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放线菌中铁载体生物合成机制研究进展 被引量:8
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作者 黄婷婷 林双君 邓子新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期765-773,共9页
铁载体是由微生物产生,对铁元素具有高亲和性的小分子化合物。这类天然产物所展现的结构多样性引起人们对其生物合成机制的极大兴趣。目前已有研究报道的铁载体生物合成途径主要有2种,一是直接由非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptide ... 铁载体是由微生物产生,对铁元素具有高亲和性的小分子化合物。这类天然产物所展现的结构多样性引起人们对其生物合成机制的极大兴趣。目前已有研究报道的铁载体生物合成途径主要有2种,一是直接由非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptide synthetases,NRPSs)家族的多酶复合体负责合成,另一种是以不依赖于NRPS(NRPS-independent,NIS)的方式,由一类特殊合成酶家族参与合成。在过去的十多年中,铁载体生物合成成为天然产物生物合成研究领域的热点之一,其中几种依赖于NRPS途径合成的铁载体生物合成机制已得到充分阐明,而对NIS方式合成的铁载体研究也获得了诸多进展。作为放线菌的一类重要次级代谢产物,通过遗传学、化学等手段对放线菌所产生铁载体生物合成途径的遗传学和生物化学研究,能够为发展新的抗菌药物提供契机,同时也能加深我们对这一类生物活性物质形成机制的认识。综述近期该研究方向的进展。 展开更多
关键词 铁载体 非核糖体肽合成 不依赖于NRPS的合成 生物合成 放线菌
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生物对逆境环境的适应和抗逆分子育种
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作者 赵杨 赵心清 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1-5,共5页
我国人口占世界人口17%,耕地面积约占世界耕地面积的7.8%。根据国家统计局2021年数据,全国19.18亿亩耕地面积中旱地占50.33%,水浇地占25.12%,水田占24.55%;其中约10%的耕地已受到土壤盐渍化的影响。
关键词 耕地面积 国家统计局 分子育种 土壤盐渍化 水浇地
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MRP8过表达促进重组酿酒酵母外切纤维素酶生产 被引量:4
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作者 万青青 李洁 +3 位作者 曾钰 张明明 赵心清 白凤武 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期94-100,共7页
增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵... 增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵母的胞外CBH1酶活提高了约80%。实时定量PCR结果分析表明,在MRP8过表达突变体中,CBH1转录水平高于对照菌株,但是与蛋白折叠和分泌相关的关键基因转录水平没有明显变化。在刚果红平板和含有衣霉素或二硫苏糖醇的平板上生长没有受到影响。胞内ATP含量和活性氧积累未发现显著差别。本研究表明MRP8过表达促进外切纤维素酶的生产。 展开更多
关键词 酿酒酵母 异源蛋白表达 外切纤维素酶 线粒体核糖体蛋白基因MRP8 蛋白合成
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丝状真菌纤维素酶合成诱导及转录调控 被引量:3
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作者 张飞 白凤武 赵心清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1481-1495,共15页
