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CDDO-Me对三阴性乳腺癌细胞泛素特异性蛋白酶2a活性及细胞增殖的抑制作用 被引量：1
1
作者 季艳杰 罗浩 +6 位作者 蔡海燕 刘欣宇 金诗佳 粟深月 徐含章 雷虎 吴英理 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1025-1032,共8页
目的·在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞中研究筛选得到的泛素特异性蛋白酶2a(ubiquitin-specific protease 2a,USP2a)抑制剂甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对USP2a活性及细胞增殖的影响。方法&#... 目的·在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)细胞中研究筛选得到的泛素特异性蛋白酶2a(ubiquitin-specific protease 2a,USP2a)抑制剂甲基巴多索隆(bardoxolone methyl,CDDO-Me)对USP2a活性及细胞增殖的影响。方法·利用泛素特异性蛋白酶抑制剂筛选系统筛选得到USP2a抑制剂CDDO-Me,采用分子对接分析技术预测CDDO-Me与USP2a的结合情况,采用细胞热迁移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)检测CDDO-Me与3种TNBC细胞株内USP2a蛋白的结合情况。通过Western blotting检测USP2a的底物β连环素(β-catenin)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)蛋白水平以及凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3(caspase3)和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1[poly(ADP-ribose)polymerase1,PARP1]的变化。利用细胞活性检测试剂盒8(cell counting kit-8,CCK8)检测CDDO-Me对TNBC细胞增殖的影响。MDA-MB-468细胞瞬时转染pLVX(pLVX组)或pLVX-USP2a(pLVX-USP2a组)质粒,经CDDO-Me处理后,采用Western blotting检测β-catenin和TRAF6的蛋白水平,流式细胞术检测细胞周期以及台盼蓝拒染法检测活细胞数。结果·CDDO-Me在体外可以抑制USP2a活性,50%抑制浓度为3.84μmol/L。分子对接分析结果显示,CDDO-Me可以和USP2a的His456残基之间形成氢键,和Phe409、Tyr514残基之间具有疏水相互作用。CETSA实验结果显示,CDDO-Me能够和3种TNBC细胞中的USP2a蛋白结合。Western blotting结果显示,CDDO-Me可以下调USP2a底物β-catenin和TRAF6的蛋白水平,而相同浓度的CDDO-Me处理USP2a过表达的MDA-MB-468细胞,发现β-catenin和TRAF6蛋白水平未出现明显降低。CDDO-Me呈剂量依赖性抑制TNBC细胞的增殖,使细胞发生caspase3活化和PARP1的剪切并且导致细胞出现S期和G2/M期阻滞。与pLVX组相比,pLVX-USP2a组活细胞数目更多,细胞也未出现周期阻滞。结论·CDDO-Me可以抑制TNBC细胞中USP2a的活性,并且抑制TNBC细胞的增殖,诱导其凋亡。 展开更多
关键词 甲基巴多索隆 泛素特异性蛋白酶2a 三阴性乳腺癌 泛素特异性蛋白酶抑制剂筛选系统 Β连环素 肿瘤坏死因子受体相关蛋白6
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血浆外泌体源性miR-335-5p可作为三阴性乳腺癌诊断指标并抑制免疫逃逸 被引量：1
2
作者 陈涛 董亚萍 吴晓雪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期347-356,共10页
