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曼氏无针乌贼(Sepiella maindroni)繁殖习性及其产卵场修复的研究 被引量:55
1
作者 吴常文 董智勇 +1 位作者 迟长凤 丁峰 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期39-46,共8页
采用对比分析方法,观察了曼氏无针乌贼的繁殖习性,比较了不同产卵附着物的附卵效果,选择典型产卵场(中街山列岛海区)进行附着物的调查。结果表明,曼氏无针乌贼有较高等复杂的性行为,有显著的求偶、争偶及雌雄搏斗现象,乌贼交配对其它乌... 采用对比分析方法,观察了曼氏无针乌贼的繁殖习性,比较了不同产卵附着物的附卵效果,选择典型产卵场(中街山列岛海区)进行附着物的调查。结果表明,曼氏无针乌贼有较高等复杂的性行为,有显著的求偶、争偶及雌雄搏斗现象,乌贼交配对其它乌贼交配有诱导作用;乌贼对附卵基有严格选择,没有充足适宜的附卵基,不仅使乌贼产卵时间延迟、数量减少,而且易被水流冲散、沉入底部致受精卵大量死亡,是影响乌贼繁衍的重要因素;附卵基附卵效果依次为聚乙烯(PE)绳、聚丙烯(PP)绳、钢筋、竹子、木头,颜色依次为黑色、蓝色、红色、黄色,形状依次为圆柱体、正三棱柱体、正长方体、扁长方体,粗度以直径0.25—0.50cm为宜,此外附卵基间应有适当空隙;目前,中街山列岛海区柳珊瑚(Plexaauraa sp.)生物量为0.15—0.64棵/m2,平均生物量为0.32棵/m2,资源数量趋于恢复,但远不能适应乌贼资源修复需要。增殖放流试验表明,修复乌贼资源的可能性很大,但在加大增殖放流工作的同时,必须尽快开展产卵场生态环境修复尤其是产卵附着物修复工作。 展开更多
关键词 曼氏无针乌贼 繁殖行为 附卵基 产卵场修复
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基于易错PCR技术的短小芽孢杆菌YZ02脂肪酶基因BpL的定向进化 被引量:21
2
作者 黄瑛 蔡勇 +1 位作者 杨江科 闫云君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期445-451,共7页
利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C14... 利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍。序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变:T61C/C147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变。通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadex-G75纯化后,酶学性质测定表明:突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍,Km值由8.24mmol/L降低至7.17mmol/L;在pH>8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。 展开更多
关键词 短小芽胞杆菌 脂肪酶 定向进化 易错PCR
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麻黄碱对支气管平滑肌细胞增殖的影响 被引量:22
3
作者 景红娟 汪长东 +2 位作者 宋苏 甘露 何光源 《生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期27-29,共3页
在前人工作的基础上,采用一种更简省的方法分离培养支气管平滑肌细胞;并且利用显微镜观察和MTT的方法,研究了麻黄碱对支气管平滑肌细胞形态和增殖的影响。结果表明:麻黄碱对支气管平滑肌细胞的形态没有明显影响,但是对平滑肌细胞的增殖... 在前人工作的基础上,采用一种更简省的方法分离培养支气管平滑肌细胞;并且利用显微镜观察和MTT的方法,研究了麻黄碱对支气管平滑肌细胞形态和增殖的影响。结果表明:麻黄碱对支气管平滑肌细胞的形态没有明显影响,但是对平滑肌细胞的增殖有一定的抑制作用,并进一步阐述了麻黄碱治疗哮喘等呼吸系统疾病的作用机理。 展开更多
关键词 麻黄碱 哮喘 细胞增殖
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酵母的分子生物学鉴定 被引量:21
4
作者 唐玲 刘平 +2 位作者 黄瑛 杨江科 闫云君 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第5期84-87,共4页
