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低氧反应元件对低氧复氧状态下心肌细胞转染人血管内皮生长因子_(165)基因表达的调控作用 被引量：8
1
作者 张中明 姜波 +1 位作者 董红燕 张宜乾 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1510-1512,共3页
目的研究9拷贝低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞转染人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞进行培养,将在 HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。心肌细胞分为8组,... 目的研究9拷贝低氧反应元件(HRE)对低氧、复氧心肌细胞转染人血管内皮生长因子(hVEGF165)基因表达的调控作用。方法分离新生SD大鼠心肌细胞进行培养,将在 HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。心肌细胞分为8组,采用无血清培养基,分别在低氧(氧浓度5％)、正常氧(氧浓度21％)条件进行培养,取低氧／复氧不同时段的心肌细胞或培养液,采用细胞免疫荧光法、ELISA法分别测定心肌细胞及培养液中hVEGF165蛋白表达情况;逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定心肌细胞hVEGF165 mRNA的表达。结果病毒转染率约为87％;转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)培养液中hVEGF165蛋白含量显著升高(P<0．01),细胞免疫荧光hVEGF165蛋白染色呈阳性;RT-PCR结果亦显示,转基因低氧1组(A组)、2组(B组)及复氧1组(E组)可见484 bp目的条带。结论在低氧状态下,9 拷贝HRE作为氧敏感调控开关,可促使心肌细胞转染的hVEGF165基因高度表达,而在复氧(正常氧浓度)状态下,hVEGF165因的表达即行中止。 展开更多
关键词 低氧反应元件 血管内皮生长因子 心肌细胞 基因调控 基因表达
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低氧反应元件调控下h-VEGF_(165)基因表达及其蛋白产物的延迟消失 被引量：6
2
作者 张宜乾 张中明 +1 位作者 闫英群 董红燕 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期281-286,共6页
血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element．HRE)作为... 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)转基因可促进心肌缺血区血管生成,改善心脏功能,然而长期高水平表达又会引起诸多副作用。为调控VEGF表达,在启动子区加入低氧反应元件(hypoxic response element．HRE)作为调控开关,研究氧环境对VEGF基因mRNA及蛋白产物表达的影响。重组腺相关病毒(recombinant adeno-associ- ated virus,rAAV)作为载体(rAAV-HRE-h-VEGF_(165)),转染离体培养大鼠心肌细胞,在常氧/缺氧(氧浓度1%)/缺氧复氧条件下进行培养,用酶联免疫特异性测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测培养液h-VEGF_(165)蛋白浓度,细胞免疫荧光染色观测细胞内h-VEGF_(165)蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT- PCR)方法检测细胞h-VEGF_(165)mRNA表达。结果显示：未转染组、常氧培养组均无h-VEGF_(165)mRNA及其蛋白表达：缺氧培养组h-VEGF_(165)mRNA及蛋白均表达；缺氧复氧4h组的h-VEGF(165)mRNA消失,培养液中h-VEGF_(165)蛋白减少,细胞内h-VEGF_(165)蛋白存在：缺氧复氧8h及12h组的h-VEGF_(165)mRNA消失,培养液和细胞内h-VEGF_(165)蛋白均消失。研究表明,在HRE调控下,缺氧可促使h-VEGF_(165)基因表达,复氧后,h-VEGF_(165)mRNA表达停止,蛋白产物延迟消失。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 低氧反应元件 心肌细胞
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FoxO3a激活FasL介导肾缺血再灌注中肾小管上皮细胞凋亡的作用及机制 被引量：4
3
作者 徐剑 王艳 +3 位作者 姬怀雪 胡书群 董红艳 任玲 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期929-931,共3页
