广西河池地区牛肠道病毒和牛冠状病毒流行病学调查及遗传变异分析 被引量：4

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作者 罗宇航 刘黄豪 +7 位作者 李德政 张广欣 乔成鹏 潘艳 覃一峰 李军 韦建华 黄伟坚 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期32-39,共8页

为了解广西壮族自治区河池地区牛肠道病毒(BEV)和牛冠状病毒(BCoV)的流行情况及毒株序列特征,本试验应用TRIzol法抽提核糖核酸(RNA),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对2021—2022年广西河池各地区采集得到的422份粪便样品进行病原检... 为了解广西壮族自治区河池地区牛肠道病毒(BEV)和牛冠状病毒(BCoV)的流行情况及毒株序列特征,本试验应用TRIzol法抽提核糖核酸(RNA),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对2021—2022年广西河池各地区采集得到的422份粪便样品进行病原检测及遗传变异分析。结果显示,广西河池地区BEV的检出率为3.23%~19.51%,BCoV的检出率为2.44%~4.62%,BEV和BCoV混合感染率为2.44%~4.44%。按照不同品种牛群对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,西门塔尔杂交牛BEV感染率为13.99%,BCoV感染率为2.07%;本地黄牛BEV感染率为9.00%,BCoV感染率为0.95%;杂交水牛BEV感染率为33.33%,BCoV未发现感染;安格斯牛BEV和BCoV均未发现感染。按照不同年龄对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,0~180日龄BEV感染率为22.11%,BCoV感染率为4.21%,大于180日龄牛群BEV感染率为7.95%,BCoV感染率为0.61%。按照不同养殖模式对牛群BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,农户养殖BEV感染率为12.06%,BCoV感染率为1.42%,合作社养殖BEV感染率为9.29%,BCoV感染率为1.43%。遗传变异分析结果显示,广西河池地区存在E、F型2种BEV感染,检出E型BEV 21份,检出F型BEV 26份。本试验首次揭示了广西河池地区BEV和BCoV的流行病学调查数据,为广西乃至全国牛肠道病毒和牛冠状病毒净化防控提供了理论参考数据。 展开更多

关键词 流行病学调查 牛肠道病毒 牛冠状病毒 遗传进化分析

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竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价 被引量：1

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作者 陈童锦悦 覃绍敏 +6 位作者 韦珏 刘金凤 陈凤莲 许力士 梁晶 兰干球 吴健敏 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期201-206,共6页

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。... 本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 生物学特性 安全性评价

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来宾市临床腹泻肉牛的病毒和寄生虫感染情况调查与分析

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作者 李珊 冯世文 +9 位作者 吴翠兰 禤雄标 胡帅 何彩美 陆晶山 钟舒红 彭昊 贺会利 李军 方芳 《广西畜牧兽医》 2024年第6期234-237,共4页

为了解广西来宾市肉牛腹泻的主要病原感染情况,2022年-2023年共采集126份肉牛新鲜腹泻粪便,通过RT-PCR法和形态学观察法对BEV、BCoV、BVDV、BKV、BRV、BAstV、牛球虫、牛弓首蛔虫及结肠小袋纤毛虫9种主要致牛腹泻病原进行检测。结果显示... 为了解广西来宾市肉牛腹泻的主要病原感染情况,2022年-2023年共采集126份肉牛新鲜腹泻粪便,通过RT-PCR法和形态学观察法对BEV、BCoV、BVDV、BKV、BRV、BAstV、牛球虫、牛弓首蛔虫及结肠小袋纤毛虫9种主要致牛腹泻病原进行检测。结果显示:样品总体阳性率为46.83%(59/126),其中BEV、BCoV、BVDV、BRV、BKV、BAstV、牛球虫、牛弓首蛔虫和小袋纤毛虫的检出率分别为14.28%(18/126)、4.76%(6/126)、11.90%(15/126)、2.38%(3/126)、0(0/126)、0(0/126)、23.81%(30/126)、9.52%(12/126)、5.56%(7/126)。调查分析表明,来宾市不同年龄、不同粪便性状的腹泻肉牛粪样中存在多种病毒、寄生虫病原,主要病原为BEV、BVDV、牛球虫和牛弓首蛔虫,多病原混合感染情况严重,具有丰富的混感型。 展开更多

