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创新创业教育评价的VPR结构模型 被引量:40
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作者 徐小洲 《教育研究》 CSSCI 北大核心 2019年第7期83-90,共8页
评价要素及其结构的确定是创新创业教育评价的重要基础。研究采用扎根理论方法,通过对访谈资料的内容分析,提出VPR三维三级创新创业教育评价的理论结构模型。VPR评价体系由3个一级维度、8个二级维度和29个三级评价维度构成。3个一级维... 评价要素及其结构的确定是创新创业教育评价的重要基础。研究采用扎根理论方法,通过对访谈资料的内容分析,提出VPR三维三级创新创业教育评价的理论结构模型。VPR评价体系由3个一级维度、8个二级维度和29个三级评价维度构成。3个一级维度是价值评价(Value)、过程评价(Process)和结果评价(Result);8个二级维度是精神价值、现实价值、政策投入、教育投入、学生发展、企业发展、创业者绩效、产品与成果。该评价模型强调精神价值评价与现实价值评价相结合、发展性评价与绩效性评价相结合、短期评价与长期评价相结合,具有多维、多层、多元的特征,丰富了创新创业教育评价的内容,对创新创业教育实践具有理论参考价值。 展开更多
关键词 创新创业教育 vpr 评价结构 多层次模型
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肺康复运动处方指南解读(ATS/ERS、BTS、ACSM及AACVPR) 被引量:37
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作者 李际强 白晓辉 +1 位作者 蔡倩 张溪 《临床肺科杂志》 2020年第1期151-154,共4页
运动训练被认为是肺康复计划的基石,在肺康复中至关重要,目前国内尚无指南或专家共识。国外关于肺康复指南或共识主要由美国运动医学学院(ACSM)、美国胸科学会(ATS)/欧洲呼吸学会(ERS)、美国心血管和肺康复协会(AACVPR)和英国胸科协会(B... 运动训练被认为是肺康复计划的基石,在肺康复中至关重要,目前国内尚无指南或专家共识。国外关于肺康复指南或共识主要由美国运动医学学院(ACSM)、美国胸科学会(ATS)/欧洲呼吸学会(ERS)、美国心血管和肺康复协会(AACVPR)和英国胸科协会(BTS)制定,本文旨在解读国外指南或专家共识,利于探讨制定肺康复运动处方。 展开更多
关键词 运动医学 美国胸科学会 肺康复 康复运动处方 专家共识 指南解读 ACSM vpr
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不同变异位点的HIV-1 vpr重组真核表达载体对转染细胞凋亡作用的观察 被引量:7
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作者 郑煜煌 张春迎 +11 位作者 何艳 龚国忠 李慧 谌资 刘猛 周华英 李瑛 刘纯 李靖 周国强 尹伟 袁宏丽 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期614-619,共6页
目的观察不同的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的vpr基因变异株致宿主细胞凋亡作用的区别,及其可能的机制。方法14个带有不同变异位点的中国感染者HIV-1 vpr基因片断,其PCR产物纯化后经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,以pcDNA3.1(+)真核表达... 目的观察不同的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的vpr基因变异株致宿主细胞凋亡作用的区别,及其可能的机制。方法14个带有不同变异位点的中国感染者HIV-1 vpr基因片断,其PCR产物纯化后经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,以pcDNA3.1(+)真核表达质粒连接转化实验,将重组质粒用脂质体瞬时转染至HeLa细胞,G418筛选后收获细胞。RT-PCR检测目的基因mRNA水平的表达,荧光染色在显微镜下观察Hoeschst凋亡细胞并计算凋亡率,DNA琼脂糖电泳观察各转染细胞凋亡条带,膜联蛋白V-FITC流式细胞检测各株细胞凋亡率,并比较各株细胞的半胱酸蛋白水解酶3活性差别。结果14个vpr基因片段转染HeLa细胞后,发现有第70、85、86或94位变异的vpr转染细胞Hoeschst染色凋亡率和半胱酸蛋白水解酶3活性检测(分别为0.1225,0.1675,0.1975,0.1575和11.356,8.021,14.6875,10.521)较无这些变异的保守序列vpr转染细胞(0.355和182.4875)为低,DNA琼脂糖电泳法和膜联蛋白细胞凋亡检测也提示同样的规律;第1~7号重组质粒(均为vpr AE亚型)的致细胞凋亡能力也明显小于第8~14号重组质粒(vpr B,AB,C和C/BC亚型)。结论首次观察到有第70、85、86或94位变异的HIV-1 vpr序列,其致HeLa细胞凋亡的能力低于无这些位点变异的保守序列,AE亚型诱导宿主细胞凋亡能力低于其他亚型,其机制之一与半胱酸蛋白水解酶3途径激活降低有关。 展开更多
