凝集素依赖的LAK细胞介导的肿瘤细胞凋亡 被引量：11

1

作者 董海东 邢嵘 +2 位作者 郭连英 杨翠红 钱振超 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期245-248,共4页

作者采用ＤＮＡ电泳及荧光染色流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析方法，检测了凝集素依赖的ＬＡＫ细胞介导的肿瘤细胞死亡机制。在体外以白血病和实体瘤细胞系为靶细胞，在１μ／ｍｌ的凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）存在下，人ＬＡＫ细胞在４小时... 作者采用ＤＮＡ电泳及荧光染色流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析方法，检测了凝集素依赖的ＬＡＫ细胞介导的肿瘤细胞死亡机制。在体外以白血病和实体瘤细胞系为靶细胞，在１μ／ｍｌ的凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）存在下，人ＬＡＫ细胞在４小时之内就可诱导这些肿瘤细胞（Ｕ９３７细胞、Ｒａｊｉ细胞，ＳＷ１１１６细胞和Ｈｅｐ２细胞），出现以ＤＮＡ断裂成不连续的片断为特征的细胞调亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）现象。用ＲＮＡ及蛋白合成抑制剂预处理靶细胞并不能阻断其ＤＮＡ断裂。ＦＡＣＳ分析显示在ＰＷＭ存在下ＬＡＫ细胞诱导靶细胞凋亡的程度高于ＬＡＫ细胞单独使用时。而且实验提示ＬＡＫ细胞在与靶细胞相互作用的同时，也会部分地发生细胞死亡。以上结果表明诱导靶细胞凋亡是ＬＡＫ细胞在凝集素存在下杀伤肿瘤细胞的有效手段之一，由此为提高ＬＡＫ细胞疗效提供了新的实验依据。 展开更多

关键词 凝集素 LAK细胞 细胞凋亡 肿瘤细胞凋亡

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癌基因与抗癌基因和细胞程序性死亡及肿瘤的发生与控制 被引量：9

2

作者 董海东 钱振超 《实用肿瘤杂志》 CAS 北大核心 1995年第1期8-10,共3页

癌基因与抗癌基因和细胞程序性死亡及肿瘤的发生与控制大连医科大学病理生理学教研室（１１６０２３）董海东，钱振超癌基因和抗癌基因的相继发现大大加深了人们对肿瘤发病学的认识。癌基因和抗癌基因不仅调节和控制肿瘤细胞的增殖、分... 癌基因与抗癌基因和细胞程序性死亡及肿瘤的发生与控制大连医科大学病理生理学教研室（１１６０２３）董海东，钱振超癌基因和抗癌基因的相继发现大大加深了人们对肿瘤发病学的认识。癌基因和抗癌基因不仅调节和控制肿瘤细胞的增殖、分化和转移，而且也调节肿瘤细胞的程序... 展开更多

关键词 癌基因 抗癌基因 细胞死亡 肿瘤发生 肿瘤控制

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依赖凝集素的人单核细胞介导的U937和Raji细胞系细胞程序性死亡 被引量：1

3

作者 董海东 邢嵘 +1 位作者 沈洁 钱振超 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第12期636-638,共3页

用ＤＮＡ电泳和荧光染色法流式细胞仪分析，发现在依赖美洲商陆凝集素（ＰＷＭ）的单核细胞介导的细胞毒活性中，白血病靶细胞Ｕ９３７和Ｒａｊｉ细胞均呈现以ＤＮＡ断裂为特征的细胞程序性死亡。通过细胞毒试验和荧光染色分析表明：抗... 用ＤＮＡ电泳和荧光染色法流式细胞仪分析，发现在依赖美洲商陆凝集素（ＰＷＭ）的单核细胞介导的细胞毒活性中，白血病靶细胞Ｕ９３７和Ｒａｊｉ细胞均呈现以ＤＮＡ断裂为特征的细胞程序性死亡。通过细胞毒试验和荧光染色分析表明：抗肿瘤坏死因子α的单克隆抗体和乙酰基葡萄糖胺单糖可分别阻断单核细胞所诱导的Ｕ９３７细胞或Ｒａｊｉ细胞死亡和ＤＮＡ断裂。试验中还发现ＰＷＭ同时可与单核细胞和这两种肿瘤细胞相结合。提示凝集素在促进效靶细胞相互接近，进而导致肿瘤细胞发生程序性死亡方面具有重要作用。 展开更多

关键词 单核细胞 凝集素 细胞凋亡 细胞程序化死亡

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hIL-7-GM-CSF(7-127)融合蛋白的构建和E.coli表达 被引量：11