目的本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)对三阴性乳腺癌(TNBC)免疫逃逸的影响。方法收集TNBC患者血浆与健康人血浆,之后分离血浆外泌体,实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报... 目的本研究旨在探究血浆外泌体源性miR-335-5p调控泛素特异性蛋白酶22(USP22)对三阴性乳腺癌(TNBC)免疫逃逸的影响。方法收集TNBC患者血浆与健康人血浆,之后分离血浆外泌体,实时定量PCR检测外泌体中miR-335-5p的相对表达。双荧光素酶报告实验验证miR-335-5p与USP22的相互作用。调节外泌体、MDA-MB-436细胞中miR-335-5p与USP22的表达,将其与CD8^(+)T淋巴细胞共培养并将其分为不同组。流式细胞术检测各组细胞中细胞凋亡情况,ELISA检测各组细胞γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。Western blot法检测细胞中USP22对程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1)稳定性的影响。裸鼠成瘤实验检测miR-335-5p与PD-L1在体内对肿瘤生长的影响。结果TNBC外泌体样本中miR-335-5p的表达下调。USP22被证实为miR-335-5p的一个靶基因,此外,USP22可以抑制PD-L1蛋白泛素化。过表达miR-335-5p能抑制TNBC的免疫逃逸。抑制miR-335-5p可以促进TNBC的免疫逃逸,该作用可以通过下调USP22得到部分挽救。敲低miR-335-5p能促进体内肿瘤生长,加入PD-L1抗体后肿瘤生长被抑制。结论外泌体源性miR-335-5p通过下调USP22,促进USP22对PD-L1的泛素化,并抑制PD-L1介导的TNBC免疫逃逸。 展开更多
关键词 miR-335-5p 外泌体 泛素特异性蛋白酶22(usp22) 程序性死亡蛋白1配体1(PD-L1) 泛素化 免疫逃逸
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去泛素化酶USP29调控CBX6蛋白质稳定性 被引量：2
3
作者 陈茂鹤 陈肖霞 +2 位作者 黄文洋 陈睿 林韩斌 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1474-1481,共8页
多梳家族(polycomb group,PcG)是一类控制细胞命运和胚胎发育的转录抑制因子,主要以转录抑制复合物(polycomb repressive complex,PRC)的形式发挥功能。染色体盒蛋白质同源物6(chromobox protein homolog 6,CBX6)是PRC1的核心蛋白质亚... 多梳家族(polycomb group,PcG)是一类控制细胞命运和胚胎发育的转录抑制因子,主要以转录抑制复合物(polycomb repressive complex,PRC)的形式发挥功能。染色体盒蛋白质同源物6(chromobox protein homolog 6,CBX6)是PRC1的核心蛋白质亚基之一,在基因表达调控、细胞更新分化、肿瘤发生发展和干细胞干性维持等方面发挥重要的作用。本研究发现,CBX6通过泛素-蛋白酶体依赖性途径降解,接着利用包含92个去泛素化酶(deubiquitinating enzyme,DUB)基因表达文库进行筛选,发现泛素特异性蛋白酶29(ubiquitin-specific protease,USP29)能够明显地稳定CBX6的蛋白质水平并延长其半衰期(P<0.05);免疫沉淀结果发现,CBX6通过其C-端结构域与USP29发生相互作用;进一步研究发现,USP29通过去泛素化CBX6调控CBX6蛋白质稳定性,且这个过程依赖于USP29本身去泛素化酶活性。细胞增殖结果还发现,USP29能抑制MCF7细胞的增殖(P<0.0001)。综上所述,本研究通过筛选发现,USP29能够通过去泛素化CBX6来稳定CBX6蛋白质水平,且USP29能够抑制MCF7细胞增殖进程。 展开更多
关键词 染色体盒蛋白质同源物6 泛素特异性蛋白酶29 去泛素化酶 蛋白质稳定性 细胞增殖
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USP22蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义 被引量：2
4
作者 罗铮铮 杨小敏 《海南医学》 CAS 2017年第23期3836-3839,共4页