目的观察叉头框蛋白FoxO3a激活Fas配体FasL介导肾缺血再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用及机制。方法双侧夹闭大鼠肾蒂缺血45min后再灌注建立动物模型。免疫印迹分析FoxO3a、FasL的表达变化;原位缺口末端标记法检测大鼠肾小管上... 目的观察叉头框蛋白FoxO3a激活Fas配体FasL介导肾缺血再灌注损伤诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用及机制。方法双侧夹闭大鼠肾蒂缺血45min后再灌注建立动物模型。免疫印迹分析FoxO3a、FasL的表达变化;原位缺口末端标记法检测大鼠肾小管上皮细胞凋亡情况;透射电镜观察肾小管上皮细胞凋亡的超微结构变化;生化全自动分析仪检测大鼠肾功能。结果大鼠肾缺血再灌注1 h后,FoxO3a及FasL蛋白表达水平明显增加;再灌注48 h,肾小管上皮细胞凋亡损伤加剧,凋亡数目明显增加,血肌酐及尿素氮水平明显升高,与假手术组相比,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠肾缺血再灌注能诱导FoxO3a激活,进而上调FasL的表达,促进肾小管上皮细胞凋亡,加剧肾组织损伤。 展开更多
关键词 叉头框蛋白 FAS 配体 缺血再灌注 肾小管上皮细胞 凋亡
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血管内皮生长因子基因转移促进异种生物瓣膜宿主内皮化的实验研究 被引量：3
4
作者 张中明 王伟 +3 位作者 胡波 刘金东 麻醉科 董红燕 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第17期1074-1077,共4页
目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)基因心肌细胞转移促进异种生物瓣膜宿主内皮化的可行性。方法　将戊二醛及L 谷氨酸处理过的牛心包置入猪的右心房 ,采用pcD2 /hVEGF12 1基因缝线向右室心肌细胞转移VEGF基因 (1mg/只 )。测定外周及右... 目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)基因心肌细胞转移促进异种生物瓣膜宿主内皮化的可行性。方法　将戊二醛及L 谷氨酸处理过的牛心包置入猪的右心房 ,采用pcD2 /hVEGF12 1基因缝线向右室心肌细胞转移VEGF基因 (1mg/只 )。测定外周及右房血中VEGF蛋白含量 ,应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定心肌中VEGF基因的表达 ,并取置入的牛心包进行组织学及超微形态学分析。结果　转pcD2 /hVEGF12 1基因 10d后 ,基因组右房血中VEGF蛋白含量明显高于空载质粒组 (P<0 .0 1) ,术后 16d ,基因组心肌VEGFmRNA表达产物明显高于空载质粒组及左室对照组。此间 ,VEGF基因组牛心包宿主内皮覆盖率亦显著高于质粒组 (P <0 .0 5 ) ,术后 30d ,VEGF基因组牛心包已完全内皮化。结论　采用基因缝线心肌细胞转移VEGF基因 ,可防止生物瓣膜钙化 。 展开更多
关键词 异种生物瓣膜 血管生成因子 基因转移 血管内皮生长因子 实验研究
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幼兔缺血预处理在心肌保护第二窗期对未成熟心肌Bcl-2基因mRNA表达的影响 被引量：2
5
作者 张宜乾 张中明 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第6期477-480,共4页
目的　观察幼兔心脏缺血预处理 2 4h对未成熟心肌缺血 /再灌注后Bcl -2mRNA表达的影响 ,探讨未成熟心肌保护第二窗形成的作用机理。方法　 18只 3～ 4周龄幼兔 ,随机分为 3组 ,每组 6只 :Ⅰ组 ,正常对照组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注损伤组 ;... 目的　观察幼兔心脏缺血预处理 2 4h对未成熟心肌缺血 /再灌注后Bcl -2mRNA表达的影响 ,探讨未成熟心肌保护第二窗形成的作用机理。方法　 18只 3～ 4周龄幼兔 ,随机分为 3组 ,每组 6只 :Ⅰ组 ,正常对照组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注损伤组 ;Ⅲ组 ,缺血预处理组。建立活体心脏缺血 /再灌注损伤模型 ,Maclab/8s系统监测左心室发展压 (LVDP)、左室压上升及下降最大速率 (+dp/dtmax,-dp/dtmax)变化 ,原位免疫杂交 (ISH)方法检测心肌细胞内Bcl-2mRNA的表达。结果　缺血再灌注前 ,各组间LVDP、±dp/dtmax无显著性差异 (P >0 .0 5) ;再灌注 1h后 ,Ⅱ组的LVDP、+dp/dtmax和 -dp/dtmax恢复率分别为 (42 .81± 12 .56) %、(3 0 .67± 16.2 2 ) %和 (2 9.49± 10 .13 ) % ;Ⅲ组LVDP、+dp/dtmax及 -dp/dtmax恢复率分别为 (84.15± 13 .56) %、(69.49± 10 .3 6) %和 (58.3 7± 12 .45) % ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 1)。Ⅱ组、Ⅲ组Bcl -2mRNA表达阳性细胞面积百分数分别为 (8.3± 2 .5) %、(76.3±13 .5) % ,两组间有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　缺血预处理可上调Bcl -2mRNA表达 ,参与未成熟心肌保护第二窗的形成 ,促进未成熟心肌缺血 展开更多
