IL-12恢复化疗药物对人细胞免疫功能的抑制作用 被引量：14

1

作者 谢淑华 沈娟 +4 位作者 张燕楠 余思菲 杨滨燕 陶亮 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期461-468,475,共9页

目的探讨IL-12是否能够恢复化疗药物对人抗原特异性和非特异性细胞的免疫抑制功能及其机制。方法人PBMCs在抗CD3和抗CD28共刺激条件下,加或不加化疗药物和IL-12,不同的方法检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生及其mRNA的表达。利用流式细... 目的探讨IL-12是否能够恢复化疗药物对人抗原特异性和非特异性细胞的免疫抑制功能及其机制。方法人PBMCs在抗CD3和抗CD28共刺激条件下,加或不加化疗药物和IL-12,不同的方法检测细胞因子IFN-γ和TNF-α的产生及其mRNA的表达。利用流式细胞术或Western blotting检测T细胞不同亚群细胞因子IFN-γ和转录因子T-bet、p-STAT-1、p-STAT-4的表达。利用卡介苗(BCG)刺激PPD+PBMCs,检测化疗药物及IL-12对抗原特异性细胞IFN-γ和TNF-α的表达影响。结果化疗药物对人IFN-γ和TNF-α的产生有显著的剂量依赖性抑制作用,同时IL-12对其抑制作用的恢复也呈显著的剂量依赖性;BCG刺激PPD+PBMCs实验证明,化疗药物抑制抗原特异性细胞产生IFN-γ和TNF-α,IL-12能够恢复其免疫抑制功能。进一步研究发现,化疗药物通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达影响IFN-γ和TNF-α的产生,IL-12通过上调STAT-4的磷酸化恢复了免疫的抑制作用。结论化疗药物抑制人的细胞免疫应答,而IL-12通过上调STAT-4的磷酸化完全恢复其抑制作用,从而对肿瘤化疗病人重建免疫功能(包括抗感染和抑制癌细胞的复发)起到非常重要的作用。 展开更多

关键词 化疗药物 免疫抑制 IL-12 免疫恢复

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2型登革病毒通过线粒体途径诱导EA．hy926细胞凋亡 被引量：9

2

作者 齐一鸣 黄俊琪 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期385-389,共5页

目的:探讨登革病毒诱导EA.hy926细胞(人脐静脉内皮细胞融合细胞株)相对活力的变化与线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm)改变及线粒体凋亡途径的关系。方法:用2型登革病毒(denguevirus type 2,DENV-2)感染EA.hy926细... 目的:探讨登革病毒诱导EA.hy926细胞(人脐静脉内皮细胞融合细胞株)相对活力的变化与线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm)改变及线粒体凋亡途径的关系。方法:用2型登革病毒(denguevirus type 2,DENV-2)感染EA.hy926细胞,MTT法检测感染前后EA.hy926细胞的相对活力,荧光显微镜和流式细胞术分别观察感染前后JC-1在EA.hy926细胞线粒体内的聚集情况以检测Δψm的改变,通过比色法检测caspase-9的活性变化。结果:DENV-2感染EA·hy926细胞24 h、36 h及48 h后,细胞活性受到显著抑制,550 nm处的A值均低于未感染组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);JC-1染色显示,感染后各时点,代表正常线粒体的红色荧光均较未感染组减弱,而代表Δψm下降的绿色荧光较未感染组逐渐增强。流式细胞术检测Δψm平均荧光密度比未感染组减低,差异有统计学意义。DENV-2感染后早期即可出现caspase-9活性的上升,与未感染组相比,各时点的活性差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:DENV-2感染EA·hy926细胞后可诱发Δψm下降,增强caspase-9活性,进而启动线粒体的凋亡途径。 展开更多

关键词 登革病毒 线粒体膜电位 血管内皮细胞

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IL-12逆转顺铂对人NK细胞免疫功能的抑制及其机制 被引量：8

3

作者 沈娟 吴琼丽 +1 位作者 杨滨燕 吴长有 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期872-877,共6页