利用廉价可再生木质纤维素资源水解产生的可发酵糖生产生物能源和生物基化学品是近年来国内外研究的热点。纤维素酶酶解是木质纤维素原料生物降解的重要手段,但目前纤维素酶生产成本过高,限制了纤维素生物转化和生物炼制的工业化应用。... 利用廉价可再生木质纤维素资源水解产生的可发酵糖生产生物能源和生物基化学品是近年来国内外研究的热点。纤维素酶酶解是木质纤维素原料生物降解的重要手段,但目前纤维素酶生产成本过高,限制了纤维素生物转化和生物炼制的工业化应用。对丝状真菌纤维素酶基因表达和调控进行研究,有利于进一步选育纤维素酶高产菌株,降低纤维素酶生产成本。随着高通量测序及丝状真菌遗传操作等技术的进步,对丝状真菌纤维素酶诱导和基因表达调控机理有了更深入的认识。本文综述了近年来丝状真菌纤维素酶诱导和纤维素酶基因表达调控的最新进展,重点论述糖转运蛋白、转录因子和染色质重塑对纤维素酶表达调控的影响,并对利用人工锌指蛋白进行丝状真菌纤维素酶诱导调控研究进行了展望。 展开更多
关键词 纤维素酶 基因表达调控 转录因子 里氏木霉
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猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)诱导NCI-H446等小细胞肺癌细胞在FIGNL1沉默时出现S期阻滞 被引量:3
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作者 厉建蕾 施嘉骏 +4 位作者 李泉 张泽忠 白林泉 马伟 邓子新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期411-419,共9页
【目的】研究支原体对体外培养细胞基因功能的影响。【方法】利用si RNA抑制DNA双链损伤修复关键基因——FIGNL1在无支原体感染、感染猪鼻支原体及清除支原体污染后的人小细胞肺癌细胞株NCI-H446与NCI-H1688中的表达后,采用定量PCR、流... 【目的】研究支原体对体外培养细胞基因功能的影响。【方法】利用si RNA抑制DNA双链损伤修复关键基因——FIGNL1在无支原体感染、感染猪鼻支原体及清除支原体污染后的人小细胞肺癌细胞株NCI-H446与NCI-H1688中的表达后,采用定量PCR、流式细胞术等方法检测支原体感染对宿主细胞目标基因表达、细胞周期等影响。【结果】虽然猪鼻支原体感染对si RNA沉默FIGNL1表达无显著影响,无支原体感染及清除支原体污染的H1688和H446细胞FIGNL1表达沉默后,与仅加转染试剂的空白组(mock)相比较,靶标FIGNL1基因的实验组(T1)和阴性对照组(nc)的S期细胞比例均未发生显著变化。但猪鼻支原体感染的H1688和H446细胞相对于空白组,实验组与阴性对照组的S期细胞比例,H1688细胞提高了约1.38倍和0.51倍,H446细胞提高了约1.27倍和0.55倍。【结论】推测由于支原体会对宿主细胞DNA造成损伤,而FIGNL1是DNA双链断裂损伤修复的重要基因,从而导致沉默猪鼻支原体感染的H1688和H446细胞FIGNL1表达时,细胞会出现S期阻滞。鉴于支原体感染对细胞有广泛、显著的影响,在基因功能、肿瘤等细胞生物学研究中,应予以高度重视。 展开更多
关键词 猪鼻支原体 S期阻滞 SIRNA FIGNL1
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抗氧化基因过表达提高运动发酵单胞菌糠醛耐受性 被引量:2
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作者 闻远 夏娟 +3 位作者 戚良华 刘小伟 刘晨光 白凤武 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期85-94,共10页
糠醛是木质纤维素水解液的主要抑制物,能诱发活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)产生。探索抗氧化基因对于糠醛耐受性的影响有助于改善菌株表型。过表达运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis自身的NADH氧化酶(ZMO1885)、NADP+还原酶... 糠醛是木质纤维素水解液的主要抑制物,能诱发活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)产生。探索抗氧化基因对于糠醛耐受性的影响有助于改善菌株表型。过表达运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis自身的NADH氧化酶(ZMO1885)、NADP+还原酶(ZMO1753)和谷胱甘肽还原酶(ZMO1211)基因,检测胞内ROS、NADH/NAD+以及其耐受性能。结果表明,在2g/L糠醛条件下,相比对照菌株,ZM4/ZMO1885的胞内ROS降低了52.1%,生物量提高了38.9%,且未引起胞内辅因子扰动。过表达ZMO1753和ZMO1211没有显著提高菌株耐受性。在模拟木质纤维素水解液中,ZM4/ZMO1885的生物量较对照菌株提高了46.9%,糖耗速率提高了110.3%,乙醇生产力提高了195.2%。综上,过表达抗氧化酶基因能够影响糠醛胁迫耐受性,其中过表达ZMO1885不仅不影响细胞正常生长,还能降低ROS水平,提高糠醛去除率,改善了细胞的糠醛耐受性。 展开更多
