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广东省猪流感病毒的分离鉴定及遗传进化分析 被引量：3
1
作者 郑运 马俊 +6 位作者 罗永峰 秦锋 赵苗苗 曹振鹏 周沛 粟硕 张桂红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期266-271,共6页
为了解广东地区猪流感病毒(SIV)的流行和变异情况,本研究于2013年10月至2014年1月从广东省4个不同地区采集猪鼻拭子和肺脏病料共203份,对样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测,从中分离得到5株SIV,对其进行病毒纯化、全基因组测序和遗... 为了解广东地区猪流感病毒(SIV)的流行和变异情况,本研究于2013年10月至2014年1月从广东省4个不同地区采集猪鼻拭子和肺脏病料共203份,对样品处理之后进行鸡胚分离和RT-PCR检测,从中分离得到5株SIV,对其进行病毒纯化、全基因组测序和遗传进化分析。结果表明,5株SIV分离毒株其中3株为H1N1亚型,2株为H1N2。分离毒株HA裂解位点位于PSIQSR↓GL,具有典型的低致病性流感病毒特征。HA基因序列比对结果显示,5株SIV分离毒株与A/Jiangsu/ALS1/2011(H1N1)株同源性最高,核苷酸相似性为97%~99%。遗传进化分析结果显示,5株分离毒株的PB2、PB1、PA和NP基因片段属于PDM/09分支,M基因片段以及外部基因片段HA属于欧亚类禽分支,NS基因片段属于北美三元重组分支,3株H1N1亚型的NA基因属于欧亚类禽分支,2株H1N2亚型的NA基因属于人季节性流感分支。抗原位点分析结果表明,分离毒株的抗原位点基本保守,但YJ28分离株HA1蛋白上发现3个氨基酸突变,分别是L69S、S137P、E222G。本研究通过对广东省不同地区分离到的SIV进行鉴定分析,掌握SIV的变异趋势,为猪流感的防控提供切实有效的理论依据。 展开更多
关键词 广东地区 猪流感病毒 分离鉴定 相似性 遗传进化分析 抗原位点
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猪繁殖与呼吸综合征病毒FS株Nsp9基因的克隆与序列分析 被引量：4
2
作者 赵孟孟 宋中宝 +4 位作者 冯松林 王文佳 邢星 冯嘉萍 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2249-2256,共8页
为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp9基因的功能进行预测,利用RT-PCR法从细胞毒中扩增PRRSV FS株的Nsp9基因,并将其克隆至pMD18-T载体上,测序得到Nsp9基因序列,利用多种生物信息学软件分析Nsp9序列生物学信息。结果显示,Nsp9基... 为了对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）Nsp9基因的功能进行预测,利用RT-PCR法从细胞毒中扩增PRRSV FS株的Nsp9基因,并将其克隆至pMD18-T载体上,测序得到Nsp9基因序列,利用多种生物信息学软件分析Nsp9序列生物学信息。结果显示,Nsp9基因全长1 929bp,目的基因的蛋白分子质量为70.5ku,pI为7.78,表明该蛋白不稳定;抗原性分析显示,Nsp9基因存在多个抗原位点,柔韧性较好,多处位点的亲水性较强,适合作为单抗制备的表位;同种亚型不同毒株的Nsp9基因氨基酸同源性为96.9%~98.9%,这表明Nsp9基因高度保守,可进一步作为检测靶蛋白用于猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的诊断与疫苗免疫;亚细胞定位预测该基因可能定位于细胞质中,而不是细胞核内;同源建模预测三级结构结果显示,三维结构呈右手型,具有3个亚结构域,没有信号肽。此外,亲本株Nsp9基因与疫苗株Nsp9基因存在多个氨基酸的突变,这些氨基酸的插入与缺失是否与病毒的聚合酶活性和毒力有关还需要进一步试验验证。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 Nsp9基因 克隆 序列分析
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Nsp9基因在Marc-145细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒复制的影响 被引量：3
3
作者 赵孟孟 冯松林 +3 位作者 王文佳 邢星 冯嘉萍 张桂红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3114-3120,共7页
试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和W... 试验旨在验证Nsp9基因是否影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的复制。构建含有Nsp9全长基因的质粒pIRES2-EGFP-Nsp9,并转染到Marc-145细胞中,接毒之后分别通过实时荧光定量PCR和Western blotting方法测定PRRSV N蛋白在mRNA和蛋白水平的表达。结果显示,转染Nsp9基因的Marc-145细胞上PRRSV的N蛋白在mRNA水平上显著高于未转染Nsp9基因的对照组(P<0.05),是对照组的1.5倍,同时转染Nsp9基因后的Marc-145上PRRSV N蛋白水平也明显高于对照组。随着剂量的增加,N蛋白的表达量在mRNA和蛋白水平都有所增加。由以上结果初步可知,Nsp9基因可以在Marc-145细胞上促进PRRSV的复制,Nsp9基因与其复制密切相关。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP 9 基因 MARC-145 细胞 复制
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兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒血清在Marc-145细胞上对病毒复制影响 被引量：1
4
作者 赵孟孟 孙龙 +4 位作者 陈耀 张雅 张二芹 冯松林 张桂红 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期52-58,共7页
