位A→C突变 ,1株有rrs基因 5 13位A→T突变 ,突变检出率为 90 .9%,40株耐SM菌株和 9株敏感株可用膜杂交方法检测出来 ,与传统药敏试验方法检测符合率为 49/5 3。结论　应用膜反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌耐SM基因型灵敏度高、特异性好、简便、快速 。 展开更多

关键词 PCR-反向斑点杂交 快速检测 结核分枝杆菌 链霉素 基因型 耐药性 基因变异

原文传递