酵母种类繁多,与人类的关系极其密切,但目前由于研究方法的不同,对于酵母的分类还存在着不同的分类体系。而准确快速的对酵母进行鉴定,既可以有效防止食品腐化变质,又可以增加经济效益,同时也为酵母的分类鉴定奠定一定的理论基础。对常... 酵母种类繁多,与人类的关系极其密切,但目前由于研究方法的不同,对于酵母的分类还存在着不同的分类体系。而准确快速的对酵母进行鉴定,既可以有效防止食品腐化变质,又可以增加经济效益,同时也为酵母的分类鉴定奠定一定的理论基础。对常用的核糖体DNA鉴定法、DNA指纹图谱鉴定、脉冲场电泳鉴定、实时PCR和基因芯片等分子生物学鉴定方法在酵母鉴定工作中的研究情况进行了比较。 展开更多
关键词 核糖体DNA DNA指纹图谱 脉冲场凝胶电泳 实时PCR 基因芯片
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一株产紫杉醇内生真菌YN6的分离及鉴定 被引量:20
5
作者 张鹏 刘博 +3 位作者 周蓬蓬 王春兰 江晨 余龙江 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期961-967,共7页
从云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(10-deacetylbaccatinⅢ-10-O-acetyl transferase,DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(C-13 phe... 从云南红豆杉(Taxus yunnanensis)树皮内表皮中分离得到75株内生真菌,采用基于紫杉醇合成关键酶10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-O-乙酰基转移酶(10-deacetylbaccatinⅢ-10-O-acetyl transferase,DBAT)和C-13苯丙氨基侧链CoA乙酰基转移酶(C-13 phenylpropanoid side chain-CoAacyltransferase,BAPT)基因为标志分子的快速筛选方法获得一株可产紫杉醇的内生真菌YN6,并通过高效液相色谱法和质谱法对其紫杉醇进行分析.同时,通过对内生真菌YN6的形态特征分析以及18S rDNA序列分析将其初步鉴定为拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis sp.)真菌.拟盘多毛孢YN6的紫杉醇产量约为120~140μg/L,是目前已报道的紫杉醇产量较高的野生菌株之一.拟盘多毛孢YN6的发现为微生物发酵生产紫杉醇提供了潜在的优良种质资源. 展开更多
关键词 云南红豆杉 内生真菌 紫杉醇 拟盘多毛孢
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基于响应面设计脂肪酶Novo435催化合成甘油二酯的工艺优化 被引量:12
6
作者 李相 刘云 杨江科 《生物加工过程》 CAS CSCD 2009年第5期13-18,共6页
以甘油、油酸为原料,优化在无溶剂体系中以固定化脂肪酶Novo435催化合成甘油二酯(diglyceride,DAG)的工艺。系统考察底物摩尔比(油酸/甘油)、反应温度、时间和加酶量等因素对油酸转化率和甘油二酯含量影响的基础上,利用响应面试验设计... 以甘油、油酸为原料,优化在无溶剂体系中以固定化脂肪酶Novo435催化合成甘油二酯(diglyceride,DAG)的工艺。系统考察底物摩尔比(油酸/甘油)、反应温度、时间和加酶量等因素对油酸转化率和甘油二酯含量影响的基础上,利用响应面试验设计优化各主效因子,并经回归分析获得最优的工艺条件。所得最优条件:油酸与甘油底物摩尔比2.27、反应温度48.14℃、反应时间6.3 h、加酶量1.68%。在此条件下,实验测得油酸转化率为45.42%,甘油二酯质量分数为70.01%,与响应面模型预测值吻合。 展开更多
关键词 脂肪酶Novo435 甘油二酯 响应面设计
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微波消解ICP-MS法测定曼氏无针乌贼肉和海螵蛸中八种微量元素 被引量:14
7
作者 吴常文 迟长凤 +1 位作者 何光源 徐梅英 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第12期3395-3398,共4页