关键词 幼兔 缺血预处理 心肌保护 第二窗期 未成熟心肌 BCL-2基因 mRNA 表达
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浅低温缺血预处理对未成熟心肌超微结构保护作用的影响(英文) 被引量：1
6
作者 董红艳 张中明 +1 位作者 朱珊珊 于红丽 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第19期15-20,共6页
目的:研究IP复合32℃浅低温晶体停搏液保护状态对未成熟心肌缺血再灌注损伤细胞超微结构的影响。方法:应用Langendorff离体心脏模型,IP采用2次5min缺血、5min再灌注,实验分为IP+32℃浅低温组和单纯32℃浅低温组。心脏灌注St.ThomasⅡ停... 目的:研究IP复合32℃浅低温晶体停搏液保护状态对未成熟心肌缺血再灌注损伤细胞超微结构的影响。方法:应用Langendorff离体心脏模型,IP采用2次5min缺血、5min再灌注,实验分为IP+32℃浅低温组和单纯32℃浅低温组。心脏灌注St.ThomasⅡ停搏液,缺血30min,37℃再灌注30min。采用血流动力学、生物化学及立体定量方法分析IP的心肌保护效果及对心肌细胞超微结构的影响。结果:再灌注后30min,IP组的LVDP、+dp/dtmax、-dt/dtmax恢复率明显高于单纯32℃浅低温组(P<0.05)。再灌注末,IP组心肌ATP含量显著高于单纯32℃浅低温组(P<0.05)。IP组心肌MDA含量显著低于单纯32℃浅低温组(P<0.05)。IP组基本完好心肌细胞体积密度高于单纯32℃浅低温组(P<0.001),而严重损伤心肌细胞的体密度小于单纯32℃浅低温组(P<0.05),IP组心肌细胞间质体积密度小于单纯32℃浅低温组(P<0.05)。IP组心肌组织内皮细胞有显著变性的毛细血管断面计数显著高于单纯32℃浅低温组(P<0.05)。结论:IP复合32℃浅低温晶体停搏液对未成熟心肌缺血再灌注损伤细胞超微结构有较好的保护作用。 展开更多
关键词 缺血预处理 未成熟心肌 心肌保护 超微结构
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环孢素A对小鼠滋养细胞FasL基因表达及胚胎发育的影响 被引量：1
7
作者 吴若愚 刘嘉慧 +4 位作者 鲁寒寒 张金香 侯越 李真 袁红花 《徐州医学院学报》 CAS 2015年第4期216-220,共5页
目的探讨滋养细胞Fas／FasL基因表达异常、外周T细胞亚群变化对胚胎发育的影响以及环孢素A（CsA）在其中的作用。方法雌性CBA／J小鼠、雄性DBA／2小鼠建立妊娠模型。分别在孕第5天开始经阴道灌注给予不同剂量的CsA乙醇溶液（1mg／kg组、... 目的探讨滋养细胞Fas／FasL基因表达异常、外周T细胞亚群变化对胚胎发育的影响以及环孢素A（CsA）在其中的作用。方法雌性CBA／J小鼠、雄性DBA／2小鼠建立妊娠模型。分别在孕第5天开始经阴道灌注给予不同剂量的CsA乙醇溶液（1mg／kg组、5mg／kg组、25mg／kg组），每日1次直至分娩；RT—PCR法检测小鼠绒毛组织滋养细胞FasL和caspase-3基因表达。部分成模小鼠分别于CsA给药7、14天，流式细胞术检测其肝组织匀浆内CD4^＋CD25^＋T细胞相对含量。结果3组CsA干预孕鼠胚胎吸收率分别为16．99％、13．42％及16．67％，与对照组（18．42％）比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；FasL和caspase-3基因表达被抑制，与对照组比较差异有差异有统计学意义（P〈0．05）。CsA干预组CD4^＋CD25^＋T细胞水平明显增加，与自然流产组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论CsA可抑制FasL以及caspase-3基因的表达，使小鼠CD4^＋CD25^＋T细胞增多。在一定范围内，CsA剂量越高，抑制作用越强，从而维持正常妊娠，减少流产率。 展开更多
关键词 FAS FASL caspase-3 环孢素A 胚胎发育 流产
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人外周血间充质干细胞向肝样细胞诱导分化的实验研究 被引量：1
8
作者 王骥 周海军 +1 位作者 董红燕 李向农 《徐州医学院学报》 CAS 2012年第8期491-496,共6页
