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EBV病毒全基因组cDNA探针的设计与制备(英文) 被引量:2
1
作者 方唯意 郑文岭 +6 位作者 马文丽 刘腾飞 王爽 谢卫兵 李虹 任彩萍 姚开泰 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期246-250,共5页
目的设计和克隆所有EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针用于构建EBV微阵列,以促进研究EBV在其相关疾病中的发病学作用.方法cDNA探针首先由Oligo6.0,Blast和Primer Primier软件设计和筛选全 EBV基因组探针,它们的长度被定在300... 目的设计和克隆所有EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针用于构建EBV微阵列,以促进研究EBV在其相关疾病中的发病学作用.方法cDNA探针首先由Oligo6.0,Blast和Primer Primier软件设计和筛选全 EBV基因组探针,它们的长度被定在300~600 mer并且具有高度特异性.从B95-8细胞和NPC组织的基因组DNA和 RNA中,通过PCR和RT-PCR方法扩增这些探针,之后克隆入T/A克隆载体.所有的探针被测序鉴定.结果除LF1和LF3基因在B95-8细胞的EBV基因组中不存在外,其余85个基因片段(BWRFl基因有7个重复阅读框架)和两个EBERs基因被成功克隆.结论EBV cDNA探针的设计和克隆为制备EBV微阵列和进一步研究EBV基因组在其相关疾病中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 EBV基因 CDNA探针 EBV基因芯片 基因克隆
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细胞凋亡的MTT染色法检测 被引量:23
2
作者 冯春琼 马文丽 +3 位作者 宋艳斌 郭秋野 吴清华 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期262-263,266,共3页
目的研究MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性。方法以As2O3诱导K562细胞建立凋亡细胞模型,并比较以下3种方法检测凋亡的结果。MTT染色法检测、直接在光镜下进行形态学观察以及DNA凝胶电泳。结果MTT染色法可准确判定细胞凋亡,并可清晰分... 目的研究MTT染色法用于检测细胞凋亡的可行性。方法以As2O3诱导K562细胞建立凋亡细胞模型,并比较以下3种方法检测凋亡的结果。MTT染色法检测、直接在光镜下进行形态学观察以及DNA凝胶电泳。结果MTT染色法可准确判定细胞凋亡,并可清晰分辨正常细胞、凋亡细胞和死亡细胞。结论MTT染色法是一种简单、可行的检测细胞凋亡的方法。 展开更多
关键词 细胞凋亡 MTT染色 三氧化二胂 K562细胞
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酪氨酸酶抑制剂的研究进展 被引量:27
3
作者 丁大鹏 马文丽 郑文岭 《实用医学杂志》 CAS 2005年第12期1364-1366,共3页
关键词 酪氨酸酶抑制剂 色素沉着性皮肤病 合成反应 皮肤黑色素 生物合成 哺乳动物 选择应用 祛斑增白 作用机制 研究前景 关键性 限速酶 黄褐斑 化妆品 分类学
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一种限制性cDNA文库的构建 被引量:14
4
作者 祝骥 马文丽 +2 位作者 李凌 姚汝华 郑文岭 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期174-176,共3页
利用本室创建的限制性显示技术RD -PCR ,建立的cDNA文库 ,我们称之为限制性cDNA文库。该方法构建的文库因经过了限制性分组扩增 ,每组均含有特定的cDNA 。
关键词 限制性cDNA文库 K562细胞 RD-PCR 构建
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应用RD-PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针 被引量:8
5
作者 毛向明 马文丽 +1 位作者 姜立 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第6期548-550,553,共4页
目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合... 目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合于基因芯片探针的收集。 展开更多
