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博莱霉素诱导小鼠肺间质纤维化造模方式的选择 被引量:27
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作者 李丽娜 王华 +4 位作者 周蕾 张永胜 于永利 王丽颖 孙陆果 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期254-257,共4页
目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg ... 目的:建立博莱霉素导致肺间质纤维化小鼠动物模型,比较不同给药方式的成模差异。方法:利用8周龄雄性ICR小鼠,①随机分为腹腔给药组(P组)、气管内给药组(I组)、阴性对照组(C组),分别经腹腔注射BLM 40 mg/kg 5次、气管内滴入BLM 5 mg/kg 1次或气管内滴入生理盐水50μl。分别于14、28、40天处死,②小鼠随机分为4组,分别经腹腔注射BLM 40mg/kg3、4、5次或经腹腔给予生理盐水200μl。分别于28、40天处死。观察小鼠体重、咳嗽、挠鼻症状、肺系数及肺组织病理改变。结果:给予博莱霉素后①小鼠的体重均下降并出现咳嗽及挠鼻等呼吸障碍症状;处置后第14、28及40天处死小鼠,计算肺系数,P组较I组肺系数高;处死小鼠后,P组和I组小鼠均形成广泛、稳定的间质纤维化病理改变,P组主要分布在胸膜下及血管周围,而I组主要分布在肺门和支气管周围。P组较I组肺纤维化病理评分高。②不同腹腔给药次数模型小鼠体重变化以5次给药对体重影响最大;计算肺系数以给药5次肺系数变化最大。上述模型均成功建立。通过比较生存率、呼吸困难症状、组织病理变化等指标,选出腹腔给药5次相对于给药3次及4次为更好的造模方式。结论:利用BLM腹腔注射和气管内滴入制备了肺间质纤维化动物模型,纤维化形成的部位存在着一定的差异,腹腔给药5次方法制备肺间质纤维化模型的成功率更佳。 展开更多
关键词 ICR小鼠 博莱霉素 肺间质纤维化
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脂多糖诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活化凋亡作用 被引量:13
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作者 周静 王轶楠 +3 位作者 柳忠辉 冯野 陈芳芳 台桂香 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期136-138,共3页
目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/mlLPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/mlLPS分别刺... 目的探讨脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,分别用0.5、1.0、2.5μg/mlLPS刺激RAW264.7细胞24h,一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO水平;用1.0μg/mlLPS分别刺激细胞3d和6d,台盼蓝拒染法检测细胞增殖情况;用1.0μg/mlLPS刺激细胞6d,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果经LPS刺激后24h,RAW264.7细胞培养上清中NO含量明显增加,且具有剂量依赖性;LPS刺激3d和6d后,细胞的增殖均受到抑制,且呈时间依赖性;LPS刺激6d时,细胞周期被阻滞在S期,并出现明显的凋亡。结论LPS具有诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞活化凋亡的作用。 展开更多
关键词 脂多糖 巨噬细胞 活化凋亡
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大紫蛱蝶线粒体基因组全序列分析 被引量:11
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作者 王菊平 聂新平 +4 位作者 曹天文 张敏 郭亚平 马恩波 张小楠 《动物分类学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期1-9,共9页
