近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病。肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因。为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类E...近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病。肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因。为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类EV71疫苗的研发,其中以灭活疫苗的进展最快,目前国内3家EV71全病毒灭活疫苗即将进入Ⅲ期临床试验阶段。本文就全病毒灭活疫苗的研发进展及质量控制和评价要点作一综述。展开更多
目的比较不同HBsAg酶联免疫检测试剂(国产试剂:1号～4号,进口试剂:5号和6号)的分析灵敏度差异。方法收集乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清,提取病毒核酸,PCR扩增HBV的S基因,测序后,根据其氨基酸序列确定血清型。应用雅培H...目的比较不同HBsAg酶联免疫检测试剂(国产试剂:1号～4号,进口试剂:5号和6号)的分析灵敏度差异。方法收集乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清,提取病毒核酸,PCR扩增HBV的S基因,测序后,根据其氨基酸序列确定血清型。应用雅培HBsAg检测试剂对各血清型样品进行定量检测,根据定量结果稀释至1～4 IU/ml,将各样品以1∶2系列稀释至4个稀释度,分别利用6种HBsAg酶联免疫检测试剂双孔检测。将各试剂的cut-off值代入各样品,检测A值和浓度值的双对数曲线,计算各血清型样品的分析灵敏度,比较各试剂间与各血清型间的分析灵敏度差异。结果不同血清型间的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05),不同试剂间的检测结果差异均有统计学意义(P<0.01)。国产4号试剂与进口5号和6号试剂间的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05),国产4号、进口5号和6号试剂的分析灵敏度高于国产1号和3号试剂,低于国产2号试剂。各试剂对不同血清型样品的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05)。结论各血清型间HBsAg检测的分析灵敏度无差别,但不同试剂间的分析灵敏度有差别,应对其临床意义进一步研究。展开更多
目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p ...目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p GEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500μs、400 V 500μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转最佳条件。结果 p GEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论电转参数为500 V 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞。展开更多
文摘近年来手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)在我国持续流行,已经成为危害儿童健康的严重疾病。肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染是引起HFMD病例和婴儿重症死亡的主要病因。为控制EV71感染的流行,国内外均在开展不同种类EV71疫苗的研发,其中以灭活疫苗的进展最快,目前国内3家EV71全病毒灭活疫苗即将进入Ⅲ期临床试验阶段。本文就全病毒灭活疫苗的研发进展及质量控制和评价要点作一综述。
文摘目的比较不同HBsAg酶联免疫检测试剂(国产试剂:1号～4号,进口试剂:5号和6号)的分析灵敏度差异。方法收集乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染者血清,提取病毒核酸,PCR扩增HBV的S基因,测序后,根据其氨基酸序列确定血清型。应用雅培HBsAg检测试剂对各血清型样品进行定量检测,根据定量结果稀释至1～4 IU/ml,将各样品以1∶2系列稀释至4个稀释度,分别利用6种HBsAg酶联免疫检测试剂双孔检测。将各试剂的cut-off值代入各样品,检测A值和浓度值的双对数曲线,计算各血清型样品的分析灵敏度,比较各试剂间与各血清型间的分析灵敏度差异。结果不同血清型间的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05),不同试剂间的检测结果差异均有统计学意义(P<0.01)。国产4号试剂与进口5号和6号试剂间的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05),国产4号、进口5号和6号试剂的分析灵敏度高于国产1号和3号试剂,低于国产2号试剂。各试剂对不同血清型样品的分析灵敏度差异无统计学意义(P>0.05)。结论各血清型间HBsAg检测的分析灵敏度无差别,但不同试剂间的分析灵敏度有差别,应对其临床意义进一步研究。
文摘目的建立信使RNA(mRNA)电转抗CD3抗体刺激的外周血单个核细胞(PBMC)的方法,为制备基因修饰CDR3δ移植型γδT淋巴细胞,为肿瘤细胞过继治疗提供新的技术方法。方法以SpeⅠ内切酶消化重组p GEM4Z/EGFP/A64质粒,回收纯化线性化的重组质粒p GEM4Z/EGFP/A64,体外转录成mRNA;在电转参数为500 V500μs、400 V 500μs或300 V 500μs等不同条件下,转染抗CD3抗体刺激的人PBMC;用倒置荧光显微镜观察和流式细胞仪观察和分析绿色荧光蛋白的表达;台盼蓝染色计算不同电转条件下细胞的存活率,以确定mRNA电转最佳条件。结果 p GEM4Z/EGFP/A64质粒经过SpeⅠ内切酶酶切,获得了线性化的质粒;体外转录得到了增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转后48 h绿色荧光蛋白表达量较高;与其他转染条件相比,在500 V 500μs电转参数下转染EGFP mRNA的PBMC细胞,电转48 h后绿色荧光蛋白表达的阳性细胞高达77%;台盼蓝染色分析不同电转条件下细胞的存活率,在细胞电转48 h后,500 V 500μs参数电转条件下细胞存活率可以达到85%以上。结论电转参数为500 V 500μs的条件可用于电转mRNA于抗CD3抗体扩增的人PBMC,以制备基因修饰T淋巴细胞。
