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麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗的研制 被引量:2
1
作者 刘晓琳 张安宁 +7 位作者 陈晓梅 史晓莉 张建军 李瓯 李磊 申亚楠 李玉华 于立芹 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第5期209-213,共5页
目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞... 目的 建立麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubella and varicella,MMRV)联合减毒活疫苗的生产工艺和检定方法.方法 采用麻疹病毒沪-191株、腮腺炎病毒S79株、风疹病毒BRDⅡ株、水痘-带状疱疹病毒北京84-7株,在原代鸡胚细胞或人胚肺二倍体细胞2BS株中制备高滴度疫苗病毒原液.观察4种原液按不同比例稀释配制后病毒的滴度变化和相互干扰现象,确定MMRV疫苗中4种原液的配制比例,并筛选适宜保护剂,建立最佳冻干工艺.同时,建立MMRV联合减毒活疫苗的检定方法.采用t检验对结果进行比较.结果 选择最佳配制比例、保护剂和冻干工艺制备出连续多批MMRV疫苗,按国家药典要求检定全部合格.其中连续3批疫苗经国家检定机构检定合格:麻疹病毒基础滴度和37℃放置7d后的滴度分别≥3.9和≥3.5 lg半数细胞培养感染量(50% cell culture infective dose,CCID50)/ml,腮腺炎病毒≥5.0和≥4.7 lgCCID50/ml,风疹病毒≥5.0和≥4.8 lgCCID50/ml,水痘病毒≥4.5和≥4.4 lg噬斑形成单位/ml.用建立的方法检测MMRV疫苗,结果4种病毒滴度实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t值为0.149~1.838,P值均>0.05).结论 建立了稳定、可行的MMRV疫苗生产工艺和检定方法. 展开更多
关键词 麻疹疫苗 腮腺炎疫苗 风疹疫苗 水痘疫苗 疫苗 联合
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麻疹、腮腺炎、风疹和水痘联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度测定方法研究
2
作者 陈晓梅 李淑云 +8 位作者 张安宁 于立芹 史晓莉 李瓯 张建军 赵炜炜 李磊 申亚楠 刘晓琳 《国际生物制品学杂志》 CAS 2016年第2期59-62,共4页
目的建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubellaandvaricella,MMRV)联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。方法首先通过比较温度,确定中和条件,再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力... 目的建立并验证麻疹、腮腺炎、风疹和水痘(measles,mumps,rubellaandvaricella,MMRV)联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。方法首先通过比较温度,确定中和条件,再根据抗麻疹、腮腺炎、风疹病毒血清对相应病毒的完全中和能力,确定每种抗血清的使用浓度。观察抗血清对2BS细胞生长的影响和对水痘病毒的干扰作用。采用t检验对结果进行比较。结果与37℃1h相比,4℃1h的中和条件能准确反映MMRV疫苗中水痘病毒的滴度水平(t=6.7082,P〈0.01)。3种抗血清(麻疹1:80、腮腺炎1:40、风疹1:40)混合后对2BS细胞生长无影响,对不同滴度水痘病毒无干扰(高滴度t=0.4472,P〉0.05;中滴度t=O.9045,P〉O.05;低滴度t=0.3536,P〉0.05)。使用建立的方法测定MMRV疫苗中水痘病毒滴度,实测值与理论值之间的差异无统计学意义(t=1.7533,P〉0.05)。结论建立了MMRV联合减毒活疫苗中水痘病毒滴度的测定方法。 展开更多
关键词 水痘疫苗 麻疹-腮腺炎-风疹疫苗 疫苗 联合
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戊型肝炎病毒 ORF1研究进展 被引量:1
3
作者 周艳 黄维金 王佑春 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期963-968,共6页