目的:探讨IL-12逆转化疗药物对NK细胞免疫功能的抑制及其机制。方法:纯化的NK细胞在PMA和Ionomycin刺激条件下、加或不加化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)和IL-12,用ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平,流式细胞术检测IFN-γ和T... 目的:探讨IL-12逆转化疗药物对NK细胞免疫功能的抑制及其机制。方法:纯化的NK细胞在PMA和Ionomycin刺激条件下、加或不加化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)和IL-12,用ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平,流式细胞术检测IFN-γ和TNF-α、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)和转录因子(T-bet和pSTAT-4)的表达百分率;纯化NK细胞加或不加化疗药物和IL-12预处理48 h,流式细胞术检测其对白血病Jurkat细胞株的杀伤效应。结果:化疗药物明显抑制NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α以及TRAIL的表达,IL-12可以明显逆转DDP对NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α和TRAIL的抑制(P<0.05或P<0.01)。DDP抑制IFN-γ和TNF-α的转录因子p-STAT-4的表达,而IL-12通过上调磷酸化STAT-4恢复了NK细胞的IFN-γ和TNF-α的分泌功能(P<0.01)。杀伤实验显示,DDP抑制NK细胞对白血病细胞Jurkat的杀伤,而IL-12通过上调TRAIL恢复NK细胞的杀伤功能(P<0.05或P<0.01)。结论:化疗药物DDP抑制NK细胞的杀伤功能以及细胞因子(IFN-γ和TNF-α)的分泌,IL-12通过上调TRAIL和转录因子STAT-4的磷酸化恢复NK细胞的免疫功能,为临床应用IL-12重建肿瘤化疗患者的免疫功能提供实验依据。 展开更多

关键词 NK细胞 顺铂 IL-12 免疫抑制 JURKAT细胞株

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组织驻留记忆T细胞与肿瘤研究进展 被引量：8

4

作者 吴琼丽 康双朋 吴长有 《中国科学：生命科学》 CSCD 北大核心 2020年第10期1032-1041,共10页

免疫应答之后,大多数效应T细胞凋亡,只有少数细胞形成记忆T细胞.根据其分布、功能和转录因子的不同,可将记忆T细胞分为效应记忆T细胞(effector memory T cells,TEM)、中央记忆T细胞(central memory T cells,TCM)和组织驻留记忆T细胞(tis... 免疫应答之后,大多数效应T细胞凋亡,只有少数细胞形成记忆T细胞.根据其分布、功能和转录因子的不同,可将记忆T细胞分为效应记忆T细胞(effector memory T cells,TEM)、中央记忆T细胞(central memory T cells,TCM)和组织驻留记忆T细胞(tissue resident memory T cells,TRM).TRM细胞是非循环的淋巴细胞,分布于非淋巴组织中,包括皮肤和黏膜组织、泌尿生殖系统、脑组织、呼吸系统、肺和肝脏等组织中.当病原微生物入侵后,能够直接和快速产生防御反应.此外,TRM细胞在肿瘤的免疫、变态反应性疾病和自身免疫性疾病的发生中也发挥十分重要的功能.TRM细胞包括CD4+和CD8+T细胞,表达CD69和/或CD103,在免疫应答过程中,产生细胞因子和/或杀伤功能,连接天然免疫和过继免疫,启动全身性免疫应答.此外,研究表明TRM细胞的功能受组织中调节性T(regulatory T,Treg)细胞的调控.为此,本文对TRM细胞的分化及在肿瘤方面的作用进行综述. 展开更多

关键词 TRM 肿瘤免疫 疫苗

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周围血中CD3^+ TCRvα24^+与CD3^+ TCRvβ11^+ NKT细胞之间的差异 被引量：7

