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藻蓝蛋白的抗癌活性研究 被引量:35
1
作者 王勇 钱峰 +1 位作者 钱凯先 董强 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2001年第6期672-675,共4页
活细胞脱氢酶催化四唑盐 (MTT)还原 ,生成溶于有机溶剂的蓝色甲月赞结晶 ,可定量反映细胞生长 .流式细胞技术可根据细胞中 DNA的质量分数来检测其所处的细胞周期 .采用上述两种方法 ,研究了藻蓝蛋白 (PC)对 He La细胞的抗癌活性 .实验证... 活细胞脱氢酶催化四唑盐 (MTT)还原 ,生成溶于有机溶剂的蓝色甲月赞结晶 ,可定量反映细胞生长 .流式细胞技术可根据细胞中 DNA的质量分数来检测其所处的细胞周期 .采用上述两种方法 ,研究了藻蓝蛋白 (PC)对 He La细胞的抗癌活性 .实验证明 ,PC对 He La细胞生长有明显的抑制作用 ,当 PC浓度为 80 mg/L时对癌细胞的抑制率达 31.0 %.初步认为这种抑制机理为 :PC使 He L a细胞由合成期(S)或分裂期 (M)向 G1期转变和积集 ,细胞 DNA合成衰减 . 展开更多
关键词 螺旋藻 藻蓝蛋白 四唑盐 流式细胞技术 人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)
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嗜水产气单胞菌诱导的草鱼免疫球蛋白分析 被引量:13
2
作者 李亚南 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第2期132-138,共7页
取草鱼经嗜水产气单胞菌疫苗免疫 ,获免疫血清分两组 ,一组样品经饱和硫酸铵分级沉淀、透析和电泳分析 ,另一组经SephadexG 2 0 0柱层析分离及电泳分析。各分离样品经特异性凝集活性测定 ,发现沉淀分离组样品中抗体凝集活性最强的主要为... 取草鱼经嗜水产气单胞菌疫苗免疫 ,获免疫血清分两组 ,一组样品经饱和硫酸铵分级沉淀、透析和电泳分析 ,另一组经SephadexG 2 0 0柱层析分离及电泳分析。各分离样品经特异性凝集活性测定 ,发现沉淀分离组样品中抗体凝集活性最强的主要为 35 %饱和硫酸铵沉淀的组分 ,而柱层析分离组样品的凝集抗体主要集中在第一个洗脱峰里。在电泳图谱中 ,各免疫组均比对照组增加了一条大分子B带 ,分子量为 30 9kD左右 ,后者经变性电泳分离表现为两条区带 ,相对分子量分别为 5 2kD和 2 6kD。因而推测它们是单体IgG解离的重链和轻链 ,而聚集在B带的是IgG的聚合形式IgM。 展开更多
关键词 草鱼 嗜水产气单胞菌 免疫血清 免疫球蛋白 凝集活性
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急性低氧下β-内啡肽参与对大鼠体液免疫的抑制性调节 被引量:13
3
作者 白海波 杜继曾 郑筱祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期258-262,共5页
正常大鼠脑室注射β内啡肽(βEP)(1ng/rat)使溶血素生成和鸡卵白蛋白的IgG抗体产生受到明显抑制,脾脏单个核细胞DNA含量也下降;7km48h低氧同样使溶血素的产生明显下降,大鼠脑室注射阿片受体阻断剂钠屈... 正常大鼠脑室注射β内啡肽(βEP)(1ng/rat)使溶血素生成和鸡卵白蛋白的IgG抗体产生受到明显抑制,脾脏单个核细胞DNA含量也下降;7km48h低氧同样使溶血素的产生明显下降,大鼠脑室注射阿片受体阻断剂钠屈酮(naltrexone)可使低氧造成的IgG和溶血素生成抑制翻转,低氧抑制的脾脏单个核细胞DNA合成得到部分阻断;脑室注射βEP与7km低氧12h一样使脾脏中儿茶酚胺含量增加。因而,本研究认为阿片类物质在急性低氧应激过程中参与了对大鼠体液免疫功能的调节作用。其对低氧体液免疫功能的抑制作用可能与激活交感神经系统有关。 展开更多
关键词 低氧 免疫 Β-内啡肽 免疫调节 体液免疫
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肉苁蓉多糖的纯化及其对T细胞功能调节的研究 被引量:9
4
作者 曾群力 毛俊浩 吕志良 《浙江医科大学学报》 CSCD 1998年第3期108-111,共4页