关键词 RD-PCR方法 K562细胞 表达谱 基因芯片 分子探针 幼红细胞白血病
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基因表达谱芯片杂交影响因素的初步研究 被引量:5
6
作者 祝骥 马文丽 +2 位作者 李凌 毛向明 郑文岭 《生命科学研究》 CAS CSCD 2004年第2期133-139,共7页
通过对K562细胞基因表达谱芯片杂交影响因素的研究表明,用限制性显示技术[1]制备的cDNA探针长度较均一,适合基因芯片杂交;在42℃条件下含甲酰胺的杂交液中杂交16~20h,可保证样品的有效杂交,并表现出很好的杂交特异性;用RD-PCR或线性PC... 通过对K562细胞基因表达谱芯片杂交影响因素的研究表明,用限制性显示技术[1]制备的cDNA探针长度较均一,适合基因芯片杂交;在42℃条件下含甲酰胺的杂交液中杂交16~20h,可保证样品的有效杂交,并表现出很好的杂交特异性;用RD-PCR或线性PCR对少量样品进行扩增,并用荧光(Cy3或Cy5)标记的通用引物对样品进行标记,可提高芯片检测的灵敏度;一次杂交反应总RNA的用量仅需0.5~10μg,在每cm2约含1000~1500个点的阵列中杂交时,标记样品用量1~2μg为宜;用PCR产物纯化柱对荧光标记产物进行纯化,可大大减小背景荧光,提高信噪比;同一批芯片经同一样品杂交结果的重复性很好,相关系数高达97.8%. 展开更多
关键词 K562细胞 基因芯片 基因表达谱 杂交 限制性显示
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生物芯片在功能基因组学研究中的应用进展 被引量:8
7
作者 刘翠华 马文丽 +1 位作者 李凌 郑文岭 《国外医学(临床生物化学与检验学分册)》 2002年第1期9-11,共3页
目前 ,结构基因组学研究方兴未艾 ,功能基因组学研究又成为生命科学新的研究热点。作为世纪之交发展起来的一项集分子生物学、电子学、信息学为一身的生物高技术—生物芯片技术已日益成熟和完善 ,且其应用领域不断拓展 ,已成为后基因组... 目前 ,结构基因组学研究方兴未艾 ,功能基因组学研究又成为生命科学新的研究热点。作为世纪之交发展起来的一项集分子生物学、电子学、信息学为一身的生物高技术—生物芯片技术已日益成熟和完善 ,且其应用领域不断拓展 ,已成为后基因组时代功能基因组学研究中最重要的技术之一。本文就生物芯片在突变及多态性检测、基因表态及调控研究。 展开更多
关键词 生物芯片 功能基因组学 研究 比较基因组学 蛋白质组学 DNA芯片 蛋白阵列
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人红白血病K562细胞的红系终末分化研究 被引量:3
8
作者 危敏 马文丽 郑文岭 《国外医学(输血及血液学分册)》 2002年第3期210-213,共4页
人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系,但在体外可被多种诱导剂诱导向红系终末分化,出现红系表征:停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核,因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文... 人红白血病K562细胞是一株恶性程度较高的人红白血病体外细胞系,但在体外可被多种诱导剂诱导向红系终末分化,出现红系表征:停止分裂、表达珠蛋白基因产物、核固缩直至自然排核,因此已成为体外研究肿瘤细胞恶性表达调控的良好模型。本文就K562细胞红系分化的机制和研究进展作一综述。 展开更多
关键词 人红白血病 K562细胞 红系终末分化 研究 细胞因子 转录因子 癌基因
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一种新的基因芯片检测荧光标记技术:通用引物U_2联合标记法 被引量:5
9
作者 徐秋林 马文丽 +2 位作者 李凌 石嵘 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期289-292,共4页
目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss1... 目的报告一种新的基因芯片荧光标记技术:通用引物U2联合标记技术(universal primer U2 labeling ,UPL);比较UPL与随机引物等其他标记方法的效率和可重复性。方法流感病毒RNA用四种标记方法处理后与流感病毒寡核苷酸检测芯片杂交,用Spss10.0对杂交结果进行分析。结果UPL方法在标记物杂交的荧光强度、信噪比、探针真阳性率和可重复性等方面均高于随机引物逆转录掺入标记法,而与其他两种RD标记方法相当,但标记过程相对更加简单。结论UPL方法可用于基因芯片研究和应用。 展开更多
