凝胶电泳微流控芯片提取外泌体及对人血浆外泌体中miRNA-21的测定 被引量：6

1

作者 罗丹 冉凤英 +5 位作者 武伦 张娟 任芳玲 刘经健 张斌强 陈琴华 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期663-672,共10页

为了开发一种用于人体血浆中外泌体的高效快速提取和分离的新型微流控芯片,文中收集健康人体外周血液样本,自主设计并制备基于纳米多孔薄膜和琼脂糖凝胶电泳的微流芯片。提取的外泌体使用透射电镜、Nanosight和Western blotting等技术... 为了开发一种用于人体血浆中外泌体的高效快速提取和分离的新型微流控芯片,文中收集健康人体外周血液样本,自主设计并制备基于纳米多孔薄膜和琼脂糖凝胶电泳的微流芯片。提取的外泌体使用透射电镜、Nanosight和Western blotting等技术进行表征,鉴定并分析其形态、浓度和粒径分布。同时将超速离心法和微流芯片所提取的外泌体进行粒径和浓度的分析比较,探讨两种方法各自的提取效率。最后,利用RT-PCR技术分析外泌体中miRNA-21的相对表达量。凝胶电泳微流芯片可在1 h内快速的从血浆中高效率地提取出纯度高、大小完整、尺寸分布在30–200 nm之间的外泌体,满足后续下游分析的要求。通过与现有最普遍的超速离心法进行对比分析,当血浆样本量小于100μL时,凝胶电泳微流芯片提取外泌体的效率为超速离心法的3.80倍。凝胶电泳微流芯片提取外泌体的优化参数是:电场电压:100 V;琼脂糖凝胶浓度:1.0%;注射泵流速:0.1 mL/h。凝胶电泳微流芯片可快速高效地提取出外泌体,对外泌体与癌症生物标记物的相关研究具有潜在的巨大优势,也为基于外泌体的即时诊断技术提供了可能。 展开更多

关键词 外泌体 微流控芯片 癌症 纳米多孔薄膜 凝胶电泳

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反相高效液相色谱法测定参芪降糖胶囊中梓醇含量 被引量：4

2

作者 冯光军 罗丹 +4 位作者 冉凤英 杨洋 杨光义 梅全喜 陈琴华 《中国药业》 CAS 2021年第9期63-65,共3页

目的建立测定参芪降糖胶囊中梓醇含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。方法色谱柱为Linksil HPLC Column ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(2∶98,V/V),流速为0.8 m L/min,检测波长为205 nm,柱温为30℃,... 目的建立测定参芪降糖胶囊中梓醇含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法。方法色谱柱为Linksil HPLC Column ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(2∶98,V/V),流速为0.8 m L/min,检测波长为205 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。结果梓醇质量浓度在1~100μg/m L范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2%(n=6);平均加样回收率为103.45%,RSD为1.61%(n=6)。结论该方法分离效果和重复性均良好,测定结果准确,回收率高,可用于参芪降糖胶囊中梓醇的含量测定。 展开更多

关键词 参芪降糖胶囊 梓醇 反相高效液相色谱法 含量测定

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液相色谱-离子阱质谱法检测白术内酯Ⅰ的裂解途径及其在白术中的含量 被引量：2

