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一种适用于PCR反应的酵母菌、无绿藻及丝状真菌DNA提取方法 被引量：28
1
作者 刘素玲 冉玉平 +4 位作者 曾蔚 张浩 代亚玲 李明远 贾文祥 《中国真菌学杂志》 2006年第6期340-342,共3页
目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(... 目的介绍一种从酵母、无绿藻及丝状真菌中提取DNA以用于PCR反应的方法。方法所用菌种包括临床分离的未知菌株和保藏菌株共23株:未知酵母菌(5株)、真皮毛孢子菌(1株)、糠秕马拉色菌(1株)、季也蒙念珠菌(5株)、未知丝状真菌(6株)、无绿藻(1株)、烟曲霉(2株)、拟青霉菌(1株)、茎点霉(1株)。用溶细胞酶(lyticase)结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA,A260/A280检测纯度并计算质量浓度,用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增真菌核糖体基因(rDNA)内转录间区ITS基因,经PCR扩增检验所提取的DNA质量。结果成功提取所有23株真菌基因组DNA,其纯度及质量浓度能满足PCR反应的要求。结论用溶细胞酶结合Biospin真菌基因组DNA提取试剂盒从酵母菌、无绿藻及丝状真菌提取的DNA可用于PCR反应。 展开更多
关键词 DNA提取 真菌 DNA提取试剂盒 溶细胞酶
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铜绿假单胞菌耐药性在生物被膜形成过程中的变化 被引量：19
2
作者 谢轶 杨维青 +5 位作者 贾文祥 程曦 曾蔚 杜艳 李学如 张再容 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期314-318,共5页
目的　研究铜绿假单胞菌遗传性耐药(gyrA基因突变和MexAB OprM主动外排)在生物被膜形成过程中对药物抗性的作用。方法　通过PCR技术鉴定gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株,利用三亲杂交的方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转到铜绿假单... 目的　研究铜绿假单胞菌遗传性耐药(gyrA基因突变和MexAB OprM主动外排)在生物被膜形成过程中对药物抗性的作用。方法　通过PCR技术鉴定gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株,利用三亲杂交的方法将绿色荧光蛋白(GFP)基因转到铜绿假单胞菌药物敏感株中,测定gyrA基因突变株、MexAB OprM主动外排株以及带有绿色荧光蛋白的铜绿假单胞菌在特氟隆上产生生物被膜耐药的规律。结果　筛选出gyrA基因突变株和MexAB OprM主动外排株。通过三亲杂交成功构建了带有pGFPuv质粒的铜绿假单胞菌。将突变株和敏感株培养在最低杀菌浓度(MBC)的环丙沙星溶液中形成生物被膜使菌株的存活率均在50%以上。结论　比较遗传性耐药和生物被膜耐药的作用表明gyrA基因突变和主动外排在生物被膜耐药形成前期发挥主要作用,当生物被膜完全形成之后,铜绿假单胞菌的耐药性有可能是由生物被膜介导的。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 生物被膜 形成过程 耐药性 GYRA基因突变 绿色荧光蛋白 基因突变株 主动外排 遗传性耐药 最低杀菌浓度 三亲杂交 膜耐药 药物抗性 技术鉴定 环丙沙星 敏感株 PCR 特氟隆 存活率
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启发式教学与学生创新能力的培养 被引量：20
3
作者 李婉宜 李虹 杨远 《西北医学教育》 2002年第4期237-238,共2页
为了培养高素质的医学人才,在基础医学教育中,必须加强对学生创新能力的培养,启迪学生的创造性思维.强化学生的自学创新意识,采用启发式教学是培养学生创新能力的主要措施.文中着重介绍了五种启发式教学法,均在教学实践中收到良好效果.