采用微波消解技术,建立了一种测定头足类食药两用生物曼氏无针乌贼肉和海螵蛸中Cr,Mn,Cu,Zn,As,Cd,Hg和Pb等八种微量元素含量的ICP-MS法。测定元素校正曲线的相关系数都在0.9973以上,样品分析结果的相对标准偏差在2.4%~8.7%之间,加标... 采用微波消解技术,建立了一种测定头足类食药两用生物曼氏无针乌贼肉和海螵蛸中Cr,Mn,Cu,Zn,As,Cd,Hg和Pb等八种微量元素含量的ICP-MS法。测定元素校正曲线的相关系数都在0.9973以上,样品分析结果的相对标准偏差在2.4%~8.7%之间,加标回收率在96.5%~106.3%之间,最低检出限在0.002~0.032μg.L-1之间。研究结果表明:曼氏无针乌贼肉和海螵蛸中含有丰富的元素Cu和Zn,但是重金属元素Cd和As含量也超过规定标准,因此曼氏无针乌贼进入市场时,需要对Cd和As含量进行严格的检查。研究结果不仅对曼氏无针乌贼质量控制具有指导意义,而且可为曼氏无针乌贼的养殖、资源利用及产品出口提供科学依据。 展开更多
关键词 曼氏无针乌贼 微量元素 电感耦合等离子体质谱 微波消解
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走自制实验设备之路 凸显学科专业特色 被引量:12
8
作者 刘亚丰 杨祥良 +3 位作者 赵元弟 鲁明波 马聪 卢群伟 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2021年第2期201-203,共3页
培养拔尖创新人才需要一流专业,而一流专业建设离不开创新型实验教学体系建设。以华中科技大学生命科学与技术学院生物物理学大实验课程为例,针对该领域商用教学设备少、缺乏针对性和前瞻性、滞后学科发展等问题,先后自制了膜片钳系统... 培养拔尖创新人才需要一流专业,而一流专业建设离不开创新型实验教学体系建设。以华中科技大学生命科学与技术学院生物物理学大实验课程为例,针对该领域商用教学设备少、缺乏针对性和前瞻性、滞后学科发展等问题,先后自制了膜片钳系统、视网膜电图仪、随机扫描光刺激系统以及小动物行为记录装置与光片式显微成像系统等教学仪器;并在此基础上开设了一系列新的实验项目,推进了学科的发展,使学生触及前沿技术,拓宽了实验的广度与深度,起到很好的教学效果,促进了实验室建设和实验教学改革,提升了学科专业特色和影响力。 展开更多
关键词 生物物理学 自制实验设备 专业特色 学科交叉 实验教学
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魔芋软腐病菌的致病条件及致病因子 被引量:11
9
作者 何峰 杨英 +3 位作者 张伟 季家兴 王雪迪 余龙江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期492-495,共4页
本文研究了魔芋软腐病菌欧文氏杆菌的致病条件以及致病过程中起重要作用的因子。结果表明,该病原菌侵染魔芋的最适温度范围为25°C-30°C,湿度范围为90%-95%。当魔芋受病菌侵染后,从魔芋病斑处和病健处都能检测到果胶酶和纤维素... 本文研究了魔芋软腐病菌欧文氏杆菌的致病条件以及致病过程中起重要作用的因子。结果表明,该病原菌侵染魔芋的最适温度范围为25°C-30°C,湿度范围为90%-95%。当魔芋受病菌侵染后,从魔芋病斑处和病健处都能检测到果胶酶和纤维素酶,随着腐烂程度的升高酶活迅速升高,果胶酶酶活第6天达到最高值1.2473U/mg,纤维素酶酶活在第9天达到最高值1.0813U/mg。表明纤维素酶和果胶酶在魔芋软腐病菌致病过程中起重要作用。 展开更多
关键词 魔芋软腐病 欧文氏杆菌 致病条件 纤维素酶 果胶酶
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麻黄碱抑制支气管平滑肌细胞增殖的机制 被引量:11
10
作者 景红娟 汪长东 +4 位作者 甘露 阎旭 陈鹏 陈明洁 何光源 《细胞生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第5期647-650,共4页
BK通道(large-conductance Ca2+-activated K+ channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中。β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基。麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味... BK通道(large-conductance Ca2+-activated K+ channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中。β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基。麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味治疗哮喘的常用中药。利用RT-PCR和膜片钳等技术,研究麻黄治疗哮喘的作用机制。结果表明:麻黄碱(ephedrine,Eph)作为麻黄的一种主要成分,显著抑制支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)的增殖和BK通道β1亚基的表达,但是对BK通道的电流没有显著影响。 展开更多