5

作者 李子涛 杨滨燕 吴长有 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期949-953,共5页

目的:比较正常人周围血中CD3+TCRvβ11+NKT细胞和CD3+TCRvα24+NKT细胞在频率、亚群、表型特征及功能方面的异同,以进一步了解NKT细胞在免疫应答中的作用。方法:分离正常成年人PBMCs,利用流式细胞术(FCM)检测TCRvα24、TCRvβ11、CD4、... 目的:比较正常人周围血中CD3+TCRvβ11+NKT细胞和CD3+TCRvα24+NKT细胞在频率、亚群、表型特征及功能方面的异同,以进一步了解NKT细胞在免疫应答中的作用。方法:分离正常成年人PBMCs,利用流式细胞术(FCM)检测TCRvα24、TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L和CCR7表面分子的表达;PMA+Ionomyc in刺激PBMCs后,检测CD3+TCRvα24+、CD3+TCRvβ11+NKT细胞产生细胞因子IL-4和IFN-γ的情况。结果:PBMCs中CD3+TCRvα24+和CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率分别为0.63%和0.43%,NKT细胞频率的个体差异较大,少数细胞同时表达TCRvα24和TCRvβ11;根据CD4和CD8分子的表达,PBMCs中CD3+TCRvα24+NKT细胞可分为CD4+、CD8+、CD4-CD8-3个亚群,平均频率分别为64.35%、19.04%、17.18%,CD3+TCRvβ11+NKT细胞同样可分为CD4+、CD8+、CD4-CD8-3个亚群,其平均频率分别为53.69%、18.99%、29.74%,相应各亚群之间无显著差异;CD45RA+CD3+TCRvβ11+NKT细胞的频率(71.14%)要高于CD45RA+CD3+TCRvα24+NKT细胞的频率(46.55%),二者之间差异有显著性,CD62L+CD3+TCRvα24+NKT(46.26%)对CD62L+CD3+TCRvβ11+NKT(42.36%)以及CCR7+CD3+TCRvα24+NKT(9.24%)对CCR7+CD3+TCRvβ11+NKT(8.22%)之间的差异均无统计学意义;细胞因子检测的结果表明CD3+TCRvα24+NKT细胞和CD3+TCRvβ11+NKT细胞产生的IL-4(13.01%对6.62%)和IFN-γ(38.12%对26.95%)的总体水平间无显著性差异,但是IFN-γ+IL-4+CD3+TCRvα24+NKT细胞的平均频率(12.65%)要高于IFN-γ+IL-4+CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率(3.02%),且二者之间的差异有统计学意义。结论:正常人周围血中CD3+TCRvα24+NKT细胞和CD3+TCRvβ11+NKT细胞在频率、表型及产生细胞因子方面均有一定差异,总体来看,二者频率虽小但表型复杂,产生细胞因子IFN-γ和IL-4的水平高,参与免疫调节及免疫应答的过程。 展开更多

关键词 NKT细胞 频率 亚群 表型 细胞因子

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托法替尼抑制外周血中T细胞细胞因子的分泌及机制 被引量：6

6

作者 吴昆仑 赵珺 +1 位作者 吴琼丽 吴长有 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1448-1455,共8页

目的研究托法替尼对人外周血中T细胞分泌的细胞因子的抑制作用及其机制。方法用抗CD3抗体联合CD28抗体刺激培养外周血单个核细胞(PBMC)和纯化T细胞,在加入或不加入0.5μmol/L托法替尼的情况下,ELISA检测培养细胞上清液中γ干扰素(IFN-γ... 目的研究托法替尼对人外周血中T细胞分泌的细胞因子的抑制作用及其机制。方法用抗CD3抗体联合CD28抗体刺激培养外周血单个核细胞(PBMC)和纯化T细胞,在加入或不加入0.5μmol/L托法替尼的情况下,ELISA检测培养细胞上清液中γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素2(IL-2)的水平;流式细胞术检测T细胞的活化分子CD69和CD25的表达情况及信号转导子与转录激活子1(STAT1)、STAT3和STAT4的磷酸化程度;羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色观察T细胞的增殖情况,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果托法替尼能够抑制外周血T细胞的IFN-γ、TNF-α的产生和CD25的表达,并抑制T细胞的增殖以及STAT1、STAT3和STAT4的磷酸化,但不影响IL-2的分泌、CD69分子的表达及细胞凋亡。结论托法替尼能抑制外周血中的T细胞分泌IFN-γ、TNF-α,其机制可能是托法替尼可抑制T细胞的活化、增殖及转录因子的表达。 展开更多

关键词 托法替尼 CD4+T细胞 CD8+T细胞 γ干扰素(IFN-γ) 肿瘤坏死因子α(TNF-α)

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IFN-α磷酸化STAT1和STAT4诱导人NK细胞产生IFN-γ并增强其杀伤活性 被引量：6

7

作者 林绮文 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期752-755,759,共5页

目的研究IFN-α对CD56+NK细胞的细胞因子分泌、杀伤功能和细胞内信号传导的作用。方法分离健康人PBMC分别与培养液、IFN-α和IL-12培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析I... 目的研究IFN-α对CD56+NK细胞的细胞因子分泌、杀伤功能和细胞内信号传导的作用。方法分离健康人PBMC分别与培养液、IFN-α和IL-12培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析IFN-α诱导IFN-γ产生的细胞亚群以及该细胞亚群对肿瘤细胞的杀伤作用和信号传导机制。结果经IFN-α刺激后,PBMC能产生低剂量的IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,IFN-α诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。IFN-α促进NK细胞的杀伤功能。促进STAT1和STAT4磷酸化。结论 IFN-α通过磷酸化STAT1和STAT4,增加NK细胞IFN-γ分泌和增强杀伤功能。 展开更多

关键词 NK细胞 IFN-Α IFN-Γ IL-12

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汉黄芩素通过诱导中性粒细胞凋亡治疗小鼠结肠炎 被引量：4