关键词 来宾市 肉牛 腹泻 病毒 寄生虫

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一例黑山羊肺炎克雷伯氏菌感染的诊断报告 被引量：1

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作者 唐丹萍 滕翎 +5 位作者 李常挺 李军 白慧丽 马春霞 尹杨燕 彭昊 《广西畜牧兽医》 2024年第3期116-117,共2页

肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae)属肠杆菌科,呈卵圆形杆状的革兰氏阴性菌[1]。广泛存在于动物机体黏膜表面,当机体免疫力减弱或黏膜受损时,会导致肺炎克雷伯菌入侵机体而诱发呼吸道、皮肤和软组织、泌尿道等多部位感染。尽管有广... 肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae)属肠杆菌科,呈卵圆形杆状的革兰氏阴性菌[1]。广泛存在于动物机体黏膜表面,当机体免疫力减弱或黏膜受损时,会导致肺炎克雷伯菌入侵机体而诱发呼吸道、皮肤和软组织、泌尿道等多部位感染。尽管有广谱抗生素可用于治疗克雷伯菌诱发的感染,但该菌感染诱发的死亡率仍高于50%,因此在患病初期就应得到重视[2]。2023年7月19日马山县某黑山羊场内发生了一起以呼吸道病变为主的疫病,并随之确诊为肺炎克雷伯菌感染。通过药敏试验筛选出合适药物用于指导用药,迅速控制了疫情。现将整个诊疗过程与防控体会阐述如下,供同行参考。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯氏菌 黑山羊 诊断报告 机体免疫力 肺炎克雷伯菌 药敏试验 肠杆菌科 动物机体

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禽呼肠孤病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的研发 被引量：4

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作者 华俊 曾婷婷 +7 位作者 谢芝勋 谢丽基 李孟 罗思思 王盛 万丽军 任红玉 谢志勤 《中国动物检疫》 CAS 2023年第4期99-105,共7页

禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)主要感染鸡和火鸡,引起关节炎、腱鞘炎等症状。为满足疾病早期快速诊断的需求,建立一套应用重组聚合酶核酸等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测ARV的方法,使用侧向流动免疫试... 禽呼肠孤病毒(avian reovirus,ARV)主要感染鸡和火鸡,引起关节炎、腱鞘炎等症状。为满足疾病早期快速诊断的需求,建立一套应用重组聚合酶核酸等温扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)检测ARV的方法,使用侧向流动免疫试纸条(lateral flow dipstick,LFD)观测结果。首先针对ARV较为保守的片段M1基因设计数套引物,使用普通RT-PCR筛选出一套无非特异条带、敏感性优良的引物组建立ARV RT-RPA-LFD反应体系,优化探针浓度和反应温度,使用建立的反应体系进行特异性和敏感性试验,最后以最低检测模板浓度优化反应时间。结果显示,建立的ARV RT-RPA-LFD反应体系在探针工作浓度为0.12 mmol/L,37℃条件下反应20 min,可最低检测到1.5×10^(1)copies/反应的ARV RNA,并且不与其他常见禽病原体核酸发生反应。使用建立的方法检测40份临床病料,发现有3份ARV阳性,与之前本实验室建立的二重qRT-PCR检测结果一致。结果表明,本研究建立的ARV RT-RPA-LFD检测方法,具有快速、特异,不需要大型复杂仪器,可直观观测结果的优势,为基层兽医实验室和兽医现场检测提供了技术参考。 展开更多

关键词 禽呼肠孤病毒 重组聚合酶核酸等温扩增技术 侧向流动免疫试纸条

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纤维二糖水解酶在乳酸乳球菌中的表达

6

作者 黄凯 何启杰 +5 位作者 陈樱 欧阳康 黄伟坚 彭昊 韦祖樟 李军 《云南畜牧兽医》 2024年第1期1-4,共4页

为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴... 为在乳酸乳球菌中表达纤维二糖水解酶II(CBH II)基因,对绿色木霉(T.reesei)CBH II基因序列进行密码子优化和合成,通过PCR及T4 DNA连接酶将人工合成的序列插入到表达载体pNZ8148中,获得重组质粒pNZ8148-CBH II,重组质粒经双酶切及测序鉴定正确后,将正确的重组质粒通过电击转化进入乳酸菌NZ3900感受态细胞,通过选择性抗生素氯霉素筛选阳性克隆,放大培养后使用终浓度为20 ng/mL的Nisin进行诱导表达,诱导后的菌液经SDS-PAGE鉴定,有符合预期大小的条带,说明CBH II基因在乳酸乳球菌NZ3900中表达。研究为乳酸乳球菌的改造及开发临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 纤维二糖水解酶 克隆 乳酸乳球菌 表达

