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A型塞内卡病毒激活炎症因子表达及诱导细胞焦亡 被引量：6
1
作者 李媛媛 马旭升 +3 位作者 Mohiuddin 郑海学 刘湘涛 马永华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期586-594,共9页
初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎... 初步探索A型塞内卡病毒(SVA)感染3D4/21细胞后引起细胞因子的变化,以及诱导细胞焦亡的分子机制。用SVA感染3D4/21细胞,不同时间点分别检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA的表达水平和相关炎症因子分泌水平;采用CCK-8检测细胞活力;用乳酸脱氢酶释放试验检测细胞膜的损伤程度;用Western-blot检测目的基因在蛋白水平的表达程度。结果显示:SVA感染细胞后,IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12、GM-CSF、IL-10、IFN-γ、CXCL10细胞因子mRNA表达水平均升高,与转录水平相似,SVA能够诱导IL-1β、IL-6、TNF-α以及IL-12分泌水平上调;SVA感染3D4/21细胞后,焦亡相关基因在mRNA水平表达增加,焦亡相关蛋白GSDMD、IL-1β以及Caspase-1被激活;SVA感染细胞后,导致细胞活力下降,细胞膜完整性丧失;转染sh-NLRP3或加入NLRP3抑制剂MCC950,Caspase-1抑制剂VX765,然后感染SVA,发现焦亡相关活性蛋白表达降低。结论:SVA感染3D4/21细胞后引起上述细胞因子表达增加,激活Caspase-1引起的细胞焦亡,且与NLRP3炎症小体途径相关。 展开更多
关键词 A型塞内卡病毒 炎症反应 细胞焦亡 NLRP3炎症小体
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灭活的羊口疮病毒抑制口蹄疫病毒在BHK-21细胞中的复制 被引量：2
2
作者 张大俊 王国春 +11 位作者 史喜绢 杨博 张婷 崔卉梅 袁兴国 赵登率 陈学辉 杨金柯 郝雨 郑海学 刘湘涛 张克山 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期403-409,共7页
为探究灭活的羊口疮病毒(ORFV)调节宿主免疫应答后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的调控作用,本研究通过制备、灭活、纯化ORFV,采用RT-qPCR方法评估并分析在预先使用灭活的ORFV处理的BHK-21细胞中FMDV的复制情况以及细胞因子的变化情况。研究... 为探究灭活的羊口疮病毒(ORFV)调节宿主免疫应答后对口蹄疫病毒(FMDV)复制的调控作用,本研究通过制备、灭活、纯化ORFV,采用RT-qPCR方法评估并分析在预先使用灭活的ORFV处理的BHK-21细胞中FMDV的复制情况以及细胞因子的变化情况。研究结果显示,灭活的ORFV上调细胞因子GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-2、IL-6和IL-10的转录水平,显著抑制FMDV在BHK-21细胞中的复制。也就是说,灭活的ORFV通过上调宿主细胞因子的转录进而抑制FMDV复制。这一研究结果为灭活的ORFV作为免疫调节剂提供了依据并为其应用提供了可能性。 展开更多
关键词 口疮病毒 口蹄疫病毒 细胞因子 BHK-21细胞
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非洲猪瘟病毒CP312R蛋白T细胞表位的筛选及抗原性分析 被引量：2
3
作者 周晓丽 毛箬青 +5 位作者 朱紫祥 孙德惠 朱昱茜 王凌云 齐萌 郑海学 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期410-416,共7页
利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽... 利用免疫表位数据库(IEDB)预测和筛选非洲猪瘟病毒(ASFV)CP312R蛋白的T细胞表位;通过流式细胞术检测表位肽促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖情况,促进免疫细胞分泌IFN-γ水平及其对T淋巴细胞杀伤作用的影响;通过RT-qPCR技术分析表位肽对ASFV在骨髓巨噬细胞中复制的影响。结果显示,筛选出2条表位肽PP8和PP9,均可促进ASFV抗原特异性脾淋巴细胞增殖(P<0.05),促进CD8^(+)T细胞分泌IFN-γ的水平(P<0.05)。表位肽PP8不能显著促进CD8^(+)T细胞对ASFV感染的靶细胞的杀伤效率(P>0.05),而表位肽PP9能够显著促进CD8^(+)T细胞对靶细胞的杀伤效率(P<0.01)。2条表位肽均可显著抑制ASFV在骨髓巨噬细胞中的复制(P<0.01)。本研究结果为筛选ASFV保护抗原或表位提供了基础数据。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 T细胞表位 筛选 蛋白 抗原性
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非洲猪瘟病毒D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定 被引量：1
4
作者 崔卉梅 张婷 +10 位作者 杨博 杨金柯 赵登率 袁兴国 陈学辉 郝雨 闫文倩 张克山 刘霞 郑海学 刘湘涛 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期572-578,共7页
为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定... 为测定非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L蛋白的腺苷三磷酸酶活性,首先原核表达和纯化了D1133L蛋白。然后,利用Kinase-Glo Plus Luminescent Kinase Assay Platform试剂盒优化了反应条件,建立了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性的测定方法,测定了D1133L蛋白腺苷三磷酸酶活性。结果显示,在25μL的反应体系中,当蛋白浓度为1.8μmol/L,Cu^(2+)浓度为10 mmol/L,37℃反应70 min时D1133L蛋白具有最佳腺苷三磷酸酶活性,可水解体系中40.04%的腺苷三磷酸。本结果为进一步明确D1133L功能,揭示其解旋机制和靶向D1133L解旋活性的高通量化学药物筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 D1133L 腺苷三磷酸酶 活性测定
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ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：4
5
作者 侯景 申超超 +9 位作者 张大俊 杨博 史喜绢 张婷 杨泽晓 张克山 郑海学 李丹 党文 刘湘涛 《江西农业学报》 CAS 2021年第6期1-6,共6页
为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133... 为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133L的抗体应答情况。结果显示:成功表达纯化了D1133L蛋白,以此为抗原建立了ELISA抗体检测方法,该方法特异性高,灵敏性强,其检测结果与市售试剂盒检测结果的符合率达100%。家猪在感染ASFV后,针对D1133L的抗体在第5天可被检测到,在第7天抗体水平达到顶峰。 展开更多
关键词 ASFV 解旋酶 D1133L 抗体检测 应用
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