目的探讨人外周血来源问充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）的体外分离、培养及诱导分化成有功能肝样细胞的可行性。方法静脉采集13例成人外周血，分别应用单纯密度梯度离心法及人间充质干细胞富集试剂＋密度梯度离心两步法分离M... 目的探讨人外周血来源问充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）的体外分离、培养及诱导分化成有功能肝样细胞的可行性。方法静脉采集13例成人外周血，分别应用单纯密度梯度离心法及人间充质干细胞富集试剂＋密度梯度离心两步法分离MSCs；将得到的MSCs经贴壁纯化扩增，以流式细胞仪检测细胞表面抗原后，经肝细胞生长因子（HGF）、成纤维细胞生长因子-4（FGF-4）及抑瘤素M（OSM）诱导分化成肝样细胞；以RT—PCR、免疫荧光染色及Westernblot检测所得细胞中自蛋白（ALB）、甲胎蛋白（AFP）在基因及蛋白水平上的表达情况；电镜检测所得细胞的超微结构。结果外周血应用单纯密度梯度离心法无法培养得到MSCs。人间充质干细胞富集试剂＋密度梯度离心两步法可分离并培养获得梭形细胞，经细胞表面抗原检测证实为MSCs；所得细胞经过纯化扩增和诱导分化后，RT—PCR、免疫荧光及Westernblot均证实细胞在基因及蛋白水平上存在ALB和AFP的表达；电镜证实其具有类肝细胞的超微结构。结论人外周血中存在MSCs并可使用非侵袭性的人问充质干细胞富集试剂＋密度梯度离心两步法方法提取分离，所得MSCs具诱导分化成有功能肝样细胞的能力，此方法能够为以后的肝组织工程研究提供种子细胞来源。 展开更多
关键词 外周血干细胞 间充质干细胞 肝样细胞 诱导分化
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一氧化氮对未成熟心肌缺血/再灌注损伤后血流动力学和超微结构的影响
9
作者 张宜乾 张中明 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第6期474-477,共4页
目的　了解一氧化氮 (NO)对未成熟心肌缺血 /再灌注损伤的保护作用。方法　 2 4只 3～ 4周龄幼兔 ,随机分为 4组 ,每组 6只 :Ⅰ组 ,正常对照组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注损伤组 ;Ⅲ组 ,L -精氨酸 (3 0 0mg/kg)组 ;Ⅳ组 ,L -硝基精氨酸甲酯 (L... 目的　了解一氧化氮 (NO)对未成熟心肌缺血 /再灌注损伤的保护作用。方法　 2 4只 3～ 4周龄幼兔 ,随机分为 4组 ,每组 6只 :Ⅰ组 ,正常对照组 ;Ⅱ组 ,缺血 /再灌注损伤组 ;Ⅲ组 ,L -精氨酸 (3 0 0mg/kg)组 ;Ⅳ组 ,L -硝基精氨酸甲酯 (L -NAME ,10mg/kg)组。建立活体心脏缺血 /再灌注损伤模型 ,监测左心室血流动力学变化及观察心肌超微结构变化。结果　给药后缺血前 ,与Ⅰ组相比 ,Ⅲ组LVDP及±dp/dtmax下降 ,Ⅳ组LVDP及±dp/dtmax则升高 (P <0 .0 5) ;再灌注 60min ,Ⅱ组和Ⅳ组的LVDP及±dp/dtmax低于Ⅲ组 (P <0 .0 1)。电镜观察显示 ,Ⅱ组和Ⅳ组心肌细胞水肿、线粒体损伤明显 ,而Ⅲ组的细胞及线粒体损伤较轻。结论　一氧化氮能减轻未成熟心肌的缺血 /再灌注损伤 。 展开更多
关键词 一氧化氮 心肌缺血 再灌注损伤 血流动力学 超微结构
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煤岩样品TEM超薄切片制备方法研究 被引量：2
10
作者 于冰 周蕊 +2 位作者 卢兆林 于红丽 路瑶 《电子显微学报》 CAS CSCD 2014年第2期180-187,共8页
本文作者以泥炭、褐煤、烟煤及无烟煤为例,探讨了超薄切片制备方法对不同煤阶样品的适用性。在采用包埋切片法制备煤岩样品TEM超薄切片时,首先通过浸解离析方法和HCl、HF逐级化学浸蚀方法使煤中自然共生组合的有机显微组分离析及脱除无... 本文作者以泥炭、褐煤、烟煤及无烟煤为例,探讨了超薄切片制备方法对不同煤阶样品的适用性。在采用包埋切片法制备煤岩样品TEM超薄切片时,首先通过浸解离析方法和HCl、HF逐级化学浸蚀方法使煤中自然共生组合的有机显微组分离析及脱除无机矿物质;利用光学显微镜(透射/反射模式)镜检离析显微组分后,使用SPI812树脂对挑出的单一显微组分块体渗透及包埋聚合。显微组分块体形态学及嵌布矿物成分分析使用扫描电子显微镜的低真空二次电子像模式和EDS面分布分析模式;利用透射电子显微镜检查超薄切片效果。实验表明采用上述方法制备煤岩TEM超薄切片样品的成功率较高,并且能够比较真实的再现显微组分的微观结构。 展开更多
关键词 煤岩 超薄切片 浸解离析 显微组分 煤阶
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氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF_(165)基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定
11