通过PCR步移法对大紫蛱蝶Sasakia charonda coreana线粒体基因组全序列进行了测定和分析。分析结果表明:大紫蛱蝶线粒体基因组全长15233bp,包括13个蛋白编码基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因以及长度为381bp的非编码区。A、T、C、G碱基... 通过PCR步移法对大紫蛱蝶Sasakia charonda coreana线粒体基因组全序列进行了测定和分析。分析结果表明:大紫蛱蝶线粒体基因组全长15233bp,包括13个蛋白编码基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因以及长度为381bp的非编码区。A、T、C、G碱基含量分别为39.7%、40.2%、12.2%、7.9%。9个蛋白编码基因和14个tRNA基因在J链编码,其余4个蛋白编码基因和8个tRNA基因在N链编码,基因排列顺序与其它已知鳞翅目昆虫相同。13个蛋白编码基因中除COⅠ以CGA作为起始密码外,其余蛋白质基因均以ATN作为起始密码子,终止密码子多数为典型的TAA、TAG,只有COⅡ和ND4以单独的T作为终止密码子。在所测得的22个tRNA基因中,除tRNA Ser(AGN)缺少DHU臂外,其余tRNA均能形成典型的三叶草结构。与其它多数鳞翅目昆虫一样,大紫蛱蝶的非编码区序列中散在着一些长短不一的串联重复单元,在与其近缘物种非编码区的比较当中并未发现共同的保守序列区。 展开更多
关键词 鳞翅目 大紫蛱蝶 线粒体基因组
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肿瘤免疫治疗的研究进展和发展趋势 被引量:9
4
作者 台桂香 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期427-430,共4页
随着免疫学技术的进步,大量肿瘤抗原不断被发现。DC摄取肿瘤抗原诱导免疫激活还是抑制,取决于肿瘤细胞释放危险信号(GM-CSF、单核趋化蛋白1、MCP1及热休克蛋白等)还是抑制性信号(TGF-β、IDO和iNOS等)。在危险信号的调节下,激活Th1细胞... 随着免疫学技术的进步,大量肿瘤抗原不断被发现。DC摄取肿瘤抗原诱导免疫激活还是抑制,取决于肿瘤细胞释放危险信号(GM-CSF、单核趋化蛋白1、MCP1及热休克蛋白等)还是抑制性信号(TGF-β、IDO和iNOS等)。在危险信号的调节下,激活Th1细胞免疫应答清除肿瘤;而在抑制性信号的作用下,激活Th2应答,不能有效清除肿瘤。肿瘤免疫治疗方面的进展主要表现在抗体疗法、T细胞疗法及肿瘤疫苗。目前至少有7种抗体与化疗药物合用的临床效果已经被证实;尽管抗不同种癌症的抗体种类在逐渐增加,但还需进一步探讨用于抗体治疗的新靶点、开发新抗体及扩大抗体应用的抗肿瘤范围。而T细胞疗法治疗效果不十分理想。大多数肿瘤疫苗处于Ⅰ期和Ⅱ临床试验,但为数不多的Ⅲ期临床试验结果不理想,尚需进一步完善。抗体在免疫监视中的重要作用被逐渐认识,肿瘤免疫预防最终可能成为现实。 展开更多
关键词 肿瘤抗原 抗体 肿瘤疫苗 免疫治疗 免疫预防
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血清卵泡抑素水平检测用于卵巢癌诊断的研究 被引量:8
5
作者 陈芳芳 王轶楠 +3 位作者 汪丽 孟小丹 孙洋 柳忠辉 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第2期207-209,共3页
目的探讨卵泡抑素在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测肿瘤患者及健康对照者血清FS水平;免疫组织化学染色观察卵巢癌组织FS表达情况。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P<... 目的探讨卵泡抑素在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测肿瘤患者及健康对照者血清FS水平;免疫组织化学染色观察卵巢癌组织FS表达情况。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P<0.01;乳腺癌和肺癌患者血清FS水平也高于健康对照组,P<0.05;胃癌和肾癌患者血清FS水平与健康对照组比较无显著性差异,P>0.05。肿瘤诊断阳性率依次为卵巢癌(60%)>乳腺癌(40%)>肺癌(30%)>胃癌(20%)>肾癌(0%)。免疫组织化学染色显示,卵巢癌组织表达FS与肿瘤类型有关,染色强度依次为粘液性癌>子宫内膜样癌>透明细胞癌>鳞癌>浆液性癌。结论卵巢癌患者血清FS水平升高,其诊断阳性率与卵巢肿瘤类型有关;血清FS检测对卵巢癌诊断具有重要价值。 展开更多
关键词 卵泡抑素 酶联免疫吸附试验 卵巢癌 诊断
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道亦道,非故道——试论固有免疫中的抗原和免疫原的定义 被引量:4
6
作者 熊思东 周光炎 +2 位作者 金伯泉 龚非力 于永利 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期441-443,共3页