8

作者 陈静柔 张宗军 +4 位作者 吴绮丽 朱殷宏 吴琼丽 陈洪鑫 彭延文 《中华炎性肠病杂志（中英文）》 2021年第2期162-168,共7页

目的观察汉黄芩素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎的影响并探讨作用机制。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组6只。对照组正常饮水,其他2组连续给予含2.5%DSS的饮用水7 d,治疗组在喂水第2天和第4天腹腔注... 目的观察汉黄芩素对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠结肠炎的影响并探讨作用机制。方法将18只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,每组6只。对照组正常饮水,其他2组连续给予含2.5%DSS的饮用水7 d,治疗组在喂水第2天和第4天腹腔注射汉黄芩素。第8天处死小鼠并取材,通过测量小鼠结肠长度和HE染色评估小鼠结肠损伤和炎症水平,利用免疫荧光检测小鼠结肠组织中性粒细胞的浸润数量。另外,以25、50、100μmol/L汉黄芩素体外干预小鼠骨髓中性粒细胞,阴性对照组不予任何干预。采用流式细胞术检测中性粒细胞的凋亡,Western blot检测中性粒细胞抗凋亡蛋白髓细胞白血病-1(Mcl-1)和细胞外信号调节激酶(ERK)表达变化。结果与模型组比较,治疗组的小鼠结肠明显较长[(7.80±0.21)cm比(6.43±0.10)cm,P<0.01)],结肠组织病理损伤评分明显降低[(6.83±0.98)分比(14.33±1.03)分,P<0.01)],结肠中性粒细胞浸润显著减少[(8.52±0.15)个/低倍镜视野比(29.43±0.43)个/低倍镜视野,P<0.01)]。阴性对照组以及25、50、100μmol/L汉黄芩素组中性粒细胞的凋亡率分别为6.41%±0.51%、14.01%±0.81%、20.89%±0.82%、24.23%±0.29%;随着汉黄芩素浓度增高,中性粒细胞凋亡率明显升高,组间差异具有统计学意义(均P<0.01)。与阴性对照组比较,25、50、100μmol/L汉黄芩素组中性粒细胞磷酸化ERK表达均明显减少(均P<0.05)。随着汉黄芩素浓度升高,中性粒细胞Mcl-1蛋白表达逐渐减少(均P<0.05)。结论汉黄芩素可浓度依赖性诱导小鼠中性粒细胞凋亡,减少结肠组织中性粒细胞浸润,减轻肠道损伤,上述作用可能通过抑制ERK磷酸化和浓度依赖性下调Mcl-1表达来实现的。 展开更多

关键词 结肠炎 汉黄芩素 中性粒细胞 凋亡 蛋白 细胞外信号调节激酶 蛋白 髓细胞白血病-1 小鼠 炎症性肠病

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miR-106b及EZH2对HepG2细胞生长的影响及机制 被引量：4

9

作者 桂连 张倩倩 +2 位作者 蔡燕 邓小红 黄俊琪 《热带医学杂志》 CAS 2017年第10期1279-1284,共6页

目的探讨miR-106b及核心亚基基因增强子的人同源基因2(EZH2)对HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR法检测不同肝癌细胞miR-106b的表达;用miR-106b抑制物(inhibitor)及模拟物(mimic)和siEZH2转染肝癌细胞,CCK8法检测细胞增殖... 目的探讨miR-106b及核心亚基基因增强子的人同源基因2(EZH2)对HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR法检测不同肝癌细胞miR-106b的表达;用miR-106b抑制物(inhibitor)及模拟物(mimic)和siEZH2转染肝癌细胞,CCK8法检测细胞增殖,细胞凋亡用Annexin V-FITC/PI双染法和WB法检测凋亡蛋白-3(Caspase-3),生物信息学分析并用荧光素酶法证实miR-106b是否靶向结合EZH2。结果与永生化的肝细胞LO2相比,miR-106b在肝癌细胞中表达量增加;miR-106b mimic促进HepG2细胞增殖和抑制凋亡;miR-106b inhibitor能导致Caspase-3全长表达量减少和其活性片段表达量增加;siEZH2抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡,并且能导致Caspase-3全长表达量减少及其活性片段表达量增加。荧光素酶结果表明miR-106b并非直接靶向抑制EZH2,miR-106b促进EZH2的表达。结论抑制miR-106b和EZH2的表达都能有效抑制HepG2细胞增殖和促进其凋亡。 展开更多

关键词 miR-106b EZH2 HEPG2

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2型登革病毒诱导RAW264.7细胞凋亡的机制及凋亡对病毒复制的影响 被引量：4

