树鼩模型在人类病毒性疾病研究中的应用进展 被引量：10

1

作者 殷安国 匡德宣 +4 位作者 李晓飞 张媛 孙晓梅 夏雪山 代解杰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第2期86-89,共4页

由于树鼩在进化上接近于灵长类动物,在生理、生化及解剖学等生物学特性方面与人类有着相似之处,树鼩得到越来越多的关注,研究人员运用与其他动物相比具有多种优势的树鼩建立了一系列的疾病模型,如病毒类疾病、神经系统、肿瘤等,本文着... 由于树鼩在进化上接近于灵长类动物,在生理、生化及解剖学等生物学特性方面与人类有着相似之处,树鼩得到越来越多的关注,研究人员运用与其他动物相比具有多种优势的树鼩建立了一系列的疾病模型,如病毒类疾病、神经系统、肿瘤等,本文着重就树鼩在人类病毒疾病方面的研究进展进行概述。 展开更多

关键词 树鼩 病毒 动物模型

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基于16S rRNA测序对树鼩肠道菌群特征与高级别肉瘤的相关性分析 被引量：6

2

作者 黄鑫 古文鹏 +4 位作者 黎晓慧 李娜 贾杰 李明学 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期11-16,49,共7页

目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通... 目的检测高级别肉瘤的树鼩肠道微生物菌群结构,为探讨肠道微生物菌群结构的改变与肿瘤发生的相关性提供科学依据。方法选取3例患有恶性高级别肉瘤树鼩粪便为CA组,6例健康树鼩粪便为对照NO组。通过16SV3+4区引物进行细菌多样性的鉴定,通过对Reads剪切过滤,OTUs聚类,并进行物种注释及丰度分析,得出两组树鼩肠道微生物结构、丰度以及多样性。结果比较CA组和NO组树鼩肠道微生物结构,多样性指数Chao1指数值、ACE指数值、Shannon指数值差异无统计学意义(P>0.05)。NO组的树鼩肠道菌群OTUs为640种,而CA组为494种,健康树鼩肠道菌群结构呈多样性。在门水平上比较,其中CA组中螺旋体门(Spirochaetes)丰度为0.03%,低于NO组(丰度为0.12%),且差异有统计学意义(P<0.05);CA组厚壁菌门(Firmicutes)丰度为77.79%高于NO组(47.65%),但差异无统计学意义;CA组的拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度为0.75%低于NO组(8.31%),但差异无统计学意义。CA组中的乳杆菌属(lactobacillus)是具有统计学意义的生物标识。结论患有高级别肉瘤树鼩的肠道菌群结构丰度和多样性低于健康树鼩,肠道菌群的结构改变及厚壁菌门含量增加可能增加恶性肿瘤的发生。 展开更多

关键词 肠道菌群 高级别肉瘤 16srRNA测序 树鼩

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帕金森疾病动物模型的研究进展 被引量：5

3

作者 张志成 袁圆 +2 位作者 王璇 宋庆凯 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第5期21-27,共7页

帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方... 帕金森疾病(Parkinson’s disease,PD)是一种神经退行性疾病,现多认为是遗传和环境因素相互作用的结果。典型特征是黑质纹状体中多巴胺神经元丧失以及多巴胺缺乏相关的典型帕金森运动特征。动物模型在阐明PD的发病机制、测试新的治疗方案及药物的研究中,具有十分重要的作用。啮齿类动物、树鼩和灵长类动物等采用不同造模方法所建立的PD动物模型都拥有自己的优势和局限性,所表现出的临床特征和病理机制与人类有所不同。因此,在科学研究中选择所需使用的模型时必须仔细考虑。本文就主要神经毒素及转基因PD动物模型的相关研究进展进行综述。 展开更多

关键词 帕金森疾病 6-羟基多巴胺 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶 神经毒素 转基因 动物模型

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实验树鼩主要内分泌器官的组织学观察 被引量：5

4

作者 匡德宣 孙晓梅 +5 位作者 陆彩霞 王文广 仝品芬 殷安国 李晓飞 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第6期35-39,F0003,F0004,共7页

