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清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒作用 被引量:35
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作者 周雪梦 陆春妮 +3 位作者 亓文宝 马勇江 汤有志 陈建新 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1351-1356,共6页
目的评价清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒药效,探讨其对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响。方法建立H9N2亚型禽流感病毒鼠肺适应株人工感染BALB/c小鼠模型,以肺指数抑制率、生命保护率和肺病毒滴度为主要评价指标,研究清开灵和双... 目的评价清开灵和双黄连口服液体内抗禽流感病毒药效,探讨其对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响。方法建立H9N2亚型禽流感病毒鼠肺适应株人工感染BALB/c小鼠模型,以肺指数抑制率、生命保护率和肺病毒滴度为主要评价指标,研究清开灵和双黄连口服液对感染H9N2亚型禽流感病毒小鼠的防治效果;以脾指数、胸腺指数和T细胞亚群比率(CD4+/CD8+)为主要评价指标,探讨清开灵和双黄连口服液对感染流感病毒小鼠免疫功能的影响。结果清开灵和双黄连口服液均能显著抑制H9N2亚型禽流感病毒引起的小鼠肺炎实变,攻毒后第4天小鼠肺指数抑制率分别为34.1%、26.3%。清开灵和双黄连口服液对感染小鼠有显著的生命保护作用,存活率分别为70.0%、60.0%,显著高于病毒对照组的存活率(30.0%),鼠肺病毒滴度显著低于病毒组(P<0.01)。清开灵和双黄连口服液对感染病毒后小鼠脾脏和胸腺萎缩具有显著的抑制作用,并能提升感染小鼠脾脏中CD4+/CD8+值。结论清开灵和双黄连口服液具有显著的抗禽流感病毒作用,对病毒复制的抑制及对病毒感染导致的小鼠免疫功能下降的调节作用是其发挥抗病毒功效的重要机制。 展开更多
关键词 清开灵口服液 双黄连口服液 禽流感病毒 抗病毒作用 免疫功能
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上海市肉鸽沙门氏菌的分离鉴定及流行血清型和耐药性分析 被引量:22
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作者 梁德媚 许学斌 +5 位作者 王伟芳 詹泽强 任行星 林嘉特 廖明 张建民 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3322-3328,共7页
为了解上海市农贸市场肉鸽群体中沙门氏菌流行血清型和耐药情况,本试验于2011—2014年间从上海市各区农贸市场采集肉鸽新鲜粪便样本92份,用XLD平板和沙门氏菌属显色培养基分离疑似沙门氏菌,革兰氏染色镜检并进行生化试验,共获得沙门氏... 为了解上海市农贸市场肉鸽群体中沙门氏菌流行血清型和耐药情况,本试验于2011—2014年间从上海市各区农贸市场采集肉鸽新鲜粪便样本92份,用XLD平板和沙门氏菌属显色培养基分离疑似沙门氏菌,革兰氏染色镜检并进行生化试验,共获得沙门氏菌24株,分离率为26.1%。采用Kauffmann-White法和K-B纸片法对24株沙门氏菌进行血清型鉴定和16种抗生素的药敏试验。血清型鉴定显示,24株沙门氏菌可分为鼠伤寒(66.7%)、阿贡纳(25.0%)和科瓦利斯(8.3%)3种血清型。药敏试验结果显示,有75.0%(18株)的分离株表现出不同程度耐药,其中分离株对四环素和磺胺异唑耐药率最高,均达到62.5%,其次为链霉素(58.3%)、萘啶酸(50.0%)、氨苄西林(20.8%)。多重耐药菌株15株(62.5%),耐4种抗菌药物的菌株最多,占16.7%(7株)。另外,分离菌株对头孢吡肟、头孢噻肟、头孢噻甲羧肟、亚胺培南、氧氟沙星等5种药物的敏感率为100.0%,对奥格门丁和环丙沙星有12.5%的中介敏感率。本研究结果表明,上海市肉鸽中沙门氏菌的携带率较高,且菌株多重耐药现象较严重,这为食品中沙门氏菌的防控工作带来较大的挑战和风险,肉鸽沙门氏菌的流行和耐药情况应值得密切关注。 展开更多
关键词 肉鸽 沙门氏菌 血清型 耐药性
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高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病混合感染的诊断与防制 被引量:17
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作者 苏丹萍 王文豪 +2 位作者 张显浩 张丹琳 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第8期186-189,共4页