戊型肝炎病毒(hepatitus E virus,HEV)是急性病毒性戊型肝炎的病原体,近年来研究发现免疫力低下或器官移植患者感染 HEV 后形成 HEV 的持续性感染,发展成为慢性戊型肝炎。公认的 HEV包括4个基因型,其中基因1、2型只感染人,而基因... 戊型肝炎病毒(hepatitus E virus,HEV)是急性病毒性戊型肝炎的病原体,近年来研究发现免疫力低下或器官移植患者感染 HEV 后形成 HEV 的持续性感染,发展成为慢性戊型肝炎。公认的 HEV包括4个基因型,其中基因1、2型只感染人,而基因3、4型既感染人也感染猪。除人、猪 HEV 外,还发现了兔、禽、鹿、鼠等 HEV。HEV 是肝炎病毒科戊型肝炎病毒属的唯一成员,为无包膜、正义、单链RNA 病毒,病毒基因组全长约7.2 kb,包括5ˊ非编码区、3个开放阅读框(ORFs)和3ˊ非编码区;ORF1编码与病毒复制相关的酶等非结构蛋白,ORF2编码660 aa的病毒衣壳蛋白,ORF3编码小分子的磷蛋白。ORF2蛋白是公认的病毒抗原,是病毒的主要结构蛋白,ORF3蛋白是病毒多功能蛋白,参与多种调节及病毒释放;ORF1在明确其与病毒复制相关功能后研究较少,近年来,对 ORF1的研究报道增多,发现其新的特征,以下综述 ORF1的研究进展。 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 ORF1 持续性感染 ORF2蛋白 ORF3蛋白 病毒性戊型肝炎 非编码区 非结构蛋白
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清洁消毒新方法的建立及在腮腺炎疫苗车间的应用
4
作者 阎春琦 刘辉 +2 位作者 付永其 高嵩 刘芳 《国际生物制品学杂志》 CAS 2014年第2期58-60,共3页
目的 以酸性/碱性苯酚盐作为常规消毒剂,在腮腺炎疫苗生产车间建立新的清洁消毒方法.方法 每月轮换使用酸性/碱性苯酚盐溶液进行擦拭,且每周使用杀孢子剂进行熏蒸.检测新消毒方法的消毒效果,并与原消毒方法进行比较.结果 新方法的消毒... 目的 以酸性/碱性苯酚盐作为常规消毒剂,在腮腺炎疫苗生产车间建立新的清洁消毒方法.方法 每月轮换使用酸性/碱性苯酚盐溶液进行擦拭,且每周使用杀孢子剂进行熏蒸.检测新消毒方法的消毒效果,并与原消毒方法进行比较.结果 新方法的消毒效果好于原方法,使用新方法消毒后,腮腺炎疫苗车间的沉降菌检出率下降,而且腮腺炎疫苗单收液和原液的污染率分别降至0.1%和0.0%.结论 新消毒方法可用腮腺炎疫苗生产车间的日常清洁消毒. 展开更多
关键词 消毒 腮腺炎疫苗 方法 苯酚盐
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肿瘤疫苗的研究进展
5
作者 聂建梅 谷春霞 张振龙(综述) 《国际生物制品学杂志》 CAS 2011年第2期86-90,共5页
恶性肿瘤是威胁人类健康的严重疾病,目前尚无完全有效的治疗方法。随着医学和生物技术的发展,肿瘤治疗方法已呈现多样化,肿瘤疫苗作为其中一种治疗策略正日益受到人们的关注。此文就肿瘤疫苗研究进展作一综述。
关键词 癌症疫苗 接种 研究
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细胞工厂在制备口服脊髓灰质炎减毒活疫苗中的应用 被引量:7
6
作者 王红燕 张晋 +4 位作者 金歌 佟丁丁 沈莉 郑小滨 柯伟华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第4期550-554,共5页
目的 采用细胞工厂替代转瓶培养Sabin株脊髓灰质炎病毒,制备脊髓灰质炎减毒活疫苗。方法用细胞工厂和15L转瓶分别培养人二倍体细胞(2BS),扩增至36代后,分别接种0.20MOI的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎工作代毒种,待细胞病变达10... 目的 采用细胞工厂替代转瓶培养Sabin株脊髓灰质炎病毒,制备脊髓灰质炎减毒活疫苗。方法用细胞工厂和15L转瓶分别培养人二倍体细胞(2BS),扩增至36代后,分别接种0.20MOI的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎工作代毒种,待细胞病变达100%时收获病毒液,加入保护剂(4.5mol/L氯化镁溶液),制备单价疫苗,分别将Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个型别的单价疫苗按照病毒数10:1:6的比例混匀,制备成三价疫苗半成品,分装入1ml西林瓶中(每瓶为10人份剂量),即为疫苗成品。采用微量滴定法测定疫苗原液及成品的病毒滴度,同时进行其他各项检定,并考察疫苗成品的稳定性。结果采用相同的感染复数接种病毒,细胞工厂制备的3个型别疫苗原液的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗原液,Ⅰ型平均滴度高0.17 log10 CCID50/ml,Ⅱ型平均滴度高0.33 log10 CCID50/ml,Ⅲ型平均滴度高0.27 log10 CCID50/ml;细胞工厂制备的疫苗成品3个型别的病毒滴度均高于转瓶制备的疫苗,三价疫苗的平均滴度均高于6.24 log10 CCID50/ml,符合国内外标准;疫苗原液及疫苗成品的其他各项检定均合格;细胞工厂制备的3批疫苗成品于37℃放置2d,疫苗的总病毒含量不低于6.24 log10 CCID50/0.1ml,且病毒滴度下降未超过0.5 log10 CCID50/0.1ml,于2~8℃放置9个月,疫苗的总病毒含量仍不低于6.24 log10 CCID50/0.1ml,均符合WHO的标准要求。结论利用细胞工厂替代转瓶培养2BS细胞制备脊髓灰质炎减毒活疫苗,可获得高于转瓶培养3个型别疫苗的滴度,且工艺稳定,质量可控,可用于规模化脊髓灰质炎减毒活疫苗的生产。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎减毒活疫苗 细胞工厂 人二倍体细胞
