文摘【目的】研究转录因子RFX1对大鼠胰腺星状细胞LTC-14分泌细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的影响,并探究其分子机制。【方法】在LTC-14细胞中过表达Flag-RFX1质粒,并加入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导,通过western blotting检测Flag-RFX1对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化蛋白88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子κB-p65(nuclear factorκB-p65,NF-κB-p65)、磷酸化NF-κB-p65(phosphorylation of nuclear factorκB-p65,p-NF-κB-p65)、NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of nuclear factor kappa B alpha,IκBα)、磷酸化IκBα(phosphorylation of inhibitor of nuclear factor kappa B alpha,p-IκBα)蛋白表达的影响,ELISA检测ECM中Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(collagenⅢ,COL-Ⅲ)、纤连蛋白(fibronectin,FN)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌水平。在LTC-14细胞中浓度依赖性地过表达Flag-RFX1质粒,western blotting和ELISA实验检测上述因子的变化。【结果】LPS诱导的LTC-14细胞中TLR4、MyD88、p-NF-κB-p65、NF-κB-p65和IκBα蛋白表达水平均升高(P<0.05),p-IκBα蛋白表达水平降低(P<0.05),且Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN和TNF-α的分泌水平升高(P<0.05);而过表达Flag-RFX1质粒后,LPS诱导的LTC-14细胞中上述指标表达水平均逆转(P<0.05);并且,Flag-RFX1呈浓度依赖性地下调TLR4、MyD88、NF-κB-p65和IκBα的蛋白表达,上调p-IκBα的蛋白表达水平,浓度依赖性地抑制Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN和TNF-α的分泌。【结论】转录因子RFX1通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB-p65信号通路下调胰腺星状细胞分泌的ECM中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN和TNF-α的表达水平。