关键词 麻黄碱 BK通道 支气管平滑肌细胞 细胞增殖
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扩展青霉脂肪酶基因克隆、密码子优化及表达 被引量:10
11
作者 张正平 杨江科 +2 位作者 徐莉 刘云 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期228-235,共8页
【目的】克隆扩展青霉脂肪酶基因,实现具强催化活性的脂肪酶的异源高效表达。【方法】利用RT-PCR扩增扩展青霉CICC 40356脂肪酶(PEL)cDNA序列,利用重叠延伸PCR(Over-lap extension PCR)技术对PEL的10个稀有氨基酸密码子和表达载体pPIC9... 【目的】克隆扩展青霉脂肪酶基因,实现具强催化活性的脂肪酶的异源高效表达。【方法】利用RT-PCR扩增扩展青霉CICC 40356脂肪酶(PEL)cDNA序列,利用重叠延伸PCR(Over-lap extension PCR)技术对PEL的10个稀有氨基酸密码子和表达载体pPIC9Kα信号肽的9个氨基酸密码子进行了优化,获得了改造过的脂肪酶基因PELM和表达载体pPIC9KM。并构建了带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL1、pPIC9KM-PELM1、pPIC3.5K-PEL1、pPIC3.5K-PELM1和不带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL2、pPIC9KM-PELM2六个重组质粒。利用对硝基苯酚棕榈酸酯(pNPP)为底物检测工程菌脂肪酶的酶活。在此基础上,对工程菌的酶学性质进行了研究。【结果】扩展青霉脂肪酶基因cDNA序列分析结果表明该序列与已报道PEL cDNA序列仅相差3个碱基,同源性高达99%。6个重组工程菌在甲醇诱导下,均表现出pNPP水解活性,28℃诱导100h时酶活达到最高,发酵上清的酶活分别为3.65 U/mL、30.49 U/mL、90.85 U/mL、212.05 U/mL、15.29 U/mL、76.32 U/mL。SDS-PAGE结果表明重组脂肪酶分子量均约28 kDa。酶学性质研究表明,重组脂肪酶PELM最适温度为35℃,最适pH为9.5,在pH7.0-10.0范围内该脂肪酶均较稳定,Ca2+和Mg2+对其有激活作用,Fe2+、Zn2+、Cu2+则有抑制作用,EDTA能使之快速失活。以不同碳链长度的对硝基苯酚酯为底物检测其底物特异性,结果显示其对中链酯(C8-C12)有较强的水解能力,最适底物为为C8的pNP酯。【结论】密码子优化后的扩展青霉脂肪酶基因在毕赤酵母中获得理想的表达,其酶活力比未优化的野生脂肪酶的提高了2.3-2.5倍,表明定点突变对其基因本身更改特有稀有密码子是实现PEL功能蛋白的异源高效表达的有效策略之一。 展开更多
关键词 扩展青霉脂肪酶 基因克隆 密码子优化 表达
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紫外线诱变和恒化器培养筛选耐高温的高产乳酸菌 被引量:8
12
作者 鲁明波 曾翔 +2 位作者 张力 卢正东 余龙江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期520-523,共4页
本文探讨了利用紫外线诱变结合恒化器富集筛选耐高温高产乳酸菌的方法。首先以一株鼠李糖乳杆菌为出发菌种,并用紫外线的方法进行诱变,然后通过恒化器培养的方法在55oC下进行了耐高温高产菌株的富集。最终获得了9株耐高温菌株,其在高温... 本文探讨了利用紫外线诱变结合恒化器富集筛选耐高温高产乳酸菌的方法。首先以一株鼠李糖乳杆菌为出发菌种,并用紫外线的方法进行诱变,然后通过恒化器培养的方法在55oC下进行了耐高温高产菌株的富集。最终获得了9株耐高温菌株,其在高温下的产酸能力较出发菌株有了较大提高,其中一株突变株HT1发酵48h后L-乳酸产量达到了62.9g/L,比出发菌株提高了18.1g/L。本方法比一般平板筛选方法的效率高,大大减轻了复筛的工作量。 展开更多