关键词 免疫原 抗原 固有免疫 特异性免疫应答 免疫学教学 适用性
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不同序列Cp G ODN对牙周膜细胞的促增殖作用 被引量:5
7
作者 秦雁雁 申玉芹 +4 位作者 任春霞 郭恪 林崇韬 王丽颖 于永利 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期876-879,I0001,共5页
目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs... 目的:用不同序列Cp G ODN刺激牙周膜细胞(PDLCs),筛选对PDLC有促增殖作用的Cp G ODN序列,为Cp G ODN在牙周病治疗上的应用提供实验依据。方法:收集因正畸治疗需要而拔除的健康前磨牙48颗,年龄10~15岁。利用组织块原代培养法培养人PDLCs,取第4和5代细胞用于实验。实验组用1~12号Cp G ODN刺激PDLCs,分别培养24、48和72h,用PBS做对照组,MTT比色法检测吸光度A492值。结果:原代培养的PDLCs呈长梭形或星形,胞突细长,中央有圆形或椭圆型的胞核,抗波形丝蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性,为中胚层来源细胞。与对照组比较,实验组Cp G ODN的A均值升高,其中9、11号Cp G ODN与对照组比较A值明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Cp G ODN有促人PDLCs增殖作用,其中9、11号Cp G ODN可显著促进人PDLCs增殖。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 CP G ODN 细胞增殖
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AG490阻断肝癌细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的实验研究 被引量:4
8
作者 王艳春 黄进明 +1 位作者 朱明光 常雅萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1170-1171,共2页
目的:检测Stat3mRNA在肿瘤细胞中的表达,研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响,探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性。方法:RT-PCR法检测Stat3mRNA表达;动态检测AG490作用前后... 目的:检测Stat3mRNA在肿瘤细胞中的表达,研究JAK酶抑制剂AG490阻断Stat3信号通路对免疫抑制因子基因表达的影响,探讨应用AG490阻断肿瘤细胞Stat3信号通路逆转免疫抑制的可行性。方法:RT-PCR法检测Stat3mRNA表达;动态检测AG490作用前后肝癌细胞Stat3mRNA表达以及VEGF、TGF-β和IL-10等免疫抑制因子基因的表达情况。结果:在所检测的人肿瘤细胞中5种有Stat3mRNA的表达;AG490阻断肝癌细胞Stat3通路后,免疫抑制因子VEGF、TGF-β和IL-10等的mRNA表达减弱甚至消失。结论:AG490可通过阻断Stat3信号转导通路逆转免疫抑制,发挥抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 STAT3 肿瘤细胞 AG490 免疫抑制因子
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激活素结合蛋白在ConA诱导小鼠肝损伤时的表达及作用 被引量:5
9
作者 王轶楠 马迪 +3 位作者 闫枫 于昉 台桂香 柳忠辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期684-686,691,共4页
目的:探讨激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在刀豆蛋白A(ConcanavalinA,Con A)诱导肝损伤中的表达及作用。方法:尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,实时定量PCR检测FSmRNA表达,ELISA法检测FS及激活素A(Activin A)蛋白水平。结果:注射Con... 目的:探讨激活素结合蛋白(Follistatin,FS)在刀豆蛋白A(ConcanavalinA,Con A)诱导肝损伤中的表达及作用。方法:尾静脉注射ConA诱导小鼠急性肝损伤,实时定量PCR检测FSmRNA表达,ELISA法检测FS及激活素A(Activin A)蛋白水平。结果:注射ConA后肝脏组织中FSmRNA表达水平在第三天明显下降,FS蛋白水平在第三天也呈下降趋势;而Activin A水平明显增高。注射FS中和内源性激活素A作用后,肝脏病理损伤程度明显减轻,血清转氨酶水平也显著低于ConA单纯诱导组。结论:在ConA诱导的急性肝损伤过程中激活素A-FS系统失平衡,应用FS阻断内源激活素A可以减轻ConA诱导的肝脏损伤,因此FS有可能成为治疗肝损伤性疾病的有效药物。 展开更多
