耐异烟肼结核分枝杆菌临床分离株耐药相关基因突变研究 被引量：44

1

作者 陈曦 马玙 +3 位作者 金奇 姜广路 李传友 王庆 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期250-253,共4页

目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与Gen... 目的阐明结核分枝杆菌耐异烟肼临床分离株katG、inhA、ahpC、kasA及oxyR基因突变特点。方法对144株结核分枝杆菌临床分离株(耐异烟肼菌株101株;异烟肼敏感株43株)的katG、inhA、kasA、ahpC及oxyR基因进行DNA片断扩增及DNA序列分析,与GeneBank中结核分枝杆菌标准序列进行比较。结果(1)耐异烟肼菌株中未发现katG完全缺失,81株耐药株(80.2%)katG存在点突变、缺失或插入,其中16个突变位点未见报道;39株(38.6%)耐药株第315位点突变,低耐药菌株(1μg/ml)第315位点突变率显著高于高耐药菌株(10μg/ml;χ2=9.31,P<0.05);58株(57.4%)耐药株第463位点突变。23株(53.3%)敏感株第463位点突变。(2)5株(4.9%)耐药株inhA发生突变。敏感株inhA无突变。(3)3株(2.9%)耐药株ahpC发生突变。敏感株ahpC无突变。(4)17株(16.8%)耐药株kasA发生突变。敏感株中3株菌株Gly312Ser突变。(5)在全部菌株中未发现oxyR基因突变。(6)综合本项研究中各基因的突变情况,共有91株耐异烟肼菌株发生与异烟肼耐药相关的突变。结论本项研究进一步证实了结核分枝杆菌耐异烟肼与katG、inhA、ahpC及kasA基因突变之间的关系,并且提示还有其他机制参与异烟肼耐药。 展开更多

关键词 临床分离株 耐异烟肼结核分枝杆菌 耐药相关基因 突变研究 DNA序列分析 INHA AHPC katG 基因突变 oxyR基因 位点突变 耐药菌株 耐药株 敏感株 DNA片断 突变位点 未发现 突变率 缺失

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结核分枝杆菌持留性和持留菌的界定 被引量：12

2

作者 潘毓萱 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期264-266,共3页

关键词 结核分枝杆菌 持留性 持留菌 界定 结核病

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IS6110限制性片段长度多态性和间隔区寡核苷酸分型技术在结核分枝杆菌菌株鉴定中的应用 被引量：4

3

作者 郭艳玲 王甦民 +1 位作者 李传友 刘洋 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期796-798,共3页

目的评价IS6110限制性片段长度多态性(IS6110RFLP)和间隔区寡核苷酸分型技术(spoligotyping)两种方法在结核病流行病学上的应用,探讨我国各地区的结核分枝杆菌菌株特点。方法收集158株结核分枝杆菌临床分离株,分别应用IS6110RFLP和Spoli... 目的评价IS6110限制性片段长度多态性(IS6110RFLP)和间隔区寡核苷酸分型技术(spoligotyping)两种方法在结核病流行病学上的应用,探讨我国各地区的结核分枝杆菌菌株特点。方法收集158株结核分枝杆菌临床分离株,分别应用IS6110RFLP和Spoligotyping两种方法进行鉴定。结果(1)IS6110RFLP的分辨力大于spoligotyping分型。(2)将本次试验结果与国际spoligotype数据库进行比较。结果有14个类型属于共有类型,其中类型1为流行的类型,分布广泛,即所说的北京基因型。(3)广东地区与其他地区成簇率和北京基因型所占比例差异有统计学意义(P<0.05)。广东地区成簇率和北京基因型所占比例均显著低于其他地区。结论同时应用IS6110RFLP分型和Spoligotyping两种方法进行结核病流行病学调查研究非常有效,在中国不同地区的菌株具有不同的特点。 展开更多

关键词 多态性 限制性片段长度 核苷酸 分支杆菌 结核 限制性片段长度多态性 结核分枝杆菌 分型技术 菌株鉴定 寡核苷酸 IS6110 SPOLIGOTYPING

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结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断中的应用 被引量：5

4

作者 张旭霞 孙照刚 +3 位作者 李妍 张健源 端木宏谨 李传友 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期448-452,共5页