关键词 HIV-1 基因 vpr 变异(遗传学) 凋亡
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中国人类免疫缺陷病毒-1 vpr基因多态性及其临床意义 被引量:6
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作者 李慧 冯铁建 +5 位作者 郑煜煌 王晓辉 刘猛 陈琳 刘纯 李瑛 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期39-43,共5页
目的分析来自中国不同地区HIV-1感染者的vpr基因序列变异位点及与国外以往研究的异同,为进一步研究HIV-1 vpr基因变异的意义及其与感染者临床病情的关系奠定基础。方法RT-PCR及套式PCR法对398例HIV-1感染者行HIV-1vpr基因扩增,并进行... 目的分析来自中国不同地区HIV-1感染者的vpr基因序列变异位点及与国外以往研究的异同,为进一步研究HIV-1 vpr基因变异的意义及其与感染者临床病情的关系奠定基础。方法RT-PCR及套式PCR法对398例HIV-1感染者行HIV-1vpr基因扩增,并进行氨基酸序列分析,了解HIV vpr基因的多态性、离散率和常见变异位点。同时将发现常见变异位点感染者的相应病毒水平、淋巴细胞亚群及临床病程的进展进行对比分析。结果对398份血标本行HIV1 vpr基因扩增,分析后可用氨基酸序列为153份。HIV-1 Vpr氨基酸序列分型主要是CRF01_AE 51.63%,C亚型24.84%,B亚型17.65%,CRF03-AB 3.92%,CRF08_BC 1.31%。HIV Vpr序列中第77位氨基酸84.3%为谷氨酸,与以往国外报道的R77Q变异与AIDS长期病情无进展(LTNP)密切相关的观点有明显差异。HIV Vpr第、63、70、85、86、89、94位氨基酸的变异,有可能使感染者的临床进展趋缓。结论我国HIV Vpr分型仍以M组为主,其中CRF01_AE占优势。HIV-1 Vpr中氨基酸序列某些位点的变异可能与感染者临床表现相关。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 基因 vpr 多态现象 遗传 变异(遗传学) 基因扩增
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声纹识别的特征参数提取 被引量:7
5
作者 郭慧娟 《太原师范学院学报(自然科学版)》 2008年第1期70-73,共4页
声纹识别是语音识别的一种,根据测试语音来辨别说话者的身份.特征参数的提取是声纹识别的重要组成部分.为此,文章主要介绍了LPC和M FCC两种常用的声纹识别特征参数及M atlab实现算法.
关键词 声纹识别 特征参数 LPC MFCC
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基于VPR的层次式FPGA结构描述方法研究 被引量:4
6
作者 刘攀 周强 +2 位作者 朱珂 钱旭 张峥 《微电子学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期105-110,共6页
针对层次式FPGA结构设计的需要,提出一种基于VPR的FPGA结构文件描述方法。该方法可以描述多种层次式FPGA的系统结构,实现同VPR布线功能的集成,方便进行FPGA结构设计的验证。实验证明,该结构描述方法具有较好的灵活性和一定的通用性,并... 针对层次式FPGA结构设计的需要,提出一种基于VPR的FPGA结构文件描述方法。该方法可以描述多种层次式FPGA的系统结构,实现同VPR布线功能的集成,方便进行FPGA结构设计的验证。实验证明,该结构描述方法具有较好的灵活性和一定的通用性,并能够应用在FP-GA物理设计和新结构的设计过程中。 展开更多
关键词 现场可编程逻辑阵列 vpr 布线 结构描述
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基于正态分布的一种岩石(岩块)弹性纵波速度取值方法
7
作者 洪明宏 张军鹏 左国青 《物探化探计算技术》 CAS 2024年第3期301-305,共5页
新鲜完整岩石(岩块)波速(Vpr)是计算岩体完整性系数的重要参数,岩石弹性纵波速度取值对岩体完整性评判具有重要作用,但其取值具有较强人为随意性的缺点,对同一类型岩石原位测试进行统计分析,得到了岩石弹性纵波速度分布的概率分布模型... 新鲜完整岩石(岩块)波速(Vpr)是计算岩体完整性系数的重要参数,岩石弹性纵波速度取值对岩体完整性评判具有重要作用,但其取值具有较强人为随意性的缺点,对同一类型岩石原位测试进行统计分析,得到了岩石弹性纵波速度分布的概率分布模型。通过不同概率保证率,可以利用概率分布模型得到完整岩体波速的上限值,得到岩石弹性纵波速度参数取值范围。以某抽水蓄能电站中花岗岩试验数据为例,通过实际工程算例表明,所提出的基于正态分布的岩体弹性波参数取值的方法可为实际工程中确定岩体完整性评价提供参考。 展开更多