目的了解树鼩主要内分泌器官的组织学结构特征,建立树鼩正常的内分泌器官组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只,麻醉后放血处死和病理解剖,对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材,常规病理制片,采用常规组... 目的了解树鼩主要内分泌器官的组织学结构特征,建立树鼩正常的内分泌器官组织学图谱。方法选取人工饲养的健康树鼩10只,麻醉后放血处死和病理解剖,对甲状腺、甲状旁腺、肾上腺及脑垂体进行病理大体检查和取材,常规病理制片,采用常规组织HE染色技术,显微镜下观察组织学结构。结果 （1）甲状腺呈淡黄色,位于气管两侧,在第2~4气管软骨环之间,呈板状,表面包有薄层被膜,被膜伸人甲状腺实质内分成若干小叶。小叶内有滤泡和滤泡旁细胞,滤泡腔内可见红染胶质。（2）甲状旁腺每侧一个,位于甲状腺颅侧或中部外表面,稍被甲状腺覆盖,呈圆形或卵圆形,其实质由主细胞和嗜酸性细胞组成,并可见腺泡样结构。（3）脑垂体位于蝶鞍内,没有垂体隐窝,垂体有腺垂体和神经垂体两部组成,表面包有结缔组织被膜。腺垂体分为远侧部、中间部和结节部,神经垂体由神经部和漏洞部组成。（4）肾上腺呈卵圆形,赭黄色,位于肾门颅侧,与肾相连。肾上腺外包被膜,实质明显区分为皮质和髓质两部分。皮质从外到内可分为球状带、束状带和网状带。球状带最厚,束状带最薄,网状带介于中间。髓质部细胞形成团块或网状,髓质中央有静脉。结论基本建立了树鼩内分泌器官组织学图谱,其在组织形态学上接近于灵长类动物,可以为研究树鼩内分泌器官的功能和病变,以及建立人类相关疾病的动物模型提供组织学依据。 展开更多

关键词 树鼩 内分泌器官 组织学

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滇西亚种树鼩微卫星分子标记的筛选 被引量：5

5

作者 张媛 李晓飞 +4 位作者 李振宇 仝品芬 陈玲霞 尹博文 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期36-41,共6页

目的筛选出适用于滇西亚种树鼩种群遗传质量控制的特异性微卫星分子标记。方法首先从树鼩全基因组序列中筛选出约700个微卫星位点,择优选出约100个位点设计引物,去除有不良因素的,最后保留33对和文献报道的13对引物对滇西亚种树鼩DNA进... 目的筛选出适用于滇西亚种树鼩种群遗传质量控制的特异性微卫星分子标记。方法首先从树鼩全基因组序列中筛选出约700个微卫星位点,择优选出约100个位点设计引物,去除有不良因素的,最后保留33对和文献报道的13对引物对滇西亚种树鼩DNA进行PCR扩增,根据琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺电泳结果筛选保留,进行STR扫描再次筛选适于树鼩遗传检测的微卫星位点组合。结果筛选出树鼩微卫星位点22个,STR基因扫描有明显Stutter峰。比较备选位点和最终筛选出的位点,普通树鼩位点中选取5个,2个可用,与滇西亚种的重合率是40%;印度小树鼩位点中选取5个,2个可用,重合率是40%;中缅树鼩的位点中选取3个,2个可用,重合率约70%。结论筛选出的22个微卫星位点适用于滇西亚种树鼩的遗传检测,为树鼩种群的遗传质量监测提供科学依据。 展开更多

关键词 滇西亚种树鼩 微卫星分子标记 STR扫描

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树鼩真菌性角膜炎模型的建立及甘露糖受体和TNF-α对炎症的影响 被引量：4

6

作者 苗雨润 贾杰 +5 位作者 黎晓慧 袁园 宋庆凯 张志成 李娜 代解杰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期752-759,共8页