目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分... 目前在集约化养殖场的猪群中经常出现病毒病和细菌病的混合感染,严重影响中国养猪业的发展。2011年9月,广东某个千头母猪场的猪群大量发病,表现为高热、咳嗽、食欲下降、皮肤发绀、关节肿大等临床症状。通过流行病学调查、剖检、细菌分离鉴定、药敏试验、PCR和RT-PCR等实验室检测最终确诊为高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒病和副猪嗜血杆菌病的混合感染,在此基础上提出和实施了该病的防控方案。 展开更多
关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 猪圆环病毒 副猪嗜血杆菌 诊断 防制
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副猪嗜血杆菌环介导等温扩增检测方法的建立 被引量:14
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作者 朱杰仪 谭实勇 +4 位作者 曾小娜 刘健 刘中勇 朱道中 罗满林 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期204-207,共4页
本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特... 本研究旨在建立检测副猪嗜血杆菌(Hps)的新方法。根据GenBank上发表的不同血清型Hps的16S rRNA序列,找出高度保守区域,再针对该区域设计了4条特异性引物,建立了Hps环介导等温扩增法(LAMP)。试验结果表明,LAMP方法在恒温(63℃)条件下特异性强,比PCR方法敏感100倍,鉴于目前副猪嗜血杆菌分离培养和鉴定的复杂性,LAMP操作简单、成本低,整个扩增反应在1 h内即可完成,为检测Hps提供了一个快速简便的分子生物学方法。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 16S RRNA 环介导等温扩增技术
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华南地区猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及其S基因抗原表位片段的遗传变异分析 被引量:14
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作者 田野 苏丹萍 +4 位作者 蒋伟 钟望 张显浩 陈瑞爱 贺东生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第5期3-5,8,共4页
应用RT-PCR方法对华南地区某大型猪场疑似猪流行性腹泻病料检测,选取阳性病料接种到Vero细胞,命名为CH/GDGZ/2012(简称GD-12)株。用病毒RNA抽提物为模板,对GD-12的S基因抗原区片段的扩增、克隆后进行核苷酸测序。序列分析表明,CH/GDGZ/2... 应用RT-PCR方法对华南地区某大型猪场疑似猪流行性腹泻病料检测,选取阳性病料接种到Vero细胞,命名为CH/GDGZ/2012(简称GD-12)株。用病毒RNA抽提物为模板,对GD-12的S基因抗原区片段的扩增、克隆后进行核苷酸测序。序列分析表明,CH/GDGZ/2012与CV777、Chinju99、Br1/87、DR13和SM98的核苷酸序列同源性分别为96.9%、93.0%、95.7%、96.7%和96.0%,氨基酸序列的同源性分别为97.7%、91.5%、95.4%、98.0%和94.8%。进化树分析结果显示,华南地区CH/GD-01/2011、CH/GDGZ/2012、GDHSY/2011、CH/GXQZ/2011毒株与经典毒株的遗传距离较大,处于不同的亚群。研究表明,PEDV GD-12株已发生遗传变异、关键抗原表位发生较大变化,该研究可为诊断和防控该病提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻 S基因 变异
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猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因RT-LAMP检测方法的建立 被引量:14
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作者 赵彦宗 张显浩 +2 位作者 余小利 苏丹萍 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第12期53-56,共4页