关键词 糠醛 活性氧自由基 NADH氧化酶 谷胱甘肽还原酶 NADP+还原酶 耐受性
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大肠杆菌甲基转移酶dcm基因的表达对变铅青链霉菌的多效性影响 被引量:2
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作者 高婕 韩铁生 +1 位作者 丰俊 贺新义 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1925-1931,共7页
【目的】大肠杆菌的dcm基因编码的DNA甲基转移酶可以特异性地将5′CCWGG3′(W=A/T)序列中第二个胞嘧啶变成5-甲基胞嘧啶。Dcm甲基转移酶发现已有37年了,但其确切的功能不明,本篇主要研究其对变铅青链霉菌的影响。【方法】通过构建克隆... 【目的】大肠杆菌的dcm基因编码的DNA甲基转移酶可以特异性地将5′CCWGG3′(W=A/T)序列中第二个胞嘧啶变成5-甲基胞嘧啶。Dcm甲基转移酶发现已有37年了,但其确切的功能不明,本篇主要研究其对变铅青链霉菌的影响。【方法】通过构建克隆、接合转移、异源表达及HPLC、酶切、Southern杂交等方法研究dcm基因的表达对变铅青链霉菌的多效性影响。【结果】首次发现变铅青链霉菌基因组中不含5-甲基胞嘧啶修饰,将dcm基因导入变铅青链霉菌后,接合子菌落比正常菌落小很多,并有放线紫红素产生。【结论】基因组的表观遗传修饰能激活沉默放线紫红素基因簇的表达这一现象,为基因组挖掘隐藏的活性天然产物提供了一条新途径。 展开更多
关键词 dcm甲基化 链霉菌 形态分化 放线紫红素
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人类mTOR信号通路Ragulator复合物的各亚基的原核表达与纯化
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作者 李卫松 吴更 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期2566-2571,共6页
Ragulator是mTOR信号通路中的一个关键蛋白复合物,分别由p18、p14、MP1、Lamtor4、Lamtor5五个蛋白通过相互作用复合而成。Ragulator在mTOR通路中起到结合Rag GTPases并锚定到溶酶体表面的作用,而后者招募并激活mTORC1。本研究通过生物... Ragulator是mTOR信号通路中的一个关键蛋白复合物,分别由p18、p14、MP1、Lamtor4、Lamtor5五个蛋白通过相互作用复合而成。Ragulator在mTOR通路中起到结合Rag GTPases并锚定到溶酶体表面的作用,而后者招募并激活mTORC1。本研究通过生物信息学和分子克隆相结合的手段,构建各组分蛋白全长的质粒以及截短p18(41~161)和Lamtor(83~173)片段,相应转化到大肠杆菌中进行蛋白的表达。使用Ni2+柱亲和层析,阴离子交换层析和快速蛋白液相色谱相结合的蛋白纯化手段得到纯度较高的稳定的Ragulator复合物,为后续的晶体制备和生物学结构奠定了基础。同时也为进一步深入了解该信号通路的机制以及相关药物的开发与研究作出了贡献。 展开更多
关键词 Ragulator 蛋白表达纯化 MTOR 分子克隆
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酵母生物多样性开发及工业应用 被引量:9
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作者 范婷婷 王慕瑶 +3 位作者 李俊 王风楼 章漳 赵心清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期806-815,共10页