目的研究茄病镰刀菌感染树鼩角膜过程中甘露糖受体和炎症因子的表达变化,探讨真菌感染性角膜炎发生机制。方法通过接触镜辅助法用茄病镰刀菌感染树鼩角膜,前段照相、病理切片及活体共聚焦显微镜观察结果对动物模型进行评价。qPCR检测树... 目的研究茄病镰刀菌感染树鼩角膜过程中甘露糖受体和炎症因子的表达变化,探讨真菌感染性角膜炎发生机制。方法通过接触镜辅助法用茄病镰刀菌感染树鼩角膜,前段照相、病理切片及活体共聚焦显微镜观察结果对动物模型进行评价。qPCR检测树鼩角膜炎病发过程中的甘露糖受体、dectin-1、IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;体外培养树鼩原代角膜细胞并进行感染实验。结果树鼩真菌性角膜炎模型建立成功率为84%。MR与dectin-1在感染初期有高拷贝数阳性表达,引起炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达峰值,这些因子的表达与病症的严重程度呈正相关。角膜细胞体外感染前后IL-1β、IL-6、TNF-α的表达差异无显著性(P> 0.05)。结论建立的真菌性角膜炎树鼩模型,其病理表现相与人类真菌性角膜炎症状接近。甘露糖受体可能参与调控机体对真菌感染的免疫应答反应,机体自身的免疫能力可能对角膜炎病发与转归有重要作用。 展开更多

关键词 树鼩 真菌性角膜炎 甘露糖受体 TNF-Α

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树鼩粪便中沙门氏菌LAMP检测方法建立及应用 被引量：4

7

作者 王璇 袁园 +3 位作者 张志成 刘城秀 宋庆凯 孙晓梅 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第2期90-97,共8页

目的建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用。方法根据沙门氏菌种属特异性基因inv A(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP引物。分别设定十个... 目的建立树鼩粪便沙门氏菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行初步应用。方法根据沙门氏菌种属特异性基因inv A(侵袭蛋白基因A)的保守序列,设计合成特异性LAMP引物。分别设定十个反应温度即57℃~66℃和十个反应时间即24~42 min进行优化,并测定本方法的特异性和灵敏度;同时进行普通PCR实验,作为本方法的验证和比较。用建立的LAMP法对91份野生来源的树鼩稀便样品进行检测。结果优化反应条件选出反应温度为62℃,反应时间34 min;该方法对沙门氏菌的灵敏度可达3.36×101CFU/m L,比普通PCR方法高10~100倍;对10种树鼩来源的肠道细菌进行LAMP检测,只有沙门氏菌属的肠炎沙门氏菌和乙型副伤寒沙门氏菌检测为阳性,其余为阴性;对91份野生树鼩粪便样品进行LAMP检测,阳性检出率为20.88%;LAMP法的所有反应可在40 min内完成。结果可通过肉眼观察颜色变化直接判定。结论所建立的LAMP方法具有便捷、快速、灵敏、特异等特点,可用于树鼩粪便中沙门氏菌的大规模快速检测。 展开更多

关键词 沙门氏菌 环介导等温扩增 粪便样品 树鼩

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二株不同基因型树鼩呼肠孤病毒的分离和鉴定 被引量：3

8

作者 刘建生 陶玉芬 +5 位作者 李晓菲 李超 李晓飞 孙晓梅 代解杰 刘红旗 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期365-370,共6页

目的从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLCMK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物... 目的从腹泻树鼩的粪便样本中分离和鉴定病毒。方法树鼩腹泻粪便样本分别接种Vero、LLCMK2和KMB17细胞,经连续传代,观察记录细胞病变,并对培养上清进行透射电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析、轮状病毒鉴别筛查、S1全长基因片段扩增和生物信息学分析。结果树鼩腹泻粪便样品在KMB17、Vero和LLC-MK2细胞上经连续3代次传代后,均能产生细胞病变。经电镜检查、病毒RNA-PAGE电泳分析和轮状病毒鉴别筛查,推测其为呼肠孤病毒。病毒基因组全长S1基因扩增、序列测定和分析结果表明,KMB17培养上清中获得的病毒与I型原型株T1L同源性最高,核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和90%,因此该病毒定义为呼肠孤病毒I型。而LLC-MK2和Vero细胞上清中的病毒S1基因与III型原型株T3D核苷酸和氨基酸同源性分别为85%和92%,因此为呼肠孤病毒III型。结论对今后树鼩和其他宿主呼肠孤病毒的分离鉴定有一定的指导意义。 展开更多