作者 张宜乾 张中明 +1 位作者 闫英群 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2007年第2期71-74,共4页
目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)... 目的包装及鉴定低氧反应元件(HRE)启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV-HRE9-VEGF165、pAAV-Rep/cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞,制备2型重组腺病毒相关病毒(rAAV2)。分离培养S-D大鼠心肌细胞,转染rAAV,细胞固定后做免疫细胞荧光染色,检测细胞内血管内皮细胞生长因子(VEGF165)蛋白的表达。结果pAAV-HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定,结果与NCBI GenBank公布的人VEGF165cDNA核苷酸序列(AB021221)完全一致,含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功,可感染原代培养的大鼠心肌细胞,缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV-HRE9-hVEGF165载体,可有效转染心肌细胞,VEGF165基因的适时表达,为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒 血管内皮细胞生长因子 低氧反应元件
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针对HO-2基因的四种RNA干扰序列构建和效应观察
12
作者 王珍珍 张腾业 +5 位作者 陈仁金 袁红花 胡安康 吴连连 朱裕华 朱孝荣 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期161-164,共4页
目的:构建和筛选出血红素氧合酶-2(HO-2)基因的RNA干扰载体,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。方法:根据小鼠HO-2基因的c DNA序列设计了4个HO-2基因干扰序列,克隆到干扰载体p GPU6-GFP-Neo上,利用电穿孔法将干扰载体对小鼠脑... 目的:构建和筛选出血红素氧合酶-2(HO-2)基因的RNA干扰载体,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。方法:根据小鼠HO-2基因的c DNA序列设计了4个HO-2基因干扰序列,克隆到干扰载体p GPU6-GFP-Neo上,利用电穿孔法将干扰载体对小鼠脑血管内皮细胞进行转染。Real-time PCR和Western Blot检测小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达。结果:干扰载体显著抑制小鼠脑血管内皮细胞中HO-2的表达,其中干扰载体p GPU6-GFP-Neo-HO-2-mus-768对HO-2 mRNA的表达抑制达显著水平(P<0.01),蛋白的表达抑制达显著水平(P<0.05)。结论:成功构建并筛选了HO-2表达干扰载体,为下一步的HO-2基因的功能鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 HO-2基因 RNA干扰载体 基因表达 大鼠
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小鼠心脏成纤维细胞直接转分化为心脏祖细胞的实验研究
13
作者 王韵茹 李勇 +3 位作者 厉传艺 惠洪亮 董红燕 张中明 《徐州医学院学报》 CAS 2015年第7期421-426,共6页
目的采用非特异性转录因子介导的谱系重编程系统，将小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）直接转分化为心脏祖细胞（cardiac progenitor cells，CPCs）。方法取昆明小鼠乳鼠心肌组织，差速贴壁法分离CFs。免疫荧光染色、流... 目的采用非特异性转录因子介导的谱系重编程系统，将小鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts，CFs）直接转分化为心脏祖细胞（cardiac progenitor cells，CPCs）。方法取昆明小鼠乳鼠心肌组织，差速贴壁法分离CFs。免疫荧光染色、流式细胞术分别检测CFs性状及纯度，以携带含小鼠tet-on系统的4种重编程因子Oct4、Sox2、Klf4、c-myc（OSKC）慢病毒等比例感染第3代（P3）CFs。A组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中不加入白血病抑制因子（LIF），加入JAKinhabit1（J11），以抑制向iPSCs方向的转分化。B组：对照组感染空载体病毒。C组：感染含小鼠tet-on系统的OSKC慢病毒，重编程培养基中加入LIF，不加入JI1，不抑制向iPSCs方向的转分化。