关键词 vpr 正态分布 弹性波 波速
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不同周龄自发性高血压大鼠的动态血压变化与心脏的组织学改变 被引量:6
8
作者 田永路 李艳丽 +3 位作者 李军 刘敬浩 白慧称 朱德生 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第2期164-167,I0011,共5页
目的测量不同周龄自发性高血压(SHR)的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血流速,为SHR及有关高血压方面的实验研究提供基础数据参考。方法采用CODATM无创血压仪,测量34只8~15周龄SHR的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血... 目的测量不同周龄自发性高血压(SHR)的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血流速,为SHR及有关高血压方面的实验研究提供基础数据参考。方法采用CODATM无创血压仪,测量34只8~15周龄SHR的收缩压、舒张压、平均压、心率、血流量及血流速。在最后一周测量完血压值后,采用45mg/kg的戊巴比妥钠,腹腔注射麻醉动物,进行处死。采取胸主动脉、肺、肾、心脏和大脑,经10%的福尔马林溶液固定常规脱水,包埋,切片,进行HE染色。结果8~15周龄SHR的收缩压和心率值在各周之间均无统计学差异(P>0.05)。舒张压的比较中,第8周与第15周之间存在显著差异(P<0.05)。平均压的比较中,第8周与第15周之间存在显著差异(P<0.05)。在组织学观察中,40%的心肌细胞变性。结论SHR的舒张压、收缩压及平均压随周龄的增加均有上升的趋势。而心率、血流速及血流量均有下降的趋势,但是在各周存在一定的波动。 展开更多
关键词 自发性高血压大鼠 高血压 血压参数 体积压力传感器技术
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一种灵活的包含嵌入式存储器的FPGA结构 被引量:1
9
作者 段会福 周华兵 《微计算机信息》 北大核心 2008年第20期219-220,97,共3页
近年来,集成电路制造工艺的巨大提高使得FPGA有能力实现大的数字系统电路。这些大的系统通常需要大量的存储器以存储数据。很多FPGA生产商已经推出了含有大的嵌入式存储器的FPGA芯片。然而,大多数学术方面的CAD工具只针对于同质的FPGA结... 近年来,集成电路制造工艺的巨大提高使得FPGA有能力实现大的数字系统电路。这些大的系统通常需要大量的存储器以存储数据。很多FPGA生产商已经推出了含有大的嵌入式存储器的FPGA芯片。然而,大多数学术方面的CAD工具只针对于同质的FPGA结构(即只包括逻辑模块和布线通道的FPGA结构)。FPGA的布线结构通常被表示为RRG(布线资源图)。本文将介绍一种包含嵌入式存储器模块的FPGA的灵活结构以及一种建立RRG的方法。文中我们对VPR(versatile placing and routing)进行了改进,使得VPR可以处理包含嵌入式存储器结构的FPGA的布局布线问题,同时保持了VPR的灵活性。 展开更多
关键词 场可编程逻辑阵列(FPGA) 嵌入式存储器 RRG vpr
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线长驱动的层次式FPGA布局算法 被引量:2
10
作者 张峥 周强 +2 位作者 钱旭 刘攀 曹雪 《微电子学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期429-433,共5页
针对层次式FPGA结构的特点,提出了以线长为目标的层次式FPGA布局算法。该算法基于模拟退火优化策略,针对层次式FPGA实际芯片结构的特点,提出了线长计算方法和搜索范围确定方法;同时,给出了提高算法速度的快速布局方法。实验结果表明,该... 针对层次式FPGA结构的特点,提出了以线长为目标的层次式FPGA布局算法。该算法基于模拟退火优化策略,针对层次式FPGA实际芯片结构的特点,提出了线长计算方法和搜索范围确定方法;同时,给出了提高算法速度的快速布局方法。实验结果表明,该方法不仅能够减小时间代价,也能够得到比较好的布局质量。 展开更多
关键词 线长驱动 层次式FPGA 布局 模拟退火算法 vpr
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RelB对HIV-1 Vpr转录激活及诱导细胞G2/M期停滞功能影响的初步研究 被引量:2
11
作者 刘瑞康 高杨 +3 位作者 林永权 谈娟 耿运琪 乔文涛 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期44-50,共7页