3

作者 曹扶胜 余飞 陈琴华 《湖北中医药大学学报》 2020年第2期45-48,共4页

目的采用电喷雾离子阱质谱(ESI-IT-MS)对白术内酯Ⅰ进行解析鉴定,并建立液相色谱-离子阱质谱串联法(LC-IT-MS)测定白术中白术内酯Ⅰ的含量。方法白术内酯Ⅰ标准品经蠕动泵直接进样,ESI-IT-MS正离子模式下测定,获得质谱图,并对其主要碎... 目的采用电喷雾离子阱质谱(ESI-IT-MS)对白术内酯Ⅰ进行解析鉴定,并建立液相色谱-离子阱质谱串联法(LC-IT-MS)测定白术中白术内酯Ⅰ的含量。方法白术内酯Ⅰ标准品经蠕动泵直接进样,ESI-IT-MS正离子模式下测定,获得质谱图,并对其主要碎片进行分析,采用DL-C18反相色谱柱(250 mm×4.6mm,5.0μm),甲醇-0.5%乙酸水溶液(75∶25)为流动相,样品采用80%甲醇提取,在正离子模式下,采用选择离子监测(SIM)方式,其监测离子对为m/z 233→215,使用LC-IT-MS测定其中白术内酯Ⅰ含量。结果白术内酯Ⅰ的ESI-MS获得m/z 233[M+H]+,255[M+Na]+和487[2M+Na]+,而ESI-MS2获得m/z 215、205、187、177、160和151等碎片离子,在0.5~50μg/mL范围内白术内酯Ⅰ获得良好线性关系(r=0.9995),检测限为2.0 ng/mL,平均回收率为96.5%。结论 ESI-MS正离子模式下适用于白术内酯Ⅰ结构解析鉴定,归属了主要的碎片裂解途径,所建立的LC-IT-MS方法快速灵敏,适用于白术中白术内酯Ⅰ的检测,研究结果可为白术质量控制体系,药代动力学和结构修饰等研究提供科学的参考依据。 展开更多

关键词 白术内酯Ⅰ 白术 液相色谱-离子阱质谱联用 裂解途径

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气相色谱-质谱法对大黄酚的鉴定及其在大黄中的含量 被引量：1

4

作者 王伟 朱军 陈琴华 《湖北中医药大学学报》 2020年第3期54-57,共4页

目的使用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对大黄酚进行解析鉴定,并建立气相色谱-选择监测离子质谱法(GC-MS-SIM)测定大黄中大黄酚的含量。方法大黄酚对照品经乙酸乙酯溶解,以DB-5MS(30m×0.32 mm×0.25μm)石英毛细管柱为色谱柱,全... 目的使用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)对大黄酚进行解析鉴定,并建立气相色谱-选择监测离子质谱法(GC-MS-SIM)测定大黄中大黄酚的含量。方法大黄酚对照品经乙酸乙酯溶解,以DB-5MS(30m×0.32 mm×0.25μm)石英毛细管柱为色谱柱,全扫描模式下(m/z 50~300 amu)对其主要碎片进行分析,采用蛇床子素为内标,样品经过乙酸乙酯直接提取,选择离子监测法定量分析,监测离子为m/z 254,采用GCMS测定其在大黄中的含量。结果大黄酚主要碎片离子m/z 254(M+),226,225,198,197,180,169,152,141和115,在5~150μg/mL(r=0.9976)范围内线性良好;平均回收率为97.3%,检测限为0.1ng/mL,平均回收率97.3%。结论 GC-MS适用于大黄酚结构解析鉴定,归属了主要碎片途径,所建立的GC-MS-SIM方法简便、快速、灵敏度高、结果准确可靠,可以用于测定大黄中大黄酚的含量。 展开更多