目的探讨泛素化特异性蛋白酶22(USP22)在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中的表达情况,分析其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法检测惠州市中心人民医院2010-2015年收治的10例结节性甲状腺肿、20例甲状腺腺瘤... 目的探讨泛素化特异性蛋白酶22(USP22)在甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤和结节性甲状腺肿中的表达情况,分析其与临床病理参数的关系。方法应用免疫组织化学方法检测惠州市中心人民医院2010-2015年收治的10例结节性甲状腺肿、20例甲状腺腺瘤和60例甲状腺乳头状癌组织中USP22蛋白的表达,分析其与性别、年龄、肿物大小、多灶性、包膜浸润和Ⅵ区淋巴结转移等临床病理特征的关系。结果 USP22在甲状腺乳头状癌组织中的表达高于甲状腺腺瘤组织及结节性甲状腺肿组织,差异有统计学意义(P<0.05);USP22的表达与Ⅵ区淋巴结转移和肿瘤大小有关(P<0.05),而与性别、年龄、多灶性、包膜浸润等特征无关(P>0.05)。结论与结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤相比,USP22在甲状腺乳头状癌组织细胞中高表达,其高表达与肿瘤大小和Ⅵ区淋巴结转移有关。USP22蛋白可能是一种新的预测甲状腺乳头状癌预后的肿瘤标记物以及生物治疗靶点。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 泛素化特异性蛋白酶22 Ⅵ区淋巴结转移 免疫组织化学
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USP22的作用机制及其与肿瘤关系的研究现状 被引量：2
5
作者 罗铮铮 杨小敏 《海南医学》 CAS 2016年第2期257-261,共5页
泛素化特异性蛋白酶22(USP22)是一种去泛素化酶,其通过去除蛋白底物的泛素连接,影响c-Myc、Bmi-1、FBP-1等靶基因的表达,从而调控细胞周期进展、细胞生长分化等一系列生物学行为,可能导致肿瘤的发生。目前已发现USP22在甲状腺癌、喉癌... 泛素化特异性蛋白酶22(USP22)是一种去泛素化酶,其通过去除蛋白底物的泛素连接,影响c-Myc、Bmi-1、FBP-1等靶基因的表达,从而调控细胞周期进展、细胞生长分化等一系列生物学行为,可能导致肿瘤的发生。目前已发现USP22在甲状腺癌、喉癌、口腔鳞癌等多种肿瘤组织细胞中高表达,且与恶性肿瘤的分期、预后密切相关,是近年来被广泛研究的肿瘤标记物,对USP22生理作用机制的探讨已成为目前肿瘤学方面的研究热点。USP22可能作为抗肿瘤治疗新的作用靶点,但相关药物仍需进一步研究。 展开更多
关键词 泛素特异性蛋白酶22 肿瘤 细胞周期 预后
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人泛素特异性蛋白酶42在肿瘤组织中的表达及其shRNA干扰重组质粒的构建
6
作者 郭紫婵 魏媛 +2 位作者 王秀丽 赵蓉 王晓霞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1338-1341,共4页
目的评价人泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在不同肿瘤组织中的表达水平,并构建其shRNA干扰重组质粒。方法通过网络数据库GEPIA和Ualcan分析USP42在不同肿瘤组织中的表达水平。以人USP42 mRNA为靶序列设计合... 目的评价人泛素特异性蛋白酶42(ubiquitin-specific protease 42,USP42)在不同肿瘤组织中的表达水平,并构建其shRNA干扰重组质粒。方法通过网络数据库GEPIA和Ualcan分析USP42在不同肿瘤组织中的表达水平。以人USP42 mRNA为靶序列设计合成含有shRNA序列的寡核苷酸,克隆至真核表达载体pGPU6/Neo,构建重组质粒USP42-shRNA。采用Neofect®DNA转染试剂将重组质粒转染至人结肠癌细胞HCT116(干扰组),同时设对照组(转染NC-shRNA),Western blot法检测USP42表达的干扰效果,Transwell小室试验检测USP42对结肠癌细胞迁移和侵袭功能的影响。