四川主要养猪地区猪2型链球菌血清流行病学调查 被引量：6

1

作者 徐魁 王巍 +5 位作者 文心田 黄小波 伍锐 文翼平 赵勤 曹三杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期370-373,共4页

为了解近年来四川主要养猪地区猪群猪2型链球菌(S.suis 2)的流行情况,本研究利用ELISA抗体检测试剂盒对来自四川地区15个市(区)526份猪血清样品进行S.suis 2血清流行病学调查。四川地区猪群血清调查的总阳性检出率为40.30%(212/526);按... 为了解近年来四川主要养猪地区猪群猪2型链球菌(S.suis 2)的流行情况,本研究利用ELISA抗体检测试剂盒对来自四川地区15个市(区)526份猪血清样品进行S.suis 2血清流行病学调查。四川地区猪群血清调查的总阳性检出率为40.30%(212/526);按地区分析,15个市(区)S.suis 2检出阳性率的地区占86.67%(13/15),其中阳性检出率超过50%地区占46.67%(7/15),宜宾地区的阳性检出率高达78.57%(11/14);按猪场分析,四川地区猪场S.suis 2阳性检出率高达76.74%(33/43),其中规模化猪场阳性检出率较高,为81.81%(18/22);在母猪、保育猪和育肥猪的猪群血清中,种母猪阳性检出率最高,为76.28%(74/97);并且夏季的阳性检出率最高,为46.81%(110/235)。研究表明S.suis 2在四川主要养猪地区普遍存在,并且在部分养猪区域、规模化猪场及种母猪猪群中存在较大的流行风险。本研究对四川主要养猪地区S.suis 2的流行和预防提供了调查依据。 展开更多

关键词 猪2型链球菌 四川 流行病学调查 ELISA

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猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因的截短表达及间接ELISA检测方法的建立 被引量：6

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作者 邓静 袁明铭 +4 位作者 文心田 黄小波 曹三杰 文翼平 伍锐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期734-741,共8页

为对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的M蛋白进行截短原核表达并建立ELISA检测方法,设计引物扩增了含M基因抗原位点的基因片段,并构建了原核表达载体pET-32a-dM;将pET-32a-dM转化大肠杆菌Rosetta(DE3),获得了高效表达,表达产物大小为27k... 为对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的M蛋白进行截短原核表达并建立ELISA检测方法,设计引物扩增了含M基因抗原位点的基因片段,并构建了原核表达载体pET-32a-dM;将pET-32a-dM转化大肠杆菌Rosetta(DE3),获得了高效表达,表达产物大小为27ku。蛋白免疫印迹结果显示,该重组蛋白具有良好的抗原活性。以重组蛋白为抗原建立了间接ELISA检测方法,方阵滴定试验确定重组蛋白抗原的最佳包被质量浓度为13.07μg/mL,血清稀释度为1∶80,酶标抗体1∶4 000稀释。阳性判定标准确立为D450nm≥0.3,反之则判为阴性。建立的ELISA与猪乙型脑炎病毒、胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌的阳性血清均无交叉反应,说明它特异性好。批内与批间重复性试验的平均变异系数分别为3.53%及6.82%,说明重复性较好。用该方法检测52份血清,特异性为87.5%,敏感性为90.0%,与商品化ELISA试剂盒的符合率为88.5%。本研究结果表明,截短表达的M蛋白可以作为诊断抗原,建立的ELISA方法完善后可用于PRRSV抗体的检测。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M蛋白 原核表达 间接ELISA

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四川省部分地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及espp2基因序列分析 被引量：4

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作者 魏兴良 董敏 +9 位作者 张禄滑 丁玲强 赖陆叶 闫雪锋 余敏 文翼平 文心田 黄小波 伍锐 曹三杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期42-49,共8页