酵母是一类包括酿酒酵母和非常规酵母在内的多种单细胞真菌的总称,其中酿酒酵母是应用较多的重要工业微生物,广泛应用于生物医药、食品、轻工和生物燃料生产等不同生物制造领域。近年来,研究者从不同生态环境中分离了大量的酵母菌株,鉴... 酵母是一类包括酿酒酵母和非常规酵母在内的多种单细胞真菌的总称,其中酿酒酵母是应用较多的重要工业微生物,广泛应用于生物医药、食品、轻工和生物燃料生产等不同生物制造领域。近年来,研究者从不同生态环境中分离了大量的酵母菌株,鉴定了多个新种,也发现了抗逆性不同以及具有多种活性产物合成能力的菌株,证明天然酵母资源具有丰富的生物多样性和功能多样性。利用基因组挖掘以及转录组、蛋白组等多组学分析研究,可进一步开发利用酵母遗传多样性,获得酶和调节蛋白的基因以及启动子等遗传元件改造酵母菌株。除了利用酵母的天然遗传多样性,还可通过诱变、驯化、代谢工程改造及合成生物学等技术产生具有多种非天然多样性的菌株。此外,对天然遗传元件也可以进行突变和定向进化,所产生的新遗传元件可用于有效提升菌株的性能。开发利用酵母的生物多样性,对构建高效酵母细胞工厂,生产生物酶、疫苗以及多种活性天然产物等产品具有重要意义。文中对酵母生物多样性的研究现状进行综述,并对未来高效开发利用酵母菌株资源和遗传资源的研究进行了展望。文中所总结的研究方法和思路也可为研究其他工业微生物的多样性及进行高效菌株的选育提供参考。 展开更多
关键词 酵母 新种鉴定 生物多样性 合成生物学 生物制造 细胞工厂
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工业微生物:创新与突破专刊序言(2021) 被引量:2
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作者 邓禹 赵心清 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期801-805,共5页
工业微生物及其产品广泛用于工业、农业、医药等诸多领域,相关产业在国民经济中具有举足轻重的地位。高效的菌株是提高生产效率的核心,而先进发酵技术和仪器平台对充分开发菌株代谢潜能也很重要。近年来,工业微生物领域的研究取得了快... 工业微生物及其产品广泛用于工业、农业、医药等诸多领域,相关产业在国民经济中具有举足轻重的地位。高效的菌株是提高生产效率的核心,而先进发酵技术和仪器平台对充分开发菌株代谢潜能也很重要。近年来,工业微生物领域的研究取得了快速进展,人工智能、高效基因组编辑技术和合成生物学技术逐渐广泛使用,相关产业应用也在不断扩展。为进一步促进工业微生物在生物制造等领域的应用,《生物工程学报》特组织出版专刊,从微生物菌株的多样性和生理代谢、菌株改造技术、发酵过程优化和放大,高通量微液滴培养装备开发以及工业微生物应用等方面,分别阐述目前的研究进展,并展望未来的发展趋势,为促进工业微生物及生物制造等产业的发展奠定基础。 展开更多
关键词 工业微生物 基因组编辑 代谢工程 合成生物学 发酵优化和放大 高通量培养装备
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超高浓度乙醇连续发酵体系振荡行为诱发因素研究
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作者 谭慧萍 王惠国 +5 位作者 王林会 赵增彤 程杨好 刘晨光 王亮 李倩 《工业微生物》 CAS 2022年第2期9-16,共8页
超高浓度(Very high gravity,VHG)发酵可以显著提高发酵终点乙醇浓度,节省精馏能耗,同时减少废糟液量。然而,酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)VHG乙醇连续发酵过程中生物量、乙醇、残糖浓度等发酵参数呈现长周期、大振幅的振荡行为,... 超高浓度(Very high gravity,VHG)发酵可以显著提高发酵终点乙醇浓度,节省精馏能耗,同时减少废糟液量。然而,酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)VHG乙醇连续发酵过程中生物量、乙醇、残糖浓度等发酵参数呈现长周期、大振幅的振荡行为,不仅严重影响系统的乙醇发酵性能,而且不利于下游精馏装置的稳定运行。本研究比较三株不同乙醇耐受性的酵母菌株的VHG乙醇连续发酵行为,发现乙醇耐受性强的S.cerevisiae BHL01和S.cerevisiae 4126体系呈现周期性振荡行为,而乙醇耐受性差的S.cerevisiae S288c体系则未观察到振荡行为。此外,通过对低糖稳态体系外源施加乙醇胁迫发现,细胞耐受范围内的外源乙醇胁迫可以诱发周期性的振荡行为。另一方面,本研究考察了培养基组成和供氧对周期性VHG振荡行为的影响,结果表明,切换合成培养基或停止供氧后,振荡行为逐渐衰减,表明周期性VHG振荡行为需要能量和营养维持。综合实验结果,本研究提出VHG振荡行为是比生长速率、比死亡速率、稀释速率和细胞乙醇耐受性整体调控的结果。 展开更多
关键词 酿酒酵母 超高浓度 振荡行为 乙醇耐受性
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