目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素（Heparin—binding haemagglutinin adhesin，HBHA）在结核病免疫诊断方面的应用价值。方法将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株（BCG）菌体超声裂解，离心后取上清并通过CL-6B层析柱，... 目的探讨结核分枝杆菌肝素结合血凝黏附素（Heparin—binding haemagglutinin adhesin，HBHA）在结核病免疫诊断方面的应用价值。方法将在苏通培养基中培养至稳定期的卡介苗菌株（BCG）菌体超声裂解，离心后取上清并通过CL-6B层析柱，利用含0—500mmol／L氯化钠的磷酸盐缓冲溶液（PBS）进行梯度洗脱后获得天然HBHA。以BCG基因组为模板PCR扩增结核分枝杆菌hbha基因片段，质粒pET-32a为载体，大肠杆菌作为宿主菌制备原核表达的HBHA重组蛋白。以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原，分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组各47例血清通过ELISA方法检测抗HBHA的抗体水平。应用SPSS11．5统计软件对各研究组数据进行方差齐性检验，然后进行t检验，并计算各研究组的敏感度和特异度。结果含有375mmol／L氯化钠的PBS洗脱液可以洗脱获得较纯的天然HBHA蛋白。利用重组HBHA所带的组氨酸标签进行特异分离、纯化。ELISA检测结果表明天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间血清抗体水平差异不明显。肺结核组与肺外结核组的血清抗体ELISA检测的吸光度值在散点图中分布有明显差异，肺结核组吸光度值集中分布在0．30—0．40之间，肺外结核组吸光度值分布在0．35—0．45之间，经统计学检验结果差异具有统计学意义（t：12．224，P〈0．05）。结核组（肺结核和肺外结核）与对照组（PPD阴性，PPD阳性）吸光度值分布具有显著不同，对照组全部小于0．30，结核组吸光度值则集中分布于0．30—0．45之间。经统计学检验（t=25．909，P〈0．05）血清抗体水平具有显著性差异。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA在结核病免疫学诊断的应用中具有较好的特异度和敏感度，有望用于结核病、尤其是肺外结核病的实验室辅助诊断。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 诊断 HBHA蛋白

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实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达 被引量：2

5

作者 孙照刚 张旭霞 +6 位作者 张健源 柴利泉 李妍 田苗 李卫民 邱云青 李传友 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2006年第5期305-307,315,共4页

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化... 目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,利用实时定量PCR的方法,检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后,whiB7基因的表达水平变化不明显外,其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐药株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因,推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 耐药 基因

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结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度与gyrA基因突变的相关性分析 被引量：3

6

作者 张健源 刘毅 +8 位作者 李妍 张旭霞 田苗 高铁杰 张治国 任卫聪 车南颖 程君 李传友 《中华临床医师杂志（电子版）》 CAS 2010年第8期84-88,共5页

目的以氧氟沙星为例,探讨阈值的划分对实验室早期检测出耐氧氟沙星结核分枝杆菌的影响。结合DNA序列分析探讨gyrA基因点突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星耐受程度的相关性。方法 (1)在含氧氟沙星改良罗氏培养基上检测101株结核分枝杆菌临... 目的以氧氟沙星为例,探讨阈值的划分对实验室早期检测出耐氧氟沙星结核分枝杆菌的影响。结合DNA序列分析探讨gyrA基因点突变与结核分枝杆菌对氧氟沙星耐受程度的相关性。方法 (1)在含氧氟沙星改良罗氏培养基上检测101株结核分枝杆菌临床分离株对氧氟沙星的敏感性。(2)测序以检测耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变的特征。结果 (1)52株耐氧氟沙星5.0μg/ml的临床分离株中,17株能在含氧氟沙星10.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长(约占32.69%),49株对氧氟沙星5.0μg/ml敏感的临床分离株中,有2株能在含氧氟沙星2.0μg/ml的改良罗氏培养基上生长(约占4.08%)。(2)基因扩增产物测序发现;耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因点突变主要发生第90、91和94位点上,有10株在不同的gyrA基因位点上发生了碱基缺失或插入的变异,101株被检测的结核分枝杆菌临床分离株中,发生在第95位点的碱基突变率为100%。结论 (1)判定耐药结核分枝杆菌上、下限的阈值对耐药结核菌的早期检出具有重要的作用。(2)发生在耐氧氟沙星结核分枝杆菌gyrA基因上的点突变是多变的,但与结核分枝杆菌对氧氟沙星的耐受程度没有明显的相关性。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 氧氟沙星 广泛耐药结核 GYRA基因突变 阈值