制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,探索其对病毒复制影响,通过大量培养猪繁殖与呼吸综合征病毒XH-GD株病毒,高速离心后蔗糖梯度纯化浓缩并免疫新西兰大白兔,4免后采集抗血清,ELISA法测定效价。同时将抗血清与病毒共同孵育接种Marc-... 制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,探索其对病毒复制影响,通过大量培养猪繁殖与呼吸综合征病毒XH-GD株病毒,高速离心后蔗糖梯度纯化浓缩并免疫新西兰大白兔,4免后采集抗血清,ELISA法测定效价。同时将抗血清与病毒共同孵育接种Marc-145细胞,荧光定量PCR和TCID50测定病毒复制情况。成功制备兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清,效价达1640,抗血清可以在m RNA水平和TCID50上降低病毒滴度。结果表明,兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒抗血清可以在Marc-145细胞上抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒复制。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗血清 MARC-145细胞 复制 滴度
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集约化猪场脐疝处理方法
5
作者 邓启伟 王衡 张桂红 《广东畜牧兽医科技》 2018年第1期20-24,26,共6页
集约化和规模化养猪生产中,脐疝病例十分常见。为降低因脐疝导致的残次淘汰率,减少饲料浪费和人力投入,提高养殖效益,针对集约化、规模化猪场中的脐疝问题,经生产实践总结出一套包含病因简析、预防方法、筛查流程、价值评估、治疗方案... 集约化和规模化养猪生产中,脐疝病例十分常见。为降低因脐疝导致的残次淘汰率,减少饲料浪费和人力投入,提高养殖效益,针对集约化、规模化猪场中的脐疝问题,经生产实践总结出一套包含病因简析、预防方法、筛查流程、价值评估、治疗方案、淘汰策略等易管理操作且实用的集约化猪场脐疝处理方案。 展开更多
关键词 猪场 脐疝 处理
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华南地区猪场猪流感和甲型H1N1/2009流感病毒的血清学调查 被引量：10
6
作者 何淑仪 马骏 +8 位作者 方博 孙彦阔 罗永峰 秦锋 郑运 曹振鹏 周沛 粟硕 张桂红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期660-664,共5页
为了解华南地区猪场猪流感病毒（SIV）和甲型H1N1／2009流感病毒（H1N1pdm09）的流行情况，本研究采用血凝抑制试验（HI），对2013年～2014年从5个省份采集的2208份血清样品进行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清学检测，结果显示阳性血清共1... 为了解华南地区猪场猪流感病毒（SIV）和甲型H1N1／2009流感病毒（H1N1pdm09）的流行情况，本研究采用血凝抑制试验（HI），对2013年～2014年从5个省份采集的2208份血清样品进行SIV和H1N1pdm09流感病毒血清学检测，结果显示阳性血清共1269份（57．42％），其中广东省和广西省的感染率最高（p〈0．01）。H1N1SIV、H3N2SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率分别为22．51％、32．97％和26．49％。H1N1pdm09流感病毒的抗体几何平均滴度（GMT）最高（91．93＋1．04，p〈0．05）。H1N1SIV和H3N2SIV在冬季血清阳性率最高，然而在冬末（2月）阳性率却最低（p〈0．01）。H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率在5月和9月出现高峰（p〈0．01）。母猪的H1N1SIV和H1N1pdm09流感病毒抗体阳性率高于仔猪和育肥猪，但仔猪的H3N2SIV抗体阳性率却比较高。本研究为华南地区猪场SIV和H1N1pdm09流感病毒的预防提供参考依据。 展开更多
关键词 猪流感 甲型H1N1/2009流感病毒 血清学调查 血凝抑制试验
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白的亚细胞定位与功能预测 被引量：2
7
作者 赵孟孟 冯丽丽 +9 位作者 张二芹 马红芳 冯松林 崔甜甜 杨春辉 王文佳 邢星 张雅 冯嘉萍 张桂红 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第12期138-142,共5页
为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白9(NSP9)的亚细胞定位,并探索NSP9蛋白在PRRSV复制过程中的定位变化,首先预测NSP9蛋白的生物信息学功能,之后将含有NSP9基因的质粒转染Marc-145细胞,并接种PRRSV,通过间接免疫荧光方法检... 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白9(NSP9)的亚细胞定位,并探索NSP9蛋白在PRRSV复制过程中的定位变化,首先预测NSP9蛋白的生物信息学功能,之后将含有NSP9基因的质粒转染Marc-145细胞,并接种PRRSV,通过间接免疫荧光方法检测NSP9蛋白的表达与定位情况。功能预测结果表明,NSP9蛋白内部存在双向核定位序列、酰胺化位点、N-糖基化位点、酪蛋白激酶磷酸化位点、N-豆蔻酰化位点、蛋白激酶C磷酸化位点、细胞结合位点、酪氨酸激酶磷酸化位点、伸展蛋白重复区域、RNA聚合酶结合区域。间接免疫荧光检测结果显示,PRRSV感染之初,NSP9蛋白定位在Marc-145细胞质中,围绕在细胞核附近,随PRRSV感染时间延长,其逐步往细胞核内转移,转移的面积也逐步增多。可见,PRRSV感染会引起NSP9蛋白向核内转移。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9蛋白 真核表达 亚细胞定位
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