10

作者 张林 黄俊琪 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2245-2250,共6页

目的:探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法:用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western ... 目的:探讨2型登革病毒(DENV2)感染能否诱导RAW264.7细胞凋亡,并初步探讨凋亡对病毒复制的影响。方法:用DENV2感染RAW264.7细胞,MTT检测细胞活性,Hoechst 33342染色检测细胞核变化,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting检测caspase-3和caspase-8活化片段的变化,比色法检测caspase-9活性变化,JC-1染色检测线粒体膜电位变化,Z-VAD-FMK抑制细胞凋亡后以TCID50检测感染细胞上清病毒滴度。结果:DENV2感染RAW264.7细胞24 h、36 h及48 h后细胞活性受到抑制,免疫荧光检测有核固缩现象,流式细胞术检测发现病毒感染诱导了细胞凋亡,Western blotting检测发现活化caspase-3和caspase-8的表达增加,caspase-9活性也增加,JC-1染色发现病毒感染诱导RAW264.7细胞线粒体膜电位降低,用Z-VAD-FMK抑制凋亡后感染细胞上清病毒滴度增加。结论:登革病毒感染可以通过内、外源性途径诱导RAW264.7细胞发生凋亡;凋亡发生抑制了病毒的产生。 展开更多

关键词 登革病毒 细胞凋亡 RAW264 7 细胞

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人初始和记忆CD4^+T细胞信使RNA基因芯片检测结果分析 被引量：3

11

作者 康双朋 余思菲 +4 位作者 吴琼丽 金水平 樊莉 万顺巧 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期422-425,共4页

目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4^+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4^+T细胞,裂解细胞,进行mRNA... 目的探讨健康成人外周血初始和记忆CD4^+T细胞静息状态下表面分子、趋化因子受体、细胞因子和转录因子mRNA表达的差异。方法抽取健康成年人外周血,分离PBMC,染色后流式分选出CD45RO-的初始和CD45RO+的记忆CD4^+T细胞,裂解细胞,进行mRNA表达谱芯片检测。结果相比初始T细胞,静息状态下记忆CD4^+T细胞表达高水平的表面分子CTLA-4、PD-1、FAS、CD25,趋化因子受体CCR4、CCR6、CXCR3、CXCR5,细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-17和转录因子T-bet、EOMES、STAT4、GATA3和RORγt,并表达低水平的表面分子CD62L、CCR7、ICAM-I、CD40L,细胞因子IL-1β和转录因子NF-κB。结论静息状态下,与初始CD4^+T细胞相比,记忆CD4^+T细胞高表达某些活化分子、细胞因子、转录因子mRNA,可能是记忆CD4^+T细胞发生快速免疫应答的关键因素。 展开更多

关键词 记忆T细胞 CD4^+T细胞 MRNA

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托法替尼对人外周血T细胞和单核细胞细胞因子分泌的不同免疫调节作用的体外研究 被引量：2

12

作者 欧榕琼 李莎 +4 位作者 谌亚星 吴琼丽 康双朋 吴长有 檀卫平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期853-859,共7页

目的观察托法替尼(tofacitinib)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)和纯化CD14+单核细胞分泌细胞因子的作用。方法本研究采集健康志愿者或幼年特发性关节炎患儿肝素抗凝静脉血,Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs并纯化CD14+单核细胞,应用抗CD3... 目的观察托法替尼(tofacitinib)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)和纯化CD14+单核细胞分泌细胞因子的作用。方法本研究采集健康志愿者或幼年特发性关节炎患儿肝素抗凝静脉血,Ficoll密度梯度离心法分离PBMCs并纯化CD14+单核细胞,应用抗CD3抗体联合CD28抗体、LPS或CPG进行刺激,加或不加入托法替尼培养,检测IFN-γ、IL-1β和IL-6的产生。结果在健康志愿者和幼年特发性关节炎患儿中,托法替尼都可以抑制PBMCs产生IFN-γ,但促进PBMCs产生IL-1β和IL-6;进一步研究的结果表明托法替尼促进纯化CD14+单核细胞分泌IL-1β和IL-6。结论托法替尼抑制T细胞IFN-γ的产生,但促进单核细胞IL-1β和IL-6的分泌,提示托法替尼对T细胞和单核细胞细胞因子分泌存在相反作用。不同类型JIA的发病机制涉及不同的免疫细胞,因此,需要进一步研究托法替尼对各型JIA的疗效是否存在差异,以期为托法替尼的临床应用提供参考。 展开更多