关键词 乳酸菌 紫外线诱变 耐高温 恒化器富集
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GABAB受体研究现状 被引量:6
13
作者 李莹 刘剑峰 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第16期3144-3146,共3页
代谢型GABAB受体是C族蛋白偶联受体中的特殊的异源二聚体成员,由GABAB1亚基和GABAB2亚基组成。每个亚基在受体的激活过程中具有各自不同的功效。初步研究发现GABAB受体的活性下调方式如失敏和内化并不遵从经典的路径。近期的研究还发现G... 代谢型GABAB受体是C族蛋白偶联受体中的特殊的异源二聚体成员,由GABAB1亚基和GABAB2亚基组成。每个亚基在受体的激活过程中具有各自不同的功效。初步研究发现GABAB受体的活性下调方式如失敏和内化并不遵从经典的路径。近期的研究还发现GABAB受体新的生理功能,GABAB1亚基的不同亚型体在认知学习中具有重要的作用。 展开更多
关键词 GABAB受体 激活 失敏 内化 认知学习
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Isolation and Identification of a Taxol-producing Endophytic Fungus Identified from Taxus media 被引量:8
14
作者 李佟清 张志建 +5 位作者 张鹏 王春兰 刘博 刘婷婷 付春华 余龙江 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第5期38-40,68,共4页
[Objective] The aim was to isolate and identify a taxol-producing endophytic fungus from Taxus media. [Method] 32 strains of endophytic fungi were identified form the inner bark of T. media,and their fermentation prod... [Objective] The aim was to isolate and identify a taxol-producing endophytic fungus from Taxus media. [Method] 32 strains of endophytic fungi were identified form the inner bark of T. media,and their fermentation products were detected by high performance liquid chromatography (HPLC). [Result] Through the screening,a strain of taxol-producing endophytic fungi M57 was obtained,which could produce 45-50 μg/L of taxol,and M57 was defined as Rhizopus sp. through morphological observation and 18S rDNA sequence analysis. [Conclusion] The finding of Rhizopus sp. M57 provided a promising strain for producing taxol with taxol-producing fungi fermentation process. 展开更多
关键词 Taxus media Taxol Endophytic fungi HPLC 18S rDNA
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特发性基底节钙化致病的分子机制 被引量:8
15
作者 王程 徐旋 +5 位作者 李璐璐 王涛 张旻 沈璐 唐北沙 刘静宇 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期731-740,共10页