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克氏原螯虾副溶血性弧菌的分离鉴定与小鼠致病性试验

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作者 许艺兰 陈婷婷 +13 位作者 卢冰霞 梁家幸 周英宁 黄广杰 江新华 何肈强 许心婷 全琛宇 赵硕 秦毅斌 段群棚 许佳乐 何颖 陈忠伟 《水产学杂志》 CAS 2024年第4期42-48,83,共8页

为探究从广西某养殖基地收集的患病克氏原螯虾(Procambarus clarkii)分离获得的一株细菌GXBL的致病性和生物学特性,利用形态学、分子生物学及生理生化综合鉴定菌株,进行分离菌感染实验动物、组织病理实验及药敏实验。结果显示,分离株GXB... 为探究从广西某养殖基地收集的患病克氏原螯虾(Procambarus clarkii)分离获得的一株细菌GXBL的致病性和生物学特性,利用形态学、分子生物学及生理生化综合鉴定菌株,进行分离菌感染实验动物、组织病理实验及药敏实验。结果显示,分离株GXBL在TCBS培养基上菌落呈蓝绿色、圆形,染色镜检为短棒状或弧状的革兰氏阴性菌;生理生化鉴定结果显示,分离菌能发酵阿拉伯糖、葡萄糖、甘露醇、尿素、精氨酸和甲基红,不能发酵纤维二糖、乳糖及蔗糖;16S rRNA序列分析显示该分离菌为副溶血性弧菌;动物试验结果显示,该分离菌对小鼠有一定的致病性,造成小鼠的肝细胞大片坏死,肝板结构被破坏,肺泡壁显著增厚,血管内聚集大量红细胞,脾脏淋巴细胞明显减少;药敏结果显示,分离菌对氨苄西林、头孢哌酮、庆大霉素、四环素、多黏菌素B、复方新诺明等18种抗生素敏感,对青霉素G、甲硝唑和氟康唑3种药物耐药。本研究结果可为副溶血性弧菌引起的克氏原螯虾细菌性疾病防治提供参考依据。 展开更多

关键词 克氏原螯虾 副溶血性弧菌 分离鉴定 药敏试验 致病性

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一例山羊金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌混合感染的调查分析

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作者 霍秀龙 周沛 +8 位作者 贺会利 黄善 兰肖萍 冯世文 胡帅 吴翠兰 钟舒红 彭昊 李军 《广西农学报》 2024年第2期20-25,33,共7页

旨在调查分析广西平果市部分母羊全身各部位出现皮下脓包、影响采食和运动,导致母羊偏瘦的原因。采用细菌分离培养、分子生物学及寄生虫形态学方法对脓液及其粪便进行检测。分离脓液中的金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌,检验粪便中的球... 旨在调查分析广西平果市部分母羊全身各部位出现皮下脓包、影响采食和运动,导致母羊偏瘦的原因。采用细菌分离培养、分子生物学及寄生虫形态学方法对脓液及其粪便进行检测。分离脓液中的金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌,检验粪便中的球虫虫卵。药敏试验结果显示,混合菌对青霉素、阿莫西林、环丙沙星、阿米卡星、头孢他啶、多西环素、头孢喹肟、头孢噻呋、泰地罗新、加米霉素、长效阿莫西林和氟苯尼考高度敏感,对卡那霉素中度敏感,对头孢氨苄、链霉素、壮观霉素、恩诺沙星、新霉素、磷霉素、马波沙星、林可霉素及阿奇霉素耐药。通过实验室检测,确诊本次病例为金黄色葡萄球菌、伪结核棒状杆菌和球虫病混合感染。根据以上检测结果,指导养殖场科学合理地制订治疗方案,从而控制病情。 展开更多

关键词 山羊 皮下脓肿 金黄色葡萄球菌 伪结核棒状杆菌 球虫

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广西地区鸽圆环病毒Cap和Rep基因的克隆及遗传进化分析

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作者 黄运福 颜国庆 +5 位作者 唐林生 韦建兴 银慧慧 赵武 姜源明 刘伟 《现代畜牧兽医》 2024年第4期1-5,共5页

