微生物代谢组学的样品前处理 被引量：8

1

作者 周大炜 朱之燕 《化学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期404-407,共4页

微生物代谢组学是指全面分析(定性和定量)细胞生长或生产周期某一时刻细胞内和细胞周围的所有低分子量代谢物。微生物代谢组学研究需要可靠和重现地分析细胞内较宽动力学浓度范围(nmol^mmol)、化学功能各异的代谢产物,因此,需要对从生... 微生物代谢组学是指全面分析(定性和定量)细胞生长或生产周期某一时刻细胞内和细胞周围的所有低分子量代谢物。微生物代谢组学研究需要可靠和重现地分析细胞内较宽动力学浓度范围(nmol^mmol)、化学功能各异的代谢产物,因此,需要对从生物量培养、灭活和代谢产物的提取到代谢物的定量分析这整个实验过程提出耐用、可重现和可靠的实验方案。本文介绍了灭活过程中细胞内代谢产物泄漏的处理方法,较为详细地论述了通过灭活草案捕获代谢反应活性方法和代谢物提取方法的优化,并对微生物代谢组学样品前处理的目前发展趋势提出初步见解。 展开更多

关键词 微生物代谢组学 样品前处理生物量培养 灭活 代谢物提取

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苯胺和苯酚与环酐的酰胺化及酯化反应 被引量：4

2

作者 贺丽鹏 燕方龙 +3 位作者 曹勃阳 路海滨 王曦 王恩思 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期287-290,共4页

研究了环酐与苯胺和苯酚的酰胺化及酯化反应,优化了酰胺化及酯化反应条件.结果表明,环酐的分子结构直接影响反应结果,当酸酐分子存在共轭结构时以N-芳基内酰胺为主要产物.关键中间体及最终化合物的结构经核磁共振氢谱、碳谱及红外光谱确证.

关键词 酰胺化 酯化 酸酐 合成

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大肠杆菌O152中wfgD基因编码的β-1,3-葡萄糖基转移酶产物结构的质谱表征 被引量：2

3

作者 周大炜 胡波 +2 位作者 刘斌 吴俊丽 韩艳芳 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第2期225-228,共4页

大肠杆菌O152抗原的寡糖重复单位中含葡萄糖-β-1,3-N-乙酰葡萄糖胺(Glc-β-1,3-GlсNAc)连接键。本研究采用电喷雾离子化多级串联质谱技术对以人工合成的天然受体底物的结构类似物苯氧基十一烷二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-β-PO3-PO3... 大肠杆菌O152抗原的寡糖重复单位中含葡萄糖-β-1,3-N-乙酰葡萄糖胺(Glc-β-1,3-GlсNAc)连接键。本研究采用电喷雾离子化多级串联质谱技术对以人工合成的天然受体底物的结构类似物苯氧基十一烷二磷酸-N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc-β-PO3-PO3-(CH2)11-O-phenyl(GlcNAc-PP-PhU))为受体底物,尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)为给予体底物的酶促反应产物进行了详细的结构表征。电喷雾离子化多级串联质谱图中观察到的主要碎片源于磷酸二酯键部分和糖苷键的裂解。此外,由观察到的二糖产物非还原端碎片获得了序列信息;跨环断裂碎片及源于吡喃环取代基消除的‘内在’碎裂离子可提供组成产物的单糖残基连接方式信息。广泛的碎裂信息表明wfgD基因编码UDP-Glc:GlcNAc-pyrophosphate-lipid中的β-1-3葡萄糖基转移酶。 展开更多

关键词 糖基转移酶 电喷雾离子化多级质谱 大肠杆菌

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糖基转移酶反应的基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法监测 被引量：2

4

作者 周大炜 刘斌 +2 位作者 吴俊丽 胡波 齐源远 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2011年第4期193-199,共7页

以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用... 以wabD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶、wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfeD(志贺氏菌鲍氏O14中O抗原基因簇内)编码的β-1,4-半乳糖基转移酶酶促反应产物为研究对象,尝试应用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的糖基转移酶监测方法。该方法首先直接用质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速检测。研究结果表明,CID MALDI-TOF MS平台适用于新建克隆的糖基转移酶酶活反应的监测,与现有的高通量方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势。 展开更多

