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大豆转录因子基因GmMYB111的克隆及功能分析 被引量:11
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作者 许玲 卫培培 +5 位作者 张大勇 徐照龙 何晓兰 黄益洪 马鸿翔 邵宏波 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第15期3079-3089,共11页
【目的】克隆大豆MYB转录因子基因,进行序列分析和表达模式分析,并对其功能进行鉴定。【方法】通过对盐胁迫相关的数字表达谱(DGEP)数据分析,获得一个MYB转录因子Gm MYB111;以盐胁迫处理的c DNA为模板,利用RT-PCR法分离克隆MYB基因c DN... 【目的】克隆大豆MYB转录因子基因,进行序列分析和表达模式分析,并对其功能进行鉴定。【方法】通过对盐胁迫相关的数字表达谱(DGEP)数据分析,获得一个MYB转录因子Gm MYB111;以盐胁迫处理的c DNA为模板,利用RT-PCR法分离克隆MYB基因c DNA编码序列;根据Gm MYB111蛋白序列进行同源性搜索,得到与Gm MYB111蛋白序列相似度较高的其他物种的蛋白序列;使用MEGA5.05对Gm MYB111蛋白序列及其同源序列进行多序列比对分析并构建同源物种间系统进化树;利用实时荧光定量PCR方法检测目的基因在大豆中受非生物胁迫诱导表达情况及组织特异性表达情况;利用拟南芥原生质体转化体系分析Gm MYB111的亚细胞定位情况;通过酵母杂交系统检测其转录激活活性以及体外结合活性。【结果】根据前期江苏省农业科学院农业生物技术研究所盐土农业研究室盐胁迫相关的数字表达谱(DGEP)数据获得盐胁迫响应显著上调(27倍)的Gm MYB111,利用RT-PCR方法从栽培大豆根组织中克隆该基因片段,序列比对发现其与已公布的Williams82基因组数据库序列一致,生物信息学分析表明,其编码的氨基酸序列具有MYB类转录因子的共同特征,其N端具有R2、R3两个MYB结构域,同时其C-端还存在一个富含酸性氨基酸的转录激活区;系统进化树分析表明,该基因编码的蛋白与Gm MYB76、Gm MYB12a以及苜蓿Mt MYB61的亲缘关系最近;Gm MYB111在大豆中的表达受高盐、干旱、冷害和ABA诱导表达,实时荧光定量PCR检测结果显示,在高盐和冷害胁迫下,Gm MYB111呈上调表达,在干旱胁迫诱导后呈先上调后下调的表达模式,在ABA诱导下其表达量呈现波动式上调和下调表达;时空表达分析表明,Gm MYB111为组成型表达,在大豆幼苗期和成熟期的表达量相对较强,成熟期的表达量相对较低,从不同组织来看,Gm MYB111在茎、叶和花中表达量最高,在根中表达量相对较低,在� 展开更多
关键词 大豆 GmMYB111 表达分析 结合基序 转录激活活性
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Functional Diversity of CYCLOIDEA-like TCP Genes in the Control of Zygomorphic Flower Development in Lotus japonicus 被引量:7
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作者 Shilei Xu Yonghai Luo +4 位作者 Zhigang Cai Xiangling Cao Xiaohe Hu Jun Yang Da Luo 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期221-231,共11页
CYCLOIDEA (CYC)-like TCP genes play key roles in dorsoventral differentiation of zygomorphic flowers in Papilionoideae legumes. In this study, we analyzed the kew mutants whose flowers lost lateral identity, and inv... CYCLOIDEA (CYC)-like TCP genes play key roles in dorsoventral differentiation of zygomorphic flowers in Papilionoideae legumes. In this study, we analyzed the kew mutants whose flowers lost lateral identity, and investigated the diverse functions of three LjCYC genes during zygomorphic flower development in the model legume Lotus japonicus. We showed that kew1 and kew3 are allelic mutants of LjCYC3, a CYC-like TCP gene. Through transgenic experiments, it was shown that LjCYC1 possesses dorsal activity similar to LjCYC2, and that LjCYC3 alone is sufficient to confer lateral activity, and an epistatic effect between dorsal and lateral activities was identified. Sequence analysis revealed a striking alteration at the 3 end of the LjCYC3 open reading frame (ORF) in comparison with those of LjCYC1 and LjCYC2 ORFs. Furthermore, it was found that LjCYC proteins could interact with each other and possess different activities by means of a transcriptional activity assay. Our data demonstrate that the sequence variation and the subsequent alteration of protein property play important roles in the functional diversity of different LjCYC genes in controlling zygomorphic flower development in Lotus japonicus. 展开更多
关键词 activity of transcriptional activation kew mutants Lotusjaponicus TCP genes zygomorphic flower development.