研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析... 研究旨在了解广西某肉鸽场鸽圆环病毒(PiCV) Cap和Rep基因的遗传变异情况,通过PCR技术对感染PiCV的鸽组织样品克隆Cap和Rep基因并进行测序及序列分析。结果显示,克隆的Cap和Rep基因大小分别为816 bp和954 bp。核苷酸序列同源性比对分析结果显示,克隆的Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,分别为95.5%和97.6%。遗传进化分析结果显示,Cap和Rep基因与XJ1毒株亲缘关系较近。研究表明,广西鸽群中存在PiCV流行,其Cap和Rep基因与XJ1毒株核苷酸同源性最高,亲缘关系较近,这为广西地区PiCV的诊断及防控提供了重要参考。 展开更多

关键词 鸽圆环病毒 Cap基因 Rep基因 遗传进化分析

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产AmpC酶的猪源奇异变形杆菌分离鉴定及生物学特性分析 被引量：3

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作者 陈赫威 马玲 +7 位作者 秦树英 陈樱 宋瑞鹏 孙倩 覃绍敏 刘金凤 陈凤莲 吴健敏 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2023年第7期46-52,共7页

奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种可导致多种动物感染的条件致病菌,目前有关产AmpC酶的动物源奇异变形杆菌研究较少。为探究广西某猪场母猪流产、死胎的原因,从流产猪胎肝脏中分离到病原菌,对分离株进行纯化培养、染色镜检、生化... 奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)是一种可导致多种动物感染的条件致病菌,目前有关产AmpC酶的动物源奇异变形杆菌研究较少。为探究广西某猪场母猪流产、死胎的原因,从流产猪胎肝脏中分离到病原菌,对分离株进行纯化培养、染色镜检、生化试验和16S rRNA测序确定为奇异变形杆菌,命名为GX-Y9251株。对GX-Y9251株进行药敏试验、耐药基因检测、AmpC酶基因检测、毒力基因检测、小鼠致病性试验和生物膜半定量检测。药敏试验结果显示,该菌株对8种药物敏感,对17种抗生素耐药。GX-Y9251株存在多种耐药基因,且产AmpC酶,为blaDHA基因。GX-Y9251株存在6个毒力基因,其对小鼠的半数致死量(LD50)为5.4×107CFU;具有生物被膜形成能力,为中等黏附型(++)。研究结果为奇异变形杆菌感染的防治提供了理论依据。 展开更多

关键词 奇异变形杆菌 毒力基因 耐药性 AMPC酶 生物被膜

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H9N2亚型禽流感病毒多拷贝M2e蛋白单克隆抗体的制备

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作者 张民秀 谢芝勋 +5 位作者 李孟 罗思思 谢志勤 谢丽基 李丹 阮志华 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期45-51,共7页

为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;... 为制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)多拷贝M2e蛋白单克隆抗体,试验将纯化的3M2e重组蛋白免疫BALB/c小鼠;取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA筛选出分泌抗体的杂交瘤细胞株;将获得的杂交瘤细胞株腹腔注射BALB/c小鼠制备腹水;采用间接ELISA测定腹水效价,鼠源单克隆抗体亚类鉴定试剂盒检测单克隆抗体腹水,三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定单克隆抗体的特异性;使用IFA鉴定3M2e蛋白在Sf9细胞的表达和检测H9N2亚型AIV在MDCK细胞的感染。结果显示:获得了3株分泌多拷贝M2e抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为4C7-B11、4E10-A10和5A12-B5;获得腹水的效价均为1∶1000000;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1;Westernblot鉴定三株单克隆抗体均能与2M2e、3M2e和4M2e原核重组蛋白及在Sf9细胞表达的3M2e发生特异性反应;IFA鉴定结果也显示三株单克隆抗体均能检测3M2e蛋白在Sf9细胞的表达,并且能检测到H9N2亚型AIV在MDCK细胞上的感染,出现特异性的绿色荧光;三株单克隆抗体重链亚型均为IgG1。研究获得了H9N2亚型AIV多拷贝M2e单克隆抗体,可用于Westernblot和IFA鉴定,为靶向M2e蛋白H9N2亚型禽流感疫苗的研究提供特异性的检测工具。 展开更多

关键词 禽流感病毒 M2e蛋白 蛋白表达 单克隆抗体

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H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因在昆虫细胞中的表达