关键词 哺乳动物呼肠孤病毒 树鼩 基因型 S1基因 血清型

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MPTP诱导树鼩帕金森疾病模型行为学检测方法研究 被引量：2

9

作者 张志成 宋庆凯 +6 位作者 黎晓慧 李娜 黄鑫 袁圆 王璇 李明学 代解杰 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第1期9-14,共6页

目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急... 目的建立树鼩急性帕金森疾病(PD)模型,对Catwalk、FPA检测系统作为评价PD行为学的方法进行研究。方法选取14只成年、健康的普通级滇缅树鼩,随机分为模型组(n=10)和对照组(n=4),1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)药物腹腔注射建立急性PD模型,对照组注射等体积0.9%氯化钠溶液。结果成功建立树鼩急性PD模型。建模1d后,与对照组树鼩相比,模型组树鼩空间利用指数下降、低运动性出现次数(BLM)指数显著升高(P均<0.001),表明模型组空间利用能力受损、活动度下降;模型组右前爪(RF)、左前爪(LF)最大接触面积减少,RF、LF和右后爪(RH)爪印最大接触面积平均压力,以及RF、RH、LF爪印平均压力及四肢平均力量均下降(P均<0.05),反映了树副肌肉僵硬度升高,可以作为PD步态分析的定量指标;0~15 Hz(TI1)震颤显著增强(P<0.01),能较好模拟PD患者静止性震颤的临床表现。结论MPTP致树鼩急性PD模型能较好模拟PD早期的临床表现。Catwalk、FDA检测系统可提供系统、客观、可靠的PD行为学数据。 展开更多

关键词 帕金森疾病 树鼩 1-甲基-4-苯基-1 2 3 6-四氢吡啶(MPTP) 动物模型 行为学 Catwalk步态分析系统 FPA分析系统

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树鼩胸主动脉血管内皮细胞的分离培养与鉴定 被引量：2

10

作者 宋庆凯 尹博文 +4 位作者 陈玲霞 李晓飞 苗雨润 代解杰 孙晓梅 《实验动物科学》 2018年第6期62-65,共4页

目的体外分离、培养树鼩(Tupaia belangeri)胸主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs),并对培养细胞进行初步鉴定,为新型实验动物树鼩的应用研究提供体外模型。方法无菌取幼龄树鼩胸主动脉,采用组织块培养法和胰蛋白酶... 目的体外分离、培养树鼩(Tupaia belangeri)胸主动脉血管内皮细胞(vascular endothelial cells, VECs),并对培养细胞进行初步鉴定,为新型实验动物树鼩的应用研究提供体外模型。方法无菌取幼龄树鼩胸主动脉,采用组织块培养法和胰蛋白酶、胶原酶连续消化法分别进行树鼩胸主动脉血管内皮细胞分离,经完全培养液培养,倒置显微镜观察细胞形态,并用抗Ⅷ因子抗体进行荧光染色鉴定细胞。结果经组织块培养法分离培养的血管内皮细胞,3 d有细胞贴壁,7 d后细胞从组织块中大量长出,15 d汇合为单层;酶消化法所得细胞12 h即贴壁,3～7 d生长较快,12 d汇合成单层,镜下观察发现细胞呈典型的铺路石状;两种方法分离所得原代细胞经体外培养传代,6代内,细胞生长均良好;利用血管内皮细胞标志分子Ⅷ因子进行免疫荧光鉴定后确定为阳性。结论本研究采用简便的方法成功分离到了树鼩胸主动脉血管内皮细胞,为血管内皮细胞相关研究提供了实验模型。 展开更多

关键词 树鼩 血管内皮细胞 分离培养 免疫荧光 鉴定

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流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌和多杀巴斯德杆菌病多重荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：2