关键词 JAK抑制剂 托法替尼 细胞因子 免疫调节 幼年特发性关节炎

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MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究 被引量：2

13

作者 张倩倩 张英可 +1 位作者 桂连 黄俊琪 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期884-889,共6页

目的研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。方法用全血分离人原代单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14；let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24h、36h、48h，qRT-PCR和免疫荧光法检测... 目的研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。方法用全血分离人原代单核细胞，流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14；let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24h、36h、48h，qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率；采用1mg／L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12h后，ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度，筛选出LPS最佳刺激时间；qRT—PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响；Western blot法检测瞬转1et-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfaptin 2的表达水平。结果CD14^＋细胞大于70％；免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞，转染率约为70％；let-7e mimics转染原代单核细胞24h，细胞内即可表达较高水平的let-7e；LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α。ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生，同时在mRNA水平也得到一致的结果；Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组，沉默EZH2后胞核中NF—κ Bp65显著下调，沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降。结论在原代单核细胞中，let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达；其机制可能是1et-7e靶向作用EZH2进而调节NF—κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。 展开更多

关键词 原代单核细胞 let-7e TNF-Α LPS

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敲除NLRP3通过增加Treg细胞减轻右旋糖酐硫酸钠盐诱导的肠道炎症 被引量：1

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作者 吴琼丽 冯玉琨 +3 位作者 李舸 吴长有 杨扬 彭延文 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期379-386,共8页

目的探讨NLRP3炎症小体在急性结肠炎中的作用。方法通过饲喂右旋糖酐硫酸钠盐(DSS)在野生型(WT)与NLRP3缺陷型(NLRP3^-/-)小鼠中建立炎症性肠病(IBD)模型。而后将小鼠分为4组:WT对照组、WT肠炎组、NLRP3^-/-对照组和NLRP3^-/-肠炎组。DS... 目的探讨NLRP3炎症小体在急性结肠炎中的作用。方法通过饲喂右旋糖酐硫酸钠盐(DSS)在野生型(WT)与NLRP3缺陷型(NLRP3^-/-)小鼠中建立炎症性肠病(IBD)模型。而后将小鼠分为4组:WT对照组、WT肠炎组、NLRP3^-/-对照组和NLRP3^-/-肠炎组。DSS饲喂期间记录小鼠体重,7 d后处死小鼠,收集其血清、肠系膜淋巴结(mLN)、派伊尔结(PPs)、脾脏以及结肠等标本;苏木精-伊红染色、TUNEL染色评估其炎症损伤以及细胞凋亡情况;流式细胞术检测各组小鼠T、B淋巴细胞比例差异;ELISA检测血清细胞因子水平;Western blot检测各组小鼠结肠中细胞因子表达水平;体外诱导初始CD4+T细胞向Treg分化,比较WT小鼠与NLRP3^-/-小鼠Treg分化能力。结果NLRP3的缺失通过增加PPs和脾脏中Foxp3+Treg细胞的比例减轻DSS诱导的小鼠结肠炎。NLRP3^-/-结肠炎小鼠结肠中转录因子Foxp3和抗炎细胞因子IL-10的表达明显高于野生型结肠炎小鼠。进一步的体外研究表明,NLRP3缺失促进初始CD4+T细胞向Treg细胞分化。结论NLRP3缺失可以通过促进Treg细胞分化来减轻肠道炎症。 展开更多

关键词 NLRP3 调节性T细胞 白细胞介素-10 FOXP3 炎症性肠病

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人脐带血与周围血中NKT细胞频率、亚群、表型及功能的比较 被引量：2

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作者 李子涛 杨滨燕 +4 位作者 刘昀 王慧 张建平 陈慧 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期277-282,共6页

目的比较足月产新生儿脐带血和正常人周围血NKT细胞的频率、亚群、表型特征及功能。方法分离足月产新生儿脐带血CBMCs和正常成年人周围血PBMCs,流式细胞术检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达及细胞因子IL-4和... 目的比较足月产新生儿脐带血和正常人周围血NKT细胞的频率、亚群、表型特征及功能。方法分离足月产新生儿脐带血CBMCs和正常成年人周围血PBMCs,流式细胞术检测TCRvβ11、CD4、CD8、CD45RA、CD62L、CCR7等表面分子的表达及细胞因子IL-4和IFN-γ的产生。结果 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的平均频率分别为0.35%和0.33%,二者无显著差别。CBMCs中CD4+NKT细胞频率(67.39%)高于PBMCs中CD4+NKT细胞频率(54.08%),但CD8+NKT细胞,PBMCs明显高于CBMCs(22.35%对5.86%),CD4-CD8-NKT二者相差无统计学意义。CBMCs中CD3+TCRvβ11+CD45RA+NKT细胞的频率(88.37%)高于PBMCs(61.32%)。CBMCs中CD62L(56.66%对49.60%)和CCR7(22.64%对20.03%)的比例稍高于PBMCs,但其差别无显著性。未刺激CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞均不产生IL-4和IFN-γ,PMA+Ionomycin刺激后,CBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞仍不能产生IL-4和IFN-γ,但PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞却有6.74%产生IL-4、26.96%产生IFN-γ、1.26%同时分泌IL-4和IFN-γ,产生细胞因子的CD3+TCRvβ11+NKT细胞主要为记忆性NKT细胞。结论 CBMCs和PBMCs中CD3+TCRvβ11+NKT细胞的亚群、表型和功能均存在一定差别,记忆性NKT细胞可能与其再次免疫应答相关。 展开更多