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单链构象多态性与核酸杂交联合检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌 被引量：2

7

作者 张健源 王甦民 +7 位作者 李传友 田苗 张旭霞 赵冰 李卫民 赵雁林 邱云青 马玙 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期841-844,共4页

目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性,并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法(1)体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株,并检测OFLX对这些耐药株的最... 目的探讨聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)并Southern杂交检测耐氧氟沙星(OFLX)结核分枝杆菌的可行性,并探索结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药的界限。方法(1)体外筛选人工诱变的耐OFLX的耐药突变株,并检测OFLX对这些耐药株的最低抑菌浓度(M IC)和最低杀菌浓度(MBC)。(2)扩增结核分枝杆菌的gyrA基因,包括H37Rv 1株、H37Ra 1株、临床分离的OFLX敏感株10株及人工诱变的耐OFLX H37Rv(17株)、H37Ra(17株)及临床分离菌株(51株)共计85株,并对此扩增产物进行SSCP分析及Southern杂交,对比观察耐OFLX结核分枝杆菌的核酸单链条带位移的变化。为了验证PCR-SSCP并Southern杂交结果的可重复性,对36株临床分离的耐OFLX菌株的耐药界限进行初步检测。结果经PCR-SSCP及Southern杂交,85株人工诱变的耐OFLX菌株,全部检测到gyrA基因突变。在OFLX 10μg/m l这一点上,明显地存在着一个结核分枝杆菌对OFLX敏感与耐药并存的交叉区。对36株临床分离的OFLX耐药菌的PCR-SSCP合并Southern杂交检测结果显示,对比标准株H37Ra,在临床分离的耐OFLX菌株间观察到了类似的因单链构象变化而引起的单链位移的结果。结论PCR-SSCP合并Southern杂交可以清晰地区分对OFLX敏感与耐药的菌株,以10μg/m l为界作为判别结核分枝杆菌对OFLX是否已经产生耐药的标准是适宜的。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 氧氟沙星 突变 抗药性 微生物 多态现象 单链构象 核酸杂交

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结核分枝杆菌天然黏附素HBHA的制备及其检测应用 被引量：2

8

作者 张旭霞 孙照刚 +6 位作者 李妍 刘洋 李卫民 邱云青 张健源 端木宏谨 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2006年第4期248-252,共5页

目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外... 目的探讨HBHA在ELISA检测结核病方面的应用。方法将BCG培养至稳定生长期将其苏通培养基上清通过CL-6B层折柱．利用含NaCL的PBS溶液梯度洗脱得到天然HBHA．然后以纯化的天然HBHA蛋白和原核表达的HBHA蛋白为包被抗原分别对肺结核组、肺外结核组、PPD阳性和PPD阴性健康对照组血清各47例进行ELISA检测抗HBHA抗体水平。结果在进行梯度洗脱时含有375mMNaCL的PBS洗脱液可以获得较纯的天然HBHA蛋白。ELISA检测结果表明肺结核组和肺外结核组的血清抗体水平高于PPD阳性和PPD阴性健康对照组（x^2=36．48，P〈0．01），肺结核组和肺外结核组之间（x^2=0.27。P〉0．05）、PPD阳性和PPD阴性健康对照组之间（x^2=0．30，P〉0.05）血清抗体水平没有显著差异。结论利用天然HBHA蛋白和重组HBHA蛋白进行ELISA结核病诊断都具有较高的特异性和敏感性，可以较好地用于结核病的诊断。以天然HBHA为基础的血清学诊断方法具有更好的敏感性和特异性。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 结核 天然HBHA蛋白 结核病 诊断