为了解四川省副猪嗜血杆菌病的流行情况及分析分离株espp2基因,本试验从2013年8月到12月分离该菌并扩增其espp2基因进行序列分析。结果显示,分离到12株副猪嗜血杆菌,镜检发现为革兰阴性短杆菌;卫星试验表明分离株在金黄色葡萄球菌周围... 为了解四川省副猪嗜血杆菌病的流行情况及分析分离株espp2基因,本试验从2013年8月到12月分离该菌并扩增其espp2基因进行序列分析。结果显示,分离到12株副猪嗜血杆菌,镜检发现为革兰阴性短杆菌;卫星试验表明分离株在金黄色葡萄球菌周围产生卫星现象;生化试验显示分离株发酵葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、果糖、木糖、甘露醇、山梨醇、尿素、D-核糖和精氨酸水解酶;PCR鉴定发现均扩增到约821bp的目的片段。药敏试验显示分离株对氟苯尼考、先锋霉素V、阿莫西林、强力霉素和环丙氟哌酸敏感。扩增SC-1和12株分离株的espp2基因并测序,测序结果与GenBank公布的副猪嗜血杆菌SH0165、ZJ0906和Nagasaki的espp2基因共计16条序列进行比对发现相似性大于98%,这16条序列编码的氨基酸序列相似性大于97%,表明副猪嗜血杆菌espp2基因变异度低,较保守。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 分离 鉴定 espp2基因 序列分析

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RT-PCR-RFLP方法鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒 被引量：3

4

作者 张亮 田耕 +7 位作者 石双艳 袁磊 刘澣扬 黄小波 伍锐 文心田 文翼平 曹三杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1555-1560,共6页

建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消... 建立一种可检测及鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本脑炎病毒(JEV)的RT-PCR-RFLP方法。通过对JEV基因Ⅰ型(GⅠ)和基因Ⅲ型(GⅢ)核酸序列的比对分析,设计1对特异性引物对JEV C-PrM-E区域部分基因进行RT-PCR扩增,扩增产物经限制性内切酶SpeⅠ消化后于15g·L-1琼脂糖凝胶电泳进行RFLP分析,并利用建立的RT-PCR-RFLP方法对78份临床样品进行了JEV的检测及基因型鉴定。结果显示,特异性引物可扩增出长为819bp的片段,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病毒的核酸扩增结果均为阴性。经SpeⅠ酶切,基因Ⅰ型JEV RT-PCR产物被切为568和251bp 2个条带,基因Ⅲ型JEV RT-PCR产物被切为446、251和122bp 3个条带,基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV混合RT-PCR产物被切为568、446、251和122bp 4个条带,该方法最低可检出1.5pg·μL-1的JEV RNA。RT-PCR-RFLP结果显示78份临床样品中有14份为JEV阳性,其中6份为基因Ⅰ型,8份为基因Ⅲ型,与核苷酸测序分析结果一致。本研究为日本脑炎病毒的实验室诊断及基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的鉴别提供了一种快速有效的分子生物学方法。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 反转录-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别

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日本脑炎病毒基因Ⅰ型与Ⅲ型复合RT-PCR鉴别方法的建立 被引量：2

5

作者 张亮 刘澣扬 +6 位作者 石双艳 袁磊 伍锐 黄小波 文翼平 文心田 曹三杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期419-424,共6页

为建立一种简单快捷的鉴别日本脑炎病毒(JEV)基因Ⅰ型与基因Ⅲ型的方法,根据基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的保守序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1、P3和P2、P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应... 为建立一种简单快捷的鉴别日本脑炎病毒(JEV)基因Ⅰ型与基因Ⅲ型的方法,根据基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的保守序列,分别设计合成了针对基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV的RT-PCR引物P1、P3和P2、P3,以JEV SA14-14-2和CZ1株的核酸提取液为模板,通过对反应体系及条件的优化,建立了一种可快速鉴别JEV基因Ⅰ型与Ⅲ型的复合RT-PCR方法,并用建立的方法对27份临床样品进行了检测。结果显示,以设计合成的引物进行复合RT-PCR扩增,得到与基因Ⅰ型JEV预期相符的381bp的特异性条带,得到与基因Ⅲ型JEV预期相符的550bp的特异性条带,而对猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒及猪伪狂犬病病毒核酸的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,该方法对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型JEV的最小检出量分别为1.0pg/μL和10pg/μL。利用建立的复合RT-PCR方法对27份临床样品进行检测,结果5份为基因Ⅰ型,2份为Ⅲ型,与核苷酸序列分析结果一致。结果表明,建立的复合RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于检测及鉴别基因Ⅰ型与基因Ⅲ型JEV。 展开更多