关键词 NKT细胞 频率 亚群 表型 细胞因子

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索曲妥林对人T细胞产生细胞因子抑制作用的机制研究 被引量：2

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作者 金水平 吴琼丽 +2 位作者 康双朋 杨滨燕 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期461-470,477,共11页

目的观察索曲妥林(sotrastaurin或AEB071)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)、纯化CD4^+T细胞和CD8^+T细胞分泌细胞因子的抑制作用及其机制。方法采集健康志愿者的静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMCs后纯化CD4^+T和CD8^+T细胞,应用抗... 目的观察索曲妥林(sotrastaurin或AEB071)对人外周血中单个核细胞(PBMCs)、纯化CD4^+T细胞和CD8^+T细胞分泌细胞因子的抑制作用及其机制。方法采集健康志愿者的静脉血,肝素抗凝,密度梯度离心法分离PBMCs后纯化CD4^+T和CD8^+T细胞,应用抗CD3抗体联合CD28抗体进行刺激,加或不加入AEB071培养后,检测细胞因子的产生、转录因子的表达和细胞的活化与增殖。结果索曲妥林处理不促进外周血T细胞的凋亡,而能抑制T细胞分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-2,且呈时间和剂量依赖性;进一步研究发现,索曲妥林通过下调STAT-1和STAT-4的磷酸化以及T-bet的表达抑制细胞因子的产生。同时经研究发现,索曲妥林处理后抑制T细胞的活化和增殖。结论索曲妥林抑制T细胞转录因子的表达与磷酸化而抑制细胞因子的产生,从而抑制人体免疫功能。为此,进一步研究索曲妥林免疫抑制的机制,对索曲妥林在器官移植、银屑病和溃疡性结肠炎的治疗方面的应用,具有参考价值。 展开更多

关键词 免疫抑制剂 索曲妥林 IFN-Γ TNF-Α IL-2

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广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平分析 被引量：2

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作者 乔丹 陈慎 +2 位作者 吴长有 王慧 李丽 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期979-982,986,共5页

目的分析广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平。方法随机抽取288例广州市妇女儿童医疗中心儿童院区健康体检的0～14岁儿童静脉抗凝血,经BCG刺激后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th1细胞因子(IFN-γ,TNF-α和IL-2)的水平,并... 目的分析广州市0～14岁儿童卡介苗特异性Th1细胞免疫水平。方法随机抽取288例广州市妇女儿童医疗中心儿童院区健康体检的0～14岁儿童静脉抗凝血,经BCG刺激后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th1细胞因子(IFN-γ,TNF-α和IL-2)的水平,并用流式细胞术(FACS)检测IFN-γ和TNF-α的细胞来源。结果 BCG刺激可显著诱导儿童外周血细胞产生IFN-γ(median=726.37 pg/ml),TNF-α(median=934.98 pg/ml)和IL-2(median=48.25 pg/ml)。与不刺激组相比,差别具有统计学意义(n=288,P<0.001)。此外,IFN-γ的产生水平与年龄呈一定的正相关(r2=0.4069,P<0.05)。流式分析结果表明,BCG刺激可诱导CD4+T细胞和非CD4CD8细胞分泌IFN-γ或TNF-α,而不诱导CD8+T细胞产生细胞因子。经BCG刺激后,分别有35.71%和39.29%的儿童CD4+T细胞能够产生IFN-γ和TNF-α。结论广州市0～14岁儿童外周血细胞经BCG刺激后,主要是由CD4+T细胞和非CD4CD8细胞产生Th1细胞因子,但是CD4+T细胞能够产生Th1细胞因子的儿童比例较低,这可能是卡介苗接种免疫效果并不理想的原因之一。 展开更多