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Toll样受体及其在抗结核感染免疫中的作用 被引量：2

9

作者 任卫聪 李传友 《国际呼吸杂志》 2009年第17期1054-1057,共4页

Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）是表达在哺乳动物细胞表面的一类重要的模式识别受体，是进化中比较保守的一个受体家族，TLR能特异地识别病原体相关分子模式，不仅在激活天然免疫中发挥着重要的作用，而且还调节获得性免疫，... Toll样受体（Toll-like receptors，TLR）是表达在哺乳动物细胞表面的一类重要的模式识别受体，是进化中比较保守的一个受体家族，TLR能特异地识别病原体相关分子模式，不仅在激活天然免疫中发挥着重要的作用，而且还调节获得性免疫，是连接天然免疫与特异性免疫的主要桥梁。研究表明，TLR是介导宿主对结核杆菌的识别及抗结核免疫反应的关键分子，与抗结核感染免疫有关的主要是TI，R2和TLR4。对TLR的研究有助于阐明结核病的发病机制并为其治疗提供崭新的策略。 展开更多

关键词 TOLL样受体 结核分枝杆菌 天然免疫 获得性免疫

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分枝杆菌抑或分支杆菌辨 被引量：2

10

作者 潘毓萱 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期60-61,共2页

我国结核病细菌学界以往将mycobacteria的中文译名“分枝杆菌”和“分支杆菌”混用 ,本刊来稿中作者也常将它们混用。 1995年本刊将其统一 ,采用“分支杆菌” ,但专家对此一直存有争议。目前 ,国务院自然科学名词审定委员会公布的《医... 我国结核病细菌学界以往将mycobacteria的中文译名“分枝杆菌”和“分支杆菌”混用 ,本刊来稿中作者也常将它们混用。 1995年本刊将其统一 ,采用“分支杆菌” ,但专家对此一直存有争议。目前 ,国务院自然科学名词审定委员会公布的《医学名词》采用的是“分枝杆菌” ,从本期起本刊采用“分枝杆菌”一词。本期刊登潘毓萱教授撰写的《分枝杆菌抑或分支杆菌辨》一文 ,潘教授引经据典 ,对这一有争议的问题进行了详细的论述 。 展开更多

关键词 分枝杆菌 分支杆菌辨 结核病 细菌形态学

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免疫学和结核菌持留现象

11

作者 李传友 马玙 《中国防痨杂志》 CAS 北大核心 2003年第z1期8-10,共3页

　　结核分支杆菌的耐药性和持留现象是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题.结核杆菌能存在人体内数十年并不复制繁殖,但在一定条件下可以启动结核菌的复制,通常情况下,持留结核菌对化疗药物处于耐受状态,这对结核病在全球... 　　结核分支杆菌的耐药性和持留现象是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题.结核杆菌能存在人体内数十年并不复制繁殖,但在一定条件下可以启动结核菌的复制,通常情况下,持留结核菌对化疗药物处于耐受状态,这对结核病在全球范围内的控制和消除是一个重要的障碍.宿主的免疫系统对结核菌持留现象的形成也起着重要的关键作用.…… 展开更多

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实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达 被引量：1

12

作者 孙照刚 张旭霞 +6 位作者 张健源 柴利泉 李妍 田苗 李卫民 邱云青 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2006年第4期243-247,共5页

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变... 目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核/抗药性 whiB7基因

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Toll样受体在结核病免疫应答中的作用 被引量：1

13

作者 李松 车南颖 +1 位作者 张林波 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2010年第3期218-222,共5页

结核病（Tuberculosis）主要是由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）引起的传染性疾病，全球有113的人是该致病菌的携带者，2008年约有182万人死于结核病，且新增病例940万。中国结核病疫情的严重性尤为突出，患者人数居世... 结核病（Tuberculosis）主要是由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis,MTB）引起的传染性疾病，全球有113的人是该致病菌的携带者，2008年约有182万人死于结核病，且新增病例940万。中国结核病疫情的严重性尤为突出，患者人数居世界第二， 展开更多

关键词 结核病疫情 TOLL样受体 免疫应答 结核分枝杆菌 传染性疾病 患者人数 携带者 致病菌

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结核分枝杆菌对人急性白血病单核细胞株THP-1凋亡和死亡水平的影响

14

作者 刘毅 孙照刚 +3 位作者 任卫聪 田苗 李妍 李传友 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期417-422,I0001,I0002,共8页