11

作者 邢进 冯育芳 +3 位作者 岳秉飞 贺争鸣 孙晓梅 代解杰 《实验动物科学》 2017年第3期38-42,共5页

目的建立同时检测实验动物中的流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌和多杀巴斯德杆菌的多重实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。方法分别根据三种病原菌的Hpd基因和KMT1基因设计特异性引物和Taqman探针,经特异性、敏感性和重复性验证,建立多重qPCR... 目的建立同时检测实验动物中的流感嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌和多杀巴斯德杆菌的多重实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。方法分别根据三种病原菌的Hpd基因和KMT1基因设计特异性引物和Taqman探针,经特异性、敏感性和重复性验证,建立多重qPCR检测方法,并对822份实验动物呼吸道样本进行检测应用。结果所建立的多重qPCR方法与其他29种病原菌间无交叉反应,对三种病原菌的检测限可达到10个拷贝/μL。树鼩样品中溶血嗜血杆菌和多杀巴斯德杆菌的阳性率分别为10%(6/60)和21.7%(13/60),其他实验动物中均未检出上述三种病原菌。结论本研究所建立的多重qPCR检测方法,可快速检测实验动物中的上述三种呼吸道病原菌。 展开更多

关键词 流感嗜血杆菌 溶血嗜血杆菌 多杀巴斯德杆菌 多重荧光定量PCR 实验动物

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实验树鼩肠道螺杆菌属细菌特征分析 被引量：2

12

作者 古文鹏 贾杰 +5 位作者 施梅言 邱丹丹 阮蕾颖 李娜 仝品芬 代解杰 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期238-246,共9页

近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不... 近年来,树鼩(Tupaia belangeri)作为一种新型的实验动物被广泛应用于生物医学研究的各个领域。本研究组前期的研究结果显示,螺杆菌属(Helicobacter)是树鼩肠道微生物群落中相对丰度最高的一类细菌,但其具体的细菌种类和结构特征仍然不清楚。因此,本研究将开展实验树鼩肠道中螺杆菌属细菌的分布种类和特征分析,为后续实验研究工作提供资料。通过系统采集72只树鼩的粪便样本,提取核酸后采用巢氏PCR法应用属特异性引物扩增螺杆菌属特异性片段,再分别采用7个种特异性引物对属特异性阳性样本扩增螺杆菌种特异性片段,包括肝螺杆菌(H.hepaticus)、家鼠螺杆菌(H.muridarum)、胆汁螺杆菌(H.bilis)、啮齿类螺杆菌(H.rodentium)、弯曲螺杆菌(Flexispira rappini)、鼩螺杆菌(H.suncus)和盲肠螺杆菌(H.typhlonius)。属特异性引物扩增阳性但种引物扩增阴性的样本进行核酸序列测定和BLAST比对分析,确认其最终所属的螺杆菌种类。结果显示,72份树鼩粪便样本中,属特异性引物扩增阳性有18份,总体阳性率为25.0%。其中,盲肠螺杆菌阳性8株、胆汁螺杆菌阳性6株,其余8份阳性样本经过测序和BLAST比对分析后确认为同性恋螺杆菌(H.cinaedi)阳性5株、猫螺杆菌(H.felis)阳性2株和猕猴螺杆菌(H.macacae)阳性1株。有4份树鼩粪便样本出现同时携带盲肠螺杆菌和胆汁螺杆菌的情况。将螺杆菌属细菌携带结果与实验树鼩的性别和年龄组进行比较分析后发现,不同性别间以及不同年龄组间,属或种阳性样本情况均无差异(P>0.05)。本研究结果表明,实验树鼩具有较高的螺杆菌携带率,且不分性别和年龄,主要以盲肠螺杆菌、胆汁螺杆菌和同性恋螺杆菌为主。 展开更多

关键词 实验树鼩 盲肠螺杆菌 胆汁螺杆菌 同性恋螺杆菌 PCR

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树鼩脊髓微血管内皮细胞的分离培养及EV71感染实验 被引量：2