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TCF7L2基因rs290487多态性与辽宁地区2型糖尿病发病的相关性 被引量:5
7
作者 纪红梅 刘巍 +2 位作者 边澈 张晓蕾 郭佳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第6期740-742,753,共4页
目的探讨TCF7L2基因rs290487多态性与辽宁地区2型糖尿病发病的相关性。方法选取2008年12月~2010年7月在中国医科大学附属第四医院内分泌科临床确诊为2型糖尿病的患者255例,提取患者全血基因组DNA,PCR扩增TCF7L2基因单核苷酸rs290487,PC... 目的探讨TCF7L2基因rs290487多态性与辽宁地区2型糖尿病发病的相关性。方法选取2008年12月~2010年7月在中国医科大学附属第四医院内分泌科临床确诊为2型糖尿病的患者255例,提取患者全血基因组DNA,PCR扩增TCF7L2基因单核苷酸rs290487,PCR产物经ACCⅡ酶切后,琼脂糖凝胶电泳分析rs290487的多态性及等位基因rs290487的突变与2型糖尿病发病的相关性。结果 TCF7L2基因rs290487 TT、TC、CC 3个基因型在2型糖尿病组与对照组的分布频率分别为48.24%、46.67%、5.10%和50.74%、40.39%、8.87%,组间差异均无统计学意义(P>0.05);TCF7L2基因rs290487多态位点在两组间的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律;Binary Logistic回归校正了性别、年龄、体重指数、血压、血脂等因素后,TCF7L2基因rs290487多态性与2型糖尿病的发生无相关性(P>0.05)。结论辽宁地区人群中TCF7L2基因rs290487多态性与2型糖尿病的发生无相关性。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 基因 多态性 单核苷酸
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篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗 被引量:5
8
作者 张晋 张月兰 +5 位作者 赵玉秀 王辉 马乐 马可 牛志彬 梁宏阳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1085-1086,1093,共3页
目的建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法利用7.5L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24h取样,检测病毒... 目的建立篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法利用7.5L篮式生物反应器和片状载体培养Vero细胞,接种乙型脑炎病毒P3V2株毒种,根据葡萄糖的消耗量,分析细胞的生长情况及调节病毒培养时的灌流速度,每24h取样,检测病毒滴度。收获的病毒液经纯化后,制备乙脑灭活疫苗,检测各项指标。结果Vero细胞培养至96h,葡萄糖消耗量达高峰,细胞密度达峰值;接种病毒后72h,葡萄糖消耗量达高峰,灌流量为7L/d,连续收获7~9d,共可收获(40±5)L病毒液;96h病毒滴度达高峰,为10.0LgLD50/ml;制备的乙型脑炎灭活疫苗各项指标均达到《中国药典》三部(2005版)要求。结论已建立了篮式生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗的工艺。 展开更多
关键词 篮式生物反应器 片状载体 VERO细胞 乙型脑炎 灭活疫苗
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原代地鼠肾细胞疫苗中残余宿主细胞蛋白检测方法的建立及初步验证 被引量:4
9
作者 赵玉秀 张月兰 +6 位作者 王辉 韩霞 钟书声 马可 罗书荣 白江 赵兰英 《国际生物制品学杂志》 CAS 2010年第1期9-13,共5页
目的建立定量检测原代地鼠肾细胞(primary hamster kidney cell,PHKC)疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔,对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶,通过优化各反应条件建立ELISA方法,同时进行方法... 目的建立定量检测原代地鼠肾细胞(primary hamster kidney cell,PHKC)疫苗中残余宿主细胞蛋白含量的方法。方法制备PHKC蛋白免疫家兔,对获得的抗血清进行纯化并标记辣根过氧化物酶,通过优化各反应条件建立ELISA方法,同时进行方法学验证。结果ELISA检测方法的最佳包被抗体质量浓度为6mg/L,酶标抗体工作浓度为1:2000,最佳检测区间为12.500~200.000μg/L,定量限度为23.250μg/L,准确度和精密度较佳。结论建立了一种简单、准确、可靠检测PHKC病毒性疫苗中宿主细胞蛋白残留量的ELISA双抗体夹心法。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 原代地鼠肾细胞 宿主细胞蛋白 方法