目的通过对不同毒力的结核分枝杆菌感染细胞后的细胞凋亡和死亡程度的检测,以期发现结核分枝杆菌和细胞相互作用的新的方向和观点,以及对结核病免疫学发病机制的新认识。方法选用不同毒力的结核分枝杆菌H37Ra、H37Rv及北京基因型敏感菌... 目的通过对不同毒力的结核分枝杆菌感染细胞后的细胞凋亡和死亡程度的检测,以期发现结核分枝杆菌和细胞相互作用的新的方向和观点,以及对结核病免疫学发病机制的新认识。方法选用不同毒力的结核分枝杆菌H37Ra、H37Rv及北京基因型敏感菌株(BJTB)分别感染人的巨噬细胞THP-1细胞株,模拟细胞体外感染的过程。以流式细胞仪检测细胞凋亡水平,免疫荧光检测细胞的凋亡蛋白的分布,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色检测细胞晚期凋亡的变化,台盼兰染色检测细胞死亡水平的变化。结果H37Ra引起THP-1细胞的凋亡水平最高,H37Rv次之,BJTB引起的凋亡水平最低。BJTB引起的死亡水平最高,H37Rv次之,H37Ra最低。结论毒力不同的结核分枝杆菌刺激细胞后和细胞的相互作用不同,毒力越高引起的凋亡水平越低,毒力越低引起的凋亡水平越高;对死亡水平的影响是毒力越高的结核分枝杆菌引起的死亡水平越高,毒力越低引起的死亡水平越低。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 细胞凋亡/死亡 北京基因型 毒力

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牛分枝杆菌基因分型方法及其在牛结核病流行病学中的应用

15

作者 王博 李卫民 +2 位作者 范伟兴 杨承谕 黄保续 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2006年第5期44-46,共3页

关键词 结核分枝杆菌 牛结核病 流行病学 分型方法 世界动物卫生组织 诺贝尔奖获得者 人类健康 应用 基因 农业生产

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毒素-抗毒素系统及其在结核分枝杆菌中的研究进展 被引量：1

16

作者 孙照刚 徐玉辉 李传友 《国际呼吸杂志》 2010年第2期108-111,共4页

毒素一抗毒素系统（TAs）广泛存在于非严格胞内寄生的细菌等原核生物中，基因的多态性分析表明，它们具有共同的祖先。目前已经对TAs多个家族进行了蛋白晶体结构解析，并且分析了它们作用的方式。TAs由于具有RNA酶的活性并且能够在特定... 毒素一抗毒素系统（TAs）广泛存在于非严格胞内寄生的细菌等原核生物中，基因的多态性分析表明，它们具有共同的祖先。目前已经对TAs多个家族进行了蛋白晶体结构解析，并且分析了它们作用的方式。TAs由于具有RNA酶的活性并且能够在特定的mRNA碱基排列位置切割mRNA，因此TAs在细菌的潜伏感染与适应环境刺激等方面发挥了重要作用。进一步对目前严重危害人类的结核分枝杆菌的全基因组分析表明：结核分枝杆菌存在36对TAs基因，目前已经有少量TAs的功能在结核分枝杆菌中得到证明。 展开更多

关键词 毒素-抗毒素系统 晶体结构 RNA酶 结核分枝杆菌

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用变性高压液相色谱技术检测耐氧氟沙星的结核分枝杆菌临床株 被引量：1

17

作者 孙照刚 张健源 +6 位作者 张旭霞 李妍 邱云青 田苗 刘毅 聂理会 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2007年第1期30-35,共6页