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作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国动物检疫》 CAS 2024年第4期103-110,共8页

为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Ba... 为通过昆虫细胞表达出H9N2亚型禽流感病毒M1和NA蛋白,并鉴定其免疫活性,利用PCR技术扩增H9N2亚型禽流感病毒M1和NA基因,以pFastBacDual为转移载体构建重组转移载体pFastBacDual-M1和pFastBacDual-NA;将阳性重组转移载体分别转化至DH10Bac感受态细胞,得到重组杆粒rBacmid-M1和rBacmid-NA;将重组杆粒分别转染Sf9昆虫细胞,获得含M1和NA基因的重组杆状病毒rBV-M1和rBV-NA;运用IFA和Western-blot鉴定M1和NA蛋白的表达情况,同时以NA蛋白为包被抗原,运用间接ELISA方法鉴定NA蛋白的反应活性。结果显示,IFA鉴定均出现特异性绿色荧光,Western-blot检测M1和NA蛋白大小分别约为28和52 ku,ELISA检测NA蛋白对抗H9N2阳性血清有很高的反应值。结果表明,M1和NA蛋白可在昆虫细胞中特异性表达且具有反应原性。本试验为进一步研发H9N2亚型禽流感诊断技术和疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 M1蛋白 NA蛋白 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒的构建

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作者 王粲 张民秀 +6 位作者 谢芝勋 李孟 罗思思 李丹 阮志华 谢丽基 谢志勤 《中国兽药杂志》 2024年第7期1-12,共12页

为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Wes... 为构建H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒,以血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neurami-nidase,NA)及基质蛋白(Matrix protein,M1)3种蛋白为对象,通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统构建了2种重组杆状病毒,即rBV-HA-M1和rBV-NA,用IFA和Western-blot鉴定重组蛋白的免疫活性,再将rBV-HA-M1和rBV-NA以最佳感染复数比例共感染昆虫Sf9细胞,经浓缩后获得病毒样颗粒,同时进行血凝滴度测定和透射电镜观察。透射电镜观察结果显示,表达的HA-M1和NA重组蛋白可以在Sf9细胞中自组装形成病毒样颗粒,浓缩的病毒样颗粒能够凝集1%的鸡红细胞,血凝效价为1∶64。试验结果为进一步研究H9N2亚型禽流感病毒病毒样颗粒疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 病毒样颗粒 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：1

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作者 赵硕 陈忠伟 +10 位作者 肖婷 何颖 张宁 覃国喜 卢冰霞 段振华 秦毅斌 张胜斌 段群棚 赵武 韦明宇 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期671-678,共8页

为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PR... 为了建立一种可同时精准、快捷鉴别检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,本研究选择猪源β-actin为内参基因,根据ASFV的P72基因及PRRSV的ORF6基因设计特异性引物及TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了ASFV和PRRSV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法,对该方法的特异性、敏感性、重复性进行验证,并初步应用于临床样品的检测。结果显示,该方法可在45 min内完成对ASFV、PRRSV及猪源β-actin基因的特异性扩增;对ASFV、PRRSV及猪源β-actin标准品模板的最低检测拷贝数分别为7.87×101 copies/μL、1.19×102 copies/μL和5.99×103 copies/μL,同一模板的3次重复试验的组内及组间变异系数均小于2%;用该方法检测92份临床样品,未检出ASFV,检出19份PRRSV阳性样品。结果表明,本研究建立了一种可快速鉴别检测ASFV及PRRSV的多重荧光定量PCR方法,较普通PCR敏感性高103倍,可应用于ASFV和PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重TaqMan荧光定量PCR

原文传递

感染大片形吸虫水牛脊髓全基因组DNA的甲基化及其功能的分析 被引量：2

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作者 钟舒红 盛兆安 +7 位作者 李军 彭昊 吴翠兰 马春霞 彭红艳 黄维义 施维 潘艳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期253-263,共11页