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Vero细胞传代过程中致瘤性的检测 被引量:4
10
作者 李爱灵 王红燕 +7 位作者 张月兰 赵玉秀 马可 张颖 张晋 梁宏阳 赵硕 王辉 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期456-461,共6页
目的为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据。方法对Vero细胞进行传代与冻存,并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测,同时对不同代次Ver6细胞的蛋白质表达进行差异性分析。结果Vero细胞... 目的为生物制品生产及研究用Vero细胞体系传代过程中的遗传安全性评价提供实验数据。方法对Vero细胞进行传代与冻存,并对不同代次Vero细胞进行体外与体内致瘤性检测,同时对不同代次Ver6细胞的蛋白质表达进行差异性分析。结果Vero细胞传代至270代并建立了14个细胞冻存库;不同代次Vero细胞体外与体内致瘤性检测结果均为阴性;200代以上的Vero细胞蛋白质表达水平有所变化。结论Vero细胞传代过程中虽然体外与体内致瘤性检测结果为阴性,但蛋白质组学分析有差异性蛋白表达,这为Vero细胞传代过程中的遗传安全性评价提供了实验参考。 展开更多
关键词 疫苗细胞基质 VERO细胞 传代安全性 致瘤性检测 蛋白质组学分析
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无明胶保护剂冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)稳定性研究 被引量:4
11
作者 张晋 崔子豪 +4 位作者 白亮 张乐 高春龙 马可 张颖 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第4期173-176,共4页
目的 观察不含明胶的不同保护剂配方冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的稳定性.方法 在现行冻干乙型脑炎灭活疫苗制备工艺的基础上,以乳糖替代明胶,并适当增加人血白蛋白用量至5、10和20g/L,制成A、B、C三个保护剂配方疫苗.对疫苗进行2... 目的 观察不含明胶的不同保护剂配方冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)的稳定性.方法 在现行冻干乙型脑炎灭活疫苗制备工艺的基础上,以乳糖替代明胶,并适当增加人血白蛋白用量至5、10和20g/L,制成A、B、C三个保护剂配方疫苗.对疫苗进行25℃加速试验、37℃热稳定性试验和2~8℃长期稳定性试验,检测疫苗的有效抗原含量和效力(T值),并与现行疫苗(对照)进行比较.结果 三个保护剂配方疫苗于25℃放置24周后,A、B疫苗有效抗原含量仅分别降低2.2%和5.9%,效力稳定;而C疫苗有效抗原含量降低13.6%,效力降低5.0%.37℃放置8周后,A、B、C疫苗有效抗原含量分别降低11.2%、13.2%、15.2%,效力分别降低5.8%、9.0%、7.2%.2~8℃放置48个月后,A、B、C疫苗有效抗原含量分别降低17.2%、18.4%、21.9%,效力均符合《冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)注册标准》.在上述试验中,A、B疫苗均优于或等于对照疫苗;C疫苗与对照疫苗差异较大,但均符合相关标准.结论 含A配方保护剂的冻干乙型脑炎灭活疫苗稳定性高且白蛋白用量少,因此,建议首选A配方保护剂. 展开更多
关键词 日本脑炎疫苗 辅药 稳定性
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鸡胚细胞疫苗制品宿主细胞蛋白残留量检测方法的建立 被引量:3
12
作者 赵玉秀 梁宏阳 +5 位作者 马可 赵硕 李爱灵 苏桂民 张月兰 王辉 《国际生物制品学杂志》 CAS 2011年第6期285-288,共4页
目的建立鸡胚细胞疫苗制品中宿主细胞蛋白残留量的检测方法。方法制备鸡胚细胞蛋白和抗鸡胚细胞蛋白抗体,摸索ELISA双抗体夹心法的试验条件,建立酶联免疫检测方法,并进行各项指标的验证。结果纯化的鸡胚细胞蛋白抗体纯度达到90%以... 目的建立鸡胚细胞疫苗制品中宿主细胞蛋白残留量的检测方法。方法制备鸡胚细胞蛋白和抗鸡胚细胞蛋白抗体,摸索ELISA双抗体夹心法的试验条件,建立酶联免疫检测方法,并进行各项指标的验证。结果纯化的鸡胚细胞蛋白抗体纯度达到90%以上,抗体效价可达1:128。蛋白质印迹法分析显示,纯化抗体与鸡胚细胞蛋白呈现特异性结合。该方法的线性范围为12.5—200.0ng/ml,相关系数≥0.9885;对已知浓度样品的回收率为92%~110%,变异系数为3.0%-9.2%。结论建立的ELISA双抗体夹心法对于检测鸡胚细胞疫苗制品中残留的蛋白含量具有良好的线性、专属性、精密性及准确性。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 鸡胚细胞 蛋白质类