13

作者 施梅言 王璇 +2 位作者 王文广 阮蕾颖 代解杰 《实验动物与比较医学》 CAS 2021年第2期148-154,共7页

目的建立树鼩脊髓来源的微血管内皮细胞体外分离培养技术,用7 1型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)感染该细胞,探讨其感染特性,为EV71损伤中枢神经系统机制的研究提供基础。方法采用Ⅱ型胶原酶、分散酶、DNaseⅠ三酶联合两次消化树鼩脊髓... 目的建立树鼩脊髓来源的微血管内皮细胞体外分离培养技术,用7 1型肠道病毒(enterovirus 71,EV71)感染该细胞,探讨其感染特性,为EV71损伤中枢神经系统机制的研究提供基础。方法采用Ⅱ型胶原酶、分散酶、DNaseⅠ三酶联合两次消化树鼩脊髓组织后,获取微血管内皮细胞,并进行纯化和鉴定。用E V 7 1感染树鼩脊髓微血管内皮细胞,测定感染不同时间点的细胞及其培养上清液中病毒载量。采用间接免疫荧光法检测细胞中E V 7 1标志蛋白的表达,以确定EV71对树鼩脊髓微血管内皮细胞的感染性。结果分离培养获得的树鼩脊髓微血管内皮细胞呈典型的分支状和串珠状,经过嘌呤霉素纯化培养后的传代细胞主要是不规则的多角状细胞;细胞免疫荧光鉴定结果显示,微血管内皮细胞标志蛋白CD31和血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)表达都呈阳性。用感染复数为1的EV71感染树鼩脊髓微血管内皮细胞,可见典型的细胞病变,且病毒滴度可达3.2×10^(6) TCID50/mL,表明EV71可成功感染树鼩脊髓微血管内皮细胞并有效增殖;而且在4 8 h内,细胞培养上清液中病毒载量呈线性升高,而细胞中病毒载量在12 h到达顶峰。间接免疫荧光法在EV71感染后12 h的树鼩脊髓微血管内皮细胞质中可检测到病毒颗粒。结论成功建立了树鼩脊髓微血管内皮细胞体外分离培养方法,确定了EV71对树鼩脊髓微血管内皮细胞的感染性和病毒增殖特性,为开展EV71入侵中枢神经系统的机制研究提供了一定基础。 展开更多

关键词 脊髓微血管内皮细胞 分离培养 EV71 病毒增殖 树鼩

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树鼩血压和心率的无创测定 被引量：2

14

作者 仝品芬 陆彩霞 +4 位作者 江勤芳 孙晓梅 高家红 匡德宣 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第4期52-56,共5页

目的建立健康树鼩的心率、血压正常值参考范围,并探讨不同来源、不同性别、不同年龄树鼩心率、血压的差异。方法随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只。采用智能无创血压计... 目的建立健康树鼩的心率、血压正常值参考范围,并探讨不同来源、不同性别、不同年龄树鼩心率、血压的差异。方法随机挑选实验树鼩180只,按来源分为野生成年组、F1代自繁成年组和青幼年组三个组,每组雌雄各半,共60只。采用智能无创血压计(鼠仪)逐只测定HR(心率)、SBP(收缩压)、DBP(舒张压)和MBP(平均动脉压)。结果野生成年树鼩、自繁成年树鼩和青幼年树鼩心率分别为394.33±37.74 BPM、351.61±72.76 BPM和378.19±69.04 BPM,野生和自繁成年树鼩组差异有显著性(P<0.05)。自繁成年树鼩收缩压、舒张压和平均动脉压均明显低于青幼年树鼩,差异有极显著性(P<0.01)。野生成年树鼩和自繁成年树鼩相比,收缩压、舒张压和平均动脉压差异均无显著性(P>0.05)。结论大鼠无创血压计适合于树鼩的血压、心率的测量。通过测定,获得了野生成年树鼩、F1代自繁成年树鼩和青幼年树鼩的心率和血压参考值范围,丰富了树鼩基础生理数据,可为相关研究提供科学参考。 展开更多

关键词 树鼩 心率 血压 无创

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树鼩鞭毛虫的形态学观察及其18S rRNA基因分析 被引量：2

15

作者 陈玲霞 尹博文 +2 位作者 李振宇 孙晓梅 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期5-8,I0004,共5页