关键词 启发式教学 创新能力 医学微生物学 能力培养 医学教学
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2种纯化流感病毒方法的比较研究 被引量：11
4
作者 曹康 张卫东 +3 位作者 施桥发 李虹 蒋中华 李明远 《河北医科大学学报》 CAS 2005年第3期179-181,共3页
目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose density gradient centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorptionandrelease RBC,AR RBC)进行纯化,收集纯化病毒测... 目的比较2种纯化浓缩鸡胚尿囊液中流感病毒方法。方法将流感病毒鸡胚尿囊液分别采用蔗糖密度梯度离心法(sucrose density gradient centrifugation,SDGC)和红细胞吸附释放法(absorptionandrelease RBC,AR RBC)进行纯化,收集纯化病毒测定血凝效价,比较2种纯化方法。结果SDGC法纯化病毒可在30%和45%蔗糖层面交界处的区带中检测到流感病毒,血凝效价为1∶2560;用AR RBC法纯化病毒过程中用新鲜鸡红细胞出现了溶血现象,而用甲醛处理过的鸡红细胞则无此现象,血凝效价均为1∶2560。结论与SDGC法纯化病毒比较,AR RBC法是一种经济实用、操作简便并有较高纯化效率的方法,尤以甲醛处理过的鸡红细胞纯化效果最好。 展开更多
关键词 流感病毒A型 人 离心法 梯密度 红细胞吸附释放法 鸡胚
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QS系统中LasR和RhlR蛋白对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及免疫原性研究(英文) 被引量：13
5
作者 谢轶 曾蔚 +6 位作者 贾文祥 杨发龙 杨维青 程曦 康梅 王兰兰 张再容 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-38,共8页
为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全... 为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全自动荧光测序仪测序,并用 Blast 方法检测克隆片段. 利用 pGEX4T-1 载体分别构建 lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒,在大肠杆菌 BL21(DE3)中诱导表达,并经过免疫印迹实验验证其生物学活性. 用硅胶膜培养法建立生物被膜模型,诱导转入了pGFPuv 质粒的铜绿假单胞菌 PAG0305 形成生物被膜,并测定 LasR 蛋白和 RhlR 蛋白对生物被膜形成的影响. 同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率. 以 PAO1 染色体 DNA 为模板的 PCR 结果显示,lasR 的全基因序列为 720 bp,rhlR 基因序列为 726 bp,经序列分析和同源性比较分别与 GenBank 中 lasR/rhlR 基因(登录号:M59425; AE004768) 的同源性为 100%. 大肠杆菌 BL21 (DE3) 分别转化重组质粒 lasR/rhlR-pGEX4T-1 后,经 IPTG诱导和 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表达的融合蛋白分子质量均为 54 ku 左右,与预期蛋白质分子质量相同. 荧光显微镜观察和测定结果表明,在硅胶膜上 PAG0305 能够形成典型的发荧光的生物被膜,LasR 或 RhlR 蛋白 (10 mg/L) 存在的情况下,PAG0305 生物被膜的形成速度在前三天比对照组平均提高 40.77%,而且两蛋白单独存在与同时存在时的作用相同. 体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率显著高于未经免疫的正常组 (P < 0.05). 上述结果表明:构建的lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒能够在大肠杆菌 BL21(DE3)中成功地表达并具有生物学活性. LasR/RhlR 蛋白在体外模型中能够加快铜绿假单胞菌生物被膜的形成速度,是调节铜绿假单胞菌生物被膜形成的重要因素之一. 免疫结果表明,重组蛋白 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 数量感知系统 生物被膜 免疫原性
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鸭GAPDH基因实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10
6
作者 杨发龙 岳华 +1 位作者 谢秀兰 贾文祥 《西南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期92-95,共4页