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透明质酸对人骨性关节炎软骨细胞凋亡及细胞周期的影响 被引量:3
13
作者 李化光 刘华 +6 位作者 孙洁 刘肃 张林西 王文 郭佳 赵琛 赵增虎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第4期528-530,共3页
目的观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制。方法分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24 h,采用MTT法检测细胞的增... 目的观察透明质酸(Hyaluronic acid,HA)对人骨性关节炎(Osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡及细胞周期的影响,以探讨HA保护软骨细胞的作用机制。方法分离人正常软骨细胞和OA软骨细胞,传至第2代后,分别经HA处理24 h,采用MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。结果 HA能明显降低人OA软骨细胞的凋亡率(P<0.05),提高细胞的增殖活力、S期比例和增殖指数(P<0.05),且对正常人软骨细胞的增殖活力和凋亡无明显影响。结论 HA可促进OA软骨细胞的分裂与增殖,降低细胞凋亡率,从而对软骨细胞发挥保护作用。 展开更多
关键词 透明质酸 骨性关节炎 软骨细胞 细胞凋亡 细胞周期
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两种H7N9流感病毒裂解疫苗的稳定性 被引量:3
14
作者 贾重来 陈美丽 +5 位作者 李清 程为民 宋歌 李艳 柯伟 张劲峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期561-564,共4页
目的分析有佐剂和无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗的稳定性,为确定这两种疫苗的有效期提供数据支持。方法采用WHO推荐的来自NIBSC的H7N9病毒株,按照流感疫苗生产工艺,制备含佐剂和无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗各3批,按照企业注册标准进行成... 目的分析有佐剂和无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗的稳定性,为确定这两种疫苗的有效期提供数据支持。方法采用WHO推荐的来自NIBSC的H7N9病毒株,按照流感疫苗生产工艺,制备含佐剂和无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗各3批,按照企业注册标准进行成品检定,合格后,分别于2~8℃和37℃条件下放置不同时间,进行稳定性试验。结果两种H7N9流感疫苗于2~8℃保存18个月,血凝素(hemagglutinin,HA)含量下降缓慢,其中无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗组HA含量下降均值为12.58%,含佐剂组HA含量下降均值为9.55%;两种H7N9流感疫苗于37℃保存21 d,HA含量均有下降,其中无佐剂H7N9流感病毒裂解疫苗组HA含量下降均值为13.69%,含佐剂组HA含量下降均值为8.64%;两种H7N9疫苗成品检测均符合企业注册标准。结论两种H7N9流感病毒裂解疫苗各项质量指标均符合《中国药典》三部(2010版)流感疫苗检定质量标准,HA含量下降幅度低于企业注册标准,疫苗稳定性良好。 展开更多
关键词 H7N9流感疫苗 稳定性 佐剂
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高效表达乙型肝炎表面抗原的CHO工程细胞株的构建 被引量:1
15
作者 时成波 徐军 +3 位作者 王堃 贾重来 徐冬冬 盛军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第12期1172-1175,共4页
目的构建高效表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的CHO工程细胞株。方法从pCIneo质粒出发,构建含有改造了稀有密码子的HBsAgS基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶(DHFR)转录单位的新型表达载体,利用脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经3轮氨甲喋呤(MTX)... 目的构建高效表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的CHO工程细胞株。方法从pCIneo质粒出发,构建含有改造了稀有密码子的HBsAgS基因和启动子弱化的二氢叶酸还原酶(DHFR)转录单位的新型表达载体,利用脂质体转染CHO/dhfr-细胞,经3轮氨甲喋呤(MTX)梯度加压筛选和单克隆筛选,获得高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,并对HBsAg的分泌动态进行检测。结果所构建的新型表达载体pCI-DS经PCR及酶切鉴定,证明构建正确,转染CHO/dhfr-细胞后,经筛选得到高效表达HBsAg的CHO工程细胞株3F9,表达量达9.21μg/106个细胞·48h。单层细胞培养动态表明,3F9株细胞能在40d内稳定高效表达HBsAg。结论已成功构建稳定高效表达HBsAg的CHO工程细胞株,为提高HBsAg的产量创造了条件。 展开更多