特发性基底节钙化(Idiopathic basal ganglia calcification,IBGC)俗称Fahr病,是一种以基底节及大脑其他部位钙化为特征的神经系统遗传疾病,患者可出现运动障碍及认知、精神异常,目前尚无有效治疗药物。该病具有遗传异质性,自2012年本... 特发性基底节钙化(Idiopathic basal ganglia calcification,IBGC)俗称Fahr病,是一种以基底节及大脑其他部位钙化为特征的神经系统遗传疾病,患者可出现运动障碍及认知、精神异常,目前尚无有效治疗药物。该病具有遗传异质性,自2012年本课题组发现第一个致病基因SLC20A2以来,现今又发现4个该病的致病基因:PDGFRB,PDGFB,ISG15和XPR1,初步将IBGC的发生机制分别与大脑局部无机磷稳态失衡、血脑屏障功能障碍及IFN-α/β免疫信号过度放大联系起来。文章综述了IBGC的遗传学研究进展,初步探讨了不同基因导致IBGC的分子机理。 展开更多
关键词 特发性基底节钙化 SLC20A2 PDGFRB PDGFB ISG15 XPR1
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紫杉醇生物合成途径中羟化酶的研究进展 被引量:8
16
作者 陈清浦 廖卫芳 +2 位作者 付春华 赵春芳 余龙江 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期554-564,共11页
紫杉醇是一种从红豆杉植物中提取的具有显著抗癌效果的萜类化合物,但在红豆杉中含量很低,难以满足日益增长的临床需求。近年来,利用合成生物学技术建立新的紫杉醇来源途径已成为研究热点。目前,紫杉醇合成相关酶基因大部分已被克隆和鉴... 紫杉醇是一种从红豆杉植物中提取的具有显著抗癌效果的萜类化合物,但在红豆杉中含量很低,难以满足日益增长的临床需求。近年来,利用合成生物学技术建立新的紫杉醇来源途径已成为研究热点。目前,紫杉醇合成相关酶基因大部分已被克隆和鉴定,但其中羟化酶基因的发现与应用仍是目前研究的热点和难点。本文对紫杉醇生物合成途径研究进展进行了综述,对其中羟化酶的克隆及功能研究体系进行了重点深入分析,最后探讨了本领域未来的研究方向并对其前景进行展望,以期为紫杉醇合成途径中未知羟化步骤的羟化酶基因克隆,以及利用合成生物学技术实现紫杉醇的大量生产提供依据。 展开更多
关键词 紫杉醇 生物合成 羟化酶 研究进展
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连作对麦冬根际土壤细菌群落的影响 被引量:7
17
作者 赵春芳 刘浩 余龙江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期487-491,共5页
以中草药麦冬为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法,考察连作对麦冬根际土壤细菌群落的影响。结果表明,重茬麦冬根际细菌群落的Shannon-Wiener指数从苗期至快速生长期、再到块根膨大期分别为3.36-3.40-3.69,丰富度指数为55.0-61.5... 以中草药麦冬为研究对象,采用变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法,考察连作对麦冬根际土壤细菌群落的影响。结果表明,重茬麦冬根际细菌群落的Shannon-Wiener指数从苗期至快速生长期、再到块根膨大期分别为3.36-3.40-3.69,丰富度指数为55.0-61.5-63.5,均匀度指数为0.84-0.82-0.89;而同期正茬根际细菌群落的上述指数值分别为3.66-3.33-3.72、67.5-53.5-63.5和0.87-0.84-0.90。通过对土壤细菌群落的DGGE图谱进行主成分分析,结果显示,上述各个时期重茬与正茬样本均发生显著分离,表明连作改变了麦冬根际细菌群落的多样性变化趋势和结构组成。进一步比较麦冬块根膨大期根际主要功能菌群的数量变化,发现连作后氨化细菌和好气性纤维素分解菌数量增加,而硝化细菌和固氮菌的数量减少。对比发现重茬麦冬的产量仅为正茬的70.6%,表明麦冬连作减产与其根际土壤细菌群落的变化相关。 展开更多
关键词 麦冬 连作 根际 细菌群落
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解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1的克隆、密码子优化及功能表达 被引量:8
18
作者 张黎 赵鹤云 +2 位作者 徐莉 刘云 闫云君 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期969-974,共6页