Vpr是人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)的辅助蛋白之一,在病毒复制及AIDS进程中起重要作用。为了研究Vpr完成其生物学功能的分子机制,本研究利用酵母双杂交技术,从人的cDNA文库中筛选,并经免疫共沉淀技术证... Vpr是人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus type 1,HIV-1)的辅助蛋白之一,在病毒复制及AIDS进程中起重要作用。为了研究Vpr完成其生物学功能的分子机制,本研究利用酵母双杂交技术,从人的cDNA文库中筛选,并经免疫共沉淀技术证实NF-κB通路中的重要蛋白RelB与Vpr存在相互作用;发现RelB蛋白能促进Vpr介导的对NF-κB报告基因的激活,也能促进Vpr对HIV-1LTR的反式激活作用。利用流式细胞技术发现RelB促进Vpr诱导细胞周期G2/M期停滞。上述结果表明,RelB辅助Vpr完成其转录激活以及调控细胞周期的功能。 展开更多
关键词 vpr RELB 转录激活 细胞G2 M停滞
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以人甲胎蛋白启动子控制表达HIV-1vpr基因的重组腺病毒诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡作用的研究 被引量:2
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作者 魏强 王健伟 +3 位作者 郭丽 屈建国 赵玉琪 洪涛 《中国实验诊断学》 2006年第7期725-729,共5页
目的研究人甲胎蛋白(AFP)启动子控制表达HIV-1 vpr基因的重组腺病毒对AFP(+)肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用,评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性。方法将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白... 目的研究人甲胎蛋白(AFP)启动子控制表达HIV-1 vpr基因的重组腺病毒对AFP(+)肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡的作用,评估以该策略利用vpr进行肿瘤特异性基因治疗的可行性。方法将以AFP启动子控制HIV-1vpr表达的重组腺病毒rvAdAFP-vpr和空白载体rvAd-null分别感染AFP(+)的肝癌细胞BEL-7402和AFP(-)的肝癌细胞SMMC-7721,利用流式细胞仪检测Vpr的特异性表达和细胞周期分布,用细胞荧光染色和线粒体膜电位检测等方法观察细胞凋亡。结果与对照病毒rvAd-null相比,重组腺病毒rvAdAFP-vpr只在AFP(+)肝癌细胞中表达HIV-1Vpr,并诱导肝癌细胞的细胞周期G2期阻滞和细胞凋亡,而在AFP(-)肝癌细胞中不明显表达Vpr,不能显著诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡。结论重组腺病毒rvAdAFP-vpr对于Vpr的表达是AFP表达特异性的,可有效诱导肝癌细胞G2期阻滞和细胞凋亡,有望用于AFP(+)肝癌的基因治疗研究。 展开更多
关键词 甲胎蛋白启动子 HIV-1 vpr 重组腺病毒 细胞周期G2阻滞 凋亡
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病毒蛋白调控逆转录元件Ⅰ型长弥散核元件活性的影响及其意义
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作者 赵梓含 王宇(综述) +1 位作者 赵一霏 赵可(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期98-104,共7页
型长弥散核元件(long interspersed element-1,LINE-1)是已知人类细胞中唯一具有活性的、可自主转座的逆转录元件(retroelements),与自身免疫性疾病相关,对细胞的抗病毒天然免疫,特别是对细胞干扰素(interferon,IFN)水平起到重要的激活... 型长弥散核元件(long interspersed element-1,LINE-1)是已知人类细胞中唯一具有活性的、可自主转座的逆转录元件(retroelements),与自身免疫性疾病相关,对细胞的抗病毒天然免疫,特别是对细胞干扰素(interferon,IFN)水平起到重要的激活、调控作用。本文阐述了包括人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)、乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)等病毒的几种非结构蛋白参与调控LINE-1活性的机制。这些机制既保证了病毒基因组的正常表达,又参与调控细胞天然免疫水平,对相关机制的抑制可能为治疗病毒感染引起的疾病提供新的方法。 展开更多
关键词 型长弥散核元件 NEF vpr VPX HBX
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反熔丝FPGA线长驱动布局算法 被引量:1