关键词 流感病毒 检测RD技术 基因芯片
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K562细胞经氯化高铁血红素诱导后分化相关基因的筛选 被引量:3
10
作者 姜立 马文丽 +1 位作者 郑文岭 薛社普 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期357-361,共5页
目的 研究K5 6 2细胞经氯化高铁血红素 (Hemin)诱导后在cDNA分子水平上的表达差异。 方法用限制性显示 (RD PCR)方法寻找K5 6 2细胞在经Hemin诱导后的cDNA差异表达片段。 结果 筛选到差异表达片段 4条 ,并进行了序列测定与同源性分... 目的 研究K5 6 2细胞经氯化高铁血红素 (Hemin)诱导后在cDNA分子水平上的表达差异。 方法用限制性显示 (RD PCR)方法寻找K5 6 2细胞在经Hemin诱导后的cDNA差异表达片段。 结果 筛选到差异表达片段 4条 ,并进行了序列测定与同源性分析。 结论 K5 6 2细胞分化是多基因参与的结果 ,这些分化相关基因的共同作用使K5 6 展开更多
关键词 限制性显示-PCR 氯化高铁血红素 K562细胞 白血病 HEMIN
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血管生成抑制素canstatin的新发现 被引量:6
11
作者 李浪 冯建章 郑文岭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期862-864,共3页
AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endot... AIM: As a human basement membrane-derived inhibitor of angiogenesis and tumor growth, canstatin has been paid great attention since it was isolated and identified in 2000. Canstatin significantly inhibited human endothelial cell migration and proliferation and induced apoptosis, suggesting that it might be a powerful and potential therapeutic molecule for atherosclerosis,unstable angina and tumor. 展开更多
关键词 血管生成抑制素 CANSTATIN 血管生成因子 血管内皮 动脉粥样硬化
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霍乱弧菌的分子遗传学特征及其检测研究进展 被引量:4
12
作者 胡子有 马文丽 郑文岭 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期248-250,共3页
关键词 霍乱弧菌 分子遗传学 检测 研究进展
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细胞松弛素B对K562细胞脱核作用的观察 被引量:5
13
作者 危敏 马文丽 +4 位作者 毛向明 宋艳斌 张宝 冯春琼 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第12期1087-1089,共3页
目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4~48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的... 目的观察细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)对K562细胞形态和增殖能力的影响.方法以人红白血病K562细胞为细胞模型,经不同浓度的CB作用不同时间(4~48 h),通过相差显微镜和Giemsa染色观察细胞形态学改变.细胞计数法绘制细胞不同条件下的生长曲线.结果细胞形态发生显著变化,处理组细胞出现不同程度的脱核,细胞生长受到显著抑制.结论CB对K562细胞的脱核作用与其浓度呈正相关,随作用时间延长而增强;秋水仙素有显著提高CB诱发细胞脱核的作用;CB对细胞的增殖能力有显著抑制作用. 展开更多
关键词 细胞松弛素 K562细胞 细胞脱核 秋水仙素 细胞增殖 白血病
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红白血病K562细胞基因表达谱芯片制作研究 被引量:2
