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流式细胞术结合G418筛选重组质粒稳定转染细胞 被引量：9
1
作者 王海嵘 顾春红 +4 位作者 钟济华 王婷 韩洁英 陈芳源 欧阳仁荣 《诊断学理论与实践》 2006年第1期52-55,共4页
目的:探索优化重组质粒转染细胞后的筛选方法,以得到高纯度U937转染细胞。方法:选择带Neor及GFP基因的质粒pRNATU6.1/Neo。根据流式细胞仪可分选GFP阳性细胞这一特点,在质粒转染细胞后比较单用G418筛选与合并使用流式细胞仪分选后的筛... 目的:探索优化重组质粒转染细胞后的筛选方法,以得到高纯度U937转染细胞。方法:选择带Neor及GFP基因的质粒pRNATU6.1/Neo。根据流式细胞仪可分选GFP阳性细胞这一特点,在质粒转染细胞后比较单用G418筛选与合并使用流式细胞仪分选后的筛选效果。结果:单用G418筛选时最高筛选效率为72.0%;合并使用G418及流式细胞仪分选后的筛选效率均在90.0%以上。结论:合并使用G418及流式细胞仪分选是一种高效的筛选方法。 展开更多
关键词 质粒 GFP G418 流式细胞术
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抑制凋亡相关基因PNAS-2表达后U937细胞凋亡率的改变 被引量：4
2
作者 王海嵘 顾春红 +4 位作者 钟璐 钟济华 韩洁英 陈芳源 欧阳仁荣 《诊断学理论与实践》 2007年第5期422-426,共5页
目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNAT U6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamHⅠ及HindⅢ黏性末端的shRN... 目的:构建并鉴定凋亡相关基因——PNAS-2的短发夹RNA(shRNA)质粒表达载体,将其转染U937细胞,筛选后检测细胞凋亡的变化。方法:shRNA质粒载体pRNAT U6.1/NEO经限制性内切酶BamHⅠ及HindⅢ双酶切后,连接带有BamHⅠ及HindⅢ黏性末端的shRNA插入片段,转化感受态细菌,并行测序鉴定。将阳性shRNA质粒载体进行细胞转染,合并使用G418及流式细胞仪(FCM)筛选出GFP阳性细胞,应用半定量PCR鉴定shRNA封闭效果;用Annexin V-APC/7-AAD标记后,使用FCM及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果:测序鉴定证实,PNAS-2特异的shRNA质粒表达载体构建正确;合并使用G418及FCM分选出GFP阳性细胞后,半定量PCR鉴定示shRNAⅠ、Ⅱ、Ⅲ组对PNAS-2的抑制率分别为78.1%、75.4%及51.4%。FCM显示shRNA对照组的细胞凋亡率为(3.52±1.25)%;而shRNAⅠ组为(9.23±1.88)%(P<0.01);shRNAⅡ(8.85±1.80)%(P<0.05);shRNAⅢ组为(7.19±2.09)%(P>0.05)。激光共聚焦显微镜观察显示,shRNA对照组细胞凋亡率为7.3%;shRNAⅠ组为14.7%;shRNAⅡ为13.8%;shRNAⅢ为10.3%。结论:测序结果表明,本研究成功构建了PNAS-2的shRNA质粒表达载体。半定量PCR显示shRNA抑制PNAS-2表达效果佳;抑制PNAS-2后可促使细胞凋亡,提示该基因是抗细胞凋亡基因。 展开更多
关键词 PNAS-2 细胞凋亡 短发夹RNA
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急性髓细胞白血病缓解后用中剂量阿糖胞苷治疗248个疗程的不良反应分析 被引量：4
3
作者 韩洁英 陈芳源 +4 位作者 王婷 钟璐 胡霄飞 徐岚 欧阳仁荣 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第7期572-574,共3页
背景与目的：近20年来，已认识到中剂量阿糖胞苷（MDAra—C）为主的联合化疗方案用于急性髓细胞白血病（AML）的诱导缓解和缓解后的巩固治疗可提高诱导缓解率和无病生存（DFS），但对化疗剂量增加所产生的不良反应则报道不多。本研究旨... 背景与目的：近20年来，已认识到中剂量阿糖胞苷（MDAra—C）为主的联合化疗方案用于急性髓细胞白血病（AML）的诱导缓解和缓解后的巩固治疗可提高诱导缓解率和无病生存（DFS），但对化疗剂量增加所产生的不良反应则报道不多。本研究旨在探索MDAra—C对AML缓解后巩固治疗的不良反应和相应的防治措施。方法：以阿糖胞苷2g／m^2，静滴2—3h，q12h，连续应用6个剂量为1疗程。观察所出现的不良反应，以及采用相应措施的效果。结果：骨髓抑制较为明显，非造血系统副反应轻微，在采用相应的辅助措施后得到改善。结论：AML缓解后应用MDAra—C作巩固治疗安全而有效。 展开更多
关键词 阿糖胞苷 急性髓细胞白血病 治疗 不良反应
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斑马鱼血液肿瘤学的研究进展 被引量：2
4
作者 张勇 陈芳源 邓敏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期889-895,共7页
斑马鱼已经成为当今人类遗传学和血液学研究的重要模式生物之一。文章介绍了斑马鱼造血系统的基本生物学特征,并重点阐述了斑马鱼在血液肿瘤学领域的应用和研究概况,显示了斑马鱼在血液肿瘤学的基础和临床研究方面均有着独特的应用前景... 斑马鱼已经成为当今人类遗传学和血液学研究的重要模式生物之一。文章介绍了斑马鱼造血系统的基本生物学特征,并重点阐述了斑马鱼在血液肿瘤学领域的应用和研究概况,显示了斑马鱼在血液肿瘤学的基础和临床研究方面均有着独特的应用前景,文章对此进行了展望。 展开更多
关键词 斑马鱼 血液肿瘤学 动物模型