4

作者 吴秋茜 姜宇飞 +3 位作者 陈慰峰 钱晓萍 舒翠玲 沈倍奋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期52-57,共6页

目的将ｈＩＬ－７基因与ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）基因通过一中间接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接到一起，并在大肠杆菌中表达具有ｈＩＬ－７活性和极高ｈＧＭ－ＣＳＦ活性的ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合分子。方法通过... 目的将ｈＩＬ－７基因与ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）基因通过一中间接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３连接到一起，并在大肠杆菌中表达具有ｈＩＬ－７活性和极高ｈＧＭ－ＣＳＦ活性的ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合分子。方法通过引物设计和采用分级克隆的策略构建原核表达载体ｐＢＶ２２０－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７），并在大肠杆菌中表达ｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）融合蛋白。连接ＩＬ－７与ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的中间接头为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３。通过选择密码子，在（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ｃＤＮＡ的中后部产生了一个ＢａｍＨⅠ位点，ＧＧＡ编码Ｇｌｙ，ＴＣＣ编码Ｓｅｒ。ＩＬ－７下游引物和ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）上游引物的合成均起始于该位点。结果ｐＵＣ１８－ＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）序列测定表明，ＩＬ－７、ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）以及中间接头序列均与设计一致。活性测定结果表明，ｒｈＩＬ－７－ＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）的ｒｈＩＬ－７比活性约为１．６×１０６Ｕ／ｍｇ，ｈＧＭ－ＣＳＦ（７－１２７）比活性约为５×１０９～１×１０１０Ｕ／ｍｇ，比ｒｈＧＭ－ＣＳＦ标准品高５００～１０００倍。结论在ＩＬ－７－ＧＭ－Ｃ? 展开更多

关键词 白细胞介素7 融合蛋白 GM CSF 大肠杆菌

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一种小鼠胸腺基质细胞和活化胸腺细胞共表达分子的研究

5

作者 肖士云 陈慰峰 何其华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期459-461,共3页

目的 :研究抗小鼠胸腺基质细胞 (MTSC)Pf18 3单抗识别分子的表达特性。方法 :采用流式细胞 (FACS)和激光扫描共焦显微镜 (CLSM)分析TSC单抗Pf18 3染色特征。结果 :FACS分析发现Pf18 3单抗识别分子可表达于胸腺、胎肝和骨髓等不同来源的... 目的 :研究抗小鼠胸腺基质细胞 (MTSC)Pf18 3单抗识别分子的表达特性。方法 :采用流式细胞 (FACS)和激光扫描共焦显微镜 (CLSM)分析TSC单抗Pf18 3染色特征。结果 :FACS分析发现Pf18 3单抗识别分子可表达于胸腺、胎肝和骨髓等不同来源的基质细胞系和腹腔巨噬细胞表面。新鲜分离的胸腺细胞Pf18 3识别分子表达阴性 ,但ConA活化可诱导并上调其表达 ,随活化时间延长表达增高 ,且主要表达于CD4+CD8+和CD4+CD8-两细胞亚群。CLSM分析可见 :荧光沿胸腺细胞边缘呈环状分布 ,活化后荧光明显增厚向胞浆延伸 ,胞核不着色。结论 :Pf18 3单抗识别分子共表达于胸腺基质细胞及活化的胸腺细胞 。 展开更多

关键词 单克隆抗体 FACS CLSM T细胞 胸腺基质细胞

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两种小鼠胸腺基质细胞对胸腺细胞凋亡的不同作用 被引量：11

6

作者 董海东 庞学文 陈慰峰 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期284-288,共5页

采用两种体外建系的小鼠胸腺基质细胞（ＴＳＣ）系，即上皮样ＴＳＣ（ＭＴＥＣ１）和树突状ＴＳＣ（ＭＴＳＣ４），观察其对胸腺细胞凋亡的影响。小鼠胸腺细胞在体外培养过程中，可自发地出现细胞凋亡的特征，表现为ＤＮＡ呈梯度断裂片... 采用两种体外建系的小鼠胸腺基质细胞（ＴＳＣ）系，即上皮样ＴＳＣ（ＭＴＥＣ１）和树突状ＴＳＣ（ＭＴＳＣ４），观察其对胸腺细胞凋亡的影响。小鼠胸腺细胞在体外培养过程中，可自发地出现细胞凋亡的特征，表现为ＤＮＡ呈梯度断裂片段，细胞经ＦＡＣＳ分析出现亚二倍体ＤＮＡ波峰，以及Ｆｅｕｌｇｅｎ′ｓ染色镜检所见的ＤＮＡ凝聚和断裂。胸腺细胞在与ＴＳＣ共育后，在ＭＴＥＣ１组可见其凋亡过程受到抑制和存活率的增加；在ＭＴＳＣ４组，仅在共育１２至１８小时时，见到胸腺细胞凋亡加强，而其存活率不受影响。结果提示在胸腺细胞发育过程中，其阴性选择作用的主要机制之一的ＰＣＤ过程受不同来源的胸腺基质细胞的调节。 展开更多