目的对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定。方法取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发... 目的对树鼩体内的鞭毛虫进行形态学观察及基因分析鉴定。方法取树鼩回盲部内容物和粪便经过滤离心处理直接涂片和碘液染色镜检,传统方法提取虫体总DNA,PCR扩增该鞭毛虫的18S rRNA,测序后经BLAST进行同源性分析,并应用MEGA5.1绘制系统发育进化树。结果形态学观察表明树鼩体内的鞭毛虫为三毛滴虫;测序分析表明树鼩鞭毛虫序列18S rRNA与已报道的胎儿三毛滴虫18S rRNA(AY754332.1)同源性高达99%。结论树鼩体内可感染胎儿三毛滴虫,研究结果为树鼩的寄生虫学质量控制提供依据。 展开更多

关键词 鞭毛虫 树鼩 形态观察 18S RRNA

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慢病毒载体介导HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞的影响 被引量：1

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作者 陆彩霞 孙晓梅 +5 位作者 王文广 匡德宣 李娜 仝品芬 李明学 代解杰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期700-707,共8页

目的观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。方法利用本室分离鉴定保存的树鼩BM-MSCs,构建含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将CD81和OCLN基因... 目的观察在体外培养条件下,慢病毒载体介导的HCV受体基因OCLN/CD81转染对树鼩骨髓间充质干细胞生物学特性的影响及基因的表达情况。方法利用本室分离鉴定保存的树鼩BM-MSCs,构建含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体,并分别将CD81和OCLN基因转染到BM-MSCs中,荧光倒置显微镜和流式细胞仪检测转染效率,CCK8法检测转染后BM-MSCs的细胞增殖情况,成骨成脂细胞诱导分化检测其多向分化潜能。采用实时荧光定量及WB方法检测HCV受体(OCLN/CD81)基因mRNA和蛋白表达情况和转染后BM-MSCs干性基因的表达。结果以MOI为100转染含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体后,LV-CD81转染效率达99.4%,LV-OCLN转染效率22.6%。细胞增殖趋势与未转染基因的BM-MSCs相似,转染后的BM-MSCs仍可以向成骨成脂细胞分化,但能力有所下降。干性基因NANOG mRNA表达增高,差异有显著性(P<0.05),LIN28A mRNA表达下降,差异有显著性(P<0.05)。转染后树鼩BM-MSCs能高效表达所转入的外源基因。结论构建的含人OCLN/CD81基因的慢病毒载体可以成功转染树鼩BM-MSCs,并高效表达所转入的基因,转染后对树鼩BM-MSCs的多向分化潜能有一定的影响。 展开更多

关键词 OCLN CD81 树鼩 骨髓间充质干细胞

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树鼩腺病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 被引量：1

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作者 宋庆凯 李晓飞 +5 位作者 苗雨润 张志成 王璇 袁圆 代解杰 孙晓梅 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第3期72-77,共6页

目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV ... 目的通过建立树鼩腺病毒(tree shrew adenovirus,TAV)TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,快速准确地检测树鼩腺病毒。方法根据TAV全基因组3’端保守序列设计合成特异性引物;用含目的基因片段的重组质粒作为标准品进行标准曲线绘制,建立TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果建立的TAV实时荧光定量PCR检测方法特异性好,与树鼩源及其他物种常见病毒无交叉反应;方法的最低检测限度为每微升3.7拷贝,灵敏性强;相关检测系数R2为0.998,扩增效率为95.7%;扩增结果具有良好的线性关系,且重复性检测效果好。结论成功建立了TAV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,灵敏度高,重复性好,可用于TAV感染的早期快速检测。 展开更多

关键词 树鼩腺病毒 3’保守区域 TAQMAN 实时荧光定量PCR

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肠道病毒71型体外感染树鼩肾细胞特性观察 被引量：1

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作者 王文广 匡德宣 +7 位作者 尹博文 陆彩霞 罕园园 李娜 仝品芬 孙晓梅 蔡路奎 代解杰 《实验动物与比较医学》 CAS 2017年第2期123-129,共7页

