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一种新型日本血吸虫疫苗(童虫活细胞)诱导小鼠产生有效保护性免疫力的研究 被引量：10
1
作者 曾庆仁 林雪迟 +4 位作者 龚燕飞 沈杰 张祖萍 蔡力汀 言敢威 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第14期84-87,97,共5页
目的观察日本血吸虫童虫活细胞诱导小鼠产生的保护性免疫效果。方法采用日本血吸虫肝期童虫的活细胞和虫体组织碎片,在未加佐剂条件下分别接种昆明小鼠,每组10只,每2周接种1次,共4次,末次接种后第7天攻击感染血吸虫尾蚴30条/鼠,感染后... 目的观察日本血吸虫童虫活细胞诱导小鼠产生的保护性免疫效果。方法采用日本血吸虫肝期童虫的活细胞和虫体组织碎片,在未加佐剂条件下分别接种昆明小鼠,每组10只,每2周接种1次,共4次,末次接种后第7天攻击感染血吸虫尾蚴30条/鼠,感染后第42天解剖小鼠,与对照组比较检测和分析虫体发育数、虫体大小、鼠肝病变及其组织内虫卵肉芽肿大小、血清中特异性抗体水平和IgG2a/IgG1亚类比值。结果细胞接种组和虫体碎片接种组分别与PBS注射组比,虫体发育数分别下降67.6%%和46.3%;肝组织中虫卵数(LEPG)在细胞接种组和虫体碎片接种组中分别减少95.4%和64.8%;在细胞接种鼠组肝表面卵结节和虫卵肉芽肿及雄虫长度均显著小于其他两组者;特异性IgG2a/IgG1比值≥2,但总抗体水平低于虫体接种组。结论该研究首次建立了一种血吸虫细胞型疫苗研究模型,初步结果表明,在不加佐剂条件用血吸虫童虫活细胞可诱导小鼠产生显著的抗攻击感染免疫力,其机制可能主要为Th1介导的细胞免疫应答。 展开更多
关键词 日本血吸虫 细胞 疫苗 保护性免疫 IGG2A
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丹皮酚对AD模型鼠脑组织神经细胞与胶质细胞活性的影响 被引量：4
2
作者 周军 周丽 +4 位作者 曾庆仁 侯德仁 陈坤 田怡 万顺 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1594-1597,共4页
目的:观察丹皮酚(paeonol,Pae)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织星形胶质细胞蛋白(GFAP)和S100β蛋白的表达,探讨丹皮酚(Pae)对老年痴呆症(Alzheimer disease AD)治疗的作用机理。方法:24只大鼠随机分为生理盐水对照组、β淀粉样蛋... 目的:观察丹皮酚(paeonol,Pae)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的大鼠脑组织星形胶质细胞蛋白(GFAP)和S100β蛋白的表达,探讨丹皮酚(Pae)对老年痴呆症(Alzheimer disease AD)治疗的作用机理。方法:24只大鼠随机分为生理盐水对照组、β淀粉样蛋白(Aβ)诱导AD模型构建组(模型组)和AD模型+丹皮酚治疗组(Pae组)。动物喂养40d后取大鼠脑组织观察其病理变化,用免疫组化染色法检测Aβ标记部位以及神经细胞毒性作用和GFAP与的S100β蛋白的表达水平。结果:发现脑组织病变在Pae组明显轻于模型组。免疫组化结果显示:Aβ的表达水平在模型组和Pae组二者间无明显差异,但对海马CA3区神经元损伤作用在模型组要大于Pae组(P<0.05)。GFAP和S100β表达水平在模型组也明显高于Pae组和正常组。结论:用丹皮酚治疗可降低AD模型鼠胶质细胞GFAP和S100β蛋白的表达水平,丹皮酚具有保护大脑神经元,改善Aβ对脑组织损伤的作用。 展开更多
关键词 丹皮酚 老年痴呆症 Β-淀粉样蛋白 神经胶质细胞
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日本血吸虫童虫细胞免疫小鼠抗血吸虫病的免疫保护性研究 被引量：3
3
作者 曾铁兵 蔡力汀 +7 位作者 曾庆仁 杨胜辉 喻容 李艳琴 方会龙 李本文 刘伟 张顺科 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2007年第6期660-666,共7页