研究肉苁蓉主要成分之—─—多糖对小鼠胸腺T细胞的功能调节。方法:采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖,以DEAE-SephadexA-50和SephacrylS-200柱层析,获得肉苁蓉多糖(CDPS)。再采用噻唑蓝比色法(MTT)观察CDPS对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增... 研究肉苁蓉主要成分之—─—多糖对小鼠胸腺T细胞的功能调节。方法:采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖,以DEAE-SephadexA-50和SephacrylS-200柱层析,获得肉苁蓉多糖(CDPS)。再采用噻唑蓝比色法(MTT)观察CDPS对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖反应的影响及对正常小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的影响。结果:CDPS纯化后经SephacrylS-200鉴定为单一对称峰。CDPS体外实验,在12.5~200μg/ml浓度范围内,有单独和协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用(P<0.01)。CDPS在100μg/ml浓度时,能显著提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2的能力.其IL-2活性明显高于对照组(P<0.01)。结论:肉苁蓉多糖能增加小鼠脾、胸腺淋巴细胞的增殖反应,且与ConA、PHA有协同刺激小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用;并能显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL-2。 展开更多
关键词 肉苁蓉 多糖 小鼠 胸腺 T细胞
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低氧对大鼠体液免疫的抑制作用 被引量:8
5
作者 白海波 杜继曾 贾红卫 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期167-172,共6页
本实验以模拟高原低氧的方法,探讨了低氧对大鼠体液免疫的作用,并与高原鼠免比较,体液免疫以溶血亲和IgG产生为指标。实验结果:与对照组相比,大鼠低氧10d,5km海拔抑制溶血素形成10.3%,7km海拔抑制溶血素形成21.9%;经再次免... 本实验以模拟高原低氧的方法,探讨了低氧对大鼠体液免疫的作用,并与高原鼠免比较,体液免疫以溶血亲和IgG产生为指标。实验结果:与对照组相比,大鼠低氧10d,5km海拔抑制溶血素形成10.3%,7km海拔抑制溶血素形成21.9%;经再次免疫后又低氧10d,5km海拔抑制溶血素形成4.2%,7km海拔抑制溶血素形成4.6%,高原土著动物高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)则不表现上述的抑制现象;大鼠经SRBC腹腔致敏2d后低氧5d和8d,未表现低氧抑制溶血素形成的作用;大鼠侧脑室给予外源性CRF(1μg/rat),可抑制溶血素形成和IgG产生,溶血素形成抑制8.6%,IgG产生抑制14.0%;7km低氧大鼠侧脑室给予CRF受体阻断剂(αhelicalCRF(9-41)50μg对低氧抑制溶血素形成有一定的阻断作用,可部分阻断低氧抑制IgG产生,使IgG产生的抑制率由24.2%提高到12.互%;大鼠腹腔注射1μgCRF对溶血素形成和IgG产生无影响;与假手术组比,大鼠在摘除双侧肾上腺后,低氧对溶血素形成仍抑制6.6%。因而,本研究认为低氧对初次和再次体液免疫均产生抑制作用,而且抑制作用发生在体液免疫的起始阶段,其抑制作用与中枢CRF升高有关。 展开更多
关键词 低氧 高原 体液免疫 生理学
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坛紫菜中R-藻红蛋白的色谱纯化及性质研究 被引量:5
6
作者 陈小强 龚兴国 +1 位作者 史锋 潘远江 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期5-9,共5页
