目的探讨hsa_circ_0018574在结直肠癌组织和人结肠癌HT29细胞系中的表达,以及其对结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法使用circPrimer1.2软件绘制circRNA序列结构示意图,用人circRNA芯片筛选在结直肠癌组织和癌旁组织中差异表达的circ...目的探讨hsa_circ_0018574在结直肠癌组织和人结肠癌HT29细胞系中的表达,以及其对结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法使用circPrimer1.2软件绘制circRNA序列结构示意图,用人circRNA芯片筛选在结直肠癌组织和癌旁组织中差异表达的circRNA,提取组织样本RNA,RT-qPCR检测hsa_circ_0018574在人结直肠肿瘤组织中的表达。将si-circ_0018574转染至人结肠癌HT29细胞,分别采用克隆集落形成实验、流式细胞仪、Western blot法检测CDK2、CDK4、CDK6以及cyclinD1和cyclinE周期蛋白表达。结果hsa_circ_0018574在人结直肠肿瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。si-circ_0018574能够明显抑制人结肠癌HT29细胞增殖,减少克隆形成以及降低细胞集落的形成能力(P<0.01),诱导肿瘤细胞凋亡(P<0.01)。CDK2、CDK4、CDK6以及cyclinD1和cyc l inE周期蛋白表达降低。结论hsa_circ_0018574在结直肠肿瘤中高表达,沉默circ_0018574能够显著抑制人结肠癌HT29细胞增殖,减少细胞分裂,诱导细胞凋亡。展开更多
目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖...目的探讨高三尖杉酯碱(HHT)对HT29人结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡调控的分子机制。方法用(0、0.0078125、0.015625、0.03125、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8)μg/m L HHT分别处理HT29细胞24、48、72 h。CCK-8法检测HT29细胞的增殖,集落形成实验检测细胞的集落形成能力;Hoechst33258染色观察染色质凝集情况,流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丙酮酸脱氢酶激酶(PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、雷帕霉素靶蛋白调节相关蛋白(raptor)、雷帕霉素不敏感的伴侣蛋白(rictor)的mRNA水平;Western blot法检测BAX、Bcl2、胱天蛋白酶3前体(pro-caspase-3)、裂解型caspase-3(c-caspase-3)、pro-caspase-9、裂解型caspase-9(c-caspase-9)、多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、裂解型PARP(c-PARP)、mTOR、raptor、rictor、PI3K、PDK1、AKT、p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比,HHT能抑制HT29细胞增殖,诱导细胞核破裂,染色质凝聚,凋亡小体形成;同时,HHT处理能够提高HT29细胞中BAX/Bcl2比值、caspase-3、caspase-9、raptor的mRNA水平,降低PI3K、AKT、rictor的mRNA水平;并上调HT29细胞中c-caspase-3、c-caspase-9、c-PARP、BAX、raptor蛋白水平,下调pro-caspase-3、pro-caspase-9、PARP、PI3K、PDK1、AKT、mTOR、rictor蛋白水平。结论 HHT能够通过阻断mTOR信号通路,进而抑制HT29人结直肠肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。展开更多
文摘目的探讨hsa_circ_0018574在结直肠癌组织和人结肠癌HT29细胞系中的表达,以及其对结直肠肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法使用circPrimer1.2软件绘制circRNA序列结构示意图,用人circRNA芯片筛选在结直肠癌组织和癌旁组织中差异表达的circRNA,提取组织样本RNA,RT-qPCR检测hsa_circ_0018574在人结直肠肿瘤组织中的表达。将si-circ_0018574转染至人结肠癌HT29细胞,分别采用克隆集落形成实验、流式细胞仪、Western blot法检测CDK2、CDK4、CDK6以及cyclinD1和cyclinE周期蛋白表达。结果hsa_circ_0018574在人结直肠肿瘤组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01)。si-circ_0018574能够明显抑制人结肠癌HT29细胞增殖,减少克隆形成以及降低细胞集落的形成能力(P<0.01),诱导肿瘤细胞凋亡(P<0.01)。CDK2、CDK4、CDK6以及cyclinD1和cyc l inE周期蛋白表达降低。结论hsa_circ_0018574在结直肠肿瘤中高表达,沉默circ_0018574能够显著抑制人结肠癌HT29细胞增殖,减少细胞分裂,诱导细胞凋亡。