在特定时间点为感染的细胞更换不同培养条件，观察细胞形态及生物特性的变化：①实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）法检测重编程各个时间点CPCs特异性转录因子Mespl、Nkx2．5、Isll、GATA4及胚胎干细胞多能性因子Oct4、Sox2、c-myc、Klf4、Naong的表达；②CPCs特异性标记Nkx2．5、Is11免疫荧光染色鉴定；（3）CPCs自分化为搏动心肌细胞的检测；④心肌细胞特异性标记cTnI免疫荧光染色鉴定CPCs向心肌细胞方向的分化潜能。结果①形态学观察，病毒感染11—14天，可见部分CFs形态发生改变，形成CPCs样克隆；（2）CPCs克隆Nkx2．5、Isll免疫荧光染色阳性；③CPCs可自分化为搏动的细胞团，其中的细胞cTnI免疫荧光染色阳性；（4）Real—timeRCR检测结果显示，重编程第4天，CPCs早期特异性转录因子Mespl即开始表达，而iPSCs多能性因子Naong在重编程第9天才开始表达。结论心脏成纤维细胞可以直接转分化为CPCs。 展开更多
关键词 心脏成纤维细胞 谱系重编程 心脏祖细胞
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牛皮蝇素A通过诱导CD4^+CD25^+Treg细胞生成诱导免疫耐受
14
作者 陈全刚 陈仁金 +1 位作者 刘鹏 袁红花 《健康之路》 2016年第2期1-2,共2页
器官移植作为治疗器官衰竭终末患者的一种有效方法,在临床中得到广泛应用。但由于免疫排斥反应的存在,移植物的存活率一直得不到保障。此外,免疫抑制药物仍然存在效果不佳,毒副作用较大等缺点。寄生虫通过抑制宿主免疫排斥反应,达到在... 器官移植作为治疗器官衰竭终末患者的一种有效方法,在临床中得到广泛应用。但由于免疫排斥反应的存在,移植物的存活率一直得不到保障。此外,免疫抑制药物仍然存在效果不佳,毒副作用较大等缺点。寄生虫通过抑制宿主免疫排斥反应,达到在宿主体内长期生存的机制,为免疫抑制药物的研发提供新的思路。牛皮蝇素a(ha),是由牛皮蝇幼虫分泌的一种丝氨酸蛋白酶,是其诱导免疫抑制的主要蛋白。深入揭示其免疫抑制机理,将为其应用与器官移植后的免疫耐受诱导提供新的方法与思路。本研究中我们发现ha的免疫抑制机理与其促进Cd4^+Cd25^+Treg细胞的生成相关,揭示了ha新的免疫抑制机理。 展开更多
关键词 TREG细胞 器官移植 免疫抑制 皮蝇素A
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血红素氧合酶-2基因真核表达载体的构建
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作者 张腾业 王珍珍 +6 位作者 陈仁金 袁红花 胡安康 吴连连 朱裕华 冀德君 朱孝荣 《家畜生态学报》 北大核心 2014年第6期27-30,共4页
为构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构... 为构建血红素氧合酶-2(HO-2)真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,并观察其在小鼠脑血管内皮细胞中的表达情况。试验利用PCR技术从C57BL/6小鼠海马组织中扩增出HO-2基因cDNA序列,用双酶切法将此序列克隆到真核表达载体pEF1α-IRES-AcGFP上,构建HO-2的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP,重组载体经EcoRI和BamHI双酶切和测序鉴定。电穿孔法转染小鼠脑血管内皮细胞,48h后,实时定量PCR、Western blot检测HO-2在小鼠脑血管内皮细胞中mRNA和蛋白质水平的表达情况。结果表明,pEF1α-HO-2-AcGFP载体构建正确;重组载体转染小鼠脑血管内皮细胞后HO-2在mRNA水平表达量较空载体转染极显著增高(P<0.01),在蛋白水平表达量较空载体转染显著增高(P<0.05)。表明HO-2基因的真核表达载体pEF1α-HO-2-AcGFP构建成功,为进一步研究其机制和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 HO-2基因 真核表达载体 载体构建 基因表达
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针刺太冲、合谷两穴位引起的小脑响应的差异:fMRI研究 被引量：44
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作者 刘华 单保慈 +5 位作者 高殿帅 许建阳 王葳 李永忠 李坤成 支联合 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2006年第8期1165-1167,共3页