关键词 脂寡糖 糖基转移酶 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)

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大肠杆菌O11 O-抗原基因簇序列的破译及特异分子标识的鉴定 被引量：3

5

作者 王威 彭霞 +2 位作者 王荃 程剑松 王磊 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期341-346,共6页

大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O-... 大肠杆菌O11是一种可在人畜间交叉传染的强致病菌,具有潜在流行性爆发的危险。现完成了O11 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定了多种特异分子标识,并实现了对大肠杆菌O11的快速、灵敏和准确的分子分型检测。利用鸟枪法测定大肠杆菌O11 O-抗原基因簇的序列全长为14180bp,生物信息学方法分析序列结构,共发现12个基因:GDP-L型岩藻糖合成途径基因(gmd,fcl,gmm,manC,manB)、UDP-N乙酰葡萄糖C4异构酶基因(gne)、O-抗原转运酶基因(wzx)、O-抗原聚合酶基因(wzy)和4个糖基转移酶基因;用PCR方法筛选出2个针对大肠杆菌O11的特异基因和4对特异引物,并进行环境样品检测实验鉴定了该PCR检测方法的灵敏度;设计并筛选出8条针对大肠杆菌O11的特异探针。 展开更多

关键词 大肠杆菌O11 O-抗原基因簇 分子分型 特异基因 探针

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脂多糖信号通路中的蛋白质修饰 被引量：3

6

作者 王颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期505-511,共7页

革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖,又称内毒素,感染宿主后可导致脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合症.脂多糖借助信号转导通路诱发宿主的应答,刺激免疫细胞产生大量具有致热效应的炎性细胞因子,引起免疫系统的过度活化.近年来,研究... 革兰氏阴性细菌外膜中的脂多糖,又称内毒素,感染宿主后可导致脓毒症、脓毒性休克和多器官功能障碍综合症.脂多糖借助信号转导通路诱发宿主的应答,刺激免疫细胞产生大量具有致热效应的炎性细胞因子,引起免疫系统的过度活化.近年来,研究脂多糖受体TLR4及其信号转导在先天免疫和获得性免疫中的作用,以及脂多糖信号通路的复杂调控机制取得了突破性进展.其中蛋白质翻译后修饰参与脂多糖信号通路调节的研究成为这一领域的新热点之一.本文总结了磷酸化修饰、泛素化修饰、ISG15化修饰和SUMO化修饰在调节脂多糖信号通路方面的作用.不仅对被修饰蛋白如何传递和调节脂多糖信号以及翻译后修饰在该过程中的作用进行了阐述,还着眼于不同翻译后修饰形式之间的关联.脂多糖信号通路的深入研究不但有助于阐明内毒素相关疾病的分子机理,还可为临床预防和治疗革兰氏阴性细菌感染所致疾病提供新靶点. 展开更多

关键词 翻译后修饰 脂多糖 信号转导

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类泛素化修饰蛋白SUMO1的表达纯化及抗体制备 被引量：2

7

作者 祖玲玲 史颖姣 +4 位作者 刘彬 秦宇 王远根 王照娜 王颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1029-1033,共5页

SUMO是近年发现的类泛素化修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的细胞内定位、稳定性及与其它蛋白质的相互作用.为研究蛋白质的SUMO化修饰,本文表达并纯化了重组的人SUMO1,制备了兔抗hSUMO1的多克隆抗体.经ELISA和免疫... SUMO是近年发现的类泛素化修饰蛋白,可通过异肽键共价连接到靶蛋白上,影响靶蛋白的细胞内定位、稳定性及与其它蛋白质的相互作用.为研究蛋白质的SUMO化修饰,本文表达并纯化了重组的人SUMO1,制备了兔抗hSUMO1的多克隆抗体.经ELISA和免疫印迹检测,该抗体灵敏度高、特异性好,且能识别内源性SUMO1及其修饰蛋白,可用于SUMO化修饰靶蛋白的鉴定及SUMO化修饰的生物学功能研究. 展开更多