为确定用日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)童虫细胞免疫小鼠抗血吸虫病的免疫保护性效应和分析与之可能的相关因素,本研究进行了两个独立重复的免疫实验.经皮下3次免疫后,实验1在无佐剂的情况下,与磷酸盐绥冲液(PBS)对照组比,S.j... 为确定用日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)童虫细胞免疫小鼠抗血吸虫病的免疫保护性效应和分析与之可能的相关因素,本研究进行了两个独立重复的免疫实验.经皮下3次免疫后,实验1在无佐剂的情况下,与磷酸盐绥冲液(PBS)对照组比,S.j童虫原代细胞(primary juvenile worm cells,pJCs)诱导小鼠产生了明显的减虫率(平均54.3%)、每克肝卵(liver eggs per gram,LEPG)减少率(平均59.8%)和肝卵肉芽肿面积减少率(平均66.5%)(P<0.01),均明显高于童虫原代细胞碎片(fractions of juvenile worm cells,JCFs)或童虫虫体碎片(fractions of juvenile worms,JWFs)免疫组相应的减少率(P<0.05),而虫体的非细胞成分(non-cell components of worms,WNCs)免疫组无明显保护作用.实验2中,与PBS对照组比,培养的童虫细胞(cultured juvenile worm cells,cJCs)也诱导了明显的平均58.4%的减虫率、68.1%的LEPG减少率(P<0.01),而培养的成虫细胞(cultured adult worms cells,cACs)组的虫荷(P<0.05)和卵荷(P<0.01)明显高于cJCs组.实验2的免疫学分析显示,cJCs诱导小鼠产生Th1型为主的Th1/Th2混合类型的免疫应答,而cACs则诱导Th2型偏向的应答类型.这些资料显示,用S.j原代和培养的童虫细胞都可诱导小鼠产生明显的抗血吸虫高保护效应,可能与免疫原的物理性状、虫期特异性及诱导的免疫类型有关,提示用S.j童虫全细胞免疫小鼠是一种有希望的诱导抗血吸虫病保护性免疫的方法. 展开更多
关键词 日本血吸虫 童虫细胞 培养细胞 免疫保护性 免疫应答类型
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AKP染色鉴别组织内死活血吸虫虫卵的条件探索与效果观察 被引量：2
4
作者 王芳 曾庆仁 +7 位作者 喻鑫玲 周军 薛伟世 张祖萍 李岳生 何永康 贺美 李闻文 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2011年第5期336-339,F0004,共5页
目的探索碱性磷酸酶(AKP)染色条件,观察其对宿主组织内死活血吸虫虫卵的鉴别效果。方法采用偶氮偶联法和NBT/BCIP两种AKP酶染色方法对血吸虫感染后第45 d鼠(未治疗组10只)和经吡喹酮治疗后3个月鼠(治疗组10只)的肝、肠组织内完整虫卵,... 目的探索碱性磷酸酶(AKP)染色条件,观察其对宿主组织内死活血吸虫虫卵的鉴别效果。方法采用偶氮偶联法和NBT/BCIP两种AKP酶染色方法对血吸虫感染后第45 d鼠(未治疗组10只)和经吡喹酮治疗后3个月鼠(治疗组10只)的肝、肠组织内完整虫卵,冰冻切片虫卵和石蜡切片虫卵进行比较检测和分析;收集12份有近、远期变性虫卵的血吸虫病患者肠黏膜活检标本,进行虫卵染色,计数虫卵阳性数,评价两种AKP染色法对血吸虫死卵和活卵鉴定的效果。结果两种AKP染色方法对未治疗组小鼠组织内完整虫卵染色仅半数阳性,其阳性反应主要取决于完整虫卵是否裸露。未治疗组小鼠肠组织石蜡切片和冰冻切片偶氮偶联染色法阳性率分别为97.72%和92.47%,NBT/BCIP染色法阳性率分别为97.65%和98.49%;肝组织两种染色法的阳性率分别为81.17%、86.55%和74.36%、95.32%。在冰冻切片中,肝、肠组织偶氮偶联检测的敏感性均低于NBT/BCIP法;治疗组两法的阳性率均为0。12份临床标本,偶氮偶联法检出1例阳性,NBT/BCIP法检出3例阳性。结论 NBT/BCIP AKP染色法可用于鉴别组织切片中血吸虫虫卵的死活,但在实际应用时尚有待于进一步探索活检肠黏膜组织的处理方法。 展开更多
关键词 血吸虫 日本 虫卵 碱性磷酸酶 血吸虫病患者 肠黏膜
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SV40LT基因重组腺病毒载体的包装、鉴定及用于转染日本血吸虫童虫细胞的研究 被引量：1
5
作者 刘碧源 曾庆仁 +4 位作者 余平 杨胜辉 蔡力汀 周军 张顺科 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1016-1020,共5页