关键词 卡介苗 细胞因子 酶联免疫吸附试验 流式细胞术

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一氧化氮抑制T细胞产生细胞因子但促进单核细胞细胞因子的分泌 被引量：2

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作者 谌亚星 余思菲 +3 位作者 吴琼丽 沈娟 杨滨燕 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1013-1021,共9页

目的研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对T细胞和单核细胞分泌细胞因子的作用及机制。方法用抗人CD3抗体或抗人CD3抗体联合抗人CD28抗体或LPS刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)、纯化T细胞或纯化单核细胞,加或不加一氧化氮培养,ELISA检测培... 目的研究一氧化氮(nitric oxide,NO)对T细胞和单核细胞分泌细胞因子的作用及机制。方法用抗人CD3抗体或抗人CD3抗体联合抗人CD28抗体或LPS刺激培养外周血单个核细胞(PBMCs)、纯化T细胞或纯化单核细胞,加或不加一氧化氮培养,ELISA检测培养细胞上清液中细胞因子的含量;流式细胞术检测T细胞表面活化分子CD69和CD25的表达、T-box转录因子(T-bet)的表达,STAT1和STAT4的磷酸化程度以及T细胞的分裂情况。结果一氧化氮呈时间和剂量依赖方式抑制T细胞产生IFN-γ、TNF-α和IL-2,但促进单核细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,且不诱导细胞的凋亡。进一步研究发现其抑制细胞晚期活化分子的表达和细胞的分裂,以及抑制T细胞相关转录因子T-bet的表达,但不抑制STAT1和STAT4的磷酸化程度。结论一氧化氮通过非细胞毒性作用抑制活化的T细胞产生细胞因子,但促进活化的单核细胞的细胞因子的分泌,其机制是通过抑制转录因子T-bet信号通路而抑制T细胞细胞因子的分泌,该研究将为临床应用提供理论依据。 展开更多

关键词 一氧化氮 T淋巴细胞 单核细胞 细胞因子 免疫抑制

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microRNA家族成员let-7e对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究 被引量：2

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作者 张林 张英可 +2 位作者 桂连 章旭之 黄俊琪 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期1-6,共6页

目的：研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率，qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达；MTT... 目的：研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率，qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达；MTT法检测转染后THP-1细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot法检测let-7e靶基因IFI6（interferon alpha-inducible protein 6）、EZH2（enhancer of zeste homolog 2）、caspase-3的表达；转染48h 后THP-1细胞用LPS刺激2h收集细胞培养上清，细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞，转染率约为75％，转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8．551±0．365、83．893±15．941、38．858±2．743，转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0．594±0．174、2．427±1．229、3．053±0．207；let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低；miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为－0．1608、－0．5693、－09．423，证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因；let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降；let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子（ G-CSF）、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用，可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。 展开更多

关键词 THP-1细胞 let-7e 凋亡 细胞因子

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阴道组织定居记忆γδT细胞表型特征和细胞因子产生分析 被引量：1

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作者 康双朋 毛雪英 +2 位作者 金水平 杨滨燕 吴长有 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期921-927,共7页

目的比较小鼠阴道和外周血γδT细胞表型特征和细胞因子等异同,为阴道γδT细胞的功能研究奠定基础。方法分离小鼠阴道和外周血单个核细胞,流式细胞术检测γδT细胞比例、趋化因子受体、记忆分子、杀伤分子和ERα的表达差异。PMA+Ionomy... 目的比较小鼠阴道和外周血γδT细胞表型特征和细胞因子等异同,为阴道γδT细胞的功能研究奠定基础。方法分离小鼠阴道和外周血单个核细胞,流式细胞术检测γδT细胞比例、趋化因子受体、记忆分子、杀伤分子和ERα的表达差异。PMA+Ionomycin刺激后检测细胞因子IL-17和IFN-γ的表达,并分析不同组织γδT细胞产生的IL-17量与ERα密度的关系。结果阴道内富含γδT细胞,γδT细胞占阴道T比例为47.91%±3.12%,主要是组织定居记忆γδT细胞亚型,高表达CD44、CD69、CD103、IL-17,但低表达IFN-γ。此外,脾、外周血、肺、膀胱、子宫、阴道的γδT细胞IL-17表达量与其ERα密度呈正相关。结论阴道γδT细胞主要为组织定居记忆γδT细胞,阴道γδT细胞可能通过产生大量IL-17在抵抗生殖道病原微生物感染中发挥重要功能。 展开更多

关键词 ΓΔT细胞 阴道 组织定居记忆T细胞 IL-17

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