关键词 乙型肝炎表面抗原 中国仓鼠卵巢细胞 高效表达
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H7N9型流感疫苗毒种NIBRG-267的传代稳定性 被引量:1
16
作者 陈美丽 贾重来 +5 位作者 赵雪 陈宇 朱小宇 张弓 张劲峰 柯伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第7期673-677,共5页
目的研究H7N9型流感疫苗生产用毒种NIBRG-267的传代稳定性,为制定毒种传代限定次数提供依据。方法将VE2代原始毒种NIBRG-267接种鸡胚尿囊腔,并连续传10代(VE3~VE12),参照《中国药典》三部(2010版)相关要求,对各代次毒种进行鉴别试... 目的研究H7N9型流感疫苗生产用毒种NIBRG-267的传代稳定性,为制定毒种传代限定次数提供依据。方法将VE2代原始毒种NIBRG-267接种鸡胚尿囊腔,并连续传10代(VE3~VE12),参照《中国药典》三部(2010版)相关要求,对各代次毒种进行鉴别试验、支原体、无菌检查及血凝滴度、病毒滴度、外源因子检测,提取VE3、VE4、VE5、VE12代病毒总RNA,采用RT-PCR法扩增血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因,并进行测序,与Gen Bank中公布的A/Shanghai/02/2013(H7N9)基因序列进行比对分析。结果 VE2代病毒连续传10代至VE12代,血凝滴度均不低于1∶480,病毒滴度均不低于8.2 Lg EID50/ml,鉴别试验、支原体、无菌检查及外源因子检测结果均符合要求。VE3、VE4、VE5、VE12代病毒的HA和NA基因核苷酸和氨基酸序列均一致,与A/Shanghai/02/2013(H7N9)的HA(KF021597.1)、NA(KF021599.1)基因序列一致。结论 H7N9型流感疫苗生产用毒种NIBRG-267连续传10代,生物学和遗传稳定性均良好,为制定毒种传代限定次数提供了数据支持。 展开更多
关键词 流感疫苗 毒种 传代 稳定性
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Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性
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作者 李懿 宁海京 +8 位作者 张冲 支惠 陈明 宋冬梅 马淑花 赵敏 王红燕 石慧颖 沈心亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第8期786-788,共3页
目的探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性。方法用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1MOI接种Vero细胞,进行传代培养,共传13代。采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wiste... 目的探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性。方法用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1MOI接种Vero细胞,进行传代培养,共传13代。采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wister大鼠,采用微量中和试验测定病毒的免疫原性。结果Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在Vero细胞上连续传13代,病毒滴度基本稳定;D抗原含量呈下降趋势;免疫原性下降迅速。结论用Sabin株脊髓灰质炎病毒制备灭活疫苗,在Vero细胞上传代的代次越低越好。 展开更多
关键词 脊髓灰质炎病毒 Sabin株 VERO细胞 传代 稳定性
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Vero细胞在无血清条件下制备乙型脑炎灭活疫苗
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作者 贾锐 马可 +4 位作者 王红燕 李虎 朱楠 白亮 张晋 《国际生物制品学杂志》 CAS 2015年第3期112-115,120,共5页