本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高... 本研究根据GenBank中登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)M基因保守序列6个特异性部位设计了2对引物,建立了PRRSV的环介导逆转录等温检测方法。结果表明,该方法灵敏度比RT-PCR高100倍;全部反应可在1 h内完成并可得到其特有的阶梯状条带,而且猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒的扩增结果均为阴性;在反应体系中添加SYBR GREENⅠ染料后,可通过肉眼观察有无荧光而直接判定结果。该方法灵敏度高、特异性好,可作为猪繁殖与呼吸综合征病毒的快速诊断方法。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 M基因 环介导逆转录等温扩增
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中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展 被引量:5
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作者 陈天宝 王娅妮 +5 位作者 刘宝玲 王刚 王晓虎 柳旭辉 蔡汝健 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期2114-2129,共16页
猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道... 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。疫苗免疫是防控PRRS的主要手段,但由于PRRSV毒株高度变异性导致疫苗对该病的效果仍不理想。中药(traditional Chinese medicine,TCM)活性成分众多,生理活性多样,包括抗菌、抗病毒和抗氧化等作用,是抗病毒药物的研究热点。研究证明,中药能以单体或复方的方式对PRRSV产生抑制增殖、阻断吸附和杀灭病毒的作用,以及对机体免疫反应产生影响。关于中药抗PRRSV的机制包括直接抗病毒机制和间接抗病毒机制。直接抗病毒机制即中药有效成分对病毒复制周期的直接影响,主要表现为抑制病毒的吸附、内化、复制、大分子组装和释放中的一环,从而达到抑制病毒的作用。间接抗病毒机制即中药有效成分通过调节细胞因子合成、炎症信号通路、细胞凋亡、氧化代谢和免疫系统等途径来抑制病毒对宿主细胞的负面影响,保证机体免疫反应产生的同时减少机体的损伤。由于中药成分复杂,且抗PRRSV机制尚不明确,因此,笔者以抗病毒作用机制为依据对近年来中药抗PRRSV的研究进行综述,以期为中药防控PRRSV提供理论依据。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 疫苗 中药(TCM) 抗病毒作用 机制
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禽腺病毒血清4型广东株的分离鉴定及致病性研究 被引量:9
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作者 申祖杰 黎世彬 +6 位作者 林华源 任行星 洪艳芬 廖佳钰 张建民 廖明 徐成刚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期722-728,共7页
2016年本实验室从广东省分离到1株禽腺病毒血清4型(FAd V-4),被命名为HZ-06-01。为研究该毒株的生物学特性,首先将它在鸡肝癌细胞(LMH)上进行传代及蚀斑纯化,然后对该病毒的hexon、ORF19及ORF27基因进行序列分析;结果显示,该毒株与... 2016年本实验室从广东省分离到1株禽腺病毒血清4型(FAd V-4),被命名为HZ-06-01。为研究该毒株的生物学特性,首先将它在鸡肝癌细胞(LMH)上进行传代及蚀斑纯化,然后对该病毒的hexon、ORF19及ORF27基因进行序列分析;结果显示,该毒株与国内代表毒株HB1510、JSJ13的hexon基因的序列相似性为100%,且存在ORF19和ORF27基因的缺失。将HZ-06-01株通过肌肉注射和灌喂两种途径对3周龄SPF鸡攻毒,结果,肌肉注射组死亡率为100%(10/10),且在病死鸡的多个脏器中均能检测到病毒;灌喂组死亡率为0(0/10),但攻毒后第2周能检测到抗体;病理组织学观察可见病死鸡肝有明显的核内包涵体、脾淋巴细胞减少等病变。结果表明,HZ-06-01株属于FAd V-4,且注射途径攻毒可以使SPF鸡表现出典型的心包积液综合症。本试验结果为心包积液综合症的诊断及防控提供了基础数据。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 HEXON 致病性 核内包涵体
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2015—2016年广州市部分活禽市场H9N2亚型禽流感病毒的流行病学调查 被引量:9
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作者 钟如婷 孙淑鹏 +2 位作者 丁洁 张远远 张桂红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期631-636,共6页