本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、... 本研究旨在建立鸭GAPDH基因的real-time PCR技术,为鸭功能基因mRNA水平的定量分析提供有用的方法学基础.根据GenBank中鸭GAPDH基因的序列设计引物,建立了基于SYBR Green I染料技术的real-time PCR方法.结果表明,所建立的方法具有快速、高通量、线性范围广以及重复性强等特点.研究结果为鸭GAPDH作为内参基因用于鸭相关基因定量表达分析奠定了基础. 展开更多
关键词 鸭 GAPDH基因 REAL-TIMEPCR 内参基因
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维生素C对病毒灭活中血浆蛋白活性的保护效应 被引量：11
7
作者 李燕 李明远 +1 位作者 蒋仁举 贾文祥 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第2期392-396,共5页
本研究探测在亚甲蓝(methyleneblue,MB)光化学法处理单份血浆过程中,加入维生素C(vitamineC,VitC)是否影响病毒的灭活效果,是否对血浆蛋白活性成分具有保护作用。用水泡性口炎病毒(vesicularstomatitisvi-rus,VSV)作为指示病毒,在人血... 本研究探测在亚甲蓝(methyleneblue,MB)光化学法处理单份血浆过程中,加入维生素C(vitamineC,VitC)是否影响病毒的灭活效果,是否对血浆蛋白活性成分具有保护作用。用水泡性口炎病毒(vesicularstomatitisvi-rus,VSV)作为指示病毒,在人血浆中加入不同浓度VitC和终浓度为1μmol/L的亚甲蓝,应用40000lx荧光强度照射并于不同时间取样检测。以细胞病变效应评价对VSV的灭活效果,用RT-PCR检测病毒核酸的变化,并采用Clauss法、一期法和微量免疫电泳等方法对亚甲蓝光化学法处理前后的血浆蛋白含量和活性进行分析。结果发现,VSV血浆在加入240μmol/LVitC并经MB-光照60分钟后,病毒滴度下降>8lgTCID50/ml;RT-PCR法也检测不到病毒核酸;血浆中的纤维蛋白原和凝血因子Ⅷ的回收率分别为83.55%和81.67%,与不加VitC进行亚甲蓝光化学法处理结果相比有显著提高(P<0.05);微量免疫电泳显示,血浆中的大部分蛋白成分含量没有明显改变,免疫原性也未受到明显影响。结论:血浆中加入一定量的VitC不仅不影响亚甲蓝光化学法对病毒的灭活效果,而且有效地保护了血浆蛋白活性成分,因此VitC可作为亚甲蓝光化学法处理血浆时的保护剂,能有效地提高单份新鲜冷冻血浆的质量。 展开更多
关键词 维生素C 亚甲蓝光化学法 病毒灭活 血浆蛋白
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噬菌体治疗细菌感染的研究进展 被引量：11
8
作者 秦天呈 姚彬 +3 位作者 王文 滕燕 孟俊杰 曾蔚 《四川生理科学杂志》 2012年第2期85-87,共3页
噬菌体自二十世纪早期被发现以来,一直被用于细菌感染的治疗,但由于高效抗生素的发现和利用,针对噬菌体的研究被日益冷落。直至二十世纪末,全世界因为抗生素的滥用导致细菌耐药的问题日趋严重,抗感染药物的开发开始步入困境,噬菌体的研... 噬菌体自二十世纪早期被发现以来,一直被用于细菌感染的治疗,但由于高效抗生素的发现和利用,针对噬菌体的研究被日益冷落。直至二十世纪末,全世界因为抗生素的滥用导致细菌耐药的问题日趋严重,抗感染药物的开发开始步入困境,噬菌体的研究才重新得到了世界各国科学家和研究者的关注。而今,有关噬菌体治疗的研究已经取得了一定的进展,随着噬菌体治疗领域的研究不断深入,噬菌体应用于临床的可能性的逐步提高,噬菌体的应用技术逐步地走向成熟,都能看出噬菌体作为新型抗感染生物制剂的光明前景。 展开更多
关键词 噬菌体治疗 抗感染
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GFP质粒DNA/阳离子脂质体复合物的制备及其体外表达 被引量：6
9
作者 刘莉 贾文祥 +6 位作者 毛咏秋 雷松 于波涛 乔小蓉 陈恬 李学如 杨远 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期161-164,共4页
目的　为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的 DNA投递系统。方法　采用逆向蒸发法 ,用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒 p EGFPC1,对三种不同DNA加入量所形成的 DNA/脂质体复... 目的　为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的 DNA投递系统。方法　采用逆向蒸发法 ,用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒 p EGFPC1,对三种不同DNA加入量所形成的 DNA/脂质体复合物的微球形、包封率、电荷性、转染真核细胞的效果以及对细胞的毒性作用进行初步检测研究。结果　所获得的 DNA/脂质体复合物呈球形、平均粒径为 5 6 2 nm;包封率达 5 5 %～ 6 5 % ,为阳离子脂质体 ;都能有效转染真核细胞 ,但转染效率有差异 ,DNA/脂质体混悬液中 DNA含量、混悬液的加入量以及细胞的作用时间 ,都对细胞毒性有不同程度的影响。结论　该方法可作为提高基因免疫效果的简单、经济。 展开更多
