酶标仪法测定γ-氨基丁酸 被引量：13

1

作者 梁慧 薛正莲 +2 位作者 周扬 汪冬冬 叶杨 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期156-160,共5页

通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高。为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响... 通过诱变所获得的乳酸菌突变株较多,经96孔板发酵后用传统的分光光度计法测定γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的含量效率低、成本高。为快速、高效地测定GABA的含量,基于Berthelot反应,该实验采用酶标仪法测定GABA含量并对影响该方法的主要因素进行优化。确定了在测定GABA的适宜反应体系中0.2 mol/L pH10.0硼酸盐缓冲液为0.75 mL,6%的重蒸苯酚为2.5 mL,有效氯5.2%的NaClO溶液为2 mL时,酶标仪测定可获得较高的GABA含量,同时进行了精密度试验。最后,通过对诱变后的75株突变株经96孔板发酵后,分别使用分光光度计与酶标仪测定发酵液中GABA的含量并进行拟合,以验证该方法的可行性。得出2种方法的相关系数R=0.949 3,显示2种测定方法具有很好的一致性。该实验结果表明酶标仪法能简便、快速、准确地测定发酵液中GABA的含量,为后续高通量选育GABA乳酸菌奠定了基础。 展开更多

关键词 Γ-氨基丁酸 测定 分光光度计 酶标仪 优化

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酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素 被引量：9

2

作者 余飞 秦艳飞 +3 位作者 王洲 孙俊峰 张敏 薛正莲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2019年第1期47-51,共5页

目的建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定25株突变株经48孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线拟合,以验证两种... 目的建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定25株突变株经48孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线拟合,以验证两种方法的相关性。结果确定了在测定林可霉素含量的适宜反应体系中0.02mol/L氯化钯溶液为150μL,盐酸添加浓度为1mol/L,且该方法精密度良好;拟合曲线相关系数R2=0.9551,显示两种方法具有很好的相关性。结论该实验结果表明酶标仪法能准确、快速地测定微孔板发酵液中林可霉素的含量,为后续高通量选育林可霉素高产菌株奠定了基础。 展开更多

关键词 林可霉素 测定 分光光度计 酶标仪 优化

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红曲霉ZL307固态发酵豆渣产γ-氨基丁酸的工艺优化 被引量：9

3

作者 张庆庆 吕闻闻 +1 位作者 汤文晶 许鹏 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期96-100,共5页

对红曲霉ZL307产γ-氨基丁酸的固态发酵工艺进行了优化,旨在探寻豆渣的综合利用方式,降低γ-氨基丁酸的生产成本。在单因素试验的基础上,通过Plackett-Burman设计从6个因素中筛选出了有显著影响的大米粉、MgSO4、KH2PO4三个因素。通过... 对红曲霉ZL307产γ-氨基丁酸的固态发酵工艺进行了优化,旨在探寻豆渣的综合利用方式,降低γ-氨基丁酸的生产成本。在单因素试验的基础上,通过Plackett-Burman设计从6个因素中筛选出了有显著影响的大米粉、MgSO4、KH2PO4三个因素。通过最陡爬坡实验、中心复合实验设计及响应面分析确定主要影响因素的最佳浓度及回归模型,并经实验验证模型的可行性。最佳培养基组成和培养条件为:基质豆渣12.28 g,大米粉为7.72g,(NH4)2SO40.20%,MgSO40.23%,KH2PO40.37%,CaCl20.25%,谷氨酸钠0.45%(均为占固体基质的质量分数),初始含水量60%,初始pH值5.5,温度32℃。在优化条件下,γ-氨基丁酸产量达到0.417mg/g,含量比优化前提高13.4%。 展开更多

关键词 红曲霉 Γ-氨基丁酸 固态发酵 优化

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弗氏链霉菌产硫酸新霉素高通量选育模型的建立及优化 被引量：8

4

作者 余飞 孙俊峰 +3 位作者 刘鹏飞 刘艳 王洲 薛正莲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期162-167,177,共7页