关键词 激活素A 激活素结合蛋白 刀豆蛋白A 肝损伤
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一种C型CpGODN对柯萨奇病毒感染小鼠的作用初探 被引量:2
10
作者 杨亮 孙晚晴 +4 位作者 王莉 吴秀丽 万敏 于永利 王丽颖 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-117,共3页
目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心... 目的:研究自行设计的C型CpGODN(D-SL01)对柯萨奇病毒感染的潜在治疗作用。方法:用柯萨奇病毒体外感染人HeLa细胞的体外模型观察CpGODN刺激的人PBMC培养上清的抗病毒作用;利用柯萨奇病毒感染小鼠模型观察腹腔内给予CpGODN对小鼠体重及心肌病变的影响。结果:D-SL01刺激的人PBMC培养上清不仅能抵抗VSV感染VeroE6细胞,也能明显抵抗柯萨奇病毒对HeLa细胞的感染,其作用强度与A-型CpGODN2216相似。然而,当腹腔内连续给药6d后,D-SL01使柯萨奇病毒感染小鼠的质量下降及心肌病变程度与对照组小鼠相比加重。结论:研究结果提示:体内应用CpGODN的机制特别是用于病毒感染性疾病时,应该充分注意给药时机、途径及剂量。 展开更多
关键词 CPG ODN 柯萨奇病毒 心肌炎
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激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞吞饮活性及TLR4表达的双向调节作用 被引量:5
11
作者 陈芳芳 冯野 +6 位作者 王轶楠 台桂香 周静 刘海岩 葛敬岩 崔雪玲 柳忠辉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第6期560-562,共3页
目的探讨激活素A(ActivinA)对巨噬细胞系RAW264.7细胞活性的调节作用及其可能的机制。方法取对数生长期的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,加入1μg/ml脂多糖(LPS),继续培养8h,采用ELISA法检测细胞分泌ActivinA水平;分别加入ActivinA、LPS和... 目的探讨激活素A(ActivinA)对巨噬细胞系RAW264.7细胞活性的调节作用及其可能的机制。方法取对数生长期的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,加入1μg/ml脂多糖(LPS),继续培养8h,采用ELISA法检测细胞分泌ActivinA水平;分别加入ActivinA、LPS和ActivinA+LPS,中性红染料法检测细胞吞饮活性;流式细胞术分析细胞表面分子MHCⅠ、MHCⅡ及Toll样受体4(TLR4)的表达水平。结果LPS呈时间依赖性刺激RAW264.7细胞分泌ActivinA;ActivinA可明显促进静息RAW264.7细胞的吞饮活性,而对MHCⅠ、MHCⅡ及TLR4的表达水平无明显影响;ActivinA和LPS共同作用,ActivinA明显抑制了LPS活化的RAW264.7细胞的吞饮活性,并下调TLR4的表达。结论ActivinA可能以自分泌/旁分泌形式参与巨噬细胞活性调节,其抑制LPS作用与TLR4表达有关。 展开更多
关键词 激活素A 巨噬细胞 吞饮活性 TOLL样受体4 表达
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FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡影响的研究 被引量:5
12
作者 张淑芳 刘大程 +1 位作者 孙吉凤 台桂香 《中国实验诊断学》 北大核心 2011年第1期48-50,共3页
