青藤碱对类风湿关节炎病人树突状细胞免疫活性的影响 被引量：17

1

作者 赵毅 余克强 李娟 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期1543-1545,共3页

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎树突状细胞免疫活性的影响。方法分离12例类风湿关节炎病人外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组。采用GM-CSF,IL-4进行刺激分化,于分化第4天开始给予干预,于培养第8天... 目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎树突状细胞免疫活性的影响。方法分离12例类风湿关节炎病人外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组。采用GM-CSF,IL-4进行刺激分化,于分化第4天开始给予干预,于培养第8天收获细胞。混合淋巴细胞反应检测树突状细胞对同种异体T细胞的刺激作用,酶联免疫吸附法检测树突状细胞培养上清中IL-12的含量,流式细胞技术检测树突状细胞表型的改变。结果与对照组相比,在不同混合比例下青藤碱可抑制树突状细胞对同种异体T细胞的刺激能力,青藤碱可抑制树突状细胞IL-12的分泌及其表面分子CD40,CD80,CD83,CD86和HLA-DR的表达。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞激活T细胞的能力,而达到治疗类风湿关节炎的作用。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 青藤碱 树突状细胞

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重组人神经肽Y融合蛋白的表达、纯化及生物信息学分析研究 被引量：9

2

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期2198-2202,共5页

目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-NPY转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-NPY转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析NPY蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了NPY的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-NPY在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对NPY蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 人神经肽Y 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学

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超氧化物歧化酶修饰改造的研究进展 被引量：9

3

作者 史春艳 左夏林 +2 位作者 丁宇 李谨 丁克祥 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第13期1723-1725,共3页

关键词 超氧化物歧化酶 修饰 基因重组 模拟物

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与人体肥胖相关的神经肽Y基因克隆及序列分析 被引量：5

4

作者 董萍 丁克祥 +5 位作者 杨永鹏 郑永晨 朱晓亮 单志新 韩晋云 丁宇 《国际护理学杂志》 2009年第2期257-259,共3页

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y（NPY）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法根据GeneBank中收录的NPY基因序列，设计该基因上下游序列，经过PCR反应合成NPY的cDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序... 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y（NPY）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法根据GeneBank中收录的NPY基因序列，设计该基因上下游序列，经过PCR反应合成NPY的cDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个100bp左右的DNA片段，与载体重组后和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY基因。且所克隆的基因共编码36个氨基酸，分子量为4．2kD，与GeneBank中NPY基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY基因与Genebank中NPY序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。 展开更多

关键词 肥胖 神经肽Y 基因克隆 DNA序列分析

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重组人神经肽Y受体Y2融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究 被引量：1

5

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第19期2423-2426,共4页

目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY2受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经N... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY2受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y2转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y2受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y2重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y2融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y2受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y2在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y2受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 人神经肽YY2受体 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学

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重组人神经肽Y受体Y5融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究 被引量：1

6

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期2609-2613,共5页

目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经N... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y5受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y5重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y5融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y5受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y5在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y5受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 人神经肽YY5受体 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学

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重组人神经肽Y受体Y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究 被引量：1

7

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期2331-2334,共4页

目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western Blot鉴定,表达产物包涵体经... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western Blot鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y1受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y1重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y1融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y1受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y1在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y1受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 人神经肽Y Y1受体 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学

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多指标人体皮肤测量系统研究 被引量：2

8

作者 曾勇 郑建彬 +1 位作者 王攀 丁克祥 《武汉理工大学学报（信息与管理工程版）》 CAS 2005年第4期23-26,34,共5页

介绍了一种皮肤多指标测量系统的设计方案,包括皮肤生物信息采集电路的设计,液晶触摸屏模块显示和操作功能的实现,USB2.0通信部分完成设备与主机之间的数据传输。

关键词 皮肤 生物信息 液晶 LCD USB

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神经肽Y促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化 被引量：3