为探究感染大片形吸虫后不同时间水牛脊髓全基因组DNA甲基化的类型、占比及其感染后差异甲基化区域(DMR)涉及的功能及信号通路,本研究将大片形吸虫囊蚴经口灌胃感染8~10月龄水牛,分别于感染后3 d(J01)、10 d(J02)、28 d(J03)、42 d(J04)... 为探究感染大片形吸虫后不同时间水牛脊髓全基因组DNA甲基化的类型、占比及其感染后差异甲基化区域(DMR)涉及的功能及信号通路,本研究将大片形吸虫囊蚴经口灌胃感染8~10月龄水牛,分别于感染后3 d(J01)、10 d(J02)、28 d(J03)、42 d(J04)、70 d(J05)和98 d(J06)采集水牛脊髓,利用全基因组重亚硫酸盐测序技术(WGBS)对基因组DNA的甲基化测序,测序数据经过滤筛选后,采用Bismark软件分析各组水牛脊髓基因组DNA甲基化的类型及其占比(某种类型甲基化序列在该组全部可用测序序列中的占比以及该组某种C类型甲基化的数量在全部C类型甲基化中的占比),并采用weight methylation level对各组水牛脊髓基因组DNA 7个功能区域的甲基化进行聚类分析。WGBS测序结果经过滤后显示,平均每组测序长度为100.29 Gp,Q20%(质量值≥20的碱基占总碱基数的百分比)和Q30%分别达到95%和85%以上,6组样品亚硫酸盐(BS)转化率均大于99%,表明WGBS测序结果准确可靠;各组样品DNA甲基化类型和占比的分析及统计结果显示,J01~J06组基因组分别包含CG、CHG、CHH 3种类型的甲基化(mCG、m CH及m CHH),且以m CG类型占比最多(63.1%~71.7%,80.11%~85.73%),m CHH类型(0.9%~1.2%,11.27%~15.18%)及m CHG类型均较少(1.0%~1.2%,3.00%~4.84%);聚类分析结果显示,上述3种类型的甲基化主要分布在水牛脊髓基因组第1内含子和内部内含子。上述结果表明,感染大片形吸虫后水牛脊髓基因组DNA甲基化类型以m CG为主,且第1内含子和内部内含子的甲基化可能影响该两个区域相关基因的正常表达。利用R软件包分析各组水牛脊髓基因组之间是否存在DMR,并采用基于模型的亚硫酸氢盐测序数据分析(MOABS)筛选并统计各组之间的DMR及DMR的数量;采用DAVID软件分析各组DMR在其相应基因组中的分布;采用R语言对各组的DMR进行GO功能注释和KEEG富集分析。DMR的筛选及统计结果显示,各基因组 展开更多

关键词 水牛 大片形吸虫 脊髓 DNA甲基化 全基因组重亚硫酸盐测序技术 差异甲基化区域

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广西鸡源肠炎沙门氏菌的分离与鉴定 被引量：2

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作者 邓显文 谢丽基 +4 位作者 谢芝勋 曾婷婷 华俊 何竞铭 卿崇程 《畜禽业》 2023年第1期10-13,共4页

对广西壮族自治区3个鸡场疑似沙门氏菌感染发病鸡进行细菌分离,并对分离菌株进行染色镜检、生化实验、血清学鉴定、DNA测序、动物回归试验和药敏试验。结果共分离到6株沙门氏菌,生化特征和血清学特征符合肠炎沙门氏菌特性;DNA测序结果... 对广西壮族自治区3个鸡场疑似沙门氏菌感染发病鸡进行细菌分离,并对分离菌株进行染色镜检、生化实验、血清学鉴定、DNA测序、动物回归试验和药敏试验。结果共分离到6株沙门氏菌,生化特征和血清学特征符合肠炎沙门氏菌特性;DNA测序结果与肠炎沙门氏菌同源性为100%;动物回归试验表明,分离菌株能致死SPF鸡,并复制出与临床表现一致的病例;药敏试验结果表明,分离菌株对诺氟沙星和阿米卡星高度敏感,为广西地区鸡源沙门氏菌病的防治提供参考依据。 展开更多

关键词 肠炎沙门氏菌 鸡 分离鉴定 药物敏感性

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血清4型禽腺病毒100K蛋白单克隆抗体的研制 被引量：2

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作者 谢丽基 邓显文 +9 位作者 谢芝勋 韦悠 谢志勤 罗思思 黄娇玲 张民秀 范晴 王盛 曾婷婷 张艳芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1152-1157,共6页