目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的... 目的探讨FTY720对体外培养MCF-7细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养MCF-7细胞,将其培养液中加入不同浓度的FTY720,继续培养48小时,MTT法检测MCF-7细胞的增殖情况;瑞士-姬姆萨染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测FTY720对MCF-7细胞的细胞周期、凋亡率的影响。结果当FTY720浓度为6 400 ng/ml时,体外培养MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,抑制率为62.0%(P<0.05),而且抑制率呈浓度依赖性;镜下可见细胞出现凋亡的形态;流式细胞仪检测分析显示FTY720可将MCF-7细胞阻滞于G1期,并促进其发生凋亡,凋亡率呈浓度依赖性。结论在体外培养的MCF-7细胞培养液中加入一定浓度的FTY720,能明显抑制该细胞的增殖,调节该细胞周期并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 FTY720 MCF-7细胞 凋亡 抗肿瘤作用
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两种尿素浓度测定方法的比较 被引量:4
13
作者 曹昭 万敏 +4 位作者 孙陆果 胡小平 于永利 王丽颖 张培因 《中国实验诊断学》 北大核心 2010年第1期135-136,共2页
关键词 血清尿素 测定方 二甲基氨基苯甲醛 肾小球滤过功能 流动注射分析法 二乙酰一肟 浓度 临床检测
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WWOX基因转染抑瘤效应的实验研究 被引量:5
14
作者 杨巍 袁红艳 +1 位作者 郑旸 常雅萍 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期128-130,共3页
目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体,观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4/myc-His中;采用脂质体介导法... 目的建立肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体,观察其瞬时转染对肿瘤细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法,从正常人胚肾细胞HEK-293中钓取WWOX基因,将其克隆至pMD18-T载体上,测序正确后克隆到真核表达载体pcDNA4/myc-His中;采用脂质体介导法体外瞬时转染人肺腺癌A549细胞;RT-PCR法和Western印迹法分别检测WWOX基因mRNA和蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成试验观察肿瘤细胞克隆形成能力的变化。结果成功构建了WWOX的真核表达载体,体外转染的A549细胞凋亡率明显高于未转染和空载体转染细胞,且细胞克隆形成能力下降,形成率为35.43%,明显低于未转染细胞和空载体转染细胞。结论所构建的pcDNA4/myc-WWOX真核表达载体转染肿瘤细胞能够抑制肿瘤生长并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 WWOX 基因转染 抑瘤效应
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Lewis肺癌细胞通过TLR9对CD4+CD25+Treg细胞影响的研究 被引量:4
15
作者 李欣 付海英 +1 位作者 张佳伦 李一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期124-128,共5页
目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9... 目的:本研究以Lewis肺癌细胞为研究对象,探讨肿瘤细胞通过TLRs对CD4+CD25+Treg细胞的影响。方法:我们采用流式细胞术检测了Lewis肺癌细胞与脾淋巴细胞共培养系统中CD4+CD25+Treg细胞数量变化;通过RT-PCR方法检测了共培养对Foxp3和TLR1-9mRNA表达的影响;采用TLR9受体阻断剂氯喹阻断Lewis肺癌TLR9的表达。结果:与对照组相比,共培养组CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达均明显增高(P<0.05);Lewis肺癌细胞与淋巴细胞共培养后可影响多种TLRs表达,其中TLR9 mRNA表达与对照组相比明显增高(P<0.05),阻断Lewis肺癌细胞TLR9可明显降低CD4+CD25+Treg细胞数量及Foxp3 mRNA表达(P<0.05)。结论:Lewis肺癌细胞可通过TLR9促进CD4+CD25+Treg细胞产生及功能增强,参与诱导肿瘤的免疫耐受,从而促进肿瘤的发生和发展。 展开更多
关键词 CD4+CD25+TREG细胞 FOXP3 TLRS 肿瘤免疫
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RNAi沉默RhoC基因对肝癌细胞生长和转移潜力的影响 被引量:2