为了解广州市活禽市场禽流感病毒(AIV)的流行和变异情况,本研究于2015年5月至2016年6月从广州市部分活禽市场采集禽咽喉拭子1579份,对样品处理之后进行分离和RT—PCR鉴定,通过对HA、NA基因进行遗传进化分析后,共检测到9株H9N2亚... 为了解广州市活禽市场禽流感病毒(AIV)的流行和变异情况,本研究于2015年5月至2016年6月从广州市部分活禽市场采集禽咽喉拭子1579份,对样品处理之后进行分离和RT—PCR鉴定,通过对HA、NA基因进行遗传进化分析后,共检测到9株H9N2亚型禽源流感病毒。9株分离株的HA基因属于BJ/94-like分支,核苷酸相似性为93.2%~99.7%;有8株分离株的HA基因裂解位点的序列为P—S—R—S—S-R,1株的HA基因裂解位点的序列发生了P/L—S-R—S-S-R的替换。HA蛋白第226受体结合位点的氨基酸均为亮氨酸(Leu),具有人流感受体结合的特征。6株分离株的NA基因属于BJ/94like分支,3株属于HK/G9一like分支,说明不同分支的病毒开始出现重组。本研究通过对广州市部分活禽市场分离到的禽流感病毒序列分析,掌握活禽市场流感病毒的流行变异趋势,为流感病毒的综合防控及保障公共卫生健康提供参考。 展开更多
关键词 广州市 活禽市场 禽流感病毒 分离鉴定 遗传进化分析
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基于转录组测序技术分析猪德尔塔冠状病毒感染ST细胞机制的初步研究 被引量:1
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作者 谢永生 张昆丽 +1 位作者 张建峰 贺东生 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期236-244,共9页
猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染可导致仔猪出现水样腹泻和死亡,严重危害猪的健康。为研究PDCo V感染引起宿主细胞基因转录水平的变化及初步研究其感染机制,本研究提取PDCo V感染组和不感染该病毒的阴性对照组ST细胞样品总RNA,构建二者的c... 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)感染可导致仔猪出现水样腹泻和死亡,严重危害猪的健康。为研究PDCo V感染引起宿主细胞基因转录水平的变化及初步研究其感染机制,本研究提取PDCo V感染组和不感染该病毒的阴性对照组ST细胞样品总RNA,构建二者的cDNA文库后采用Illumina HiSeq 6000高通量测序平台进行转录组测序(RNA-Seq)。结果显示,所有样品的测序错误率均≤0.03%;Q20/%和Q30/%分别达98%和94%以上;GC含量在51.09%~55.15%;相关性分析结果显示,阴性对照组及感染组细胞样品各组内的R值均>0.9,上述结果表明测序数据可靠,可用于后续转录组学数据分析。采用ggplot2软件分析两组细胞组内测序结果的相关性,并以相关系数R>0.9判定各组内测序数据的准确性;采用DESeq2软件并以P<0.05和log2(Fold change)>1为条件筛选两组细胞中转录显著差异基因;采用ClusterProfiler R软件对转录显著差异基因进行GO功能和KEGG信号通路的富集分析;采用Pheatmap软件对各组ST细胞中与免疫反应相关的转录显著差异基因进行聚类分析;随机选择9个转录显著差异基因经RT-q PCR验证RNA-Seq的结果。筛选结果显示,与阴性对照组细胞相比,共筛选出5719个转录显著差异基因,其中3573个转录显著上调基因,2146个转录显著下调基因。GO功能和KEGG信号通路富集分析结果显示,转录显著上调的基因与ST细胞的免疫应答、防御反应等功能有关;转录显著下调的基因与细胞的氧化还原和新陈代谢等功能有关;转录显著上调的基因参与细胞因子受体互作、天然免疫反应相关、肿瘤坏死因子等的信号通路;转录显著下调的基因与细胞物质代谢信号通路有关,包括氨基酸代谢、脂代谢、乙醛酸和二羧酸代谢等信号通路。与免疫反应相关的转录显著差异基因的聚类分析结果显示,与阴性对照组细胞相比,PDCo V感染的ST细胞中白细胞介素基因(IL-1R1、1L-6、IL-10R 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 转录组测序 转录显著差异基因
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A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51的原核表达及活性检测 被引量:7
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作者 吕梦娜 龙航宇 +3 位作者 王丽梅 唐陶 陈冰冰 林瑞庆 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期19-23,共5页