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作者 张大华 李威 杜涛 《微电子学与计算机》 CSCD 北大核心 2015年第3期132-135,共4页
针对反熔丝FPGA的结构特点,提出了一种线长驱动的反熔丝FPGA布局算法.该算法基于VPR的模拟退火布局算法,针对反熔丝FPGA垂直布线资源有限的特点,提出了新型的成本函数并在CAD实验平台上予以实现.实验结果表明,与VPR布局算法相比,该方法... 针对反熔丝FPGA的结构特点,提出了一种线长驱动的反熔丝FPGA布局算法.该算法基于VPR的模拟退火布局算法,针对反熔丝FPGA垂直布线资源有限的特点,提出了新型的成本函数并在CAD实验平台上予以实现.实验结果表明,与VPR布局算法相比,该方法不仅优化了线网总长度,使得线网总长度平均减少了12%,同时还减少了编程的通路反熔丝数目. 展开更多
关键词 反熔丝FPGA vpr 布局 模拟退火算法
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副溶血弧菌RIMD2210633与霍乱弧菌N16961中超级整合子结构差异分析 被引量:1
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作者 卢昕 阚飙 逄波 《中国预防医学杂志》 CAS 2013年第4期256-259,共4页
目的确定副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)RIMD2210633与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)N16961菌株中超级整合子结构特点差异。方法 (1)使用Perl脚本搜寻RIMD2210633和N16961中superintegron(SI)中核心序列(core segment,CS)和反向核心... 目的确定副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)RIMD2210633与霍乱弧菌(Vibrio cholerae)N16961菌株中超级整合子结构特点差异。方法 (1)使用Perl脚本搜寻RIMD2210633和N16961中superintegron(SI)中核心序列(core segment,CS)和反向核心序列(inverted core segment,ICS);(2)配对核心序列和反向核心序列,获得副溶血弧菌重复序列(V.parahaemolyticus repeat,VPR)及霍乱弧菌重复序列(V.cholerae repeat,VCR)基因组位置信息;(3)使用Perl语言脚本获得副溶血弧菌RIMD2210633以及霍乱弧菌N16961的SI中重复序列,并获得基因盒的构成和分布信息;(4)使用全局比对软件Clustal W将上一步获得的所有VPR和VCR序列进行多序列比对,使用Perl语言脚本处理比对结果以获得一致性序列;(5)使用MEGA 4.0查看多序列比对结果,并使用Perl脚本计算各位置的变异频率,据此结果来分析副溶血RIMD2210633和霍乱弧菌N16961中的弧菌重复序列以及基因盒分布的特点。结果在RIMD2210633的超级整合子鉴定了69个VPR,其核苷酸长度在91~125bp之间。在包含128个核苷酸的一致性序列中,15个为保守核苷酸位点,113个为可变核苷酸位点。在副溶血弧菌的SI中,共确定了64个基因盒,基因盒的长度范围是420~1 709bp,中位数是648bp。在霍乱弧菌N16961的超级整合子中鉴定了158个VCR,长度在117~124bp之间。在包含126个核苷酸的一致性序列中,37个为保守核苷酸位点,89个为可变核苷酸位点。N16961的SI中共存在146个基因盒,基因盒的长度范围是390~5924bp,中位数是1 518bp。结论与霍乱弧菌的VCR相比,副溶血弧菌的VPR可变区序列变异更大,与弧菌重复序列之间序列一致性高的特点不相吻合。 展开更多
关键词 超级整合子 副溶血弧菌 霍乱弧菌 VCR vpr 基因盒
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人类免疫缺陷病毒-1vpr基因干扰RNA载体构建及筛选的体外研究 被引量:1
16
作者 黄娜 张权 +5 位作者 何艳 周泉 龚国忠 郑煜煌 肖新强 许振宇 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期400-403,共4页