16
作者 谢淑丽 孙梅 +3 位作者 朱明光 陈志明 胡振华 全成实 《中国实验诊断学》 2008年第10期1212-1215,共4页
目的研究RhoC基因沉默对肝癌细胞生长和转移潜力的影响。方法基因重组法构建小干扰RNA表达载体,沉默肝癌细胞RhoC基因表达;平板克隆实验检测细胞生长潜力,半定量RT-PCR法检测细胞周期蛋白和MMPs表达水平。结果RNAi组克隆形成百分数显著... 目的研究RhoC基因沉默对肝癌细胞生长和转移潜力的影响。方法基因重组法构建小干扰RNA表达载体,沉默肝癌细胞RhoC基因表达;平板克隆实验检测细胞生长潜力,半定量RT-PCR法检测细胞周期蛋白和MMPs表达水平。结果RNAi组克隆形成百分数显著低于对照组(20.33±5.42%和70.58±10.10%,P<0.01);RNAi组细胞CyclinD1表达显著低于对照组(0.45±0.21和1.25±0.24,P<0.05),而P21基因表达则显著高于对照组(1.07±0.23和0.47±0.11,P<0.05);RNAi组MMP-2基因表达显著低于对照组(0.38±0.13和1.41±0.25,P<0.01);与MMP-2相似,RNAi组MMP-9基因表达水平也显著低于对照组(0.44±0.17和1.36±0.18,P<0.01)。结论基因沉默RhoC能够显著抑制肝癌细胞生长和转移潜力,为靶向RhoC肿瘤基因治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 RHOC RNAI 细胞生长 肿瘤转移
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黏蛋白1多肽对T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制及其机制 被引量:4
17
作者 马吉春 赵小霞 +5 位作者 高航 方芳 周静 宋献美 柳忠辉 台桂香 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期29-33,共5页
目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制作用及其机制。方法:将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Anne... 目的:探讨黏蛋白1(mucin 1,MUC1)多肽对人T淋巴瘤Jurkat细胞生长的抑制作用及其机制。方法:将MUC1多肽与Jurkat细胞共同培养,锥虫蓝染色法观察MUC1多肽对该细胞生长的影响;流式细胞术检测Jurkat细胞生长周期及其细胞表面MUC1的表达;Annexin V/PI双标记法检测Jurkat细胞的凋亡;应用抗体封闭实验检测MUC1多肽在Jurkat细胞表面作用的位点。结果:10、20、40μg/ml MUC1多肽作用使Jurkat细胞生长抑制分别达(32±4)%、(37±2)%、(46±5)%,未见凋亡细胞。流式细胞术检测结果表明MUC1多肽可诱导Jurkat细胞周期阻滞在G0/G1期,在Jurkat细胞表面有MUC1蛋白的表达。采用5μg/ml和25μg/ml抗MUC1抗体封闭Jurkat细胞表面MUC1表位后,MUC1多肽对细胞生长的抑制效应几乎全部消失。结论:MUC1多肽能明显抑制Jurkat细胞生长,其机制与该多肽通过和Jurkat细胞表面MUC1蛋白相互作用导致细胞周期阻滞在G0/G1期有关。 展开更多
关键词 黏蛋白1多肽 JURKAT细胞 生长抑制 细胞周期
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卡介苗HSP70的表达、纯化及活性检测 被引量:1
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作者 李贺 曹昭 +5 位作者 张培因 卫红飞 王华 孙陆果 王丽颖 于永利 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1112-1114,1118,共4页
目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白。方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析。再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得... 目的:在大肠杆菌中表达并纯化出具有良好生物学活性的卡介苗HSP70(BCG HSP70)蛋白。方法:利用PCR技术扩增出BCG HSP70的编码基因,将其克隆到pMD18-T载体,测序分析。再将该目的基因亚克隆至pET28a表达载体,转化入大肠杆菌BL21(DE3),获得正确的阳性克隆子后,用IPTG诱导表达。纯化表达产物,SDS-PAGE及Western blot鉴定目的蛋白,并通过脾增生实验检测其生物学活性。结果:扩增的BCG HSP70基因经序列测定与GenBank公布的序列完全一致。表达产物经SDS-PAGE分析,在相对分子质量(Mr)约70000处有表达条带。Western blot结果证实纯化产物在Mr约70000处可见特异性条带。蛋白纯度约96.5%。脾细胞增生试验显示,该蛋白能够明显刺激鼠脾细胞增殖。结论:成功表达并纯化了具有良好生物学活性的BCG HSP70,为进一步研究BCG HSP70及BCG的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 卡介苗 HSP70 pET28a