关键词 日本脑炎病毒 复合RT-PCR 基因Ⅰ型 基因Ⅲ型 鉴别

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JEV入侵BHK-21细胞内吞途径的初步研究 被引量：1

6

作者 曹三杰 黄恒 +3 位作者 刘凯 石双艳 黄小波 文心田 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期766-770,共5页

目的利用Real-time RT-PCR技术研究,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究。方法选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径和巨胞饮途径,然后进行JEV感染实... 目的利用Real-time RT-PCR技术研究,对乙型脑炎病毒入侵细胞的内吞途径进行初步研究。方法选用氯丙嗪、制霉菌素和细胞松弛素D3种药物分别处理细胞,以分别阻滞网格蛋白介导内吞途径、细胞膜穴样内陷途径和巨胞饮途径,然后进行JEV感染实验,通过Real-time RT-PCR方法测定感染后1h、12h、24h细胞内的病毒拷贝数。结果与仅实施感染实验、未进行药物处理的对照组比较,3种药物处理组的细胞内病毒拷贝数在感染后各时相点均呈现不同程度的下降,在感染1h、12h和24h后,氯丙嗪处理组细胞内病毒拷贝数分别下降了59.58%,53.34%和61.35%;细胞松弛素D组细胞内病毒拷贝数分别下降了23.59%,30.77%和30.14%;制霉菌素组细胞内病毒拷贝数分别下降了35.56%,34.40%和34.40%。结论乙型脑炎病毒主要利用网格蛋白介导内吞途径进入BHK-21细胞。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 实时荧光定量RT—PCR 内吞途径

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日本乙型脑炎病毒PrMΔE与tPA信号肽融合基因DNA疫苗的研究

7

作者 刘凯 孟丽军 +3 位作者 张亮 黄小波 文心田 曹三杰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期351-357,共7页

采用RT-PCR和重叠PCR方法分别扩增出日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因和tPA信号肽序列,并将其插入载体pVAX1,将纯化后的重组质粒转染COS-7细胞,用间接免疫荧光法检测质粒在细胞中的瞬时表达情况,并用制备的质粒免疫昆明小鼠,检测其特异性血清... 采用RT-PCR和重叠PCR方法分别扩增出日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因和tPA信号肽序列,并将其插入载体pVAX1,将纯化后的重组质粒转染COS-7细胞,用间接免疫荧光法检测质粒在细胞中的瞬时表达情况,并用制备的质粒免疫昆明小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平、促脾淋巴细胞增长率及攻毒保护率。结果显示,真核表达质粒pVAX-tPA-PrMΔE构建成功;间接免疫荧光试验显示,该质粒在COS-7细胞中的表达产物可与鼠抗日本乙型脑炎病毒单克隆抗体发生特异性反应,tPA信号肽序列能明显增强PrMΔE基因DNA疫苗的免疫原性,显著提高小鼠的体液免疫和细胞免疫水平,能强有力地抵抗强毒株CZ-1的攻击。结果表明,成功构建了日本乙型脑炎病毒PrMΔE基因与tPA信号肽序列融合基因DNA疫苗(pVAX-tPA-PrMΔE),为日本乙型脑炎病毒基因工程疫苗的进一步研究及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 日本乙型脑炎病毒 PrMΔE基因 tPA信号肽序列 DNA疫苗 免疫原性

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副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白的表达及其免疫原性分析

8

作者 张飞 都启晶 +3 位作者 张洋溢 文心田 黄小波 曹三杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期621-630,共10页

运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAG... 运用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌SC-1株荚膜多糖输出蛋白(CPEP)基因,克隆至pMD-19T载体。经鉴定测序验证后,将获得的CPEP基因克隆至pET-32a(+)原核表达载体,构建原核表达质粒pET-32a-CPEP,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行SDS-PAGE以及Western blot分析免疫原性,纯化CPEP,并用纯化的蛋白免疫小鼠,检测其特异性血清IgG抗体水平及攻毒保护率。结果显示,成功构建原核表达质粒pET-32aCPEP;SDS-PAGE分析结果显示,得到约35ku的蛋白;Western blot分析显示,CPEP能与Hps SC-1阳性血清发生抗原抗体的特异性反应,证实该重组CPEP蛋白具有反应原性。以致死剂量的强毒株SC-1攻毒CPEP免疫小鼠,重组蛋白的免疫能够减缓发病,并表现出40%的保护率。重组蛋白CPEP的部分保护作用表明其可以作为免疫候选因子,为未来副猪嗜血杆菌标准化疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 荚膜多糖输出蛋白基因 克隆表达 免疫原性