【目的】原核表达A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51并研究其对A型产气荚膜梭菌Clostridium perfringens的体外抗菌活性。【方法】合成噬菌体裂解酶Cp51基因,并构建了pET-32a-Cp51原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE... 【目的】原核表达A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51并研究其对A型产气荚膜梭菌Clostridium perfringens的体外抗菌活性。【方法】合成噬菌体裂解酶Cp51基因,并构建了pET-32a-Cp51原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经终浓度为0.5 mmol·L^(-1)的IPTG诱导以及镍柱纯化后,获得了可溶性的Cp51重组蛋白;用比浊法检测Cp51重组蛋白的杀菌活性。【结果】噬菌体裂解酶Cp51重组蛋白能够有效降低7株A型产气荚膜梭菌的浊度,裂解酶质量浓度在5μg·m L^(-1)以上、作用30 min对A型产气荚膜梭菌的杀菌率可达到99.99%以上,而对其他种类细菌无杀菌效果。【结论】A型产气荚膜梭菌噬菌体裂解酶Cp51重组蛋白对A型产气荚膜梭菌有较强的体外杀菌活性和特异性,研究结果为后续裂解酶Cp51的临床应用奠定基础。 展开更多
关键词 产气荚膜梭菌 噬菌体 裂解酶 蛋白表达 杀菌活性
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狂犬病病毒强、弱毒株糖蛋白调节Ⅰ型干扰素作用的差异分析 被引量:1
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作者 肖宇 吴凡 +5 位作者 张宝石 徐孟磊 龙家慧 罗均 郭霄峰 罗永文 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期190-198,共9页
【目的】狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高致死性人兽共患传染病。Ⅰ型干扰素(IFN-I)通路在抵抗RABV感染中发挥重要作用。RABV可通过磷蛋白及核蛋白的功能逃逸IFN-I的抗病毒作用,本研究旨在探讨对RABV的致... 【目的】狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的一种高致死性人兽共患传染病。Ⅰ型干扰素(IFN-I)通路在抵抗RABV感染中发挥重要作用。RABV可通过磷蛋白及核蛋白的功能逃逸IFN-I的抗病毒作用,本研究旨在探讨对RABV的致病性有重要影响的糖蛋白(Glycoprotein,G)在调节IFN-I通路方面扮演怎样的角色。【方法】将RABV弱毒株Hep-Flury的G基因替换成致病株CVS-11的G基因,拯救得到重组病毒HepG,分析Hep-Flury、CVS-11和HepG这3种毒株在体内和体外感染对IFN-I通路激活和调控的差别,比较它们在神经细胞中对抗IFN-I抗病毒作用的差异性。【结果】替换了CVS-11的G基因后,重组病毒HepG致病力增强,能够100%致死小鼠,在鼠脑中的增殖水平显著高于亲本株Hep-Flury。在感染鼠脑早期及体外神经细胞时,弱毒株Hep-Flury能够较快地激活IFN-I通路相关基因的表达,重组病毒HepG的激活能力介于HepFlury和CVS-11之间。利用Poly(I:C)激活神经细胞的IFN-I通路后,Hep-Flury的增殖被显著抑制,CVS-11和HepG的复制几乎不受影响,表现出一定的抵抗能力。【结论】RABV的G蛋白在调节和抵抗IFN-I通路方面发挥重要功能,为进一步探究RABV致病毒株的G蛋白如何协助病毒在中枢神经系统中逃逸IFN-I提供了线索和依据。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 Ⅰ型干扰素 糖蛋白 免疫逃逸
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与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析
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作者 梁灿新 郑小雪 +3 位作者 舒雪利 周婉怡 廖明 曹伟胜 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1127-1136,共10页
本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡... 本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。 展开更多
关键词 黄羽肉鸡 鸡内皮血管瘤 K亚群禽白血病病毒 遗传进化分析