目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA，扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区（QRDR）核酸片段；分别与H3... 目的利用变性高压液相色谱（DHPLC）技术快速检测结核分枝杆菌gyrA基因的突变，从而对结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物做出初步判断。方法提取试验菌株基因组DNA，扩增gyrA基因的氟喹诺酮药物耐受决定区（QRDR）核酸片段；分别与H37Rv标准株（或者含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准）的相应PCR产物混合、杂交后，利用WAVE核苷酸片段分析系统对各杂交产物进行DHPLC检测；序列测定结果与相应的DHPLC检测结果进行比较以验证DHPLC检测的准确性。采用2mg/L的药物浓度进行氧氟沙星（OFLX）药物敏感性试验，确定101株结核分枝杆菌临床分离株对OFLX的敏感性，通过比较药物敏感性和DHPLC检测结果，建立两者之间的对应关系。结果利用DHPLC检测QRDR突变与序列测定具有同样的检出率（100％），两者都能够很好地检测QRDR突变。采用单纯含有Ser284突变的临床分离株代替H37Rv作为标准进行DHPLC检测，可以检测出除Ser284突变点外所有的点突变形式。在101株结核分枝杆菌临床分离株中，有49株对2mg／L OFLX敏感；52株耐受。52株耐药菌株中，有27株能够通过序列测定和DHPLC法得到准确判定。采用含有单纯Ser284突变的临床分离株作为标准进行DHPLC检测菌株的耐药性，检测结果更准确。结论DHPLC法是快速检测出结核分枝杆菌gyrA基因碱基突变的好方法，但是碱基突变与结核分枝杆菌是否耐受氟喹诺酮类药物存复杂的关系，因此该方法应用于临床检测尚需进一步验证。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 GYRA基因 突变

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细菌whi基因及其在分枝杆菌中的特点和功能 被引量：1

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作者 孙照刚 张健源 李传友 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2006年第4期265-267,共3页

whi基因是根据链霉菌中形成白色孢子突变体的相关基因来命名的。目前发现的whi基因分别为除whiC基因和whiF外的whiA～O中的13种基因。存在whi基因的细菌种类已经在链霉菌和分枝杆菌等17种细菌属中发现。目前对两者的研究资料较少,而研... whi基因是根据链霉菌中形成白色孢子突变体的相关基因来命名的。目前发现的whi基因分别为除whiC基因和whiF外的whiA～O中的13种基因。存在whi基因的细菌种类已经在链霉菌和分枝杆菌等17种细菌属中发现。目前对两者的研究资料较少,而研究较多的是whiB家族,其中whiB2、whiB3和whiB7具有重要的临床意义。该文对现阶段严重威胁人类健康的致病分枝杆菌属中存在的whi基因(whiA、whiD和whiB)其功能与特点进行讨论。 展开更多

关键词 基因 分枝杆菌 特点 功能

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承接和创新——回顾《中华结核和呼吸杂志》50年结核病基础研究有感

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作者 潘毓萱 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期5-7,共3页

关键词 承接 创新 《中华结核和呼吸杂志》 结核病 基础研究 链霉素 异烟肼 化疗

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结核分枝杆菌对人急性白血病单核细胞株THP-1凋亡和死亡水平的影响

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作者 刘毅 孙照刚 +3 位作者 任卫聪 田苗 李妍 李传友 《结核病与胸部肿瘤》 2009年第4期264-269,共6页

目的通过对不同毒力的结核分枝杆菌感染细胞后的细胞凋亡和死亡程度的检测，以期发现结核分枝杆菌和细胞相互作用的新的方向和观点，以及对结核病免疫学发病机制的新认识。方法选用不同毒力的结核分枝杆菌H37Ra、H37Rv及北京基因型敏感... 目的通过对不同毒力的结核分枝杆菌感染细胞后的细胞凋亡和死亡程度的检测，以期发现结核分枝杆菌和细胞相互作用的新的方向和观点，以及对结核病免疫学发病机制的新认识。方法选用不同毒力的结核分枝杆菌H37Ra、H37Rv及北京基因型敏感菌株（BJTB）分别感染人的巨噬细胞THP-1细胞株，模拟细胞体外感染的过程。以流式细胞仪检测细胞凋亡水平，免疫荧光检测细胞的凋亡蛋白的分布，末端脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色检测细胞晚期凋亡的变化，台盼兰染色检测细胞死亡水平的变化。结果H37Ra引起THP-1细胞的凋亡水平最高，H37Rv次之，北京基因型敏感菌株（BJTB）引起的凋亡水平最低。北京基因型敏感菌株（BJTB）引起的死亡水平最高，H37Rv次之，H37Ra最低。结论毒力不同的结核分枝杆菌刺激细胞后和细胞的相互作用不同，毒力越高引起的凋亡水平越低，毒力越低引起的凋亡水平越高；对死亡水平的影响是毒力越高的结核分枝杆菌引起的死亡水平越高，毒力越低引起的死亡水平越低。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 细胞凋亡/死亡 北京基因型 毒力

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