目的筛选鉴定针对HIV-1vpr基因的小干扰RNA(siRNA)干扰片段,探讨siRNA对HIV-1vpr基因的干扰效率。方法根据siRNA设计要求合成针对HIV-1vpr靶点的2段寡核苷酸片段,并构建相应载体,转染含HIV-1vpr质粒的HEK293T细胞。设2个实验组(si... 目的筛选鉴定针对HIV-1vpr基因的小干扰RNA(siRNA)干扰片段,探讨siRNA对HIV-1vpr基因的干扰效率。方法根据siRNA设计要求合成针对HIV-1vpr靶点的2段寡核苷酸片段,并构建相应载体,转染含HIV-1vpr质粒的HEK293T细胞。设2个实验组(siRNA56、siRNA160组),1个阴性对照组(NC组),空白HEK293T细胞为对照组(Con组)。各组分别进行总RNA、蛋白提取,实时PCR和蛋白质印迹分别从核酸和蛋白水平验证有效的靶向HIV-1vpr的siRNA片段。ELISA检测各组培养细胞上清液中IL-17、丫干扰素水平。结果DNA测序结果表明成功构建了哺乳动物细胞pRNAT—U6.1/Neo—Vpr-56/160(siRNA56和s.RNA160)表达载体。siRNA56和siRNAl60干扰使HIV1vpr基因在mRNA水平的表达分别下降69.0%和76.1%;在蛋白表达水平分别下降76.3%和86.5%。Con组、NC组、siRNA56组和siRNA160组细胞培养上清液中IL-17分别为(1.936±0.415)、(1.815±0.393)、(1.935±0.356)和(2.03±0.421)pg/mL;了干扰素分别为(1.673±0.234)、(1.648±0.332)、(2.169±0.362)和(2.301±0.4125)pg/mL。结论表达pRNAT—U6.1/Neo—vpr-56/160(sirNA56和siRNA160)的质粒构建成功,针对不同基因片段的siRNA均可以下调HIV-1vpr的表达水平。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1 基因 vpr RNA干扰 白细胞介素17 干扰素Ⅱ型
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艾滋病痴呆综合征患者HIV-1 Vpr基因多态性及氨基酸序列分析 被引量:1
17
作者 李昕 张维嘉 +7 位作者 郑文慧 曹馨月 单晓宇 郑雯 黄涛 温红玲 王志玉 赵丽 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第1期48-52,共5页
目的 研究艾滋病痴呆综合征(AIDS dementia complex,ADC)患者体内不同部位来源的HIV-1 Vpr基因突变及其氨基酸序列的改变,为HIV-1神经致病机制的研究提供依据.方法 取1例ADC患者外周(淋巴结、脾脏、肝脏)和中枢神经系统(脑膜、额... 目的 研究艾滋病痴呆综合征(AIDS dementia complex,ADC)患者体内不同部位来源的HIV-1 Vpr基因突变及其氨基酸序列的改变,为HIV-1神经致病机制的研究提供依据.方法 取1例ADC患者外周(淋巴结、脾脏、肝脏)和中枢神经系统(脑膜、额叶灰质、额叶白质、颞叶皮质、基底核)共8个部位的尸检标本基因组DNA,巢式PCR扩增并克隆HIV-1 Vpr基因,与克隆载体pMD19-T连接,转化大肠杆菌DH5α后,分别挑取5个阳性菌落进行Vpv基因测序,测序结果通过MEGA6生成系统进化树并计算基因距离,SNAP进行同义/非同义替换值(ds/dn)的计算并分析氨基酸位点的改变.结果 该病例感染的病毒是HIV-1 B亚型,分离自ADC患者不同组织的HIV-1 Vpr基因序列存在差异,其中枢神经系统和外周HIV-1 Vpr基因序列在系统进化树中相互交织在一起,中枢和外周与HXB2 Vpr基因距离差异无统计学意义,所有HIV-1 Vpr基因序列的ds/dn=3.3749.与标准序列相比,该病例的HIV-1 Vpr基因编码的氨基酸序列有22个位点发生了变异,并且中枢各部位部分氨基酸位点的变异与外周不同.结论 ADC患者体内HIV-1 Vpr序列存在变异,且在外周和中枢不同部位中的变异不同,这些变异导致Vpr氨基酸位点的改变对Vpr蛋白生物学活性的影响及在ADC发病机制中的作用,还有待进一步研究. 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型 vpr 艾滋病痴呆综合征 基因多态性
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中国HIV感染者VPR序列变异对细胞周期和致凋亡作用的影响 被引量:1
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作者 郑力文 胡维新 +2 位作者 樊星 张硕 刘纯 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第5期306-310,314,共6页
目的研究带有不同变异位点的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)vpr基因对感染细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡的机制间的可能关系。方法以14个带有HIV-1 vpr基因片段的pcD-NA3.1(+)真核表达载体构建重组质粒,将其转染Hel... 目的研究带有不同变异位点的人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)vpr基因对感染细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡的机制间的可能关系。