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宏转录组测序技术在一起仔猪病毒性腹泻疾病诊断中的运用及分析
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作者 李跃 张长春 +11 位作者 刘光裕 高梦源 符超俊 邢家宝 徐思佳 邝麒元 刘静 高校鹏 王衡 龚浪 张桂红 孙彦阔 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3579-3589,共11页
为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用M... 为了确定2023年春季广西贺州地区猪场仔猪腹泻病原,采用宏转录组测序技术筛查该地区猪群发病和感染情况,为当地仔猪腹泻疾病的防控提供依据。采集2023年3月广西贺州地区10 km范围内6个相邻并同时暴发腹泻的猪场仔猪的肛拭子和粪便,运用MGISEQ 200测序平台进行宏转录组测序开展猪病原感染组学研究,系统性地筛查该区域仔猪腹泻的病原谱,使用实时荧光定量RT-PCR对最主要病毒进行确认,定量分析各病原的丰度并选取鉴定到的病毒基因序列进行系统发育分析,Pearson分析解析病原混合感染的相关性。结果显示:通过宏转录组测序技术在这些样品中共检测到17种致病性细菌、12种病毒和3种寄生虫。病毒以猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)代表的腹泻相关病毒为主,包括猪札幌病毒(porcine sapovirus, SaV)、猪嵴病毒(porcine kobuvirus, PKV)、猪星状病毒(porcine astrovirus, PAstV)、猪猴禽猪肠病毒(porcine sapelovirus, PSV)、轮状病毒A(rotavirus, RVA)等;细菌主要包括3种肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、3种乳杆菌科(Lactobacillaceae)、2种芽胞杆菌科(Bacillaceae)等;寄生虫包括两种滴虫和碘阿米巴原虫。来自5个场区的PEDV刺突基因(spike gene,S基因)系统发育分析显示,毒株均属于G2c簇群,毒株之间核苷酸相似性为99.99%,毒株S基因存在重组情况;其中,一发病猪场还检测到P[6]基因型的rotavirus A部分VP4序列,与人源轮状病毒的核苷酸相似性最高。此外,在4个猪场检测到2种以上的仔猪腹泻相关病毒,系统发育分析结果提示,此区域存在腹泻病原多谱系共同流行的情况。病原相关性分析显示,PEDV/PSV(P<0.001)、PEDV/猪环曲病毒(porcine torovirus, PToV)(P<0.001)和PEDV/PAstV(P<0.05)有显著的负相关,而PEDV/PKV(P<0.05)有显著的正相关。以上结果提示,在该地区相邻养殖区域中,仔猪腹泻的病原谱具有多样性,其中,直接致病病 展开更多
关键词 宏转录组测序技术 仔猪腹泻疾病 病原识别 PEDV 遗传进化分析 相关性分析
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欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒GD2022株的分离鉴定及遗传进化分析
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作者 邓可辉 王修武 +3 位作者 郭智轩 韩淑杰 孙守湖 贺东生 《动物医学进展》 北大核心 2024年第3期34-41,共8页
为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-... 为了解广东省欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV-1)流行情况,将RT-PCR检测PRRSV-1阳性的病料(肺脏和淋巴结)接种猪肺泡巨噬细胞(PAMs)进行病原分离鉴定,以分离毒株核酸作为模板,对分离的PRRSV-1进行全基因克隆和测序,并与国内外PRRSV-1和PRRSV-2参考毒株序列进行同源性及遗传进化分析。结果显示,成功分离1株PRRSV-1,命名为GD2022株,其接种PAMs可引起典型的细胞病变,从出现病变的F5细胞中提取核酸,用PCR分段扩增出PRRSV-1 GD2022株10个基因组片段,分别连接到pCE2 TA/Blunt-Zero载体进行测序,拼接后获得PRRSV-1 GD2022株全基因组长15058个核苷酸(不包含polyA尾)。同源性分析显示,该分离株全基因组序列与PRRSV-1参考毒株(LV株)和PRRSV-2参考毒株(VR2333株)核苷酸序列同源性分别为87%和59.7%。遗传进化树分析显示,全基因序列和ORF5基因与国内外PRRSV-1毒株为同一进化分支,且与疫苗毒分支较远,推断分离株为1株PRRSV-1,属于基因亚型1。氨基酸序列比对分析显示,ORF3和ORF4重叠区域缺失3个核苷酸,导致GP3蛋白和GP4蛋白分别在第245和第65氨基酸位点缺失了1个氨基酸,且与LV株比对,GD2022毒株GP5的氨基酸序列在中和抗原表位第33氨基酸位点(D→A)出现点突变,在高变区第56氨基酸位点(D→A)和第63氨基酸位点(G→D)出现两处突变。重组分析显示,GD2022毒株未发生重组事件。成功分离鉴定1株PRRSV-1毒株,为国内PRRSV-1生物学特性研究提供了材料,也为了解广东省内PRRSV-1流行情况及变异特点提供参考依据。 展开更多