关键词 大黄酚 气相色谱-质谱联用技术 大黄 解析鉴定 测定

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牙髓间充质干细胞对巨噬细胞极化的调节作用

5

作者 李金超 江欣 +4 位作者 张华 闻哲 窦春波 陈龙 马艳 《口腔颌面外科杂志》 CAS 2019年第5期253-259,共7页

目的:明确牙髓间充质干细胞对巨噬细胞极化的调节作用,探索调节作用分子机制。方法:使用酶消化法获取健康人的牙髓组织,差速贴壁法纯化培养DPSCs(dental pulp stem cells)。使用流式细胞术分析其表面蛋白表达;使用油红O、茜素红S染色,... 目的:明确牙髓间充质干细胞对巨噬细胞极化的调节作用,探索调节作用分子机制。方法:使用酶消化法获取健康人的牙髓组织,差速贴壁法纯化培养DPSCs(dental pulp stem cells)。使用流式细胞术分析其表面蛋白表达;使用油红O、茜素红S染色,分析其成脂肪、成骨诱导的潜能。转录组测序分析DPSCs和BMSCs基因表达谱的差异,并使用KEGG、String数据库对可能参与初始免疫信号通路的相关基因进行富集分析和蛋白相互作用预测。使用免疫印迹定量分析MYD88及TLR3蛋白在DPSCs和BMSCs中表达水平。在Transwell共培养体系中,将DPSCs和经Poly(I:C)激活的DPSCs分别与巨噬细胞进行共培养,使用流式细胞术分析共培养之后的巨噬细胞CD206、Arg-1的表达水平。结果:纯化培养的DPSCs形态呈成纤维细胞样,表达CD90、CD105、CD73,不表达CD34、CD45、CD11b,经成骨、成脂肪诱导液诱导后,油红O、茜素红S染色均呈阳性反应。转录组测序富集分析发现DPSCs在初始免疫信号通路基因表达水平高于BMSCs,核心基因MYD88、TLR3的蛋白水平也高于BMSCs。使用TLR3通路的激动剂Poly(I:C)激活DPSCs后,发现能够使巨噬细胞表达CD206、Arg-1的水平增加。结论:DPSCs能够促进巨噬细胞向抗炎型的巨噬细胞极化,TLRs信号通路可能是重要的分子途径。 展开更多

关键词 牙髓干细胞 巨噬细胞 极化 Toll受体信号通路

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4羟基他莫昔芬应激MCF-7乳腺癌细胞上清对巨噬细胞极化的影响 被引量：1

6

作者 陈炜 陈龙 +3 位作者 余飞 冉凤英 罗丹 陈琴华 《华南国防医学杂志》 CAS 2019年第10期659-662,699,共5页

目的探讨4羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,4-OHTAM)刺激MCF-7乳腺癌细胞后上清对巨噬细胞极化的影响。方法实验组分别用不同浓度(2.5、5、10、15、20μmol/L)的4-OHTAM刺激MCF-7乳腺癌细胞2 h和5 h,提取细胞上清液,对照组未经4-OHTAM... 目的探讨4羟基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen,4-OHTAM)刺激MCF-7乳腺癌细胞后上清对巨噬细胞极化的影响。方法实验组分别用不同浓度(2.5、5、10、15、20μmol/L)的4-OHTAM刺激MCF-7乳腺癌细胞2 h和5 h,提取细胞上清液,对照组未经4-OHTAM处理;Western blot检测MCF-7细胞中应激蛋白C/EBP家族同源蛋白(C/EBP-homologous protein,Chop)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,Grp78)的表达水平。并将上清与佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导6 h的人白血病单核细胞株THP-1共同培养66 h后,获得贴壁巨噬细胞。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测巨噬细胞上清中白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)及白细胞介素1受体拮抗剂(interleukin 1 receptor antagonist,IL-1Ra)的水平;Western blot检测巨噬细胞IL-1Ra及CD206的表达水平。结果5μmol/L的4-OHTAM刺激MCF-7细胞5 h后,实验组中应激蛋白Chop和Grp78表达水平明显上调(P<0.05);巨噬细胞上清中细胞因子IL-10和IL-1Ra的水平以及细胞中CD206和IL-1Ra的蛋白表达水平在4-OHTAM浓度为5μmol/L时水平最高(P<0.05)。结论5μmol/L的4-OHTAM刺激MCF-7细胞5 h后,MCF-7细胞发生了细胞应激,并且释放的细胞因子可以诱导巨噬细胞向M2型极化转变,这种极化方向的改变可能对乳腺癌的发生发展及4-OHTAM耐药有一定影响。 展开更多

关键词 4羟基他莫昔芬 乳腺癌 应激 极化 耐药

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“卫生管理运筹学”教学改革研究

7

作者 曾智 陈龙 《科教文汇》 2021年第12期119-120,共2页

“卫生管理运筹学”是卫生事业管理专业的一门重要课程,目前其教学过程以理论教学为主,忽略了其重要的应用特色。该文以提高学生运用运筹学知识解决现实问题的能力为目的,从教学引导、教学方法、考核方式及教学团队建设等方面提出了以... “卫生管理运筹学”是卫生事业管理专业的一门重要课程,目前其教学过程以理论教学为主,忽略了其重要的应用特色。该文以提高学生运用运筹学知识解决现实问题的能力为目的,从教学引导、教学方法、考核方式及教学团队建设等方面提出了以下具体的教学改革措施:(1)以现实问题为导向,激发学生的学习兴趣。(2)学用结合,培养学生使用运筹学软件解决问题的能力。(3)优化教学内容,提升教学效果。(4)完善考核方式,提高学生分析问题和解决问题的能力。(5)加强教学团队建设,形成教学合力。 展开更多