目的探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性。方法通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定。用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病... 目的探讨肠道病毒71型(EV71)对树鼩肾细胞的感染特性。方法通过组织块贴壁法分离培养树鼩原代肾细胞,观察细胞形态并进行传代培养,利用细胞角蛋白18对树鼩肾细胞进行间接免疫荧光鉴定。用EV71感染树鼩肾细胞,通过倒置显微镜观察细胞病变情况,结合间接免疫荧光实验观察细胞中病毒蛋白的表达情况,采用实时荧光定量PCR技术检测病毒载量,以Vero细胞为对照,研究EV71对树鼩肾细胞的感染情况。结果通过组织块贴壁法可以快速获得树鼢原代肾细胞,并可进行多次传代培养,细胞为梭形,贴壁呈铺路石状,免疫荧光鉴定为肾上皮细胞。EV71可以感染树鼩肾细胞,使之出现明显的细胞变圆、脱落或解体等病变,免疫荧光实验可以观察到病毒蛋白的分布,实时荧光定量PCR检测病毒载量最高可达10~5拷贝/mL,病变情况和增殖趋势与Vero细胞相似。结论 EV71可以体外感染树鼩肾细胞,该细胞模型可为EV71药物筛选和感染机制研究提供平台。 展开更多

关键词 树购肾细胞 肠道病毒 71型(EV71)

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树鼩实验动物标准化质量控制标准的研究编制 被引量：1

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作者 匡德宣 王文广 +5 位作者 孙晓梅 陆彩霞 罕园园 仝品芬 李娜 代解杰 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第3期67-71,共5页

树鼩在新陈代谢、生理机能、大体解剖和基因组等方面与人类具有相似性,已被广泛应用于医学和生物学研究领域。作为一种极具价值和科学研究需求的实验动物新资源,标准化质量控制已经成为树鼩使用中亟待解决的技术瓶颈和研究发展的必然趋... 树鼩在新陈代谢、生理机能、大体解剖和基因组等方面与人类具有相似性,已被广泛应用于医学和生物学研究领域。作为一种极具价值和科学研究需求的实验动物新资源,标准化质量控制已经成为树鼩使用中亟待解决的技术瓶颈和研究发展的必然趋势。本文对树鼩质量控制团体标准进行归纳总结和分析说明,加强标准的宣传推广和贯彻实施,为树鼩实验动物标准化质量控制及国家标准的制订提供参考依据,最终促进树鼩推广应用和产业化发展。 展开更多

关键词 树鼩 实验动物 质量控制 标准

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细胞条件性重编程技术的研究进展 被引量：1

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作者 李娜 李翔 +1 位作者 李一佳 陆彩霞 《生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期628-636,共9页

细胞永生化培养技术一直是个难点,条件性重编程技术(conditional reprogramming,CR)可能解决这个问题。CR技术通过将铯源γ射线辐照过的Swiss-3T3-J2小鼠成纤维细胞和人正常细胞或肿瘤细胞共培养,向共培养体系中加入Rho相关蛋白激酶(Rho... 细胞永生化培养技术一直是个难点,条件性重编程技术(conditional reprogramming,CR)可能解决这个问题。CR技术通过将铯源γ射线辐照过的Swiss-3T3-J2小鼠成纤维细胞和人正常细胞或肿瘤细胞共培养,向共培养体系中加入Rho相关蛋白激酶(Rho-associated kinase,ROCK)抑制剂Y-27632,使人正常细胞或肿瘤细胞获得部分干细胞特性和在体外无限制扩增的能力,并且撤除J2细胞和ROCK抑制剂之后,细胞能够重新定向分化为原细胞。CR技术在再生医学、药物敏感性测试、基因表达谱分析和异种移植研究等领域具有广阔的发展前景,但目前尚不清楚其具体机制。现从CR技术的研究现状、可能机制和实验方法进行综述,以期为CR技术的研究和应用提供更多的理论基础。 展开更多

关键词 条件性重编程 铯源γ射线 J2小鼠成纤维细胞 ROCK抑制剂Y-27632

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