关键词 逆向蒸发法 阳离子脂质体 包封 质粒DNA
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鼠β-防御素2(mBD2)真核表达质粒的构建及稳定表达株的鉴定 被引量：7
10
作者 魏晓丽 施桥发 +3 位作者 李虹 李婉宜 蒋忠华 李明远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期28-31,共4页
目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩... 目的:对小鼠β防御素-2(mBD2)基因进行克隆,构建其真核表达载体,筛选出稳定表达细胞株,并研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤机制。方法:通过向BALB/c小鼠腹腔注射内毒素(LPS),建立小鼠急性时相反应,取其肺组织提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增小鼠mBD2基因,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后插入相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体,对其进行酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2转染SiHa细胞,采用G418进行稳定表达株的筛选,用免疫荧光染色和RT-PCR鉴定细胞内mBD2蛋白表达情况。结果:提取小鼠肺组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增了250bp左右的产物,通过EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)/mBD2。SiHa被该质粒转染后,在100mg/LG418浓度下筛选20d,得到了稳定表达mBD2的细胞株,用免疫荧光染色显示mBD2蛋白在胞质中有大量表达,RT-PCR反应扩增到了mBD2的mRNA。结论:成功地构建了pcDNA3.1(+)/mBD2真核表达质粒,mBD2蛋白在SiHa细胞中能稳定表达,这些结果为进一步深入研究mBD2的生物学特性及其抗肿瘤的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 mBD2 真核表达 免疫荧光 RT-PCR
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铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因在生物被膜的表达 被引量：7
11
作者 杨维青 石磊 +4 位作者 程曦 谢轶 曾蔚 杨发龙 贾文祥 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期565-568,共4页
目的研究携带类整合子的铜绿假单胞菌在浮游状态和生物被膜状态类整合酶基因(intI1)mRNA的表达水平,探讨生物被膜中整合子相关的基因转移的分子机制。方法采用竞争RT-PCR方法定量检测intI1在两株临床分离的铜绿假单胞菌(PA10和PA39)生... 目的研究携带类整合子的铜绿假单胞菌在浮游状态和生物被膜状态类整合酶基因(intI1)mRNA的表达水平,探讨生物被膜中整合子相关的基因转移的分子机制。方法采用竞争RT-PCR方法定量检测intI1在两株临床分离的铜绿假单胞菌(PA10和PA39)生物被膜菌和浮游菌中mRNA的表达水平。首先用PCR方法从类整合子阳性铜绿假单胞菌全基因组DNA中扩增竞争体DNA(cDNA),再以cDNA为模板体外转录合成竞争体RNA(cRNA);再将不同稀释度的cRNA分别与铜绿假单胞菌的浮游菌和生物被膜菌的总RNA提取物进行竞争RT-PCR,产物经电泳分析,以已知cRNA的量确定待测样本中intI1mRNA的表达量。结果两株铜绿假单胞菌在其浮游状态和生物被膜状态都有intI1mRNA表达;两菌的浮游菌和生物被膜菌intI1mRNA表达量分别近似相等;但两菌生物被膜菌intI1mRNA的表达量都较其浮游菌高(约15倍)。结论铜绿假单胞菌在生物被膜状态下类整合子intI1mRNA的表达上调是耐药性广泛传递和多重耐药性形成的可能原因之一。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 生物被膜 整合子 整合酶 竞争RT-PCR
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藏药紫金标抗HSV-1的作用机理研究 被引量：6