关键词 卫生管理运筹学 教学改革 对策

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外泌体提取方法及在肺癌早期诊断中的作用研究进展 被引量：6

8

作者 罗丹 李春雷 +1 位作者 武伦 陈琴华 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期999-1006,共8页

肺癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,严重威胁着国民的生命安全与健康。肺癌的早期诊断是肺癌预防和治疗过程中的关键环节,对肺癌进行早期诊断有利于提高患者的生存率。外泌体(exosomes)与肿瘤的侵袭与转移过程密切相关... 肺癌是世界范围内发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,严重威胁着国民的生命安全与健康。肺癌的早期诊断是肺癌预防和治疗过程中的关键环节,对肺癌进行早期诊断有利于提高患者的生存率。外泌体(exosomes)与肿瘤的侵袭与转移过程密切相关,在肺癌的发生发展过程中,外泌体发挥着重要的调控作用。近年来,以外泌体为载体的生物标记物成为肺癌强有力的诊断工具。外泌体是一种由细胞分泌的由膜包裹的大小均一、直径约为30 nm-200 nm的脂质双分子层结构小囊泡。外泌体的内容物包含不同类型的核酸和蛋白质,这些核酸和蛋白质来源于其亲本细胞(包括亲本癌细胞),具有广泛的生理功能,包括参与免疫调节、细胞间联络等。外泌体中的生物大分子物质,如单链RNA、长非编码RNA、微小RNA(microRNA,miRNA)、蛋白质以及脂类,可以为肺癌的早期临床诊断提供有价值的信息。因此,本文就外泌体的来源、结构特点、提取方法、生物学特性和在肺癌早期诊断中的作用研究进展做简要阐述。 展开更多

关键词 外泌体 肺肿瘤 早期诊断

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U251胶质瘤干细胞抗辐射性能研究 被引量：1

9

作者 蔡润 马廉亭 +2 位作者 陈龙 屈洪艳 吴华伟 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期974-976,共3页

目的从U251细胞株中分离胶质瘤干细胞并探讨胶质瘤干细胞的抗辐射性能。方法应用无血清培养基悬浮培养法从U251细胞株中分离鉴定胶质瘤干细胞，X线辐射处理72h后，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性，流式细胞仪及免疫荧光染色法检测辐... 目的从U251细胞株中分离胶质瘤干细胞并探讨胶质瘤干细胞的抗辐射性能。方法应用无血清培养基悬浮培养法从U251细胞株中分离鉴定胶质瘤干细胞，X线辐射处理72h后，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性，流式细胞仪及免疫荧光染色法检测辐射前后CD133和三磷酸腺苷结合盒转运体成员2（ABCG2）的表达。结果U251细胞株中经过无血清培养可以得到悬浮生长的胶质瘤细胞球，具有较强的自我更新和增殖能力；在细胞球中，有3．17％的细胞表达CD133，1．17％表达ABCG2；9Gy辐射处理72h后，CD133表达阳性率上升到13．24％，ABCG2表达阳性率上升到8．76％；辐射处理后，细胞活性随辐射剂量增大而显著下降（P〈0．05）。结论悬浮培养法得到的肿瘤细胞球有小部分是胶质瘤干细胞；X线辐射处理后，细胞活性随辐射剂量增大而显著下降；胶质瘤干细胞表现出更强的抗辐射损伤性能。 展开更多

关键词 U251细胞株 胶质瘤干细胞 辐射

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我国非酒精性脂肪性肝病的流行病学研究和诊断现状分析 被引量：12

