目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中U...目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中UHRF1蛋白的表达水平,以证实UHRF1在食管癌组织中过表达;以慢病毒感染的方法将UHRF1基因的shRNA转入食管癌TE-1细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染UHRF1-shRNA重组表达载体后TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白的表达水平;并分别以MTT法、FCM法和体外侵袭实验检测UHRF1基因沉默对TE-1细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果:UHRF1在正常食管组织中不表达或低表达,在食管癌组织中过表达(P<0.01);UHRF1-shRNA转染后,TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白表达水平显著降低;UHRF1基因沉默可使TE-1细胞增殖及体外侵袭能力明显下降,G0/G1期细胞增多,凋亡增加(P<0.05)。结论:沉默UHRF1基因可降低食管癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,提示UHRF1在食管癌发生和发展过程中发挥重要作用。展开更多
文摘目的:通过短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰UHRF1(ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1)基因表达,探讨沉默UHRF1基因对食管癌TE-1细胞生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学法检测食管癌组织及正常食管组织中UHRF1蛋白的表达水平,以证实UHRF1在食管癌组织中过表达;以慢病毒感染的方法将UHRF1基因的shRNA转入食管癌TE-1细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染UHRF1-shRNA重组表达载体后TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白的表达水平;并分别以MTT法、FCM法和体外侵袭实验检测UHRF1基因沉默对TE-1细胞增殖、周期、凋亡和侵袭能力的影响。结果:UHRF1在正常食管组织中不表达或低表达,在食管癌组织中过表达(P<0.01);UHRF1-shRNA转染后,TE-1细胞中UHRF1mRNA和蛋白表达水平显著降低;UHRF1基因沉默可使TE-1细胞增殖及体外侵袭能力明显下降,G0/G1期细胞增多,凋亡增加(P<0.05)。结论:沉默UHRF1基因可降低食管癌细胞的增殖和侵袭能力,促进细胞凋亡,提示UHRF1在食管癌发生和发展过程中发挥重要作用。