目的应用fMRI研究针刺太冲、合谷两穴位所致小脑响应的差异。方法37例健康志愿者随机分为4组,9例接受在太冲针刺,8例接受右侧太冲附近的假穴针刺,10例接受在合谷的针刺,10例接受右侧合谷附近的假穴针刺。在针刺时进行全脑功能成像扫描,... 目的应用fMRI研究针刺太冲、合谷两穴位所致小脑响应的差异。方法37例健康志愿者随机分为4组,9例接受在太冲针刺,8例接受右侧太冲附近的假穴针刺,10例接受在合谷的针刺,10例接受右侧合谷附近的假穴针刺。在针刺时进行全脑功能成像扫描,用SPM2处理图像。结果发现针刺两穴位激活了小脑的不同区域:针刺太冲的激活了对侧小脑前叶,同侧小脑后叶下半月小叶;针刺合谷激活了对侧小脑后叶下半月小叶及同侧小脑后叶上半月小叶。两穴位针刺均未引起小脑的负激活。结论不同穴位引起的小脑激活区域不同,提示小脑在针灸不同穴位作用机制中具有特异性;小脑后叶可能是不同穴位作用的共同神经通路。 展开更多
关键词 针灸 太冲 合谷 功能磁共振成像 小脑
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针刺合谷穴脑功能磁共振成像研究 被引量：40
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作者 李可 单保慈 +4 位作者 刘华 王崴 许建阳 鲁娜 李坤成 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2005年第9期1329-1331,共3页
目的观察针刺合谷穴引发脑内相关区域的变化情况。方法对6名健康右利手年轻被试进行右手合谷穴针刺,同时进行全脑fMRI,对脑内活动区域进行定位。结果针刺合谷时引起双侧感觉/运动区,额中回,颞上回前部,丘脑,额上内侧回,双侧小脑,双侧枕... 目的观察针刺合谷穴引发脑内相关区域的变化情况。方法对6名健康右利手年轻被试进行右手合谷穴针刺,同时进行全脑fMRI,对脑内活动区域进行定位。结果针刺合谷时引起双侧感觉/运动区,额中回,颞上回前部,丘脑,额上内侧回,双侧小脑,双侧枕颞交界区,对侧岛叶,扣带回前部,中央后回上部以及同侧顶盖区激活,而降低的区域则分别表现在双侧颞极部,内颞叶区,额下内侧回,额叶眶部,双侧颞中回,双侧扣带回后部,枕叶,双侧中央前回中部,同侧中央前回上部。结论针刺合谷能够引发脑内相关区域的激活和降低,说明fMRI能够为针灸机制的探讨提供帮助。 展开更多
关键词 针刺 合谷 磁共振成像 功能性
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大鼠抗GBM肾炎模型的建立及不同病期的生化指标和肾组织病理学观察 被引量：13
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作者 汤仁仙 简洁 +1 位作者 王迎伟 董红燕 《徐州医学院学报》 CAS 2003年第1期9-13,共5页
目的　为研究人类新月体性肾炎的发病机制 ,建立大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的动物模型。方法提取S -D大鼠GBM抗原 ,将此抗原免疫新西兰白兔获得抗血清 ,再将此抗血清从尾静脉一次性注射给S -D大鼠。实验分 2组 :肾炎模型组及正常对照... 目的　为研究人类新月体性肾炎的发病机制 ,建立大鼠抗肾小球基底膜 (GBM)肾炎的动物模型。方法提取S -D大鼠GBM抗原 ,将此抗原免疫新西兰白兔获得抗血清 ,再将此抗血清从尾静脉一次性注射给S -D大鼠。实验分 2组 :肾炎模型组及正常对照组 ,定期于第 4天、第 14天和第 2 1天检测大鼠 2 4h尿蛋白、血肌酐及血尿素的含量和肾组织病理学改变。结果　大鼠肾炎模型组 :大鼠注射抗血清后于第 4天出现大量蛋白尿 ;第 14天血肌酐、血尿素显著升高 ,并持续上升 ;肾组织病理表现为肾小球内细胞数明显增加 ,大量新月体形成及蛋白管型 ,GBM呈不规则增厚 ,足突融合 ,内皮细胞脱落、坏死 ;免疫荧光检查见兔IgG、鼠IgG沿GBM线形分布。大鼠正常对照组以上指标均无明显改变。结论　通过动态观察大鼠抗GBM肾炎的病变变化 ,证实该模型病变与人类新月体性肾炎的病变较为一致 。 展开更多
关键词 肾小球基底膜抗原 肾小球基底膜抗血清 抗肾小球基底膜肾炎模型 大鼠
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大鼠胰腺缺血再灌注损伤微循环改变的实验 被引量：6
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作者 花嵘 李玺 +3 位作者 龙建军 董红燕 李德本 刘军权 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第18期152-154,共3页