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凋亡相关基因PNAS-2 siRNA质粒表达载体的构建、鉴定及转染后筛选方法的选择 被引量：5
5
作者 王海嵘 顾春红 +4 位作者 钟济华 王婷 韩洁英 陈芳源 欧阳仁荣 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期552-554,共3页
硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis—related protein）表达显著降低。Busch等认为PANS-2基因与细胞增殖有关。我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者白血病细胞... 硫化砷作用后急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞凋亡相关基因PNAS-2（apoptosis—related protein）表达显著降低。Busch等认为PANS-2基因与细胞增殖有关。我们前期的研究发现硫化砷作用后的急性早幼粒细胞白血病（APL）患者白血病细胞及NB4细胞PNAS-2基因表达特异性下调，且呈时间依赖性而K562和U937细胞则无此较应。为了进一步研究封闭该基因后对细胞凋亡的影响，我们扩增其5’端未知序列，构建了PNAS-2 siRNA质粒表达载体并转染U937细胞，筛选、纯化转染细胞后检测U937细胞凋亡的变化以初步了解PNAS-2的作用。 展开更多
关键词 细胞凋亡相关基因 质粒表达载体 转染细胞 筛选方法 早幼粒细胞白血病细胞系 急性早幼粒细胞白血病 U937细胞凋亡 硫化砷作用 NB4细胞 鉴定
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柔红霉素、阿糖胞苷作用于NB4细胞的体外实验研究 被引量：2
6
作者 罗忠光 钟璐 +2 位作者 陈芳源 王海嵘 欧阳仁荣 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期247-249,共3页
目的探讨柔红霉素（DNR）联合阿糖胞苷（Ara-C）和单用DNR对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4与另一急性髓系白血病（M2）细胞株HL-60生长抑制率、凋亡率的比较。方法用MTT法和流式细胞术分别检测NB4与HL-60细胞的生长抑制率和细... 目的探讨柔红霉素（DNR）联合阿糖胞苷（Ara-C）和单用DNR对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4与另一急性髓系白血病（M2）细胞株HL-60生长抑制率、凋亡率的比较。方法用MTT法和流式细胞术分别检测NB4与HL-60细胞的生长抑制率和细胞凋亡率；采用瑞特染色法观察细胞形态。结果两组药物（DNR单药组和双药组）对NB4细胞的生长抑制率[单药组为（35．73±6.82）％，双药组为（36.75±3．82）％]、凋亡率[单药组为（22.55±3．62）％，双药组为（21.24±5．82）％]差异均无统计学意义（P〉0．05）；而对HL-60细胞的抑制率[单药组为（62．31±1.80）％，双药组为（67．17±2.07）％]、凋亡率[单药组为（41.51±0.89）％，双药组为（48.05±0．92）％]的差异均有统计学意义（P值分别〈0.01和〈0．05）；形态学检测显示，各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。结论从细胞水平说明，DNR联合Ara—C与单用DNR对APL的疗效差异无统计学意义，且后者的临床不良反应明显轻于前者，因此支持单用DNR的治疗方案。 展开更多
关键词 柔红霉素 阿糖胞苷 白血病 早幼粒细胞 急性 细胞系 白血病
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凋亡相关基因pnas-2的表达谱分析 被引量：1
7
作者 王海嵘 朱坚轶 +5 位作者 顾春红 钟华 钟济华 韩洁英 陈芳源 欧阳仁荣 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2008年第2期282-285,共4页
为了确定凋亡相关基因pnas-2在正常组织及急性白血病患者组织中的表达谱,应用Northern blot检测了pnas-2在心脏、脑、胎盘、肺、肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、淋巴结、胸腺、白细胞、骨髓和胎肝等组织中的表达,应用实时PCR(real-tim... 为了确定凋亡相关基因pnas-2在正常组织及急性白血病患者组织中的表达谱,应用Northern blot检测了pnas-2在心脏、脑、胎盘、肺、肝脏、骨骼肌、肾脏、胰腺、脾脏、淋巴结、胸腺、白细胞、骨髓和胎肝等组织中的表达,应用实时PCR(real-time PCR)和Northemblot检测了该基因在急性白血病44份初发、9份未缓解、27份缓解、12份复发样本中的表达,并检测了pnas-2在31例恶性肿瘤患者癌组织及正常组织中的表达。结果表明,pnas-2基因除了在胎盘中表达外,在其他检测的组织中均无表达。pnas-2基因在初发,未CR和复发急性白血病患者中的表达显著高于CR和癌肿患者的癌组织及正常组织中的表达。在7例急性白血病患者的自身前后对照中,pnas-2的表达变化与病程演变有关,即初发时高表达,未CR时无明显改变,但在CR时显著下降,复发时表达又上升。结论:pnas-2的高表达在急性白血病中是特异的,可能是一种癌基因,并很可能参与了白血病的发病。 展开更多
关键词 凋亡相关基因 PNAS-2 急性白血病 癌基因
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