从坛紫菜(Porphyrahaitanensis)藻胆蛋白粗提液中分离纯化R 藻红蛋白(R phycoerythrin,R PE),经过两次不同柱长规格的自制羟基磷灰石柱层析和一次DEAE SepharoseFastFlow离子交换层析,获得了较高纯度的R PE(A565nm A280nm>5.3);测定... 从坛紫菜(Porphyrahaitanensis)藻胆蛋白粗提液中分离纯化R 藻红蛋白(R phycoerythrin,R PE),经过两次不同柱长规格的自制羟基磷灰石柱层析和一次DEAE SepharoseFastFlow离子交换层析,获得了较高纯度的R PE(A565nm A280nm>5.3);测定了R PE的紫外可见吸收光谱和荧光光谱,R PE的吸收峰在565和498nm,在540nm有一吸收肩,荧光发射峰在573nm;用SDS PAGE测定组成R PE各亚基的相对分子质量,α β亚基约为18~20kDa,γ亚基约为35kDa;对R PE在不同的pH和温度环境协同影响下的荧光稳定性进行了研究,摸索了R PE的长期有效保存的方法并探讨了(NH4)2SO4的保护机理。 展开更多
关键词 R-藻红蛋白 色谱 纯化 光谱
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精氨酸加压素对大鼠抗体产生和淋巴细胞增殖的上调作用 被引量:6
7
作者 白海波 杜继曾 郑筱祥 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期435-438,共4页
大鼠侧脑室注射(icv)100 ng 精氨酸加压素(AVP) , 用ELISA 法检测血中对鸡卵白蛋白抗原产生的IgG抗体水平。结果显示,IgG 水平高于对照, 而AVP 的V1 受体阻断剂DPAVP(1deaminop... 大鼠侧脑室注射(icv)100 ng 精氨酸加压素(AVP) , 用ELISA 法检测血中对鸡卵白蛋白抗原产生的IgG抗体水平。结果显示,IgG 水平高于对照, 而AVP 的V1 受体阻断剂DPAVP(1deaminopenicillamine 2omethyltyrosineAVP) 则可阻断此作用;icv 800 ng AVP, 大鼠的SRBC溶血素水平高于对照;icv 100 ng、800 ng AVP2 h 后, 脾淋巴细胞对MTT产生的颜色反应均比对照增加, 而DPAVP 可阻断之;icv 800 ng AVP 后, 血清去甲肾上腺素(NE) 水平明显低于对照,icv 100 ng 和800 ng AVP, 血清皮质酮水平下降。因此, 本研究提示,AVP 在脑内通过V1 受体可增强大鼠部分免疫指标的功能。结合以前AVP 对下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)有抑制作用的实验结果, 推论这种增强作用的机制可能是AVP 抑制下丘脑处CRF释放, 从而减弱了下丘脑垂体肾上腺皮质轴的功能, 展开更多
关键词 精氨酸加压素 IGG 抗体 淋巴细胞增殖 免疫调节
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虚拟仪器与COM组件技术在仪器系统设计中的应用 被引量:1
8
作者 郭淼 叶树明 +1 位作者 张建文 蒋凯 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2004年第3期191-193,共3页
COM组件技术和虚拟仪器技术在仪器设计领域均有较广泛的应用,该文在分析其各自技术特点的基础上,进一步探讨了二者相互的优越性与可行性,并介绍了一套可远程控制的海洋极端环境测试仪器系统。
关键词 COM 虚拟仪器 远程控制 组件技术 系统设计 海洋极端环境测试仪器
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螺旋藻基因克隆研究进展 被引量:4
9
作者 苏忠亮 王勇 钱凯先 《浙江大学学报(工学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第1期117-120,共4页
螺旋藻是一种具有重要经济价值和开发前景的原核生物,许多国家已相继建立了螺旋藻的大规模工业生产系统,我国在90年代一跃而成为世界第一生产大国.当前,加强螺旋藻基因工程的研究,对进一步提高其天然产物表达和开创以螺旋藻作为表达载体... 螺旋藻是一种具有重要经济价值和开发前景的原核生物,许多国家已相继建立了螺旋藻的大规模工业生产系统,我国在90年代一跃而成为世界第一生产大国.当前,加强螺旋藻基因工程的研究,对进一步提高其天然产物表达和开创以螺旋藻作为表达载体,建立基因工程新的高效原核光合表达系统日渐迫切.由于螺旋藻的遗传背景尚不清楚,其基因工程尚难突破.本文仅对有关的螺旋藻基因克隆研究进行了阐述和展望,以期为推进螺旋藻基因工程研究提供参考. 展开更多