10

作者 吴车敏 张从玉 +3 位作者 徐慧丽 郭晨欣 黄慧敏 姜雪强 《中国医药导报》 CAS 2023年第11期158-161,共4页

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是我国第一大慢性肝病,也是引起健康查体肝功能异常的首要原因。影响NAFLD发病的危险因素众多,不仅包括性别、年龄、代谢综合征等常见的危险因素,还包含睡眠障碍、肌少症等少见但已成为研究热点的因素。近年来... 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是我国第一大慢性肝病,也是引起健康查体肝功能异常的首要原因。影响NAFLD发病的危险因素众多,不仅包括性别、年龄、代谢综合征等常见的危险因素,还包含睡眠障碍、肌少症等少见但已成为研究热点的因素。近年来,随着饮食结构及生活方式的改变,我国NAFLD的患病率和发病率呈现持续增长和低龄化趋势。流行病学调查有助于NAFLD疾病的诊断、治疗及预防。近年来,国内NAFLD的流行病学资料正在不断完善,本文就近10年来我国NAFLD的患病情况及相关危险因素研究现状进行综述。 展开更多

关键词 代谢相关脂肪性肝病 非酒精性脂肪性肝病 脂肪肝 流行病学 危险因素

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湖北十堰地区某公司7421例员工普通体检代谢相关脂肪性肝病检出结果分析 被引量：1

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作者 吴车敏 张从玉 +3 位作者 徐慧丽 黄慧敏 李秀楼 姜雪强 《山东医药》 CAS 2023年第21期35-39,共5页

目的了解湖北十堰地区某公司7421例员工普通体检代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)的患病情况,以及MAFLD患病的影响因素。方法进行健康体检的东风公司员工7421例,依据MAFLD诊断标准分为MAFLD组2839例、非MAFLD组4582例。收集入选体检者的性别... 目的了解湖北十堰地区某公司7421例员工普通体检代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)的患病情况,以及MAFLD患病的影响因素。方法进行健康体检的东风公司员工7421例,依据MAFLD诊断标准分为MAFLD组2839例、非MAFLD组4582例。收集入选体检者的性别、年龄等资料,计算不同性别及年龄MAFLD患病率。收集两组体检者的一般资料和血液生化指标信息,包括年龄、BMI、丙氨酸转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血小板计数(PLT)、空腹血糖、尿酸等。以是否患有MAFLD为因变量,以单因素分析中差异有统计学意义的指标为自变量并赋值,多因素Logistic回归分析7421例体检者MAFLD患病的影响因素。结果7421例体检者中MAFLD患病率为38.3%,其中男性患病率为43.8%、女性患病率为17.1%,男性患病率显著高于女性(P<0.05),男性MAFLD患者年龄<30岁、30~39岁、40~49岁、≥50岁者患病率均高于女性(P均<0.05)。3309例非MAFLD组男性体检者的年龄、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、PLT、超重/肥胖检出率、空腹血糖异常检出率、高尿酸血症检出率等指标与2576例MAFLD组男性体检者相比,P均<0.05。1273例非MAFLD组女性体检者的年龄、ALT、TG、TC、HDL-C、LDL-C、PLT、超重/肥胖检出率、空腹血糖异常检出率、高尿酸血症检出率等指标与263例MAFLD组女性体检者相比,P均<0.05。Logistic回归分析结果显示,年龄、ALT、TG、HDL-C、PLT、超重/肥胖、空腹血糖异常、高尿酸血症是5885例男性体检者MAFLD患病的影响因素,ALT、TG、HDL-C、超重/肥胖、高尿酸血症是1536例女性体检者MAFLD患病的影响因素。结论湖北十堰地区某公司7421例员工中MAFLD患病率偏高,男性患病率高于女性,年龄、ALT、TG、HDL-C、PLT、超重/肥胖、空腹血糖异常、高尿酸血症是男性体检者MAFLD患病的影响因素,ALT、TG、HDL-C、超重/肥� 展开更多

关键词 脂肪性肝病 代谢相关脂肪性肝病 患病率 健康体检

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