关键词 SUMO1 表达纯化 多克隆抗体

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大肠杆菌和志贺氏菌O-抗原糖基转移酶与聚合酶的生物信息学研究 被引量：1

8

作者 陶江 刘斌 +3 位作者 王荃 郭宏杰 冯露 王磊 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期345-350,共6页

利用生物信息学手段对大肠杆菌和志贺氏菌的 1 1 0个O 抗原糖基转移酶与 39个O 抗原聚合酶的序列进行分析 ,探讨这两种酶的序列和结构特点。统计了其序列一致性 ,密码子使用和 (G +C) %含量的特点 ;讨论了O 抗原糖基转移酶和聚合酶对底... 利用生物信息学手段对大肠杆菌和志贺氏菌的 1 1 0个O 抗原糖基转移酶与 39个O 抗原聚合酶的序列进行分析 ,探讨这两种酶的序列和结构特点。统计了其序列一致性 ,密码子使用和 (G +C) %含量的特点 ;讨论了O 抗原糖基转移酶和聚合酶对底物的特异性 ;推测了 6组糖基转移酶的功能 ;通过对蛋白拓扑结构的预测 ,发现O 抗原聚合酶中广泛存在一个位于细胞周质中的亲水环 (Loop) ,是可能的功能区域 ;通过对蛋白高级结构的预测 ,发现O 抗原糖基转移酶属于两个不同的蛋白超家族。 展开更多

关键词 大肠杆菌 志贺氏菌 O-抗原 糖基转移酶 聚合酶 生物信息学

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基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法检测罕见单糖合成酶

9

作者 周大炜 刘斌 +1 位作者 吴俊丽 齐源远 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期115-118,共4页

以VioF(普罗威登斯菌O30中O抗原基因簇内)编码的甲酰基转移酶酶促反应产物为研究对象,采用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的罕见单糖合成酶监测方法。本方法首先直接... 以VioF(普罗威登斯菌O30中O抗原基因簇内)编码的甲酰基转移酶酶促反应产物为研究对象,采用碰撞诱导解离(CID)负离子模式基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术建立简单、高效的罕见单糖合成酶监测方法。本方法首先直接质谱分析0.3μL未经色谱分离、除盐处理的酶促反应混合物,随后应用CID串联质谱技术对酶活反应产物进行结构表征,实现酶活反应的快速监测。结果表明:高能CID MALDI-TOF/TOF-MS平台适用于新建克隆的单糖合成酶酶活反应的监测,与现有的监测方法相比,在速度、灵敏度、重现性、自动化和溶剂消耗方面具有绝对优势。 展开更多

关键词 罕见单糖 单糖合成酶 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱

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环境与工业微生物基因组学研究进展 被引量：1

10

作者 王磊 刘斌 周哲敏 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2008年第10期930-937,共8页

环境微生物是维持生态圈中能量和物质循环的重要因素之一,在各种污染物和有害物质的降解等方面发挥着重要作用,在进行能源生产和可再生利用等研究领域具有潜在应用价值.在超过150种被破译的非致病微生物基因组中,绝大多数是环境和工业细... 环境微生物是维持生态圈中能量和物质循环的重要因素之一,在各种污染物和有害物质的降解等方面发挥着重要作用,在进行能源生产和可再生利用等研究领域具有潜在应用价值.在超过150种被破译的非致病微生物基因组中,绝大多数是环境和工业细菌.随着新一代测序技术的投入使用和元基因组学方法的出现,国际上的微生物基因组方面的工作进入了高通量和高产出的阶段.我国已经完成全基因组测序的7株环境细菌中涵盖了嗜高温、嗜酸、耐高压、耐低压等各种极端环境微生物,研究人员从中发现了众多与环境和工业应用密切相关的代谢途径、遗传功能和生物酶,目前,国内多家单位相继启动了元基因组计划,必将使我国在环境和工业微生物基因组研究领域取得一大批原创成果. 展开更多

关键词 环境微生物 基因组 元基因组学

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大肠杆菌O116 O-抗原基因簇的破译及PCR检测方法的建立 被引量：1