关键词 欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离鉴定 全基因组测序 遗传进化分析
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猪伪狂犬病病毒新流行株主要糖蛋白的分子特征分析 被引量:6
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作者 向柯宇 潘慧 +4 位作者 吉艺宽 王雨 张宝石 罗永文 琚春梅 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期23-28,共6页
【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bar... 【目的】进一步了解猪伪狂犬病毒新流行株的遗传特征。【方法】对从安徽某猪场分离的1株猪伪狂犬病病毒(PRV)AH株进行遗传进化分析及主要糖蛋白gB、gC、gD、gE的序列分析。【结果】PRV AH株与国内2011年以来的流行毒株非常相似,但与Bartha株及其他国外毒株遗传关系较远;国内流行毒株与Bartha株及其他国外毒株相比,其主要糖蛋白均存在明显的连续氨基酸的缺失和插入,且部分突变位点位于这些糖蛋白的重要功能区。【结论】从分子水平上解析了PRV新流行株与疫苗株Bartha株的遗传差异,为进一步深入研究Bartha株疫苗免疫失败的原因提供了理论依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 新流行株 糖蛋白 分子特征
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2017—2020年我国中南地区猪流感病毒感染情况的血清学调查研究 被引量:1
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作者 胡晓坤 钟如婷 +7 位作者 麦湛卓 罗依琢 蔡孟楷 李美娣 贾聪俊 张梦玲 龚浪 张桂红 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第19期88-92,共5页
为了调查猪流感病毒(swine Influenza virus, SIV)在我国中南地区猪场的流行情况,试验采用血凝抑制(HI)试验对2017年7月份—2020年9月份采集的5 514份猪血清样品进行抗体阳性率的测定,并通过GraphPad Prism 8软件对抗体阳性结果进行了... 为了调查猪流感病毒(swine Influenza virus, SIV)在我国中南地区猪场的流行情况,试验采用血凝抑制(HI)试验对2017年7月份—2020年9月份采集的5 514份猪血清样品进行抗体阳性率的测定,并通过GraphPad Prism 8软件对抗体阳性结果进行了不同季节、猪群、地区的统计分析。结果表明:血清抗体总阳性率为56.31%,其中欧亚类禽H1N1亚型猪流感病毒(EA1 H1N1 SIV)的抗体阳性率最高,为31.19%,H3N2、EA2 H1N1、pdm09 H1N1、CS H1N1、H9N2和H4N8 SIV的抗体阳性率分别为19.15%、11.72%、13.78%、7.22%、1.31%和0.16%,未检测到H5N1、H6N6、H7N9亚型抗体,在猪群中不同亚型和不同分支的SIV混合感染情况较为普遍。EA1 H1N1 SIV在春冬季节较为流行,pdm09 H1N1 SIV在春夏季节较为流行,EA2 H1N1和H3N2 SIV无明显的季节性变化。公猪的EA1 H1N1 SIV抗体阳性率显著高于仔猪及保育猪和母猪(P<0.05),母猪的pdm09 H1N1 SIV抗体阳性率显著高于仔猪及保育猪和公猪(P<0.05),仔猪及保育猪的H3N2 SIV抗体阳性率极显著高于母猪(P<0.01)。福建省的EA1 H1N1 SIV抗体阳性率最高,河南省的pdm09 H1N1 SIV抗体阳性率最高。说明SIV普遍存在于中南地区各猪场中。 展开更多
关键词 猪流感病毒 血清学检测 血凝抑制试验 抗体阳性率 中南地区 猪场
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猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒多重PCR检测方法的建立 被引量:6
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作者 赵彦宗 贺东生 +1 位作者 张艳萍 苏丹萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第2期80-83,共4页