关键词 螺旋藻 基因克隆 研究进展 基因工程 原核光合表达系统 分子遗传学
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低氧对新生大鼠脾单个核细胞DNA合成及转化的影响 被引量:5
10
作者 白海波 杜继曾 贾红卫 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期220-223,共4页
本研究以荧光法测定脾单个核细胞DNA合成及MTT比色法测定的脾单个核细胞对ConA的增殖反应,观察模拟高原低氧对出生后14天大鼠上述两指标的影响,同时也观察了交感神经和副交感神经的活动状态,以初步探讨低氧对上述两指标... 本研究以荧光法测定脾单个核细胞DNA合成及MTT比色法测定的脾单个核细胞对ConA的增殖反应,观察模拟高原低氧对出生后14天大鼠上述两指标的影响,同时也观察了交感神经和副交感神经的活动状态,以初步探讨低氧对上述两指标的作用是如何介导的。结果表明:5km海拔高度低氧作用24h不抑制脾单个细胞DNA合成及脾单个核细胞转化,而作用5天时则抑制DNA合成及脾单个核细胞转化,分别为对照组的56.6%(P<0.01)和86.8%(P<0.05);7km海拔高度低氧作用24h,DNA合成及脾单个核细胞转化均受抑制,分别为对照组的61.0%(P<0.01)和81.2%(P<0.01);7km海拔24h低氧导致脾脏中乙酰胆碱下降,儿茶酚胺升高;用DSP-4中枢药理性损毁NE神经元,可使脾单个核细胞DNA合成的抑制程度减弱,脾脏中儿茶酚胺含量下降。这些结果表明低氧可抑制新生大鼠脾单个核细胞的DNA合成及转化。 展开更多
关键词 低氧高原 DNA合成 脾单个核细胞 增殖
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高速数据采集和控制模块设计及其应用——基于C8051F040的CAN总线 被引量:2
11
作者 叶树明 潘佚 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2005年第30期215-217,220,共4页
该文详细介绍了基于Cygnal公司的片上混合信号系统级(SOC)单片机C8051F040的CAN总线高速数据采集和控制模块的硬件和软件设计,给出了详细的硬件原理图和软件流程图,并将此系统成功应用到海底小型底栖生物分离系统中。
关键词 CAN总线 模块 信息目标
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菌紫质质子泵机理的研究进展
12
作者 王开彬 吴敏 《生命科学》 CSCD 2002年第2期77-80,共4页
菌紫质(bR)是嗜盐菌紫膜中的唯一蛋白,具有光驱动的质子泵功能。迄今为止对于光循环和质子泵的具体分子机理仍未弄清楚。作者概述了近几年来关于bR质子泵机理的研究进展,介绍了两个较新的模型。
关键词 菌紫质 质子泵 机理 研究进展
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冠心病和糖尿病人心率变异性非线性动力学初探 被引量:1
13
作者 徐征 徐秋萍 +1 位作者 张辉 葛霁光 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2001年第2期316-319,共4页
研究了正常人以及冠心病单支病变、多支病变、糖尿病伴植物神经性病变这些已被证实在心率变异性时域和频域上有明显变化的患者在非线性动力学上表现 ,选用的指标是散点图几项量化指标、测度熵和关联维数。研究表明 :(1)正常人非线性参... 研究了正常人以及冠心病单支病变、多支病变、糖尿病伴植物神经性病变这些已被证实在心率变异性时域和频域上有明显变化的患者在非线性动力学上表现 ,选用的指标是散点图几项量化指标、测度熵和关联维数。研究表明 :(1)正常人非线性参数中存在明显的昼夜变化 ,冠脉病人昼夜变化程度减低 ,而糖尿病患者无昼夜变化 ;(2 )根据冠脉病人和糖尿病人生理上都具有植物性神经紊乱的现象 ,可以知道植物性神经是影响心脏非线性运动的一个重要因素 ;(3)正常人、冠脉病患者的轻重程度、糖尿病人的非线性参数之间都存在比较明显的区别 。 展开更多
关键词 心率变异性 非线性动力学 冠心病 糖尿病