结果经GEPIA和Ualcan数据库分析发现,USP42在胆管癌、胃癌、胸腺癌和结肠癌等肿瘤组织中呈高表达。测序鉴定证明重组质粒USP42-shRNA构建正确。与对照组比较,干扰组HCT116细胞中USP42蛋白表达水平明显降低(t=16.97,P<0.001),且能显著抑制HCT116细胞的侵袭和迁移能力(t分别为4.974和7.787,P<0.01)。结论USP42可能在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用。建立的重组质粒USP42-shRNA可在HCT116细胞中有效干扰USP42的表达,并能抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移。 展开更多
关键词 泛素特异性蛋白酶42 shRNA序列 HCT116细胞 细胞迁移 细胞侵袭
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USP14及其抑制剂调控肿瘤的发生与发展
7
作者 杜雪花 张晓东 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1297-1304,共8页
泛素化特异性蛋白酶14(ubiquitin-specific proteases14,USP14)是泛素特异性蛋白酶家族(ubiquitin-specific proteases, USPs)的成员之一。研究发现,USP14可解离靶蛋白质上的泛素标签,通过调控雄性激素受体(androgen receptor, AR)、细... 泛素化特异性蛋白酶14(ubiquitin-specific proteases14,USP14)是泛素特异性蛋白酶家族(ubiquitin-specific proteases, USPs)的成员之一。研究发现,USP14可解离靶蛋白质上的泛素标签,通过调控雄性激素受体(androgen receptor, AR)、细胞周期相关蛋白质和凋亡相关蛋白质等多种靶蛋白质的表达水平及活性,在恶性肿瘤的发生发展中发挥重要作用。USP14在多种恶性肿瘤中异常高表达,对肿瘤的调控机制复杂多样,涵盖了肿瘤的基本生命特征,例如细胞增殖、凋亡、炎症反应、自噬及耐药性等。其通过多种信号通路抑制肿瘤细胞凋亡及耐药性;促进炎症反应及肿瘤细胞的增殖活性。同时,在大多数肿瘤中USP14与不良预后密切相关。因此,USP14可作为肿瘤治疗的新型药物靶点,对其抑制剂的开发是抗肿瘤药物研究的新方向。目前,针对USP14的特异性抑制剂主要包括IU1及其类似物IU1-47、IU1-206、IU1-248和b-AP15。因为晶体结构上的差异,IU1的类似物对USP14活性的抑制能力是IU1的10倍。同时研究表明,USP14的抑制剂具有强大的抗肿瘤作用,可通过多种途径来诱导肿瘤细胞死亡,是肿瘤靶向治疗的重要药物。以上研究表明,深入研究USP14及其抑制剂与肿瘤发生发展的相关性极其重要。因此,本文着重对USP14的结构和其在肿瘤中的调控机制进行了综述,总结了USP14抑制剂的研究进展。并进一步探讨USP14相关研究中存在的问题与挑战,以期为未来的研究提供新的方向和策略。 展开更多
关键词 泛素化特异性蛋白酶14 肿瘤 抑制剂
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去泛素化酶USP7在肿瘤中的研究进展
8
作者 刘军凤(综述) 周秀敏(审校) 《海南医学》 CAS 2020年第21期2807-2810,共4页
泛素特异性蛋白酶7(USP7)是泛素特异性修饰酶家族中的成员之一,通过与癌蛋白、抑癌蛋白甚至致瘤病毒的相关蛋白相互作用,在肿瘤的发生和进展中发挥着一定作用。研究发现USP7在肺癌、宫颈癌、鼻咽癌、骨肉瘤和前列腺癌等多种癌组织中有表... 泛素特异性蛋白酶7(USP7)是泛素特异性修饰酶家族中的成员之一,通过与癌蛋白、抑癌蛋白甚至致瘤病毒的相关蛋白相互作用,在肿瘤的发生和进展中发挥着一定作用。研究发现USP7在肺癌、宫颈癌、鼻咽癌、骨肉瘤和前列腺癌等多种癌组织中有表达,因肿瘤差异其预后意义不同。因此,USP7可作为部分肿瘤诊断和预后的新型治疗靶点。本文主要关于USP7在肿瘤发病中的作用做一综述。 展开更多
关键词 泛素特异性蛋白酶7 去泛素化 肿瘤 癌蛋白 抑癌蛋白
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