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猪肺疫病的诊断与防治

9

作者 李晓峰 周于用 +1 位作者 郑振宇 张怡磊 《河南畜牧兽医（综合版）》 2016年第4期44-45,共2页

猪肺疫病是由多杀性巴氏杆菌感染肺部所引起的疾病。近几年来，猪肺疫病的发病率呈下降的趋势，一些基层兽医工作者忽视了对该病的免疫预防，从而导致了猪肺疫病时有发生。

关键词 肺疫病 猪 防治 诊断 巴氏杆菌感染 兽医工作者 免疫预防 多杀性

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猪肺疫病的诊断与防治

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作者 李晓峰 周于用 +1 位作者 郑振宇 张怡磊 《当代畜牧》 2016年第4期8-9,共2页

2015年10月31日,河南省驻马店市西平县某猪场饲养的40日龄长白品种猪只发生以咳嗽、体温异常升高、食欲不振、呼吸急促、精神萎靡等为症状的疾病。根据发病情况、临床表现、病理变化、实验室检查等综合判断,确诊为猪肺疫病。通过积极治... 2015年10月31日,河南省驻马店市西平县某猪场饲养的40日龄长白品种猪只发生以咳嗽、体温异常升高、食欲不振、呼吸急促、精神萎靡等为症状的疾病。根据发病情况、临床表现、病理变化、实验室检查等综合判断,确诊为猪肺疫病。通过积极治疗,病情得到有效控制。 展开更多

关键词 猪肺疫:诊断 治疗

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一起疑似猪伪狂犬病与猪瘟混合感染的检测分析

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作者 李晓峰 周于用 +1 位作者 郑振宇 张怡磊 《当代畜牧》 2016年第3期41-44,共4页

笔者对一起临床症状、病理变化疑似猪伪狂犬病与猪瘟混合感染的病例进行实验室诊断,通过细菌分离和培养,猪伪狂犬病乳胶凝集试验和ELISA gE试验,猪瘟抗体水平检测盒猪瘟病原的ELISA试验,对6头病猪的血清和组织进行了检测。结果表明,在... 笔者对一起临床症状、病理变化疑似猪伪狂犬病与猪瘟混合感染的病例进行实验室诊断,通过细菌分离和培养,猪伪狂犬病乳胶凝集试验和ELISA gE试验,猪瘟抗体水平检测盒猪瘟病原的ELISA试验,对6头病猪的血清和组织进行了检测。结果表明,在全血琼脂培养基上无细菌生长,猪伪狂犬病乳胶凝集试验阳性者为5头,猪伪狂犬的ELISA gE鉴别试验阳性者为5头,猪瘟抗体水平超过1∶512的为4头,猪瘟病原的ELISA试验阳性者为4头,其中感染猪伪狂犬病与猪瘟的为3头。综合上述结果,初步诊断该病例为猪伪狂犬病和猪瘟的混合感染。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病 猪瘟 混合感染 检测

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流行性腹泻疫苗预防研究进展 被引量：1

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作者 马锐 黄小波 +2 位作者 杨国淋 滑翔 赵玉佳 《广东畜牧兽医科技》 2015年第5期9-11,共3页

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病,其感染率,死亡率高的特点是导致全世界养猪业经济损失的重要原因之一。近年来,对流行性腹泻病毒的研究逐步深入,疫苗成为了预防及控制流行性腹泻的主要措施。... 猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的仔猪和育肥猪的一种急性肠道传染病,其感染率,死亡率高的特点是导致全世界养猪业经济损失的重要原因之一。近年来,对流行性腹泻病毒的研究逐步深入,疫苗成为了预防及控制流行性腹泻的主要措施。本文就流行性腹泻的流行情况、致病机理以及流行性腹泻的疫苗预防研究进行描述,为该病的预防和控制提供参考。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻 疫苗 研究进展

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