方法以14个带有HIV-1 vpr基因片段的pcD-NA3.1(+)真核表达载体构建重组质粒,将其转染Hela细胞,并设立保守株vpr基因转染细胞、突变株vpr-FS基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照,经逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测目的基因转染成功后,Pi染色,用流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率。结果 14个带有不同变异位点HIV-1vpr基因片段的Hela细胞经流式细胞仪检测,显示出不同的致细胞周期阻滞和致细胞凋亡的能力。发现转染保守片段HIV-1 vpr的Hela细胞,其细胞周期出现G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高,但转染vpr C末端截断的vpr-FS片段的细胞、空载体pcDNA3.1(+)转染细胞和未转染的Hela细胞无此现象。转染了HIV-1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V、85P、86G、94G突变的片段,较vpr保守片段致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降。初步发现vpr诱导G2期阻滞百分率越高,其所致凋亡率亦越高。结论 HIV-1vpr基因有明显的致感染细胞G2周期阻滞和致细胞凋亡的作用,但vpr C末端截断的vpr-FS片段无此功能。说明中国感染者HIV-1vpr基因表达蛋白的70V、85P、86G、94G位点突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降。vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关,提示两者的发生机制可能有一定的关联。本研究为进一步探讨HIV-1致病机制和探索可能的基因干预措施打下了基础。 展开更多
关键词 人免疫缺陷病毒 艾滋病 HIV1 基因 vpr 细胞周期 细胞凋亡
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以GST融合蛋白为靶从噬菌体肽库中筛选结合肽 被引量:2
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作者 薛沿宁 段凌浔 R.J.POMERANTZ 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期381-384,共4页
以重组的谷胱甘肽 S转移酶 ( G S T) 和目标蛋白的融合蛋白为靶, 通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上, 可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽. 用此方法筛选到含 W W X F 结构的 H I V1 病毒蛋白 ... 以重组的谷胱甘肽 S转移酶 ( G S T) 和目标蛋白的融合蛋白为靶, 通过将其固定于谷胱甘肽琼脂糖凝胶上, 可以方便地从噬菌体肽库中筛选目标蛋白的结合肽. 用此方法筛选到含 W W X F 结构的 H I V1 病毒蛋白 R( Vpr) 的结合肽, 与经典的将 Vpr 包被于培养板上的筛选方法相比, 此方法具有简便。 展开更多
关键词 噬菌体展示 GST融合蛋白 多肽库 结合肽
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HIV-1 Vpr蛋白对C8166细胞毒性研究
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作者 贺芳 曾耀英 +3 位作者 王通 肇静娴 臧宁 林长乐 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期899-903,共5页
目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞,流式细胞术(FCM)检测细... 目的利用腺病毒系统研究HIV-1Vpr蛋白在T细胞来源的C8166细胞内的高表达以及细胞内该蛋白对T细胞毒性。方法将表达目的蛋白Vpr的重组腺病毒rAd—vpr和空白载体病毒rAd—vector分别感染对数生长期的C8166细胞,流式细胞术(FCM)检测细胞周期分布、凋亡和坏死。用Hoechst—PI荧光染色观察细胞的凋亡和坏死,JC-1荧光染色测定线粒体膜电势。结果An—nexinV—PI染色及Hoechst—PI染色一致显示HIV-1Vpr能显著诱导C8166细胞凋亡和坏死;PI细胞周期结果表明HIV-1Vpr能阻滞C8166细胞于G2期;JC—1荧光染色法测定HIV-1Vpr致C8166线粒体膜电势下降。结论细胞内HIV-1Vpr介导的T细胞毒性包括线粒体功能障碍、细胞周期的G2期阻滞和细胞的死亡。 展开更多
关键词 重组腺病毒 HIV-1 vpr C8166细胞 细胞死亡
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