11

作者 韩巍青 王威 王磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期667-671,共5页

目的测定大肠肝菌O116的O-抗原基因簇序列,鉴定其中的特异基因,建立PCR检测方法,替代传统的血清学检测。方法用长距离PCR方法扩增O116的O-抗原基因簇,PCR产物用鸟枪法建立测序文库进行测序,通过与GenBank中功能已知的蛋白的序列比较,进... 目的测定大肠肝菌O116的O-抗原基因簇序列,鉴定其中的特异基因,建立PCR检测方法,替代传统的血清学检测。方法用长距离PCR方法扩增O116的O-抗原基因簇,PCR产物用鸟枪法建立测序文库进行测序,通过与GenBank中功能已知的蛋白的序列比较,进行基因功能的分析。用PCR方法证明基因簇中寡糖单位处理酶基因的特异性,以寡糖单位处理酶基因为靶基因建立PCR检测方法,并进行灵敏度测试。结果和结论基因簇全长为14323bp,共有11个基因,其中寡糖单位处理酶基因wzx和wzy具有高度特异性。所建立的PCR方法可检测2pg的基因组DNA、0.4CFU/g(猪肉样品)或4×102CFU/g(粪便样品)。可以代替传统的血清学检测。 展开更多

关键词 大肠肝菌O116 O-抗原基因簇 特异基因 PCR检测

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大肠杆菌O85 O-抗原基因簇序列破译和特异分子标识的筛选

12

作者 王威 刘斌 +3 位作者 刘雪倩 冯露 孙丹 王磊 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期39-44,共6页

目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85... 目的测定大测肝菌O85的O-抗原基因簇的序列,对其基因进行功能和进化的分析,筛选并鉴定可用于快速分子分型的特异分子标识。方法利用鸟枪法对大肠杆菌O85的O-抗原基因簇进行测序,生物信息学方法进行序列拼接与分析,确定针对大肠杆菌O85的特异基因并设计引物,PCR方法进行模拟环境样品的检测。结果大肠杆菌O85的O-抗原基因簇序列全长为11 203 bp。发现8个开放阅读框架(orf)并确定功能,分别为:UDP-N-乙酰葡萄糖-2-异构酶基因(orf1),吡喃型UDP-半乳糖变位酶基因(glf),糖基转移酶基因(orf3、orf5、orf6和orf8),O-抗原转运酶基因(wzx)和O-抗原聚合酶基因(wzy)。鉴定出针对大肠杆菌O85的特异基因2个和引物4对。结论本文筛选的特异分子标识和PCR检测方法可用于对环境样品中的大肠杆菌O85进行快速、灵敏的检测。 展开更多

关键词 大肠杆菌O85 O-抗原基因簇 分子分型 分子标识

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产油丝状真菌高山被孢霉中蝶呤类化合物的提取及检测

13

作者 王鸿超 陈海琴 +4 位作者 赵建新 陈永泉 张灏 王磊 陈卫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期65-68,共4页

建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定高山被孢霉体内新蝶呤、蝶呤和生物蝶呤的方法。高山被孢霉在液氮破壁、酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化1h、滴加抗坏血酸还原液后,体内的四氢生物蝶呤及其前体二氢蝶呤三磷酸盐和6-丙酮酰四氢生... 建立了高效液相色谱-荧光检测法同时测定高山被孢霉体内新蝶呤、蝶呤和生物蝶呤的方法。高山被孢霉在液氮破壁、酸性条件下经碘-碘化钾溶液氧化1h、滴加抗坏血酸还原液后,体内的四氢生物蝶呤及其前体二氢蝶呤三磷酸盐和6-丙酮酰四氢生物蝶呤分别被氧化成相应的氧化产物新蝶呤、蝶呤、生物蝶呤。经离子交换树脂纯化后,利用高效液相色谱进一步分离得到了氧化产物蝶呤、新蝶呤和生物蝶呤,并采用电喷雾质谱对定性结果进行确认。色谱柱为Inertsil ODS-3C_(18)(5μm,150mm×4.6mm),用10mmol/L的磷酸氢二钠(pH6.0)作为流动相,流速为1.2mL/min,荧光检测器激发波长为350nm,吸收波长为450nm。检测出的新蝶呤、生物蝶呤和蝶呤的检出限依次是:0.003、0.002、0.005μg/mL。本方法能快速并准确的检测各类蝶呤类化合物,为利用高山被孢霉发酵生产四氢生物蝶呤奠定一定基础。 展开更多