12
作者 陈恬 贾文祥 +8 位作者 杨发龙 谢轶 杨维青 曾蔚 张再容 李晖 蒋思萍 央珍 陈金瑞 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期882-886,共5页
目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV 1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV 1感染的Vero细胞 ,以 5 0 %组织细胞感染量 (TCID50 ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交... 目的 :探讨紫金标抗单纯疱疹Ⅰ型病毒 (HSV 1)的作用及机理 ,为进一步开发该药提供理论依据。方法 :采用不同剂量的紫金标作用于适量HSV 1感染的Vero细胞 ,以 5 0 %组织细胞感染量 (TCID50 ) ,细胞病变效应(CPE) ,MTT法和核酸分子杂交作为评价指标。结果 :MTT法测得紫金标的 5 0 %抑制浓度 (IC50 )为 2 9.4 6mg·L-1,5 0 %中毒浓度 (TC50 )为 10 77mg·L-1,治疗指数 (TI)为 36 .5 6 ,结果表明紫金标有明显抑制HSV 1的作用 ,其作用强度和有效时间与药物浓度成正比。紫金标无直接灭活HSV 1的作用 ,也不能影响病毒的释放 ;但可干扰HSV 1对宿主细胞的吸附。不同浓度的紫金标能明显抑制HSV 1gD基因复制和mRNA表达。结论 :紫金标具有显著的抗HSV 1的作用 ,能抑制HSV 1对宿主细胞的吸附以及抑制HSV 展开更多
关键词 HSV-1 MTT法 藏药 感染 宿主细胞 抑制 作用强度 浓度 适量 作用机理
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流感病毒诱导肿瘤细胞凋亡及其机制的研究 被引量：5
13
作者 李虹 李华林 +5 位作者 李婉宜 肖丽英 蒋中华 李明远 汪晓东 张林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期409-412,共4页
目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝... 目的　观察流感病毒对肿瘤细胞是否具有凋亡诱导作用 ,并进一步研究 Fas L 在此过程中的作用。方法　流感病毒以 2 0 m.o.i.感染 Hela、Raji、SMMC- 772 1和 SPC- A- 1等肿瘤细胞 ,于诱导后不同时间观察细胞超微结构改变 ,DNA琼脂糖凝胶电泳检测梯状条带 ,PI染色流式细胞仪检测细胞 DNA含量 ,Annexin- V FITC/ PI流式细胞仪进行凋亡定量分析 ,并用生物素 -亲和素 EL ISA测定流感病毒诱导后细胞培养上清中 s Fas L 浓度的变化。结果　经流感病毒诱导后 ,四种肿瘤细胞均显示凋亡的形态学改变 ,细胞 DNA电泳出现梯状条带 ,流式细胞仪测定表明细胞凋亡率增高 ,且显示一定的时间效应 ;在上述过程中 ,细胞培养上清中 s Fas L 浓度有明显增高。结论　流感病毒可诱导上述肿瘤细胞发生凋亡 ,其发生机制可能与 Fas L 展开更多
关键词 流感病毒 诱导 肿瘤细胞 细胞凋亡 PI染色流式细胞仪
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荧光定量PCR法检测不同状态下铜绿假单胞菌intⅠ1基因的表达 被引量：6
14
作者 刘蓉 杨莉莉 +4 位作者 罗必蓉 唐玲 蒋宏 刘继芬 李明远 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期33-36,共4页
目的检测铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1基因)在生物膜状态和浮游状态表达水平的差异,探讨整合子的作用机制。方法对3株Ⅰ类整合酶阳性的铜绿假单胞菌分别进行液相培养和生物膜细菌培养,常规方法提取3株细菌两种生长状态的总RNA。... 目的检测铜绿假单胞菌Ⅰ类整合酶基因(intⅠ1基因)在生物膜状态和浮游状态表达水平的差异,探讨整合子的作用机制。方法对3株Ⅰ类整合酶阳性的铜绿假单胞菌分别进行液相培养和生物膜细菌培养,常规方法提取3株细菌两种生长状态的总RNA。采用荧光定量PCR(FQ-PCR)法,以细菌的16srRNA为内参照,分别测定菌株SW07、R07和TH12的浮游细菌和生物膜细菌intⅠ1mRNA的相对表达量,比较3株菌在两种状态下intⅠ1mRNA的表达水平。结果3株铜绿假单菌的生物膜细菌和浮游细菌都检测到intⅠ1基因的表达。3株菌在两种状态下intⅠ1mRNA的表达量不同,生物膜细菌intⅠ1基因的表达水平较高,其中菌株R07、SW07和TH12的生物膜细菌intⅠ1mRNA的表达量分别较浮游细菌高1.4、5.7和128倍。结论在生物膜状态下,铜绿假单胞菌intⅠ1基因的表达上调,本实验结果提示整合子在生物膜细菌中可进行更加活跃的基因盒捕获和积累,整合子和细菌生物膜的形成是导致细菌对抗生素耐药的重要机制。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 生物膜 intⅠ 1基因 荧光定量PCR