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低温存活猫肾亚细胞Ca^(2+)浓度变化的X-射线微区分析 被引量:1
14
作者 殷胜勇 葛霁光 林支付 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 2002年第3期431-434,共4页
随着肾离体低温保存时间的延长 ,细胞内钙离子沉积而导致细胞损伤 ,影响肾脏整体功能的保存情况以及移植后肾脏的存活率。本地家猫肾脏离体后冲洗至灰白 ,然后置于改良 Collins II保存液中低温存活 ,保存 0、2 4、48、72 h以后 ,应用 Ca... 随着肾离体低温保存时间的延长 ,细胞内钙离子沉积而导致细胞损伤 ,影响肾脏整体功能的保存情况以及移植后肾脏的存活率。本地家猫肾脏离体后冲洗至灰白 ,然后置于改良 Collins II保存液中低温存活 ,保存 0、2 4、48、72 h以后 ,应用 Ca2 +细胞化学探针 (Calcium cytochemical probe)及 X-射线微区分析技术 (X- ray microanal-ysis of microsections)检测肾小管上皮细胞亚细胞水平的钙离子浓度变化。肾脏经过不同时间体外存活以后 ,细胞核和内质网中钙离子浓度没有明显的变化 ,而线粒体和细胞溶质中钙离子浓度显著地呈现出线性升高。结果表明 ,随着肾脏保存时间延长 ,细胞溶质钙离子浓度升高源于细胞内储存的钙离子释放 ,正常生理条件下在细胞信息传递中充当“钙库” 展开更多
关键词 X-射线微区分析 肾脏 低温存活 亚细胞 肾保存
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冠心病与糖尿病患者的心率变异性非线性动力学研究
15
作者 徐秋萍 徐征 +1 位作者 张辉 葛霁光 《中华物理医学与康复杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期111-114,共4页
目的 研究正常人及冠心病单支病变、多支病变、糖尿病伴植物神经性病变患者心率变异在非线性动力学上的表现。方法 选用的指标是散点图几项量化指标、测度熵和关联维数。结果 正常人非线性参数中存在明显的昼夜变化 ,冠心病患者昼夜... 目的 研究正常人及冠心病单支病变、多支病变、糖尿病伴植物神经性病变患者心率变异在非线性动力学上的表现。方法 选用的指标是散点图几项量化指标、测度熵和关联维数。结果 正常人非线性参数中存在明显的昼夜变化 ,冠心病患者昼夜变化程度减低 ,而糖尿病伴植物神经性病变患者昼夜变化规律消失 ;根据冠心病患者和糖尿病伴植物神经性病变患者的病理生理上都具有植物神经功能紊乱的现象 ,提示植物神经调节是影响心脏非线性运动的一个重要因素。一些非线性参数可显示正常人、冠心病患者冠脉病变程度及糖尿病伴植物神经病变患者之间的差异。结论 通过特征值提取 ,心率变异的一些非线性参数 ,有望为临床医师提供一种有效的预测冠心病患者预后及检测糖尿病患者植物神经病变程度的指标。 展开更多
关键词 非线性动力学 冠心病 糖尿病 心率变异性
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淋巴细胞活化辅助分子与信号转导 被引量:2
16
作者 马志章 周晴 丁仁瑞 《基础医学与临床》 CSCD 1996年第3期174-180,共7页
淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章,周晴,丁仁瑞(杭州大学生命科学学院,杭州310028)Abstract:Inadditiontothespecificrecognitionofanantigenthrougha... 淋巴细胞活化辅助分子与信号转导马志章,周晴,丁仁瑞(杭州大学生命科学学院,杭州310028)Abstract:Inadditiontothespecificrecognitionofanantigenthroughantigenreceptors,l... 展开更多
关键词 淋巴细胞 活化辅助分子 信号转导
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主从式小型集散系统设计 被引量:1
17
作者 叶树明 陈杭 刘峰 《计算机工程与应用》 CSCD 北大核心 2004年第14期220-222,共3页