建立基于多孔板发酵及酶标仪检测的高通量选育模型,提高诱变后硫酸新霉素高产菌株的筛选效率。对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10^(-4)mol/L曲利本蓝的添加量(μL/m L)进行优化,并建立相应的分光光度法,对适用高通量筛选模型... 建立基于多孔板发酵及酶标仪检测的高通量选育模型,提高诱变后硫酸新霉素高产菌株的筛选效率。对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10^(-4)mol/L曲利本蓝的添加量(μL/m L)进行优化,并建立相应的分光光度法,对适用高通量筛选模型的微孔板进行选择,并对其发酵条件进行正交优化。结果表明,曲利本蓝的添加量为500μL/m L,硫酸新霉素在1.284～10.272 U/m L,吸光度与样品浓度呈良好的线性关系(R^2=0.998 8),平均回收率为98.468 4%,重复性RSD为3.270 0%;24孔板适用于高通量筛选模型,优化后发酵条件:转速、装液量和接种量分别为220 r/min、2 m L和8%,在此基础上,实际发酵效价达到(6 825±77)U/m L,较原发酵条件提高了27.40%。基于多孔板发酵及酶标仪检测建立高通量选育模型,能够达到诱变后快速筛选硫酸新霉素高产菌株的目的,也为后续高通量选育其他抗生素高产菌株奠定了基础。 展开更多

关键词 弗氏链霉菌 硫酸新霉素 高通量

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紫外诱变和氨基酸抗性筛选选育那西肽高产菌株 被引量：8

5

作者 秦艳飞 薛正莲 +2 位作者 项驷文 李恒奎 王洲 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期586-589,605,共5页

目的筛选出那西肽高产菌株。方法以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氯化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌。结果通过致死率和正突变率的考察,确定紫外最佳诱变剂量为100s。在分离培养基上层加入氯... 目的筛选出那西肽高产菌株。方法以活跃链霉菌CB040517作为出发菌株,通过紫外-氯化锂诱变处理,并结合前体复合氨基酸抗性筛选,选育那西肽高产菌。结果通过致死率和正突变率的考察,确定紫外最佳诱变剂量为100s。在分离培养基上层加入氯化锂和底层加入复合氨基酸进行正突变株的定向筛选,选育得到那西肽高产菌株UV-19-A12,其摇瓶效价达904.00μg/mL,比出发菌株提高72.5%,经过五代斜面传代试验考察,该菌株遗传性状稳定。结论紫外诱变和氨基酸抗性筛选可以获得那西肽高产菌株。 展开更多

关键词 活跃链霉菌 那西肽 紫外诱变 氨基酸抗性筛选

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中高温大曲中产酯酶细菌的筛选 被引量：7

6

作者 刘阳 薛正莲 +1 位作者 黄祖耀 赵梦梦 《中国酿造》 CAS 2012年第8期99-102,共4页

通过在培养基中添加底物三丁酸甘油酯,从中、高温大曲中初步筛选到产酯酶细菌15株。以乙酸对硝基苯酯为底物,其中12#菌株表现出最高催化活力其酶活为0.83U/mL;以乙醇、己酸为底物,其中10#菌株表现出最高催化活力其酶活为6.7U/mL。对上... 通过在培养基中添加底物三丁酸甘油酯,从中、高温大曲中初步筛选到产酯酶细菌15株。以乙酸对硝基苯酯为底物,其中12#菌株表现出最高催化活力其酶活为0.83U/mL;以乙醇、己酸为底物,其中10#菌株表现出最高催化活力其酶活为6.7U/mL。对上述两种测定方法中相对酶活较高的菌株恒温振荡培养(36℃、150r/min)72h后取其发酵液离心(12000r/min,4℃)20min进行气相色谱分析,结果表明这些菌株都能产生一定量的酸类、醇类和酯类物质。 展开更多

关键词 酯酶:中温大曲 高温大曲 细菌

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紫外-激光复合诱变原生质体选育林可霉素高产菌株 被引量：7

7

作者 薛正莲 王洲 +2 位作者 张相美 赵世光 潘文洁 《激光生物学报》 CAS CSCD 2010年第6期838-842,共5页

以SL98-2-8为出发菌种,研究了紫外线、He-Ne激光以及紫外线与He-Ne激光复合对林肯链霉菌原生质体的诱变效应,结果表明He-Ne激光对紫外线引起的损伤有较好的修复作用。通过紫外线-He-Ne激光复合诱变,筛选到一株优良菌种SL98-2-8-116,其... 以SL98-2-8为出发菌种,研究了紫外线、He-Ne激光以及紫外线与He-Ne激光复合对林肯链霉菌原生质体的诱变效应,结果表明He-Ne激光对紫外线引起的损伤有较好的修复作用。通过紫外线-He-Ne激光复合诱变,筛选到一株优良菌种SL98-2-8-116,其摇瓶效价达到3 629μg/mL,较出发菌种提高了18.3%,10次传代后生产性能稳定。 展开更多