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幽门螺杆菌体外培养影响因素探讨 被引量：6
15
作者 邝玉 杨远 +2 位作者 李婉宜 李明远 杨靖 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2013年第7期595-597,共3页
目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空... 目的探索影响幽门螺杆菌体外培养的影响因素。方法观察不同培养时间幽门螺杆菌的菌落特点和细菌形态特点,确定幽门螺杆菌的最佳培养时间;通过SYTO9/PI核酸染料对暴露于空气中不同时间的幽门螺杆菌进行死活菌的染色,估计幽门螺杆菌在空气中的存活时间。结果培养3d的幽门螺杆菌菌落为针尖大小、形态为典型弯曲杆菌,培养超过3d的幽门螺杆菌菌落直径可达1mm,菌体形态多为球型;荧光染色检查显示,暴露在空气中的幽门螺杆菌随着暴露时间的延长逐渐死亡,4h后几乎全部死亡。结论幽门螺杆菌体外培养最佳培养时间为3d,且菌体形态典型。幽门螺杆菌暴露于空气中的存活时间≤4h。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 培养 荧光染色
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鸭疱疹病毒1型实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：4
16
作者 杨发龙 贾文祥 +3 位作者 谢轶 曾蔚 杨维青 岳华 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期801-803,813,共4页
目的 建立检测鸭疱疹病毒1型（鸭瘟病毒）的实时荧光定量PCR方法，为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法 根据病毒DNA聚合酶基因的序列，设计引物和探针，采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR，用含有125bp扩... 目的 建立检测鸭疱疹病毒1型（鸭瘟病毒）的实时荧光定量PCR方法，为快速诊断、致病机理研究及抗病毒药物筛选等奠定基础。方法 根据病毒DNA聚合酶基因的序列，设计引物和探针，采用TaqMan探针技术进行实时荧光定量PCR，用含有125bp扩增产物的pMD18-T载体质粒为阳性对照，构建标准曲线，对该方法的特异性、可重复性、敏感性进行评价，同时与传统PCR方法进行比较研究。结果 标准曲线表明在2．3×10^5～2．3×10拷贝数之间有很好的线性关系（r=0．999）；实时荧光定量PCR最少可检测到23个阳性质粒，说明有很好的敏感性；试验内及试验间变异系数分别为1．22～6．69以及2．09～8．84，说明有较好的重复性；对非鸭瘟病毒DNA无扩增，说明有很好的特异性；在对病毒DNA的检测方面，比传统PCR的敏感性高出10^4倍。结论 成功建立了针对鸭瘟病毒的特异、敏感、重复性强且可准确定量的实时荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 鸭疱疹病毒1型 鸭瘟 实时荧光定量PCR TAQMAN
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肾移植患者皮肤脓肿分离出糠秕马拉色菌1例报道 被引量：4
17
作者 赵红梅 冉玉平 +5 位作者 蒋献 曾蔚 熊琳 代亚林 杜小平 杨果 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期143-146,共4页
报道 1例从肾移植患者腹股沟脓肿中分离出糠秕马拉色菌 ,并通过实验研究其致病性。患者男性 ,33岁 ,因发热伴右侧腹股沟炎性结节 1周入院。3年前曾接受肾移植 ,术后持续使用免疫抑制剂。入院后多种广谱抗生素治疗无效 ,结节破溃形成脓... 报道 1例从肾移植患者腹股沟脓肿中分离出糠秕马拉色菌 ,并通过实验研究其致病性。患者男性 ,33岁 ,因发热伴右侧腹股沟炎性结节 1周入院。3年前曾接受肾移植 ,术后持续使用免疫抑制剂。入院后多种广谱抗生素治疗无效 ,结节破溃形成脓肿及深溃疡。脓液及坏死组织培养有酵母样菌落生长 ,菌落涂片镜下见卵形出芽孢子 ,转种后仅在含菜子油的培养基生长 ,各分离株均鉴定为糠秕马拉色菌。将菌悬液经尾静脉注入免疫抑制的小鼠3d后可引起内脏器官的微脓肿和炎性反应 ,病灶中可见出芽孢子 ,透射电镜观察发现其细胞壁内侧有马拉色菌属特有的锯齿状结构。抗真菌治疗采用氟康唑内服和两性霉素 B外敷 ,分离株在治疗前对氟康唑和两性霉素 B均敏感 ,抗真菌治疗后的分离株仅对两性霉素 B敏感。本例报道提示糠秕马拉色菌可引起深部感染。 展开更多
关键词 糠秕马拉色菌 脓肿 肾移植
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癌症新策略—let-7 microRNA家族 被引量：6