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重组牛O型口蹄疫病毒VP1表位疫苗的构建、表达、纯化及免疫活性研究 被引量:2
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作者 杨光 金香兰 +5 位作者 房明丽 张培因 张永胜 王华 王丽颖 于永利 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期230-234,共5页
为构建重组牛O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1表位疫苗,并对其免疫学活性进行研究。利用计算机模拟构象的方法筛选出牛O型FMDVVP1表位六聚体重组蛋白的最佳表位组合形式,通过PCR及基因克隆等方法构建含编码该重组蛋白基因的质粒,大肠杆菌BL21(D... 为构建重组牛O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1表位疫苗,并对其免疫学活性进行研究。利用计算机模拟构象的方法筛选出牛O型FMDVVP1表位六聚体重组蛋白的最佳表位组合形式,通过PCR及基因克隆等方法构建含编码该重组蛋白基因的质粒,大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,镍亲和层析法纯化。通过间接ELISA方法初步检测该蛋白免疫豚鼠血清中的抗FMDV抗体水平;再用活病毒FMDV进行细胞中和实验和乳鼠保护实验以检测豚鼠血清中具有保护性的抗FMDV中和性抗体的滴度。结果:构建了一种编码牛O型口蹄疫病毒VP1表位六聚体重组蛋白的质粒,经诱导表达并纯化后得到重组蛋白,命名为"MIP10"。ELISA检测结果显示,MIP10蛋白免疫的豚鼠血清中含有高水平的抗牛O型FMDV抗体。细胞中和实验和乳鼠保护实验结果显示,MIP10蛋白免疫的豚鼠血清中含有针对牛O型FMDV的保护性抗体。重组牛O型口蹄疫病毒VP1表位疫苗MIP10能够在动物体内诱导产生具有保护性的抗牛O型FMDV中和性抗体,有望开发成预防牛O型FMDV感染的新型疫苗。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 FMDV VP1
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新型CpG ODN对乙型肝炎病毒复制的抑制作用 被引量:2
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作者 杨光 杨亮 +5 位作者 包木胜 刘旭 王俪波 徐海飞 王丽颖 于永利 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期487-490,共4页
目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW00... 目的:探讨我室自行设计的CpG ODN(CpG BW001)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法:CpGBW001刺激人外周血单个核细胞(PBMC)48小时,用VSV病毒保护实验及ELISA法检测培养上清的病毒保护能力及其中的IFNα-含量。将上述CpG BW001刺激人PBMC的上清与HepG2.2.15细胞共孵育12天后收集培养上清,用放射免疫法检测该培养上清液中HBsAg及HBeAg的含量,用点杂交法检测HBV DNA的含量。结果:CpG BW001刺激人PBMC产生以IFNα-为主的抗病毒物质;CpG BW001刺激人PBMC的培养上清作用于HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的含量明显减少,且细胞内HBV DNA的含量也显著降低。结论:CpG BW001能通过刺激细胞产生抗病毒物质如IFNα-等,从而在体外抑制HBsAg和HBeAg的表达及HBV的复制。 展开更多
关键词 CPG ODN 乙型肝炎病毒 人外周血单个核细胞 干扰素
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