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用人肝细胞cDNA文库制备Dig-Fas探针 被引量:13
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作者 唐恩洁 杨宗琪 +5 位作者 赵明才 冯莉 任碧轩 敬保迁 李仁 眭维耻 《川北医学院学报》 CAS 2000年第3期1-3,共3页
为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段... 为探索SLE发生、发展与Fas表达的关系 ,本文采用降落PCR技术、分子克隆技术和Fas特异性引物 ,将从人肝细胞cDNA文库中扩增的FascDNA插入T -easyvector中 ,转染JM10 9,经耐药性和lacZ插入失活筛选 ,快速细胞裂解法、限制性内切酶酶切片段和PCR扩增试验分析鉴定 ,确证获阳性转化子。然后采用地高辛化学连接标记和查见方法 ,标记扩增、分离和纯化的FascDNA ,经斑点免疫实验证实获高滴度Dig 展开更多
关键词 FAS CDNA文库 Dig标记 探针 PCR 系统性红斑狼疮
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川北地区胃癌特异性表达基因的克隆 被引量:1
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作者 王朝莉 李丽 +4 位作者 陈果 杨尚君 敬保迁 任碧轩 冯莉 《中国医药导报》 CAS 2011年第5期19-21,共3页
目的:构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,筛选胃癌特异表达基因。方法:取胃低分化腺癌组织和癌旁正常黏膜组织,提取总RNA,逆转录cDNA,进行SSH构建消减文库获得序列标签,与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索。结果:以癌旁正常黏膜... 目的:构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,筛选胃癌特异表达基因。方法:取胃低分化腺癌组织和癌旁正常黏膜组织,提取总RNA,逆转录cDNA,进行SSH构建消减文库获得序列标签,与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索。结果:以癌旁正常黏膜组织为driver、胃低分化腺癌组织为tester成功构建cDNA消减文库,测序结果与公共数据库中已知基因和人类EST比较,获得5个特异性序列标签(NBPF1、FAM48A、RXFP2、ACTB和QDPR)。结论:应用SSH法成功构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,初步筛选胃癌部分表达基因,为寻找川北地区胃癌发生发展的特异性基因奠定基础。 展开更多
关键词 胃癌 SSH 特异基因
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p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应
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作者 夏羿凡 余娴 +1 位作者 冯丽 袁斌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期852-854,共3页
目的探讨p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应。方法将p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p16和pcDNA3-HA质粒分别转染U-2OS细胞,并设未转染阴性对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,PI单染法分析细胞周期的分布,DNA ladder法结合PI单染... 目的探讨p16基因对骨肉瘤U-2OS细胞的抑制效应。方法将p16基因真核表达质粒pcDNA3-HA-p16和pcDNA3-HA质粒分别转染U-2OS细胞,并设未转染阴性对照组,采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,PI单染法分析细胞周期的分布,DNA ladder法结合PI单染法检测细胞的凋亡情况。结果 p16基因可显著抑制U-2OS细胞的增殖(P<0.05),且在一定范围内呈剂量效应关系;p16基因可使U-2OS细胞G1期比例显著升高(P<0.05),S期比例显著降低(P<0.05);p16基因可使U-2OS细胞凋亡率明显上升(P<0.05),细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳后呈典型的DNA ladder。结论 p16基因可显著抑制U-2OS细胞增殖,使细胞阻滞于G1期,并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 基因 p16 骨肉瘤 U-2OS细胞 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡
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抗结核重组BCG疫苗研究进展 被引量:2
4
作者 杨爱琼 谢勇恩 《川北医学院学报》 CAS 2015年第5期595-599,共5页
结核病仍是严重威胁人类健康的传染病之一,卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)是唯一被批准用于结核病预防的疫苗,但近年来的研究发现其免疫保护效果极不稳定,构建重组BCG成为目前新型抗结核疫苗研究的重... 结核病仍是严重威胁人类健康的传染病之一,卡介苗(mycobacterium bovis bacillus calmette-guérin,BCG)是唯一被批准用于结核病预防的疫苗,但近年来的研究发现其免疫保护效果极不稳定,构建重组BCG成为目前新型抗结核疫苗研究的重要方向之一。本文概括性地介绍了抗结核重组BCG疫苗研究的必要性、抗结核重组BCG的研究策略与研究进展以及存在的问题和未来展望。 展开更多
关键词 结核疫苗 重组BCG 免疫原性 免疫保护性
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哺乳动物shRNA表达载体的构建及鉴定 被引量:2
5
作者 杨健 唐恩洁 朱道银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期786-788,共3页
目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置... 目的:构建带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体。方法:用PCR方法从含有人U6启动子的载体PTZU6+1中扩增U6启动子,将其克隆到pEGFP-C1载体中,通过限制性内切酶、PCR及测序对构建的载体进行鉴定,以其转染HepG2细胞后,在倒置荧光显微镜下初步观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经限制性内切酶、PCR及测序证实,成功地构建哺乳动物shRNA表达载体。以其转染HepG2细胞后可以表达绿色荧光蛋白。结论:构建了带有绿色荧光蛋白报告基因的哺乳动物shRNA表达载体,为以后运用该载体进行RNAi相关研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 SHRNA RNA 哺乳动物
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小鼠B7-H4基因的真核表达及其对淋巴细胞增殖的影响 被引量:3
6
作者 李丽 胡为民 +1 位作者 王朝莉 杨致邦 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2012年第4期292-294,297,共4页
目的构建小鼠B7-H4胞外段的真核表达载体,观察其在体外对淋巴细胞增殖的影响,为深入研究B7-H4在T细胞活化及移植排斥反应中的作用提供实验材料。方法提取小鼠肺、脾脏总RNA,RT-PCR反转录cDNA,以此为模板,扩增B7-H4胞外段基因,将其导入pG... 目的构建小鼠B7-H4胞外段的真核表达载体,观察其在体外对淋巴细胞增殖的影响,为深入研究B7-H4在T细胞活化及移植排斥反应中的作用提供实验材料。方法提取小鼠肺、脾脏总RNA,RT-PCR反转录cDNA,以此为模板,扩增B7-H4胞外段基因,将其导入pGEM-T Easy载体,构建TA-mB7-H4质粒。用XBaI和HindIII双酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。将测序证实的mB7-H4酶切后装入MYC-HIS-EGFP-N荧光表达载体中,构建B7-H4-EGFP真核表达载体,转化JM109感受态细菌,提取重组质粒,酶切后琼脂糖凝胶电泳分析和测序鉴定。同时构建control-EGFP载体。应用脂质体法将重组质粒转染CHO细胞,经G418筛选,获得稳定表达B7-H4-EGFP的CHO细胞株,用MTT分析其分别对BALB/c小鼠、C57小鼠淋巴细胞和二者混合淋巴细胞增殖的影响。结果经测序证实,所克隆的小鼠B7-H4 cDNA和构建的重组质粒基因序列正确;转染的CHO细胞能稳定地表达跨膜型重组蛋白B7-H4;表达的B7-H4对淋巴细胞增殖具有明显抑制作用。结论成功构建了B7-H4真核表达系统,能表达有生物学活性的B7-H4分子,为进一步探讨B7-H4在T细胞活化和移植排斥反应中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 B7-H4 真核表达 淋巴细胞 增殖
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利用RNA干扰技术干扰HBeAg表达的研究 被引量:1
7