【目的】克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y.lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用... 【目的】克隆解脂耶氏酵母(Yarrawia lipolytica)脂肪酶基因lip1,并通过密码子优化,首次实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的诱导型和组成型表达。【方法】通过PCR扩增Y.lipolytica脂肪酶基因lip1,根据P.pastoris密码子偏爱性,运用重叠延伸PCR合成改造后基因MLip1,将其分别克隆至诱导型分泌载体pPIC9K和新构建的组成型分泌载体pG AP9K上,电转至P.pastoris GS115中,G418抗性筛选得到高拷贝转化重组子,摇瓶发酵,以对硝基苯酚酯为底物检测脂肪酶水解活力,并对表达产物进行酶学性质分析。【结果】从Y.lipolytica中成功克隆了脂肪酶基因lip1(GenBank:Z50020),全长1461bp,编码486个氨基酸残基,无内含子,无信号肽;密码子优化后基因表达水平相对于出发基因有较大提高,且组成型表达优于诱导型;Lip1酶学性质分析表明,其最适底物为pNPB(C4),45℃下Tris-Hcl缓冲液pH8.5时最大水解酶活为8.07U/mL。【结论】Y.lipolytica脂肪酶基因lip1的克隆丰富了脂肪酶基因资源,其高效基因工程菌的构建为将来实现规模化生产奠定了技术基础。 展开更多
关键词 解脂耶氏酵母脂肪酶基因lip1 克隆 密码子优化 GAP启动子 功能表达
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二步法黑曲霉脂肪酶基因lipA的全基因合成及其在毕赤酵母中的高效表达 被引量:7
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作者 杨江科 严翔翔 +2 位作者 张正平 江雪青 闫云君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期381-387,共7页
黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶,在食品、制药等领域具有广泛的用途。获得黑曲霉脂肪酶高效表达的基因工程菌是该脂肪酶规模化应用的前提。通过全基因合成对目的基因进行分子改造和人工组建是实现基因高效表达和体外分子进化的有效手段... 黑曲霉脂肪酶是重要的工业用酶,在食品、制药等领域具有广泛的用途。获得黑曲霉脂肪酶高效表达的基因工程菌是该脂肪酶规模化应用的前提。通过全基因合成对目的基因进行分子改造和人工组建是实现基因高效表达和体外分子进化的有效手段。本研究主要针对一步法长片段基因合成中复杂结构的非特异性配对和过多的PCR引入碱基错配等问题,采用二步法(组装PCR和酶切-酶连)合成了黑曲霉脂肪酶基因lipA。首先在DNA2.0和Gene2Oliga软件辅助下对lipA基因密码子及RNA二级结构进行优化并引入ClaI(237位)和PstI(475位)酶切位点;通过组装PCR分别合成lipA基因的各片段F1(237bp)、F2(238bp)和F3(422bp);通过该基因内的ClaI和PstI限制性酶切位点连接成完整的全长lipA基因。本方法有效地降低了长片段合成过程中寡核苷酸片段的非特异性配对、复杂的二级结构以及碱基突变对DNA合成的影响,提高了长片段合成的成功率。经密码子优化后的脂肪酶基因(lipA-syn)在毕赤酵母GS115中经诱导表达72h后,发酵液酶活达176.0U/mL,蛋白质含量为143.7mg/L,较出发基因分别提高了10.8倍和5.6倍。实现了该基因的高效表达,并为产酶参数的优化和酶的规模化制备奠定了基础。 展开更多
关键词 黑曲霉脂肪酶基因lipA 全基因合成 二步法 毕赤酵母 高效表达
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性别与自身免疫性疾病 被引量:8
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作者 颜冬菁 黄欣媛 +2 位作者 冷明垒 陈正望 陆婕 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第13期2562-2564,共3页
自身免疫性疾病在人群中感染率5-10%,具有明显的性别差异,女性患者显著高于男性,具体机制仍未研究清楚。研究发现,除了机体自身的遗传易感体质外,雌激素,微嵌合体和性染色体都与自身免疫性疾病发病有关。
关键词 自身免疫性疾病 性别差异 雌激素 微嵌合体 性染色体
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