集散型控制系统是一种昂贵的先进自动化装置,作者设计一套经济、实用的主从式小型集散系统,用于仪器开发领域,不仅能节省开发资金,还能提高仪器系统的利用率、可靠性、稳定性。该文构建了小型集散系统的框架,并为此设计一套完善的通讯协... 集散型控制系统是一种昂贵的先进自动化装置,作者设计一套经济、实用的主从式小型集散系统,用于仪器开发领域,不仅能节省开发资金,还能提高仪器系统的利用率、可靠性、稳定性。该文构建了小型集散系统的框架,并为此设计一套完善的通讯协议,克服了通用的通讯协议中存在的安全隐患。以此理论为基础,开发了自动生化分析仪系统。 展开更多
关键词 主从式 集散系统 通讯协议 RS-485
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组合式膜生物反应器处理高浓度氨氮废水 被引量:37
18
作者 李红岩 高孟春 +3 位作者 杨敏 潘峰 王宝泉 王丹 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第5期62-66,共5页
利用一体化膜生物反应器进行了高浓度氨氮废水硝化特性研究 .研究结果表明 ,当原水氨氮浓度为2 0 0 0mg/L、进水氨氮的容积负荷为 2 .0kg /(m3·d)时 ,氨氮的去除率可达 99%以上 ,系统比较稳定 .反应器内活性污泥的比硝化速率在半... 利用一体化膜生物反应器进行了高浓度氨氮废水硝化特性研究 .研究结果表明 ,当原水氨氮浓度为2 0 0 0mg/L、进水氨氮的容积负荷为 2 .0kg /(m3·d)时 ,氨氮的去除率可达 99%以上 ,系统比较稳定 .反应器内活性污泥的比硝化速率在半年的时间内基本稳定在 0 .3 展开更多
关键词 微滤膜 生物曝气池 容积负荷 组合式膜生物反应器 高浓度氨氮废水
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多分辨率小波信号分解用于大鼠睡眠纺锤波的分析 被引量:6
19
作者 封洲燕 郑筱祥 《中国生物医学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第2期103-108,共6页
本研究首先设计了慢波睡眠期脑电信号的合成仿真信号 ,对小波基函数进行了选择 ,结果证明Coiflet 5阶小波变换对大鼠慢波睡眠期EEG信号具有较好的分解结果。据此 ,应用多分辨率小波分析法设计了提取睡眠纺锤波的算法 ,并利用该算法对安... 本研究首先设计了慢波睡眠期脑电信号的合成仿真信号 ,对小波基函数进行了选择 ,结果证明Coiflet 5阶小波变换对大鼠慢波睡眠期EEG信号具有较好的分解结果。据此 ,应用多分辨率小波分析法设计了提取睡眠纺锤波的算法 ,并利用该算法对安定用药后和睡眠剥夺后大鼠慢波睡眠期纺锤波的持续时间和能量变化进行了分析 ,结果表明 :安定具有延长慢波睡眠期纺锤波持续时间的作用 ,而睡眠剥夺可以增加慢波睡眠期纺锤波的能量。这些结果说明 ,小波分析算法可以提供功率谱分析无法表现的时频信息。 展开更多
关键词 小波变换 纺锤波 安定 睡眠剥夺
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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化 被引量:2
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作者 史训龙 冯美卿 +2 位作者 贺佳音 袁中一 周珮 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期71-74,85,共5页
目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等... 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U/mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50%硫酸铵沉 淀酶回收率可达85%以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90%,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40%。 展开更多
关键词 S-100 细胞 法能 透析 分离纯化 电泳 表达 硫酸铵沉淀 基因工程酵母 D-氨基酸氧化酶
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