关键词 胸腺细胞 胸腺基质细胞 细胞凋亡

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凝集素美洲商陆对人单核细胞及白血病细胞的HLA－DR分子表达的影响 被引量：5

7

作者 董海东 王晓 +1 位作者 沈洁 钱振超 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第4期218-221,共4页

通过流式细胞仪的方法，报道了凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）对人单核细胞和白血病细胞表面的ＨＬＡ－ＤＲ分子表达的影响。实验结果显示：ＰＷＭ可以直接与单核细胞和白血病Ｕ９３７细胞及Ｒａｊｉ细胞相结合，而且这３种细胞均表达ＨＬＡ... 通过流式细胞仪的方法，报道了凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）对人单核细胞和白血病细胞表面的ＨＬＡ－ＤＲ分子表达的影响。实验结果显示：ＰＷＭ可以直接与单核细胞和白血病Ｕ９３７细胞及Ｒａｊｉ细胞相结合，而且这３种细胞均表达ＨＬＡ－ＤＲ分子。经ＰＷＭ处理２４ｈ后，正常人单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达不受影响，而Ｕ９３７细胞和Ｒａｊｉ细胞上的ＨＬＡ－ＤＲ分子均被下调，而且这种下调作用与ＰＷＭ的剂量有关。其他凝集素，如ＰＨＡ、ＷＧＡ和内毒素ＬＰＳ对白血病细胞ＨＬＡ－ＤＲ分子的表达无影响。结果表明，通过凝集素ＰＷＭ的处理可以改变肿瘤细胞表面ＭＨＣⅡ类分子的表达，从而为肿瘤免疫治疗提供新的途径。 展开更多

关键词 凝集素 单核细胞 白血病细胞 HLA-DR 表达

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胸腺细胞的选择与程序性细胞死亡 被引量：3

8

作者 董海东 陈静 陈慰峰 《生命科学》 CSCD 1997年第1期11-14,共4页

胸腺通过阳性和阴性选择作用，保留有功能的并对自身耐受的T细胞，同时通过启动程序性细胞死亡（programmedcelldeath，PCD）机制消除无功能的或对自身有反应性的T细胞。参与胸腺细胞PCD调节的因素中包括胸腺基质细胞和膜分子的作用。... 胸腺通过阳性和阴性选择作用，保留有功能的并对自身耐受的T细胞，同时通过启动程序性细胞死亡（programmedcelldeath，PCD）机制消除无功能的或对自身有反应性的T细胞。参与胸腺细胞PCD调节的因素中包括胸腺基质细胞和膜分子的作用。胸腺内细胞发生PCD的机理十分复杂。本文从两种选择中PCD出现的特点，PCD与选择作用之间的关系，以及在T细胞耐受形成中PCD的作用等方面，在细胞和分子水平上描述当前这一领域中的研究进展，并提出了若干仍需解决的关键问题。 展开更多

关键词 胸腺细胞 胸腺选择 程序性细胞死亡

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细胞因子与淋巴细胞激活

9

作者 董海东 陈静 陈慰峰 《基础医学与临床》 CSCD 1996年第3期181-184,共4页

细胞因子与淋巴细胞激活董海东，陈静，陈慰峰（北京医科大学免疫学系Ｔ细胞室，北京１０００８３）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｍｍｕｎｏｃｙｔｅｓｐｒｏｄｕｃｅｖａｒｉｏｕｓｋｉｎｄｓｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓ... 细胞因子与淋巴细胞激活董海东，陈静，陈慰峰（北京医科大学免疫学系Ｔ细胞室，北京１０００８３）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｍｍｕｎｏｃｙｔｅｓｐｒｏｄｕｃｅｖａｒｉｏｕｓｋｉｎｄｓｏｆｃｙｔｏｋｉｎｅｓｗｈｉｃｈｐｌａｙｖｅｒｙｉｍｐｏ... 展开更多

关键词 淋巴因子 淋巴细胞激活

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丝裂原素在人单核细胞白细胞介素2受体的表达及杀伤机制中的作用