目的构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫细胞后的表达情况。方法采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒(AdHu5-SV40LT)转化Stbl... 目的构建携带SV40LT基因的重组腺病毒表达载体,制备具有感染力的重组腺病毒,观察其转染日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)童虫细胞后的表达情况。方法采用体外连接法构建好的携带SV40LT基因的重组腺病毒质粒(AdHu5-SV40LT)转化Stbl2感受态菌,获得重组腺病毒质粒后,经Pac I酶切线性化后转染293A细胞,获得出重组腺病毒(AdHu5-SV40LT)。将重组腺病毒感染Sj童虫细胞,采用RT-PCR和免疫组织化学检测SV40LT基因的表达情况。结果重组腺病毒载体质粒可转染293A细胞并可在293A细胞内进行有效的复制;提取病毒DNA进行PCR检测证实含有SV40LT目的基因。以重组腺病毒能感染Sj童虫细胞,经RT-PCR和免疫组化检测有SV40LT基因在细胞中的表达。结论成功包装了具有感染能力的含SV40LT基因的重组腺病毒,感染Sj童虫细胞后目的基因有表达,为进一步探索日本血吸虫细胞永生化提供了实验依据。 展开更多
关键词 SV40LT基因 腺病毒载体 日本血吸虫 童虫细胞
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一种分离纯化东方田鼠肝细胞的方法改进
6
作者 丘继哲 邹艳 +3 位作者 曾庆仁 刘碧源 黄旭 徐妮为 《热带医学杂志》 CAS 2010年第2期169-170,F0002,共3页
目的建立体外培养东方田鼠鼠肝细胞的实验体系。方法采用下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法分离纯化出肝细胞,在改良Eagle培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Media,DMEM)中培养,显微镜下观察细胞形态,AO-EB染色观察测定其活率来评... 目的建立体外培养东方田鼠鼠肝细胞的实验体系。方法采用下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法分离纯化出肝细胞,在改良Eagle培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Media,DMEM)中培养,显微镜下观察细胞形态,AO-EB染色观察测定其活率来评价细胞质量。结果一只东方田鼠肝脏一般可获得1.5×108～3.0×108个细胞,活率达95%,完全符合实验要求。刚分离的东方田鼠肝细胞呈圆球形,大小均匀,培养3h后,大部分肝细胞出现贴壁,形态呈扁平状。培养24h后,伸展良好,并成片生长。结论下腔静脉插管原位灌注结合胶原酶灌注法可以分离出高纯度和活率高的东方田鼠肝细胞。 展开更多
关键词 东方田鼠 肝细胞 分离 培养
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日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定 被引量：11
7
作者 刘伟 曾铁兵 +6 位作者 曾庆仁 蔡春 张祖萍 龚燕飞 蔡力汀 张顺科 徐锡萍 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期395-397,共3页
本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表... 本研究结果显示:血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态,4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%,并在各代培养中均可见细胞分裂相;传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞,也可见形态异常细胞。表明1640-40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。 展开更多
关键词 日本血吸虫 成虫 细胞 传代培养 超微结构 染色体核型
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