关键词 高山被孢霉 四氢生物蝶呤 蝶呤类化合物 高效液相色谱 电喷雾质谱

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大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译及特异分子标识的鉴定

14

作者 李雅玥 王威 +1 位作者 王荃 王磊 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期623-628,共6页

目的完成产志贺毒素大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定检测用特异分子标识。方法利用鸟枪法进行O-抗原基因簇序列的测定,进行生物信息学方法分析发现基因并预测基因功能,利用PCR方法筛选针对大肠杆菌O120特异基因和特异引物,... 目的完成产志贺毒素大肠杆菌O120 O-抗原基因簇的破译,筛选和鉴定检测用特异分子标识。方法利用鸟枪法进行O-抗原基因簇序列的测定,进行生物信息学方法分析发现基因并预测基因功能,利用PCR方法筛选针对大肠杆菌O120特异基因和特异引物,利用基因芯片方法筛选特异探针。结果O-抗原基因簇序列全长12 485 bp,共含有10个基因:dTDP-鼠李糖合成途径基因(rmlB、rmlD、rmlA和rmlC),O-抗原转运酶基因(wzx),O-抗原聚合酶基因(wzy),3个糖基转移酶基因和1个功能未确定的基因。另外筛选和鉴定了2个特异基因、4对特异引物和6条特异探针,在模拟样品的鉴定中得到验证。结论多种特异分子标识可从样品中特异地检测出大肠杆菌O120,具有快速、灵敏和准确进行分子分型的优点。 展开更多

关键词 大肠杆菌O120 O-抗原基因簇 特异基因 特异探针

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6种罕见核苷糖电喷雾质谱裂解规律的初步研究 被引量：4

15

作者 周大炜 徐艳丽 吴俊丽 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期374-379,258,共6页

本文在负离子模式下,应用电喷雾电离多级串联质谱技术对6种罕见胸苷二磷酸单糖的裂解规律进行了初步研究。结果表明:二级串联质谱中观察到6种罕见胸苷二磷酸单糖的高丰度碎片离子源于磷酸二酯键部分的裂解,出现一系列特征的m/z 321、383... 本文在负离子模式下,应用电喷雾电离多级串联质谱技术对6种罕见胸苷二磷酸单糖的裂解规律进行了初步研究。结果表明:二级串联质谱中观察到6种罕见胸苷二磷酸单糖的高丰度碎片离子源于磷酸二酯键部分的裂解,出现一系列特征的m/z 321、383和401碎片离子,对应[TDP-H]-及该碎片离子分别失去水分子和磷酸基得到的碎片离子;罕见糖环上4位取代基的改变显著影响两个重要特征碎片离子[glycosyl-1''-PO3]-和[glycosyl-1''-P2O6]-的稳定性。 展开更多

关键词 罕见核苷糖 电喷雾串联质谱 裂解规律

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基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法区分大肠杆菌糖基转移酶基因

16

作者 周大炜 刘斌 +2 位作者 吴俊丽 胡波 齐源远 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第1期99-102,共4页

采用高能碰撞诱导解离(CID)-负离子模式基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱技术(MALDITOF MS)区别wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfgD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶酶促反... 采用高能碰撞诱导解离(CID)-负离子模式基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱技术(MALDITOF MS)区别wfgD(大肠杆菌O152中O抗原基因簇内)编码的β-1,3-葡萄糖转移酶和wfgD(大肠杆菌O77中O抗原基因簇内)编码的α-1,3-甘露糖转移酶酶促反应产物-两个脂寡糖非对应异构体。结果表明:由高能CID-MALDI TOF质谱图中产物离子[B3]/[Y3]丰度比率的差别可明确区别两个酶促反应产物。并发现碰撞能量为1.0kV时,碰撞靶气的压力变化可影响产物离子[B3]/[Y3]的丰度比率。推断MALDI-TOF质谱图中,两个脂寡糖非对应异构体的磷酸二脂键部分和糖苷键的裂解依赖于糖基给予体的立体化学。 展开更多