作者 汪光蓉 张国元 +3 位作者 杨健 唐中 唐恩洁 朱道银 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期126-131,共6页
构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用。构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检... 构建针对乙肝病毒HBeAg前c/c区(HBV prec/c)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(psiHBV),观察其在体内外对HBV复制的抑制作用。构建RNA干扰真核表达载体psiHBV,与1.5倍HBV真核表达质粒pHBV1.5共转染HeLa细胞,用微粒子化学发光分析仪(MEIA)分别检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达水平;用半定量PCR检测prec/cmRNA的转录情况。随后用水动力学方法,向小鼠尾静脉注射pHBV1.5建立小鼠急性乙型肝炎病毒感染模型。采用此感染模型,将pHBV1.5与在体外实验筛选到有明显抑制作用的shRNA表达载体(psiHBV4)共注射,注射后第6天用同样方法检测其干扰效果。结果显示,成功构建了针对HBV前c/c区的shRNA表达载体psiHBV4、psiHBV5、psiHBV6及无关shRNA表达载体psiC,筛选到在体外对HBeAg有明显的抑制作用的psiHBV4载体;注射pHBV1.5的动物血清高表达HBsAg和HBeAg。而共注射干扰性psiHBV4明显抑制了HBeAg的表达,与单纯感染组相比有显著差异,RT-PCR显示肝内HBV C mRNA水平亦明显降低。上述结果表明,siRNA能特异抑制HBV的复制和表达,对乙型肝炎的治疗有潜在应用前景。 展开更多
关键词 乙型肝炎 SHRNA RNA干扰 动物模型
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研究生分子生物学实验教学模式的探索 被引量:2
8
作者 王朝莉 《现代医药卫生》 2012年第17期2691-2692,共2页
分子生物学实验课程是医学研究生教学中一门应用性很强的基础课程,根据该院研究生实验课程的情况,就如何培养学生基本的实验技能、学生动手能力、科研创新能力、学生分析问题和解决问题的能力等方面的教学经验进行了总结。
关键词 分子生物学 教学 教育 研究生 实验教学
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小剂量阿糖胞苷体外诱导HL-60细胞凋亡的作用 被引量:2
9
作者 杜冰 朱道银 唐恩洁 《重庆大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第11期145-147,共3页
阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋... 阿糖胞苷是白血病的重要药物 ,其小剂量化疗仍用于临床治疗白血病 ,并取得了一定的疗效 ,但其作用机制尚未完全阐明 ,可能与药物诱导细胞分化或凋亡有关。文中用TUNEL法和流式细胞仪分析小剂量Ara -C(10 - 8M)对HL 6 0细胞周期和细胞凋亡的影响 ,用免疫组化法和原位杂交法分别检测P5 3蛋白和p5 3mRNA、bcl- 2mRNA表达水平的改变 ,以探讨bcl- 2和p5 3基因表达与小剂量阿糖胞苷诱导HL - 6 0细胞凋亡的关系。结果表明 :小剂量Ara -C能诱导HL - 6 0细胞凋亡 ,其分子机制可能与P5 3蛋白、p5 3mRNA表达增加和bcl- 展开更多
关键词 阿糖胞苷 凋亡 HL-60细胞 BCL-2 p53
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小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用 被引量:1
10
作者 杜冰 唐恩洁 《川北医学院学报》 CAS 2004年第3期2-4,共3页
关键词 ARA-C 小剂量 凋亡 联合诱导 白血病抑制因子 阿糖胞苷 HL-60细胞 LIF 胚胎发育 生物学活性
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重组人白血病抑制因子体外诱导HL-60细胞凋亡与bc-l2及p53表达的关系 被引量:1
11
作者 杜冰 朱道银 唐恩洁 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2004年第6期695-697,共3页