9

作者 刘敏 胡平安 丁克祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期605-607,共3页

目的:观察神经肽Y对3T3L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IB-MX)、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,2 d后将细胞分为空白对照组(未加任何诱导... 目的:观察神经肽Y对3T3L1前脂肪细胞增殖和分化的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:3T3-L1细胞由3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IB-MX)、胰岛素和地塞米松联合诱导分化,2 d后将细胞分为空白对照组(未加任何诱导剂组)、经典诱导组(胰岛素诱导)和NPY干预组(10-8、10-9、10-10mol/L NPY)。培养的第7、12天用相差显微镜观察各组细胞形态的变化,培养第12天用油红O染色观察脂肪细胞分化程度。MTT检测细胞增殖。Western blot检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAR-γ)、CAAT/增强子结合蛋白-α(CCAAT/enhancer-bind-ing protein-α,C/EBP-α)蛋白的表达。结果:10-8mol/L NPY能促进3T3-L1细胞的分化。10-9mol/L NPY,10-8mol/L NPY均能促进3T3-L1细胞增殖。10-8mol/L NPY增加C/EBPα、PPARγ的表达。结论:NPY促进3T3L1前脂肪细胞的增殖和分化,其机制可能与上调PPARγ、C/EBPα的表达有关。 展开更多

关键词 神经肽Y 3T3-L1 增殖 细胞分化

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不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响 被引量：2

10

作者 刘敏 胡平安 丁克祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期736-739,共4页

目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800... 目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B（SRB）法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果：（1）L929在血清浓度很高和很低（0%和100%）时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;（2）HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。（3）0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论：20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。 展开更多

关键词 小鼠L929成纤维细胞 细胞增殖 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 羟脯氨酸

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延缓皮肤老化的基因工程方法及外用生物制剂的研究进展

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作者 史春艳 丁宇 丁克祥 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第14期1861-1863,共3页

关键词 皮肤老化 基因工程 生物制剂

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与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y5基因的克隆及序列分析 被引量：2

12

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《国际护理学杂志》 2009年第5期713-716,共4页

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5（NPYSR）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPYSR基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测... 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y5（NPYSR）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPYSR基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY5R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1300bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY5R基因，且所克隆的基因共编码445个氨基酸，分子量为50KD，与GeneBank中NPYSR基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPYSR基因与GeneBank中NPYSR序列完全一致，通过对其相关生物学信息的明确分析，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPYSR与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。 展开更多

关键词 肥胖 神经肽Y受体Y5 基因克隆 DNA序列分析

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与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y2基因的克隆及序列分析 被引量：2

13

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《国际护理学杂志》 2009年第3期423-426,共4页

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y2（NPY2R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY2R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测... 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y2（NPY2R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY2R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY2R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1100bp左右的DNA片段，与载体重组和DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY2R基因，且所克隆的基因共编码381个氨基酸，分子量为4．2kD，与GeneBank中NPY2R基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY2R基因与GeneBank中NPY2R序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY2R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。 展开更多

关键词 肥胖 神经肽Y受体Y2 基因克隆 DNA序列分析

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与人体肥胖相关的神经肽Y受体Y1基因的克隆及序列分析 被引量：1

14

作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《国际护理学杂志》 2009年第4期557-560,共4页

目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1（NPY1R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测... 目的克隆与肥胖相关的人神经肽Y受体Y1（NPY1R）基因，并鉴定该克隆基因序列的正确性。方法从人的脂肪组织中提取总RNA并进行反转录，以此为模板用PCR扩增NPY1R基因的eDNA，然后与pET28a＋载体重组，筛选阳性克隆和DNA序列分析鉴定，测序后与GeneBank中NPY1R基因进行同源性比较和序列分析。结果PCR扩增出一个1100bp左右的DNA片段，与载体重组后DNA序列分析鉴定，DNA序列分析显示克隆的DNA片段是人NPY1R基因，且所克隆的基因共编码384个氨基酸，分子量为44KD，与GeneBank中NPY1R基因序列同源性达100％。结论克隆的人NPY1R基因与GeneBank中NPY1R序列完全一致，为进一步应用分子生物学技术深入研究NPY1R与人体肥胖发生、发展及转化等相关作用机制及应用该基因进行其基因蛋白表达奠定了基础。 展开更多

关键词 肥胖 神经肽Y受体Y1 基因克隆 DNA序列分析

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