关键词 林肯链霉菌 林可霉素 原生质体 复合诱变

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纸层析-酶标仪法测定发酵液中γ-氨基丁酸 被引量：7

8

作者 张敏 薛正莲 +2 位作者 余飞 刘艳 王洲 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期262-267,共6页

建立纸层析-酶标仪法对微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量进行测定。对影响纸层析-酶标仪法测定结果的重要因素进行优化,并建立相应的分光光度法。优化后层析液中显色剂-茚三酮的浓度为8g/L,展开剂-正丁醇、冰醋酸与水3者体积比为2∶1∶1;... 建立纸层析-酶标仪法对微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量进行测定。对影响纸层析-酶标仪法测定结果的重要因素进行优化,并建立相应的分光光度法。优化后层析液中显色剂-茚三酮的浓度为8g/L,展开剂-正丁醇、冰醋酸与水3者体积比为2∶1∶1;洗脱液中乙醇的体积分数为75%,乙醇与质量浓度为6g/LCuSO4·5H2O的体积比为39∶1;γ-氨基丁酸质量浓度在1~7g/L之间,吸光度与样品浓度线性关系良好(R2=0.9990),平均回收率为98.2485%,重复性RSD为2.6255%。纸层析-酶标仪法能快速、准确地测定微孔板发酵液中γ-氨基丁酸产量,为后续高通量选育γ-氨基丁酸高产菌株奠定了基础。 展开更多

关键词 Γ-氨基丁酸 测定 纸层析 酶标仪

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1株植物乳杆菌的抑菌作用及其生物学特性的研究 被引量：5

9

作者 洪伟 薛正莲 《生物学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期51-54,共4页

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸杆菌中的一种,常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体肠道的益生菌群,具有维持肠道菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种作用。研究从市售腌渍蔬菜中分离筛选获得一... 植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸杆菌中的一种,常存在于发酵的蔬菜和果汁中。植物乳杆菌作为人体肠道的益生菌群,具有维持肠道菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种作用。研究从市售腌渍蔬菜中分离筛选获得一株植物乳杆菌,以9种菌作为指示菌,采用牛津杯琼脂扩散法检测筛选菌株的抑菌谱大小。结果表明,该菌株能较强的抑制大肠杆菌、柠檬色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌等指示菌。此外,研究了菌株对温度的稳定性,p H值的耐受性及其酶的敏感性等生物学特性,结果显示该株植物乳杆菌菌株具有良好的热稳定性,酸碱稳定性,并且对3种蛋白酶具有很好的敏感性。这为今后深入研究与开发植物乳杆菌奠定了基础。 展开更多

关键词 植物乳杆菌 指示菌 抑菌性 生物学特性

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三种磷脂酶A1活力测定方法的比较 被引量：5

10

作者 赵梦梦 薛正莲 +2 位作者 黄祖耀 苏燕南 马琦亚 《食品与发酵科技》 CAS 2012年第3期74-77,85,共5页

三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量... 三种常用的磷脂酶A1活力测定的方法分别为碱滴定法、双层平板法和分光光度法。通过对磷脂酶A1标准品和实验室产磷脂酶A1菌株的活力进行测定,比较这三种方法在时间、准确性和精确性方面的差异。结果得出分光光度法具有耗时短、底物用量少、结果稳定、精确性好的优点。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 活力 分光光度法 棕榈酸

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粪肠球菌HX-3-6产γ-氨基丁酸发酵条件的优化 被引量：4

11

作者 钱森和 黄祖耀 +1 位作者 薛正莲 赵世光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第2期268-274,共7页