目的 :探讨重组人白血病抑制因子 (rh LIF)诱导HL 6 0细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 :不同剂量 (10~ 4 0 0 0U·ml-1)的rh LIF作用HL 6 0细胞 3d后 ,用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率 ,用TUNEL法检测原位细... 目的 :探讨重组人白血病抑制因子 (rh LIF)诱导HL 6 0细胞凋亡的作用及其可能机制。方法 :不同剂量 (10~ 4 0 0 0U·ml-1)的rh LIF作用HL 6 0细胞 3d后 ,用流式细胞仪观察分析细胞周期变化并检测细胞凋亡率 ,用TUNEL法检测原位细胞凋亡情况 ;分别用免疫组化法和原位杂交法检测rh LIF作用 2、4、6d后P5 3蛋白及p5 3mRNA、bcl 2mRNA表达水平的改变。结果 :rh LIF (10~ 4 0 0 0U·ml-1)作用d 3,细胞凋亡率较对照组显著增加 ,其中以10 0 0U·ml-1组的作用最强 ;rh LIF (80 0U·ml-1)作用 2~ 6d ,P5 3蛋白和p5 3mRNA表达也同步增高 ,而bcl 2mRNA表达显著降低 (P <0 .0 1)。结论 :rh LIF能诱导HL 6 0细胞凋亡 ,该作用与P5 3蛋白表达增加和bcl 展开更多
关键词 rh-LIF 凋亡 HL-60细胞 BEL-2 p53
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HBV prec/c shRNA慢病毒真核表达载体的构建和鉴定 被引量:1
12
作者 王朝莉 李丽 +3 位作者 陈果 杨致邦 唐恩洁 杨尚君 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期365-366,369,共3页
目的构建针对HBV prec/c区的shRNA真核表达载体psiHBV,感染HepG2 2.15细胞后观察其对HBeAg表达的抑制作用,为探讨防治HBV感染的新措施提供实验依据。方法针对HBV prec/c基因序列,构建shRNA表达载体psiHBV1、psiHBV2和无关序列psiHBVc。p... 目的构建针对HBV prec/c区的shRNA真核表达载体psiHBV,感染HepG2 2.15细胞后观察其对HBeAg表达的抑制作用,为探讨防治HBV感染的新措施提供实验依据。方法针对HBV prec/c基因序列,构建shRNA表达载体psiHBV1、psiHBV2和无关序列psiHBVc。psiHBV与慢病毒辅助系统质粒共转染293T细胞组装慢病毒颗粒后,感染HepG2 2.15细胞,RT-PCR检测prec/c mRNA的转录,微粒子化学发光分析仪(MEIA)检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达。结果重组质粒双酶切和测序鉴定与预期结果相符合;组装慢病毒颗粒感染HepG2 2.15细胞后,prec/c mRNA转录降低;与对照组比较,HBeAg的表达水平也显著降低,病毒颗粒对HBeAg表达的抑制作用差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功构建针对HBVprec/c的慢病毒载体psiHBV1、siHBV2,慢病毒介导的RNA i能抑制HBV表达,为应用RNA干扰技术治疗乙型肝炎提供了实验依据。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 prec/c基因 RNAi慢病毒表达载体 HBEAG
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幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化
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作者 杨继文 杨致邦 +4 位作者 敬保迁 于拽拽 熊玉霞 王朝丽 冯莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1421-1424,共4页
目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blu... 目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了H.pylori NCTC11637株Hp1501蛋白,为H.pylori外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 Hp1501基因 生物信息学 原核细胞 基因表达 纯化
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小剂量阿糖胞苷诱导HL-60细胞分化的作用
14
作者 杜冰 唐恩洁 朱道银 《川北医学院学报》 CAS 2004年第1期10-12,共3页
目的观察小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法阿糖胞苷 (10 8M)作用HL 6 0细胞 2 6天 ,观察细胞生长 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRN... 目的观察小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法阿糖胞苷 (10 8M)作用HL 6 0细胞 2 6天 ,观察细胞生长 ,用流式细胞仪分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA表达水平的改变。结果小剂量阿糖胞苷可诱导HL 6 0细胞向单核 /巨噬细胞分化 ,抑制HL 6 0细胞的增殖 ,使细胞停滞于G1期 ,P5 3,P2 1蛋白和P5 3mRNA表达明显增强。结论小剂量阿糖胞苷对HL 6 0细胞具增殖抑制和诱导分化作用 ,该作用与G1期阻滞及P5 3,P2 1表达增高有关。 展开更多