目的探索Vero细胞在无血清条件下制备乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法用无血清培养基培养Veto细胞,并将乙型脑炎病毒P3V2株毒种接种于培养的Vero细胞,观察细胞和病毒的生长情况。收获病毒液,通过灭活、纯化制备乙型脑炎灭活疫苗,检测... 目的探索Vero细胞在无血清条件下制备乙型脑炎灭活疫苗的工艺。方法用无血清培养基培养Veto细胞,并将乙型脑炎病毒P3V2株毒种接种于培养的Vero细胞,观察细胞和病毒的生长情况。收获病毒液,通过灭活、纯化制备乙型脑炎灭活疫苗,检测疫苗各项指标,并与有血清培养工艺制备的疫苗(2013年生产的疫苗)进行比较。结果无血清培养基培养的Vero细胞生长良好,培养5d的细胞呈致密单层生长。3批无血清培养工艺制备的疫苗的第1、2和3次收获液的平均病毒滴度分别为8.847、8.319和7.194lgLD50/ml。3批无血清培养工艺制备的疫苗半成品的平均抗原含量(1.51Eu/ml)与有血清培养工艺制备的疫苗(1.41EU/ml)相当,但前者的宿主细胞蛋白含量(19.69μg/L)则明显低于后者(63.90btg/L)。结论乙型脑炎病毒可在无血清Vero细胞中良好生长,Vero细胞无血清培养工艺制备乙型脑炎灭活疫苗是可行的。 展开更多
关键词 培养基 无血清 VERO细胞 脑炎病毒 日本 疫苗 灭活
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冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂的筛选
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作者 张晋 张颖 +6 位作者 杨阳 佟芳 董建春 白亮 郝宇 高春龙 康岚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1110-1112,共3页
目的筛选冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂,以替代传统的动物源性稳定剂。方法取同一批乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)原液,分别加入A、B、C、D稳定剂(非动物源性),制备成冻干剂型,分别检测其外观、水分、有效抗原含量和效... 目的筛选冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)非动物源性稳定剂,以替代传统的动物源性稳定剂。方法取同一批乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)原液,分别加入A、B、C、D稳定剂(非动物源性),制备成冻干剂型,分别检测其外观、水分、有效抗原含量和效力等,以传统稳定剂作对照,并考察其稳定性。结果冻干前后,疫苗的有效抗原含量及效力与对照无明显差异。加入D稳定剂(不含人血白蛋白和明胶)的冻干乙型脑炎灭活疫苗于37℃放置6个月,效力降低15.1%;于2~8℃放置2年,效力仍高于参考品。其他检测指标均符合要求。结论D稳定剂可替代传统稳定剂,用于制备冻干乙型脑炎灭活疫苗。 展开更多
关键词 乙型脑炎 灭活疫苗 冻干 稳定剂
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Vero细胞HCP试剂盒在冻干乙型脑炎灭活疫苗生产过程中的应用
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作者 张晋 张颖 +3 位作者 张乐 郝屿 康岚 崔子豪 《国际生物制品学杂志》 CAS 2013年第6期292-295,共4页
目的 通过检测冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产过程各道工序中的细胞残余蛋白,达到控制疫苗中Vero细胞残余蛋白的目的.方法 采用Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)试剂盒,对2009-2012年共65批冻干乙型脑炎灭活疫苗(... 目的 通过检测冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)生产过程各道工序中的细胞残余蛋白,达到控制疫苗中Vero细胞残余蛋白的目的.方法 采用Vero细胞宿主细胞蛋白(host cell protein,HCP)试剂盒,对2009-2012年共65批冻干乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)在病毒液收获、浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖和半成品配制阶段中的HCP含量进行检测.结果 2009-2012年,病毒液收获阶段Vero细胞HCP含量无明显差异.2010年工艺优化后,2010-2012年的HCP平均值与2009年相比,在浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、纯化、脱糖、半成品配制阶段分别降低了78.83%、83.42%、78.62%、86.88%、86.40%.结论 通过Vero细胞HCP试剂盒的动态监测,可以对生产过程中Vero细胞的残余蛋白含量实施控制. 展开更多
关键词 日本脑炎疫苗 酶联免疫吸附测定 VERO细胞 宿主细胞蛋白
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