关键词 脂寡糖 糖基转移酶 基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱

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大肠杆菌O110 O-抗原基因簇序列的破译及特异基因鉴定

17

作者 夏秋雨 王威 +4 位作者 王岩 李雅玥 郭宏杰 王磊 耿运琪 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期125-128,118,共5页

目的定大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列,对其基因结构进行遗传学分析,鉴定可用于快速分型的特异DNA序列。方法用长距离PCR扩增O-抗原基因簇序列,建立鸟枪法文库进行随机测序,用生物信息学的方法进行序列拼接与分析,根据测定的序... 目的定大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列,对其基因结构进行遗传学分析,鉴定可用于快速分型的特异DNA序列。方法用长距离PCR扩增O-抗原基因簇序列,建立鸟枪法文库进行随机测序,用生物信息学的方法进行序列拼接与分析,根据测定的序列设计引物,用PCR的方法确定针对大肠杆菌O110的特异基因。结果与结论确定了大肠杆菌O110标准株的O-抗原基因簇序列以及该基因簇中7个开放阅读框架(openreadingframe,orf)的功能,分别为糖基转移酶基因(orf1,orf2,orf7),小分子修饰酶基因(orf3,orf5),O-抗原转运酶基因(wzx)和O-抗原聚合酶基因(wzy)。鉴定出了可以用于PCR方法对大肠杆菌O110快速检测的特异基因。 展开更多

关键词 大肠杆菌 O-抗原基因簇 特异基因 分子分型

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计算机辅助教学管理——本科毕业论文规范化排版 被引量：4

18

作者 褚佳强 《科技资讯》 2009年第28期232-232,共1页

本科毕业论文格式要求严格,审核繁琐、工作量大而且历来是各级检查的重点,经常需要反复修改费时费力。本文详细介绍了本科论文写作中所涉及到的word2007排版软件的相关技巧和应用,并制作论文模板。学生撰写论文只需按照要求套用即可,降... 本科毕业论文格式要求严格,审核繁琐、工作量大而且历来是各级检查的重点,经常需要反复修改费时费力。本文详细介绍了本科论文写作中所涉及到的word2007排版软件的相关技巧和应用,并制作论文模板。学生撰写论文只需按照要求套用即可,降低学生编写论文的难度,同时也减少教师后期审核工作量。 展开更多

关键词 WORD排版 计算机 教学管理

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用多克隆抗体检测干扰素调节因子7的表达(英文)

19

作者 刘晓辉 秦宇 +3 位作者 马星 齐婧 王金忠 耿运琪 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期44-47,共4页

干扰素调节因子7(IRF-7)是调节Ⅰ型干扰素依赖型先天免疫反应的关键因子,在真核细胞防御反应中发挥重要作用。本文在大肠杆菌中表达了重组IRF-7,利用亲和层析的方法进行了纯化,并制备了鼠抗IRF-7的多克隆抗体。所得到的抗血清能够在稀释... 干扰素调节因子7(IRF-7)是调节Ⅰ型干扰素依赖型先天免疫反应的关键因子,在真核细胞防御反应中发挥重要作用。本文在大肠杆菌中表达了重组IRF-7,利用亲和层析的方法进行了纯化,并制备了鼠抗IRF-7的多克隆抗体。所得到的抗血清能够在稀释27 000倍后成功用于免疫印迹检测。该抗血清不但能识别来源于大肠杆菌的抗原,还能检测真核细胞内转染后表达的IRF-7。使用该抗体证实,转染293T细胞后表达的IRF-7主要分布在细胞质内。所制备的抗血清可用于IRF-7的表达和功能研究。 展开更多

关键词 干扰素调节因子7 多克隆抗体 免疫印迹

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