关键词 小剂量 阿糖胞苷 诱导 HL—6O细胞 作用机制
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学科教学知识对分子生物学教学的意义及构建途径
15
作者 蒋振 《基础医学教育》 2014年第7期505-506,共2页
学科教学知识是学科专业知识和教学知识两者融合而来,是教师在教学过程中,逐步积累发展形成起来的;它体现教师个体的价值观,具有建构性、整合性和转化性等特点;它主要通过教师的自我构建和环境促成两种途径共同形成。文章介绍了学科教... 学科教学知识是学科专业知识和教学知识两者融合而来,是教师在教学过程中,逐步积累发展形成起来的;它体现教师个体的价值观,具有建构性、整合性和转化性等特点;它主要通过教师的自我构建和环境促成两种途径共同形成。文章介绍了学科教学知识的概念、特征及其在医学分子生物学教学中的意义和构建途径。 展开更多
关键词 医学分子生物学 学科教学知识 教学改革
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慢病毒介导的RNA干扰体外抑制HBeAg表达的实验研究
16
作者 王朝莉 李丽 +3 位作者 陈果 唐恩洁 杨致邦 杨尚君 《西部医学》 2012年第12期2268-2270,2273,共4页
目的为防治HBV感染的新措施提供实验依据。方法针对HBV prec/c基因序列,构建shRNA表达载体psiHBV1、psiHBV2和无关序列psiHBVc。psiHBV与慢病毒辅助质粒系统共转染293T细胞组装慢病毒颗粒后,感染HepG2 2.15细胞,微粒子化学发光分析仪(ME... 目的为防治HBV感染的新措施提供实验依据。方法针对HBV prec/c基因序列,构建shRNA表达载体psiHBV1、psiHBV2和无关序列psiHBVc。psiHBV与慢病毒辅助质粒系统共转染293T细胞组装慢病毒颗粒后,感染HepG2 2.15细胞,微粒子化学发光分析仪(MEIA)检测细胞上清和细胞裂解液中HBeAg表达;用定量PCR检测prec/c mRNA的转录情况。结果重组质粒双酶切和测序鉴定与预期结果相符合;组装慢病毒颗粒感染HepG2 2.15细胞后,prec/c mRNA转录降低;与对照组比较,HBeAg的表达水平也显著降低,病毒颗粒对HBeAg表达的抑制作用差异有统计学意义(P<0.01)。结论 RNAi能特异性抑制HBV表达,为应用RNA干扰技术进行乙型肝炎的治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 RNAI HBEAG 慢病毒
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应用二维电泳和质谱技术筛选喉癌及癌旁组织中的差异表达蛋白质
17
作者 陈果 邓世山 +2 位作者 王朝莉 李丽 杨致邦 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第3期194-198,共5页
目的分离并鉴定喉癌和癌旁正常粘膜组织的差异表达蛋白质,为喉癌早期临床诊断、治疗提供新的有关的肿瘤生物学标记和靶标。方法收集5对人喉癌组织和对应的癌旁正常粘膜组织,提取组织总蛋白质,采用二维凝胶电泳技术分离蛋白并进行比... 目的分离并鉴定喉癌和癌旁正常粘膜组织的差异表达蛋白质,为喉癌早期临床诊断、治疗提供新的有关的肿瘤生物学标记和靶标。方法收集5对人喉癌组织和对应的癌旁正常粘膜组织,提取组织总蛋白质,采用二维凝胶电泳技术分离蛋白并进行比较。选择在喉癌中明显差异表达的蛋白质点,进行质谱分析。结果获得了分辨率和重复性均较好的凝胶蛋白图谱。筛选出的在喉癌及癌旁正常粘膜组织中明显差异表达的10个蛋白质点,并成功鉴定。其中在喉癌组织中高表达的7个,低表达的3个。结论喉癌组织与癌旁正常粘膜组织蛋白存在明显的差异,筛选并鉴定出的这些蛋白质可能成为喉癌早期临床诊断、治疗的标志物和靶标。 展开更多
关键词 喉癌 差异表达蛋白 二维凝胶电泳 质谱分析
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从人肝细胞文库中克隆Fas cDNA
18
作者 杨宗琪 赵明才 +3 位作者 冯莉 任碧轩 敬保迁 李仁 《川北医学院学报》 CAS 2000年第3期6-8,共3页
为获取人FascDNA ,以探索Fas的功能作用 ,本文采用高滴度Dig -FascDNA探针噬菌斑影印杂交筛选技术 ,从人肝细胞cDNA文库 (HL -cDNA)
关键词 FAS CDNA 探针 基因克隆 杂交
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