目的优化粪肠球菌HX-3-6产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)的发酵条件,提高GABA的产量。方法通过单因素试验和正交试验对产GABA的粪肠球菌HX-3-6发酵条件进行优化,采用Plackett-Burman(PB)试验设计法筛选产GABA的培养基主要影... 目的优化粪肠球菌HX-3-6产γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)的发酵条件,提高GABA的产量。方法通过单因素试验和正交试验对产GABA的粪肠球菌HX-3-6发酵条件进行优化,采用Plackett-Burman(PB)试验设计法筛选产GABA的培养基主要影响因素,应用Box-Behnken设计及响应面分析对影响发酵产GABA的主要培养基因素进行优化;用最终优化的配方进行3次验证试验。结果最佳发酵条件为底物浓度30 g/L,起始pH 5.5,发酵时间72 h,温度35℃;PB法筛选出了培养基中有显著效应的4个因素为MnSO4﹒H2O、NaCl、柠檬酸三胺和葡萄糖,经Box-Behnken设计及响应面分析,确定该4个主要影响因素的最佳浓度分别为0.100 785、0.224 459、0.215 355及12.335 95 g/L。3次验证GABA的产量平均可达16.027 g/L,比优化前(11.006 g/L)提高了45.62%。结论优化的粪肠球菌HX-3-6发酵条件和培养基可显著提高GABA产量,为其工业化生产奠定了基础。 展开更多

关键词 粪肠球菌 Γ-氨基丁酸 发酵 优化

原文传递

激光复合诱变选育那西肽高产菌及其代谢特性的研究 被引量：4

12

作者 薛正莲 秦艳飞 +2 位作者 王洲 赵世光 杨超英 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期122-125,共4页

出发菌株经紫外照射诱变后,再采用激光复合诱变方式进行的筛选,并对其传代稳定性进行研究,以期进一步获得稳产高产那西肽产生菌突变株。结果表明紫外照射100 s得到的NXT-U19放瓶效价比出发菌株(546.17μg/mL)提高了44.22%,达到了787.71... 出发菌株经紫外照射诱变后,再采用激光复合诱变方式进行的筛选,并对其传代稳定性进行研究,以期进一步获得稳产高产那西肽产生菌突变株。结果表明紫外照射100 s得到的NXT-U19放瓶效价比出发菌株(546.17μg/mL)提高了44.22%,达到了787.71μg/mL。激光-紫外复合诱变后筛选出6株产量较高的菌株,其中以NXT-U19-J2效价最高,比原始菌株提高了65.74%,达到了905.22μg/mL。经传代培养分析,NXT-U19-J2诱变株的遗传稳定性较好,该结果表明,激光复合诱变是获得高产那西肽产生菌的有效途径。 展开更多

关键词 紫外 激光 复合诱变 那西肽

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粘质沙雷氏菌PL-06磷脂酶A1基因大肠杆菌优化表达 被引量：4

13

作者 苏燕南 薛正莲 +1 位作者 陈涛 马琦亚 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期36-42,共7页

以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,I... 以粘质沙雷氏菌PL-06基因组为模板扩增得到磷脂酶A1基因plaA和含有辅助蛋白的磷脂酶A1基因plaB。plaA和plaB基因与pET-28a(+)连接后转入大肠杆菌BL21(DE3)表达,得到基因工程菌AP28和BP28。AP28最佳的诱导表达条件为诱导初始OD600值0.5,IPTG浓度为0.2mmol/L,诱导温度为37℃,诱导时间为4h,优化后磷脂酶A1蛋白表达水平从32%上升至46%,包涵体复性的磷脂酶A1酶活从10.8U/ml上升到12U/ml,相对于BP28工程菌,目的蛋白的表达对宿主细胞毒性小,而且得到的蛋白容易纯化。因此通过优化磷脂酶A1基因plaA的诱导条件,使磷脂酶A1以大量的包涵体形式表达,从而得到较高活性的磷脂酶A1并避免其对宿主细胞的毒性是可行的,而且可以得到大量纯化的磷脂酶A1蛋白,方便下一步的研究。 展开更多

关键词 粘质沙雷氏菌 磷脂酶A1 诱导表达 包涵体复性 细胞毒性

原文传递

基因组改组选育产酯化酶地衣芽孢杆菌 被引量：4

14

作者 薛正莲 刘阳 +3 位作者 王洲 马琦亚 赵世光 苏燕南 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期43-48,共6页