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作者 张强 李明远 《西部医学》 2009年第7期1210-1212,共3页
microRNA是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点。let-7基因编码的stRNA则被认为是miRNA的代表,最近的研究发现,let-7 miRNA在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过... microRNA是近年发现的一类单链小分子RNA,对它的研究已成为一个新的热点。let-7基因编码的stRNA则被认为是miRNA的代表,最近的研究发现,let-7 miRNA在细胞内影响着基因的表达调控,在疾病发生中起着及极重要的作用,尤其是在肿瘤的发展过程中,let-7 miRNA扮演着不可替代的角色。本文介绍let-7 miRNA在肿瘤中作用机制的最新研究进展。 展开更多
关键词 LET-7 MIRNA 肿瘤 基因调控
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西多福韦对HPV18阳性人宫颈癌HeLa细胞的凋亡作用及机制研究 被引量：5
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作者 李淑芹 杨靖 +7 位作者 李蓓 廖华帆 张凯 杨兵 李丹丹 徐祥 丁娜娜 李明远 《西部医学》 2017年第5期598-603,共6页
目的以抗肿瘤药物顺铂(Cisplatin,DDP)为阳性对照,研究抗病毒药物西多福韦(Cidofovir,CDV)对宫颈癌HPV18阳性HeLa细胞的凋亡现象和凋亡机制,探讨CDV在预防人乳头瘤病毒(HPV)感染和治疗宫颈癌方面的潜力和应用价值。方法利用流式细胞仪观... 目的以抗肿瘤药物顺铂(Cisplatin,DDP)为阳性对照,研究抗病毒药物西多福韦(Cidofovir,CDV)对宫颈癌HPV18阳性HeLa细胞的凋亡现象和凋亡机制,探讨CDV在预防人乳头瘤病毒(HPV)感染和治疗宫颈癌方面的潜力和应用价值。方法利用流式细胞仪观察DAPI单染后HeLa细胞中凋亡细胞的形态及数目;利用Western blotting技术分析HeLa细胞中E6、p53蛋白相对表达情况;利用免疫荧光技术研究HeLa细胞中p53蛋白的亚细胞定位情况。结果流式细胞检测显示CDV和DDP能明显抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,使细胞周期阻滞在S期并引发细胞凋亡;Western Blotting结果显示CDV和DDP抑制HeLa细胞中E6蛋白表达,激活p53蛋白表达;细胞免疫荧光结果显示CDV和DDP可以抑制E6对p53的核输出。结论 CDV和DDP可抑制HeLa细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;降低E6蛋白表达,恢复p53蛋白活性,进而调控细胞周期阻滞和细胞凋亡,因而CDV有可能成为宫颈癌治疗的新策略。 展开更多
关键词 宫颈癌 人乳头瘤病毒 HELA细胞 西多福韦 顺铂 细胞凋亡
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IL-18-PE38重组免疫毒素的原核表达及其鉴定 被引量：4
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作者 李虹 李明远 +2 位作者 蒋忠华 吕梅励 张林 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期753-756,共4页
目的　构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法　首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组... 目的　构建绿脓杆菌外毒素 PE38融合鼠 IL - 18基因的原核表达载体并鉴定其表达。方法　首先采用 RT- PCR获得小鼠 IL - 18基因 ,再通过适当的酶切及连接反应 ,构建小鼠 IL - 18与 PE38融合基因的原核表达载体 PRKL - IL 18- PE38,重组载体经限制性内切酶、PCR及 DNA序列测定等证实连接片段的正确性后 ,再转染感受态大肠杆菌 BL 2 1,经 IPTG诱导表达 ,表达产物用 SDS- PAGE和蛋白免疫印迹法分别测定其相对分子质量及特异性。结果　酶切分析、PCR鉴定和 DNA测序等证实 ,IL - 18- PE38免疫毒素的原核表达载体被成功构建 ,重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达 ,表达产物的相对分子质量与预期值一致 ,且所表达蛋白可被抗 IL - 18的特异性抗体所识别。结论　 IL - 18- PE38融合基因原核表达载体的获得 ,为进一步研究其对 Th1细胞的靶向细胞毒性及临床应用奠定了基础。 展开更多
关键词 IL-18 绿脓杆菌外毒素 重组免疫毒素 原核表达
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