本研究根据GenBank上已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的基因序列,设计了3对特异性引物,扩增PCV2、PRV、PPV,建立了同时检测PCV2、PRV、PPV的多重PCR方法。所扩增特异性产物片段大小分别为350、191、... 本研究根据GenBank上已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的基因序列,设计了3对特异性引物,扩增PCV2、PRV、PPV,建立了同时检测PCV2、PRV、PPV的多重PCR方法。所扩增特异性产物片段大小分别为350、191、270 bp。该方法特异性强、敏感性高,可以用于猪圆环病、猪伪狂犬病、猪细小病的实验室诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪伪狂犬病病毒 猪细小病毒 多重PCR
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3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性及宿主适应机制研究 被引量:1
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作者 孙守湖 陈志飞 +5 位作者 郭智轩 俞婷 王修武 李松倍 魏文康 贺东生 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2403-2413,共11页
【目的】研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)的N基因密码子偏好性差异及其影响因素。【方法】从GenBank数据库中下载上述3种猪冠状病毒(PoCoV)的全基因组序列,通过EMBOSS explorer、CALcal、... 【目的】研究猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪丁型冠状病毒(PDCoV)的N基因密码子偏好性差异及其影响因素。【方法】从GenBank数据库中下载上述3种猪冠状病毒(PoCoV)的全基因组序列,通过EMBOSS explorer、CALcal、DAMBE及CodonW等网站及软件计算有效密码子数(ENC)、相对同义密码子使用度(RSCU)等参数并进行ENC绘图、奇偶偏好性和中性绘图分析等。【结果】3种猪冠状病毒的N基因序列的ENC分布在48.99~54.96,其中PEDV、TGEV和PDCoV的ENC分别为53.74±0.61、50.09±0.88和0.72±0.65;RSCU分析显示,3种猪冠状病毒N基因偏好的密码子各不相同,但一般都偏好以U结尾;ENC绘图分析显示,3种猪冠状病毒的N基因数值点均位于标准曲线下方位置;奇偶偏好性分析显示全部散点位于y=0.5以下,且矢量向左下侧偏倚;中性绘图分析显示,3种病毒N基因绘图分析中回归曲线的斜率均接近0。3种猪冠状病毒的S和N基因在牛、猪、犬、人、鸡中的CAI值逐渐增高,RCDI值逐渐降低并接近于1。【结论】PEDV、TGEV、PDCoV的N基因密码子偏好性存在差异且密码子偏好性均较弱,3种猪冠状病毒的N基因表现为“CpG二核苷酸缺失”;自然选择作用是这3种猪冠状病毒N基因密码子偏好性形成的主要进化压力;人、猪、鸡3种宿主均适合3种猪冠状病毒的N基因表达,且PDCoV的S和N基因均更适合在鸡中表达。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪丁型冠状病毒 N基因 密码子偏好性
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一例集约化猪场伪狂犬的诊断及防控 被引量:1
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作者 关金连 赵志伟 +1 位作者 韦锦福 贺东生 《猪业科学》 2023年第1期84-85,共2页
笔者团队开展了一个猪场暴发伪狂犬病(Pseudorabies,PR)后的确诊和防控实践。通过发病情况调查、观察临床症状和剖解组织病变,初步判断某集约化猪场暴发了伪狂犬病。采集2头典型病猪的病料经PCR鉴定为伪狂犬病毒(PRV)阳性,采集10头病猪... 笔者团队开展了一个猪场暴发伪狂犬病(Pseudorabies,PR)后的确诊和防控实践。通过发病情况调查、观察临床症状和剖解组织病变,初步判断某集约化猪场暴发了伪狂犬病。采集2头典型病猪的病料经PCR鉴定为伪狂犬病毒(PRV)阳性,采集10头病猪的血清经PRVg E-ELISA检测为阳性(9/10),确诊该猪场流行和暴发的为猪伪狂犬病。确诊后对该场猪群采取了隔离、消毒和紧急接种等综合防控措施,快速制止了该猪场PR的流行,取得显著的防控效果。 展开更多
关键词 集约化猪场 伪狂犬病 发病情况调查 紧急接种 组织病变 防控效果 PRV 防控实践
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