从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变,以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后,对融合子进行发酵测定其酶活并挑... 从高温大曲中筛选到一株产酯化酶的地衣芽胞杆菌G2。采用低温等离子体对G2进行诱变,以筛选酶活提高最多的3株菌株作为亲本。将亲本原生质体灭活后对其进行基因组改组。将融合后的菌体进行筛选纯化之后,对融合子进行发酵测定其酶活并挑选酶活较高菌株进行传代测定其酶活稳定性。结果表明6#融合子酶活最高且稳定为10.7U/ml,相对于初始菌株的5.3U/ml提高了102%。对其发酵液进行气相色谱分析表明,6#融合子代谢产一定量的酸类、酯类及醇类等物质,其中乙偶姻含量达2565mg/L。 展开更多

关键词 酯化酶 基因组改组 地衣芽孢杆菌 等离子诱变

原文传递

紫外-微波复合诱变原生质体选育那西肽高产菌株 被引量：3

15

作者 秦艳飞 薛正莲 +1 位作者 苏燕南 王栋 《食品与发酵科技》 CAS 2011年第3期39-42,共4页

以UV-19为出发菌种,研究了紫外、微波以及紫外-微波复合对活跃链霉菌原生质体的诱变效应。结果表明复合诱变对该菌原生质体有明显的致死作用。通过紫外-微波复合诱变,筛选到一株优良菌株PUM-13,其摇瓶含量达到883.450μg/mL,较出发菌株... 以UV-19为出发菌种,研究了紫外、微波以及紫外-微波复合对活跃链霉菌原生质体的诱变效应。结果表明复合诱变对该菌原生质体有明显的致死作用。通过紫外-微波复合诱变,筛选到一株优良菌株PUM-13,其摇瓶含量达到883.450μg/mL,较出发菌株提高了17.14%,5代后生产性能稳定。 展开更多

关键词 活跃链霉菌 那西肽 原生质体 紫外诱变 微波诱变

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产磷脂酶A1菌株的筛选及其发酵条件的优化 被引量：3

16

作者 赵梦梦 薛正莲 +2 位作者 苏燕南 赵世光 陈涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第7期901-904,908,共5页

目的筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC 3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件。方法从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化。结果筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力最高,摇瓶发... 目的筛选产磷脂酶A1(Phospholipase A1,PLA1,EC 3.1.1.32)的菌株,并优化其发酵条件。方法从富油土壤中筛选产PLA1的菌株,并对PLA1活力高的菌株进行分子生物学鉴定及发酵条件的优化。结果筛选出的5个菌株中Dx208菌株PLA1活力最高,摇瓶发酵酶活力达4.52 U/ml。根据该菌株的形态特征分析和16S rDNA基因序列,初步鉴定其为链霉菌属(Streptomyces)的灰色链霉菌(Streptomyces griseus)。该菌株的最佳发酵条件为:初始pH 7.0,培养温度30℃,发酵时间5 d,摇床转速200 r/min,发酵液中PLA1活力可达7.15 U/ml,为优化前的1.58倍。结论已筛选出1株高产PLA1的菌株,并优化了其发酵条件,为PLA1的生产及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 灰色链霉菌 筛选 发酵 优化

原文传递

粪肠球菌HX-3细胞转化合成γ-氨基丁酸条件的优化 被引量：2

17

作者 黄祖耀 薛正莲 陈涛 《食品与发酵科技》 CAS 2012年第3期6-9,共4页

本文采用粪肠球菌HX-3菌体细胞转化法制备γ-氨基丁酸(GABA),并对影响细胞转化反应的一系列条件进行了正交优化。结果表明,在优化后的转化条件下,即:发酵2d的菌体细胞、温度42℃、缓冲液pH 4.8、PLP浓度0.05mmol/L、谷氨酸钠35g/L,进行... 本文采用粪肠球菌HX-3菌体细胞转化法制备γ-氨基丁酸(GABA),并对影响细胞转化反应的一系列条件进行了正交优化。结果表明,在优化后的转化条件下,即:发酵2d的菌体细胞、温度42℃、缓冲液pH 4.8、PLP浓度0.05mmol/L、谷氨酸钠35g/L,进行转化反应,体系中GABA浓度可达9.14g/L。 展开更多

关键词 粪肠球菌 Γ-氨基丁酸 细胞转化 正交

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磷脂酶A1高产菌株的筛选及其等离子体诱变 被引量：2

18

作者 马琦亚 薛正莲 +2 位作者 苏燕南 王洲 赵世光 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1656-1662,共7页