目的:探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法:实验于2002-12/2004-01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室、解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注1h组,... 目的:探讨胰腺缺血再灌注后微循环的改变与胰腺损伤的关系。方法:实验于2002-12/2004-01在徐州医学院神经生物学研究中心实验室、解放军第九十七医院实验科、徐州市心血管研究所实验室完成。24只大鼠随机分为假手术组,缺血再灌注1h组,缺血再灌注6h组,每组8只。测定血淀粉酶,脂肪酶了解胰腺外分泌功能;光镜、电镜观察胰腺组织结构改变;微循环显微镜检测胰腺微循环的血管直径、血流速度、血流状态;测定胰腺组织干/湿比,了解组织含水量的变化。结果:24只大鼠全部进入结果分析。①胰腺缺血再灌注后血清淀粉酶、脂肪酶含量:缺血再灌注1h组淀粉酶和脂肪酶含量高于假手术组[(26.67±9.99)μkat/L,(5.24±1.82)μkat/L,(14.53±3.98)μkat/L,(2.83±1.64)μkat/L,(t=2.60,3.49,P<0.05)],缺血再灌注6h时明显高于假手术组[(41.59±10.95)μkat/L,(10.66±2.61)μkat/L,(t=7.35,7.54,P<0.01)]。淀粉酶、脂肪酶随着再灌注时间延长而增加。②胰腺缺血再灌注后形态学改变:缺血再灌注1h组光镜下呈现急性水肿性胰腺炎表现,缺血再灌注6h组损伤加重,出现出血、坏死。③胰腺缺血再灌注后微循环的改变:缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微动脉口径小于假手术组[(18±6)μm,(20±9)μm,(22±8)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)]。缺血再灌注1h组和缺血再灌注6h组的微静脉口径均较假手术组扩张[(30±8)μm,(35±15)μm,(25±10)μm,(t=2.42～3.85,P<0.05)],缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组微静脉口径明显扩张(t=3.69,P<0.05)。缺血再灌注1h组与缺血再灌注6h组的血流速度均较假手术组减缓[(0.44±0.12)mm/s,(0.21±0.04)mm/s,(0.56±0.03)mm/s,(t=2.42～4.19,P<0.05～0.01)],并且缺血再灌注6h组较缺血再灌注1h组血流速度显著减缓(t=5.19,P<0.01)。④胰腺再灌注后胰腺组织干湿比的改变:缺血再灌注1h组胰腺干湿比明显少于假手术组[(26.5±2.3)%,(30.1±2.1)%,(t=3.23,P<0.05)],缺血再� 展开更多
关键词 胰腺 缺血 再灌注 微循环 大鼠
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银杏内酯B对发育期癫痫大鼠海马中低氧诱导因子-1α及PI3K/Akt信号通路的影响 被引量：8
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作者 孙康钦 袁宝强 +3 位作者 刘娜 李腾腾 白连琴 董红燕 《中华行为医学与脑科学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期208-211,共4页
目的 了解银杏内酯B（GKB）对癫痫大鼠海马中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）与磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）的影响,并探讨在这个过程中两者之间可能存在的关系.方法 21日龄SD大鼠96只随机分为5组：生理盐水组（NS... 目的 了解银杏内酯B（GKB）对癫痫大鼠海马中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）与磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）的影响,并探讨在这个过程中两者之间可能存在的关系.方法 21日龄SD大鼠96只随机分为5组：生理盐水组（NS组）、戊四氮（PTZ）致癫痫持续状态（SE）模型组（P组）、GKB治疗组（G＋P组）、GKB治疗＋PI3K抑制剂wortmannin干预组（G＋P＋W组）、wortmannin干预组（P＋W组）.于G＋P组建模后1h、4h、8h、24 h,其他组建模后4h、8h处死大鼠取出脑组织,应用免疫组化方法及Western blot检测HIF-1α、p-Akt蛋白的表达.结果 （1）G＋P组1h、4h、8h、24 h各时间点比较p-Akt蛋白表达差异有统计学意义（P＜0.01）,4h表达达高峰（0.85±0.03）;同时各时间点的HIF-1α蛋白表达差异有统计学意义（P＜0.01）,8h表达达高峰（1.00±0.13）.（2）8 h时间点各组间HIF-1α比较：NS组有少量表达,P组、G＋P组表达量较NS组均明显升高（P＜0.01）,且G＋P组表达量高于P组（P＜0.01）,G＋P＋W组、P＋W组表达量明显降低,但G＋P＋W组高于P＋W组（P＜0.01）.（3）4h时间点各组间p-Akt比较：NS组有少量表达,P组、G＋P组表达量较NS组均明显升高,且G＋P组表达量高于P组（P＜0.01）,G＋P＋W组、P＋W组表达量均明显降低.结论 在银杏内酯B作用下,癫痫持续状态大鼠海马内PI3K/Akt信号通路受到激活,并参与了海马内HIF-1α表达的调控. 展开更多
关键词 癫痫持续状态 PI3K/AKT信号通路 HIF-1Α 银杏内酯B
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