10

作者 陈静 董海东 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期291-294,共4页

目的：研究丝裂原素在人单核细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）受体的表达及杀伤机制中的作用。方法：采用多种丝裂原素处理人单核细胞，观察其对单核细胞ＩＬ－２受体α链表达和杀伤活性的影响。结果：美洲商陆（ＰＷＭ）和脂多糖（ＬＰＳ... 目的：研究丝裂原素在人单核细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）受体的表达及杀伤机制中的作用。方法：采用多种丝裂原素处理人单核细胞，观察其对单核细胞ＩＬ－２受体α链表达和杀伤活性的影响。结果：美洲商陆（ＰＷＭ）和脂多糖（ＬＰＳ）在处理２４小时后诱导人单核细胞表达ＩＬ－２受体α链；植物血凝素（ＰＨＡ）只有在处理４８小时后才观察到有诱导α链表达作用；而刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）无明显诱导作用。在以上丝裂原素预处理后，加入ＩＬ－２，在有诱导ＩＬ－２受体α链表达的处理组，可见其单核细胞杀伤肿瘤细胞（Ｕ９３７）的活性明显提高。其中以ＰＷＭ预处理组的单核细胞活性增加最为显著。用流式细胞仪检测到ＰＷＭ可同时与单核细胞和Ｕ９３７靶细胞结合。经ＰＷＭ预处理后，加入ＩＬ－２，明显见到Ｕ９３７细胞发生凋亡的现象（包括核浓缩、凋亡小体的形成和ＤＮＡ的断裂）。结论：通过丝裂原素诱导人单核细胞ＩＬ－２受体的表达，可以促进ＩＬ－２激活的单核细胞的杀伤活性，包括诱导靶细胞的凋亡。 展开更多

关键词 丝裂原素 单核细胞 白细胞介素2 肿瘤

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高比活性重组人IL-6的纯化与鉴定

11

作者 王宏 陈慰峰 +1 位作者 李燕 钱晓萍 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期47-51,共5页

目的制备高纯度、高比活性重组人ＩＬ－６。方法对已建立的重组表达载体ｐＢＭｈＩＬ－６进行温度诱导表达，包涵体提取洗涤和变性复性处理，复性的重组人ＩＬ－６蛋白经ＳＰ－ＦＦ强阳离子交换柱一步纯化。结果所得目的蛋白纯度＞９７... 目的制备高纯度、高比活性重组人ＩＬ－６。方法对已建立的重组表达载体ｐＢＭｈＩＬ－６进行温度诱导表达，包涵体提取洗涤和变性复性处理，复性的重组人ＩＬ－６蛋白经ＳＰ－ＦＦ强阳离子交换柱一步纯化。结果所得目的蛋白纯度＞９７％，经Ｎ末端氨基酸测序确证为ｈＩＬ－６，其比活性高达４．５×１０８Ｕ／ｍｇ。结论本研究的纯化工艺简便易行，所得产品纯度高。 展开更多

关键词 白细胞介素6 色谱柱 纯化 鉴定

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TCRαβ^+CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞的表型分析

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作者 葛青 陈慰峰 《实验生物学报》 CSCD 1999年第2期141-149,共9页

本实验综合分析了CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞多种表面分子的表达情况。通过抗体加补体的2次杀伤和panning方法,分离出CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞,进行直接或间接荧光抗体染色,利用流式细胞仪分析细胞表型。发现CD4^+CD8^-胸腺细胞均为TCRαβ... 本实验综合分析了CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞多种表面分子的表达情况。通过抗体加补体的2次杀伤和panning方法,分离出CD4^+CD8^-胸腺髓质细胞,进行直接或间接荧光抗体染色,利用流式细胞仪分析细胞表型。发现CD4^+CD8^-胸腺细胞均为TCRαβ阳性,但CD69,HSA,Qa-2,3G11,6C10分子呈现异质性表达。利用多个表面分子组合进行双染FACS分析,推测CD4SP胸腺细胞由不成熟到发育成熟,迁出胸腺,可分为7个阶段:(1)3G11^-6C10^+CD69^+HSA^(hi),(2)3G11^+6C10^+CD69^+HSA^(hi),(3)3G11^+6C10^-CD69^+HSA^(int),(4)3G11^+6C10^-CD69^-HSA^(int)Qa-2^-,(5)3G11^+HSA^(lo/-)Qa-2^(lo),4阶段还可进一步分化为(6) 3G11^-HSA^(lo)Qa-2^-,(7) 3G11^-HSA^(lo/-)Qa-2^(hi)。Qa-2^+的5,7两阶段细胞已达到最终成熟,并可迁出胸腺。 展开更多

关键词 胸腺 髓质细胞 表型 TCRαβ^+ CD^4 CD^8

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