目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征... 目的从富油土壤中筛选磷脂酶A1高产菌株,优化其发酵条件,并经等离子诱变提高其产酶能力。方法用筛选培养基和发酵培养基分别对富油土壤中磷脂酶A1产生菌进行初筛和复筛,经气相色谱鉴定产酶类型;对获得的高产菌株进行形态、生理生化特征和分子生物学鉴定;优化该菌株的发酵时间,温度,pH值及摇床转速;从该菌株出发进行等离子体诱变,绘制致死率曲线,进行平板初筛及摇瓶复筛,并检测获得菌株的遗传稳定性。结果经初筛和复筛,获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,经气相色谱鉴定其产酶为磷脂酶A1;该菌株在普通琼脂培养基上呈圆形,质地软,表面光滑、扁平,乳白色,晕圈明显,为芽孢杆菌属蜡样芽孢杆菌;最佳发酵条件为:发酵时间12 h,初始pH 8.0,温度32℃,摇床转速200 r/min,优化后酶活为9.12 U/ml,较优化前(6.74 U/ml)提高了35.3%;等离子体诱变后,经平板及摇瓶筛选,获得的菌株W22-5酶活最高,为12.80 U/ml,较诱变前(9.12 U/ml)提高了89.91%,且具有良好的遗传稳定性。结论成功获得1株磷脂酶A1高产菌株W22,优化了该菌的发酵条件,且经等离子诱变进一步提高了菌株的产酶能力,为磷脂酶A1的生产和应用奠定了基础。 展开更多

关键词 磷脂酶A1 筛选 等离子体 诱变

原文传递

硅胶柱分离纯化发酵液中叶酸的工艺研究 被引量：1

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作者 刘艳 薛正莲 +2 位作者 胡刘秀 刘杉林 金花 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期304-306,309,共4页

采用硅胶柱层析法分离纯化产朊假丝酵母Y2.12发酵液,在考察洗脱剂种类、洗脱剂配比、上样液流速以及上样量这些单因素对叶酸分离效果的影响的基础上,通过响应面分析找出最优工艺参数。结果表明:产朊假丝酵母Y2.12发酵液分离纯化得到叶... 采用硅胶柱层析法分离纯化产朊假丝酵母Y2.12发酵液,在考察洗脱剂种类、洗脱剂配比、上样液流速以及上样量这些单因素对叶酸分离效果的影响的基础上,通过响应面分析找出最优工艺参数。结果表明:产朊假丝酵母Y2.12发酵液分离纯化得到叶酸的最佳工艺条件为:上样液流速为1.26mL/min,发酵液上样量为5.29mL,洗脱剂乙醇与氨水之比1.84:1,所提取的叶酸质量为(101.12±0.13)μg。 展开更多

关键词 硅胶柱 叶酸 分离 产朊假丝酵母 响应面分析

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利福霉素抗性突变菌Streptomyces sp.HS-NF-1046R中的两个新化合物 被引量：2

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作者 齐欢 马正 +5 位作者 薛正莲 阮海宁 高美越 张辉 俞晓平 王继栋 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期117-121,共5页

采用硅胶色谱、凝胶色谱及液相色谱分离纯化一株利福霉素抗性突变菌Streptomyces sp. HS-NF-1046R发酵物中的次级代谢产物,通过波谱技术鉴定了3个化合物:3-hydroxyl-2-N-propionyl-anthranilamide (1)、2,3-dihydro-8-hydroxy-2,2-dimet... 采用硅胶色谱、凝胶色谱及液相色谱分离纯化一株利福霉素抗性突变菌Streptomyces sp. HS-NF-1046R发酵物中的次级代谢产物,通过波谱技术鉴定了3个化合物:3-hydroxyl-2-N-propionyl-anthranilamide (1)、2,3-dihydro-8-hydroxy-2,2-dimethyl quinazolin-4-(1H)-one (2)和2-aminobenzamide (3),其中1和2是新化合物。通过SRB法评价新化合物的细胞毒活性,化合物1和2对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2、人结肠癌细胞HCT-116和白血病细胞K562的IC_(50)值均大于100μmol·L^(-1),未表现出明显的细胞毒性。 展开更多

关键词 链霉菌 利福霉素抗性筛选 次级代谢产物 结构解析

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