为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)100K蛋白的特异性单克隆抗体,本研究将原核表达的100K重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性杂交瘤细胞株。将细胞株制备腹水并纯... 为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)100K蛋白的特异性单克隆抗体,本研究将原核表达的100K重组蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选阳性杂交瘤细胞株。将细胞株制备腹水并纯化得到单克隆抗体,利用ELISA、IFA和Western-blot鉴定单克隆抗体的特异性。结果显示,成功获得4株杂交瘤细胞株1D7、2B3、2F6、10E12。4株杂交瘤细胞株制备的抗体,能与FAdV-4发生阳性反应。制备的100K蛋白单克隆抗体具有良好的特异性和反应原性,为FAdV-4抗原和抗体检测试剂的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 100K蛋白 单克隆抗体

原文传递

牛副流感病毒3型和牛支原体混合感染引起牛呼吸道综合征的分析 被引量：1

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作者 霍秀龙 吴翠兰 +4 位作者 梁昌良 莫志晖 钟舒红 彭昊 李军 《现代畜牧科技》 2023年第8期120-123,共4页

为查明广西某牛场一起以呼吸道症状为主的病因,试验采用流行病学调查法、临床观察法、病理解剖观察法、病原分离培养和RT-PCR/PCR扩增法进行诊断,并对分离株进行药物敏感性试验。牛副流感病毒3型和牛支原体为阳性,牛冠状病毒、牛呼吸道... 为查明广西某牛场一起以呼吸道症状为主的病因,试验采用流行病学调查法、临床观察法、病理解剖观察法、病原分离培养和RT-PCR/PCR扩增法进行诊断,并对分离株进行药物敏感性试验。牛副流感病毒3型和牛支原体为阳性,牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒等为阴性。该起病例由牛副流感病毒3型和牛支原体混合感染引起的,导致本场牛大批发病死亡的原因是由外购牛传染引起。 展开更多

关键词 牛副流感病毒3型 牛支原体 牛呼吸道综合征 耐药性分析

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不同采摘时期桃金娘叶三萜的动态变化研究 被引量：1

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作者 赵武 覃思明 +3 位作者 银慧慧 颜国庆 曾雪颜 刘伟 《现代食品》 2023年第11期132-135,共4页

为探究不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的动态变化,寻找桃金娘叶最佳采摘时期,本文以乙酸乙酯为提取溶剂超声辅助提取桃金娘叶三萜,采用香草醛-高氯酸显色法在545 nm处测定吸光度,计算不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的变化。结果显示,2019... 为探究不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的动态变化,寻找桃金娘叶最佳采摘时期,本文以乙酸乙酯为提取溶剂超声辅助提取桃金娘叶三萜,采用香草醛-高氯酸显色法在545 nm处测定吸光度,计算不同采摘时期桃金娘叶三萜含量的变化。结果显示,2019年3—6月采摘的桃金娘叶中三萜含量呈上升趋势,6月以后桃金娘叶中三萜含量逐渐下降,其中5月14日至7月24日采摘的桃金娘叶三萜含量较高,6月20日采摘的桃金娘叶三萜含量最高,为22.54 mg·g^(-1)。因此,桃金娘叶适宜在6月份进行采摘。 展开更多

关键词 桃金娘叶 三萜 超声提取

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血清4型禽腺病毒广西分离株单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

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作者 谢丽基 邓显文 +10 位作者 谢芝勋 韦悠 谢志勤 罗思思 李孟 黄娇玲 张民秀 范晴 王盛 曾婷婷 张艳芳 《中国兽药杂志》 2023年第10期9-15,共7页

为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)广西分离株(FAdV-4-GX2018-005)的特异性单克隆抗体,将FAdV-4-GX2018-005作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株制备腹水... 为制备血清4型禽腺病毒(FAdV-4)广西分离株(FAdV-4-GX2018-005)的特异性单克隆抗体,将FAdV-4-GX2018-005作为免疫原免疫BALB/c小鼠后,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株。利用阳性杂交瘤细胞株制备腹水并纯化得到单克隆抗体,利用ELISA和IFA鉴定单克隆抗体的特异性。结果表明,成功获得3株单克隆细胞株3A3、13A11和4D5。3株杂交瘤细胞株分泌的抗体,能与FAdV-4产生特异性反应,与其他血清型禽腺病毒(FAdV-1、FAdV-2、FAdV-3、FAdV-5、FAdV-6、FAdV-7、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-9、FAdV-10和FAdV-11)不发生反应。本研究成功制备FAdV-4广西分离株单克隆抗体,为FAdV-4检测方法的建立奠定了良好基础。 展开更多

关键词 血清4型禽腺病毒 广西分离株 单克隆抗体

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