14
作者 祝骥 马文丽 +4 位作者 李凌 宋艳斌 吴清华 姚汝华 郑文岭 《广东药学院学报》 CAS 2002年第1期7-10,13,共5页
以人红白血病K5 6 2细胞为材料 ,应用限制性显示PCR(RD -PCR)技术分离到K5 6 2细胞在诱导分化药物羟基脲诱导分化前后不同时期的cDNA片段 32 5 6条 ,并用DNA芯片仪制作了K5 6 2细胞基因表达谱芯片。对芯片制作中不同点样液及处理条件对... 以人红白血病K5 6 2细胞为材料 ,应用限制性显示PCR(RD -PCR)技术分离到K5 6 2细胞在诱导分化药物羟基脲诱导分化前后不同时期的cDNA片段 32 5 6条 ,并用DNA芯片仪制作了K5 6 2细胞基因表达谱芯片。对芯片制作中不同点样液及处理条件对玻片上DNA固定效率的影响 ,样品DNA最优浓度等进行了初步研究 ,结果认为用DMSO作点样液、样品DNA浓度为 0 .3μg μL、点样后经紫外交联 ( 15 0mJ)、80℃干烤 2h ,DNA探针在玻片上的固定效率可达 95 %。用此法制作的K5 6 展开更多
关键词 K562细胞 基因表达谱 DNA微集阵列 红白血病
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参桃软肝丸对荷肝癌小鼠的抑瘤作用及提高IL-2、NK活性的实验研究 被引量:4
15
作者 石世德 李任先 +3 位作者 周岱翰 郑文岭 杨太成 冼江 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 2001年第3期216-218,共3页
目的 :探讨中药复方制剂参桃软肝丸治疗实验性肝癌的药效和机理。方法 :建立荷肝癌 (H2 2 )小鼠模型 ,观察参桃软肝丸对其肿瘤生长和IL -2、NK细胞活性的影响。结果与结论 :参桃软肝丸能显著抑制肿瘤的生长 ,大剂量的抑瘤率达 4 6.8% ,... 目的 :探讨中药复方制剂参桃软肝丸治疗实验性肝癌的药效和机理。方法 :建立荷肝癌 (H2 2 )小鼠模型 ,观察参桃软肝丸对其肿瘤生长和IL -2、NK细胞活性的影响。结果与结论 :参桃软肝丸能显著抑制肿瘤的生长 ,大剂量的抑瘤率达 4 6.8% ,并可明显提高荷肝癌小鼠的免疫功能。 展开更多
关键词 参桃软肝丸 药理学 白细胞介素 杀伤细胞 中药
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大肠杆菌poly(A)化mRNA基因片段的RD-PCR克隆 被引量:1
16
作者 胡子有 马文丽 +5 位作者 宋艳斌 张宝 吴清华 郭秋野 彭翼飞 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期203-205,共3页
目的研究大肠杆菌(E.coli)中哪些基因mRNA3'端存在poly(A)化。方法利用E.colimRNA中可能存在的poly(A)尾,以oligo(dT)-cellulose进行mRNA的纯化,并以oligo(dT)18为引物逆转录合成cDNA,应用限制性显示-聚合酶链反应(RD-PCR)分离不同... 目的研究大肠杆菌(E.coli)中哪些基因mRNA3'端存在poly(A)化。方法利用E.colimRNA中可能存在的poly(A)尾,以oligo(dT)-cellulose进行mRNA的纯化,并以oligo(dT)18为引物逆转录合成cDNA,应用限制性显示-聚合酶链反应(RD-PCR)分离不同组别的基因片段并进行克隆。结果成功克隆100多个基因片段,并对其中30个进行了测序分析。结论细菌mRNA的poly(A)化可能不是偶然和个别的现象。 展开更多
关键词 限制性显示-聚合酶链反应 E.COLI POLY(A) 基因克隆 大肠杆菌 PD-PCR
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As_2O_3处理前后K562细胞基因表达变化的基因芯片检测 被引量:4
17
作者 冯春琼 马文丽 +6 位作者 李凌 宋艳斌 石嵘 吴清华 郭秋野 祝骥 郑文岭 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第9期772-775,共4页
目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化。方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因... 目的应用基因芯片研究三氧化二砷(As2O3)处理前后K562细胞基因表达的变化。方法提取As2O3处理前后K562细胞的总RNA,纯化为mRNA后再反转录为cDNA。cDNA经限制性内切酶Sau3AI切割后,cDNA片段分别用Cy3和Cy5标记,与自制的包含348个基因片段的胎盘库芯片杂交。结果杂交结果经扫描和软件分析,发现了11个差异表达的基因片段,其中有3个基因片段与细胞凋亡密切相关。结论 我们构建的胎盘库基因芯片可以成功地用于研究药物作用前后基因表达的变化。 展开更多
