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来氟米特对HaCaT细胞分泌α-肿瘤坏死因子、白介素-6和8的影响 被引量：3
1
作者 郭志丽 顾军 +2 位作者 唐玲 球谊 米庆胜 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期9-10,共2页
目的:研究来氟米特活性代谢产物A771726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子TNF-α,白介素IL-6及IL-8的影响。方法:以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象,以不同浓度A771726处理正常及TNF-α刺激后细胞,用生物活性法及ELISA方法测定培... 目的:研究来氟米特活性代谢产物A771726对角质形成细胞分泌α-肿瘤坏死因子TNF-α,白介素IL-6及IL-8的影响。方法:以体外培养的角质形成细胞株HaCaT为对象,以不同浓度A771726处理正常及TNF-α刺激后细胞,用生物活性法及ELISA方法测定培养上清中TNF-α、IL-6及IL-8的分泌变化情况。结果:正常情况下,HaCaT细胞可自发分泌TNF-α、IL-6和IL-8;药物作用后分泌水平下降;TNF-α诱导下,HaCaT细胞IL-6及IL-8表达量均增加,加入来氟米特后则表达量均受到抑制。结论:来氟米特可抑制角质形成细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-8。 展开更多
关键词 角质形成细咆HaCaT株 来氯米特 细胞因子
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人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达
2
作者 张兴群 王梁华 +1 位作者 焦炳华 袁勤生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期85-88,共4页
目的　在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法　从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌... 目的　在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法　从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果　所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论　已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 破骨细胞 大肠杆菌 融合表达 阳性 抑制因子 活性结构 肝细胞系 片段 诱导表达 SDS-PAGE分析
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高密度培养大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm的优化条件 被引量：3
3
作者 张兴群 王梁华 +1 位作者 焦炳华 袁勤生 《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期72-75,共4页
利用Bioengeering3.7L自控式发酵罐,以分批培养和补料分批培养相结合的培养技术,高密度培养重组大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm,生产重组人破骨细胞形成抑制因子成熟肽(recombinanthumanosteoclastogenesisinhibitoryfactormaturepeptide,rhOC... 利用Bioengeering3.7L自控式发酵罐,以分批培养和补料分批培养相结合的培养技术,高密度培养重组大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm,生产重组人破骨细胞形成抑制因子成熟肽(recombinanthumanosteoclastogenesisinhibitoryfactormaturepeptide,rhOCIFm)。通过对碳、氮源补加方式以及溶解氧等参数的控制,使工程菌E.coliTB1/pMAL-hOCIFm的发酵菌体OD600达到57.8,rhOCIFm与MBP融合蛋白(hOCIFm-MBP)的含量达到3.2g/L。本研究为工业化生产rhOCIFm奠定了基础。 展开更多
关键词 破骨细胞形成抑制因子(OCIF) 表达 高密度培养 发酵 补料-分批培养
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Mac-1在细胞内走向的直视研究 被引量：2
4
作者 严鸣 毛积芳 +3 位作者 韦毅 钟纪根 杨生生 徐仁宝 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2004年第3期263-270,共8页
分别构建荧光蛋白(FP,fluorescenceprotein)与Mac-1的两个亚基(CD11b,CD18)融合蛋白表达载体,并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1fusedwithfluorescenceprotein)具有与正常白细胞表达的... 分别构建荧光蛋白(FP,fluorescenceprotein)与Mac-1的两个亚基(CD11b,CD18)融合蛋白表达载体,并在鉴定pYFP-CD18和pCD11b-BFP共转染的CHO细胞(CHO-Mac-1-FP)表达的Mac-1-FP(Mac-1fusedwithfluorescenceprotein)具有与正常白细胞表达的野生型Mac-1基本一致的结构与功能的基础上,结合应用PE标记的CD11b单抗,通过激光共聚焦显微镜观测CD11b,CD18在PMA刺激和ICAM-1结合后于胞内的走向与归宿.结果显示:(ⅰ)在静态的细胞膜上看不到Mac-1,PMA活化后1h,胞膜上可见CD11b-PE和YFP-CD18群集,2h后内吞,内吞后YFP-CD18的荧光减弱,提示Mac-1有部分降解;24h后PMA再次活化,部分CD11b-PE与YFP-CD18可再次出现在膜上,说明Mac-1还可以被循环利用.(ⅱ)ICAM-1包被磁珠与Mac-1-FP-CHO细胞作用后,4h内粘附增加,同时伴有Mac-1-FP的群集,8h后粘附减少,同时伴有Mac-1-FP的荧光逐渐减弱,这一过程与PMA活化后Mac-1-FP的变化过程类似,提示ICAM-1作用后也可能出现内吞并降解.由以上结果可以得出结论,Mac-1活化后的走向是由胞浆内转位到质膜上,然后内吞,内吞后被降解或可被再利用,与此同时粘附活性亦发生相应的变化,提示受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一. 展开更多
关键词 MAC-1 PMA ICAM-1 走向 细胞 白细胞 免疫反应
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吲哚胺2,3双加氧酶基因修饰的DCs对同种异基因T细胞增殖反应的抑制
5
作者 张文颖 楼国良 +4 位作者 史平 周俊平 王梁华 焦炳华 解俊 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第5期371-375,共5页
目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3dioxygenase,IDO)基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DCs)在体外对造血干细胞移植物中异基因T细胞增殖反应的抑制作用。方法用携带IDO基因的重组腺病毒转染BALB/c小鼠(受体)骨髓来源的DCs,... 目的探讨吲哚胺2,3双加氧酶(indoleamine2,3dioxygenase,IDO)基因修饰的树突状细胞(dendriticcells,DCs)在体外对造血干细胞移植物中异基因T细胞增殖反应的抑制作用。方法用携带IDO基因的重组腺病毒转染BALB/c小鼠(受体)骨髓来源的DCs,用RT-PCR法检测DCs表面IDO的表达,用流式细胞术分析IDO基因修饰前后DC表型的变化,并把IDO-DC与C57BL/6小鼠(供体)脾脏来源的T淋巴细胞共培养,通过混合淋巴细胞培养等方法检测异基因T细胞的特异性反应性和诱导T细胞凋亡的情况。结果用腺病毒载体携带的IDO基因转染DCs后,DCs可有效表达IDO,且没有影响DC的表型;IDO基因修饰的DCs可抑制异基因T细胞的增殖反应,同时可诱导异基因反应性T淋巴细胞的凋亡。结论在体外,IDO基因修饰的DCs可抑制移植物中异基因T淋巴细胞的增值反应。移植用该种方法处理过的骨髓,可能会预防移植物抗宿主病(GVHD)的发生。 展开更多
关键词 吲哚胺2 3双加氧酶 树突状细胞 移植物抗宿主病
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