关键词 基因表达 基因芯片 基因芯片 三氧化二砷 K562细胞 凋亡
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用限制性cDNA文库制作K562细胞基因表达谱芯片探针 被引量:3
18
作者 祝骥 马文丽 +4 位作者 李凌 宋艳斌 吴清华 姚汝华 郑文岭 《生命科学研究》 CAS CSCD 2002年第2期142-146,共5页
以人红白血病K5 6 2细胞为材料 ,应用限制性显示PCR(RD -PCR)技术构建cDNA文库 .该文库通过PCR引物 3′端延伸两个不同碱基形成 136对引物对cDNA进行限制性扩增 ,得到 136组不同的PCR扩增产物 ,纯化后与载体连接并转化细菌 ,即为限制性c... 以人红白血病K5 6 2细胞为材料 ,应用限制性显示PCR(RD -PCR)技术构建cDNA文库 .该文库通过PCR引物 3′端延伸两个不同碱基形成 136对引物对cDNA进行限制性扩增 ,得到 136组不同的PCR扩增产物 ,纯化后与载体连接并转化细菌 ,即为限制性cDNA文库 .根据不同的分组进行克隆的鉴定和分离 ,并进行大量扩增制备cDNA芯片探针 .该方法构建的文库因经过了限制性分组扩增 ,每组均含有特定的cDNA ,因而大大加快了随后克隆的分离和鉴定的速度 ,为基因芯片探针制备提供了一个新方法 . 展开更多
关键词 限制性cDNA文库 K562细胞 基因表达谱芯片 癌变细胞
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RD-PCR技术在酵母基因表达谱研究中的应用 被引量:1
19
作者 刘莉扬 马文丽 +2 位作者 宋艳斌 张宝 郑文岭 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期246-248,261,共4页
目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物... 目的 应用RD PCR技术分离酵母基因。方法 首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的 3’端延伸两个碱基 )作第二次PCR扩增。 5 %PAGE胶分离基因片段 ,选择单带割胶回收 ,做第三次PCR扩增 ,与载体连接 ,最后进行测序分析。结果 采用这种方法分离得到的基因片段 ,经Blast检索分析 ,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签 (EST)。结论 RD PCR技术可以有效地分离EST ,可用于酵母基因表达调控的研究。 展开更多
关键词 RD-PCR技术 基因表达谱 酿酒酵母 限制性显示技术 表达序列标签
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参桃软肝丸抑制人肝癌细胞增殖及增强LAK抑瘤活性的实验研究 被引量:4
20
作者 石世德 杨太成 +3 位作者 李任先 周岱翰 郑文岭 冼江 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2001年第1期30-32,共3页
目的:研究中药复方参桃软肝丸对人肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721增殖的影响,探讨其抗癌作用机制。方法:参桃软肝丸灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721,MTT法观察细胞增殖;并与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)共同... 目的:研究中药复方参桃软肝丸对人肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721增殖的影响,探讨其抗癌作用机制。方法:参桃软肝丸灌胃给药后,采集大鼠血清,处理人肝癌细胞BEL-7402、SMMC-7721,MTT法观察细胞增殖;并与淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)共同处理以上两种细胞。结果:参桃软肝丸具有显著抑制BEL-7402、SMMC-7721增殖的作用,且存在不同浓度之间的差异,呈现出血清浓度依赖性,它可以显著提高LAK抑制BEL-7402、SMMC-7721增殖的活性。结论:抑制人肝癌细胞增殖,提高LAK活性可能是参桃软肝丸抗肝癌的主要作用机制。 展开更多
关键词 肝癌 中医药疗法 参桃软肝丸 肝癌细胞 BEL-7402 SMMC-7721 血清药理学
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