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大豆GmTGA15基因的克隆、转录激活活性分析及亚细胞定位研究
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作者 袁学顺 周佳玉 +4 位作者 刘淼 周莹 姚丹 崔喜艳 陈展宇 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期358-365,共8页
以大豆“Williams 82”为试验材料,利用RT-PCR法从中克隆得到转录因子GmTGA15基因。生物信息学分析表明,GmTGA15基因组序列包括8个外显子和7个内含子,开放阅读框为1 089 bp,编码362个氨基酸;蛋白理化性质分析表明,GmTGA15蛋白分子量为41... 以大豆“Williams 82”为试验材料,利用RT-PCR法从中克隆得到转录因子GmTGA15基因。生物信息学分析表明,GmTGA15基因组序列包括8个外显子和7个内含子,开放阅读框为1 089 bp,编码362个氨基酸;蛋白理化性质分析表明,GmTGA15蛋白分子量为41.01 kDa,理论等电点为6.28,为亲水性蛋白;蛋白一级结构具有1个典型的bZIP保守结构域,属于bZIP转录因子家族,与其他15种植物TGA(TGACG motif-binding factor)蛋白同源比对及系统进化分析显示,均具有相同的bZIP保守结构域,与同科植物野大豆亲缘关系最近,为97.25%;其蛋白二级结构预测α-螺旋为主,占63.81%。通过酵母单杂试验验证GmTGA15具有转录激活活性;利用PEG4000介导法将融合表达载体转化拟南芥原生质体,发现GmTGA15定位于细胞核。TGA转录因子在植物抵御逆境胁迫及生长发育中起重要作用。此结果将为GmTGA15基因功能的进一步研究提供基础,也为植物抗逆调控机制的研究提供理论参考。 展开更多
关键词 大豆 TGA转录因子 转录激活活性 亚细胞定位
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Transcription factor GLK1 promotes anthocyanin biosynthesis via an MBW complex-dependent pathway in Arabidopsis thaliana 被引量:2
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作者 Yan Li Wei Lei +3 位作者 Zuxu Zhou Yanlin Li Dawei Zhang Honghui Lin 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2023年第6期1521-1535,共15页
Anthocyanins are important natural plant pigments and play diverse roles in plant growth and adaptation.Anthocyanins function as screens to protect photosynthetic tissues from photoinhibition.However,the regulatory me... Anthocyanins are important natural plant pigments and play diverse roles in plant growth and adaptation.Anthocyanins function as screens to protect photosynthetic tissues from photoinhibition.However,the regulatory mechanisms underlying the biosynthesis and spatial accumulation pattern of anthocyanins remain some unresolved issues.Here,we demonstrate that the GARP-type transcription factor GOLDEN2-LIKE 1(GLK1)functions as a positive factor in anthocyanin accumulation.GLK1 enhances the transcriptional activation activities of MYB75,MYB90,and MYB113 via direct proteinprotein interactions to increase the expression of anthocyanin-specific biosynthetic genes.Anthocyanins accumulate in an acropetal manner in Arabidopsis.We also found that the expression pattern of GLK1 overall mimicked the accumulation pattern of anthocyanin from the base of the main stem to the shoot apex.Based on these findings,we established a working model for the role of GLK1 in anthocyanin accumulation and propose that GLK1mediates the spatial distribution pattern of anthocyanins by affecting the transcriptional activation activities of MYB75,MYB90,and MYB113. 展开更多
关键词 anthocyanin biosynthesis GLK1 MYB75 transcriptional activation activity
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铁皮石斛DcNAC1基因克隆、表达及转录自激活活性分析 被引量:1
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作者 陈彧 邢文婷 +3 位作者 李雨欣 张婷婷 饶丹丹 周扬 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1612-1621,共10页
【目的】克隆铁皮石斛NAC转录因子基因(DcNAC1),并进行表达模式及转录自激活活性分析,为铁皮石斛抗逆相关基因鉴定及其分子机制研究提供参考。【方法】以铁皮石斛cDNA为模板,PCR扩增DcNAC1基因,运用生物信息学软件分析DcNAC1蛋白的理化... 【目的】克隆铁皮石斛NAC转录因子基因(DcNAC1),并进行表达模式及转录自激活活性分析,为铁皮石斛抗逆相关基因鉴定及其分子机制研究提供参考。【方法】以铁皮石斛cDNA为模板,PCR扩增DcNAC1基因,运用生物信息学软件分析DcNAC1蛋白的理化性质、保守结构域、信号肽、跨膜结构域及亚细胞定位,通过实时荧光定量PCR检测DcNAC1基因在不同组织和不同逆境胁迫下的表达模式。同时构建该基因的酵母表达载体,分析其转录自激活活性。【结果】从铁皮石斛中PCR扩增获得DcNAC1基因的开放阅读框(ORF),全长为945 bp,与参考序列(LOC110104882)的核苷酸序列相似性为100%。该基因编码314个氨基酸残基,蛋白分子量为35.40 kD,理论等电点(pI)为8.16,为不稳定的亲水性蛋白,定位于细胞核,不含信号肽和跨膜结构域,含有特征性的NAC保守结构域。DcNAC1基因的启动子序列含茉莉酸甲酯响应元件(CGTCA-motif和TGACG-motif)、胁迫响应元件(TC-rich repeats)、光响应元件(G-box)、干旱诱导MYB结合位点(MBS)和低温响应元件(LTR)。根中DcNAC1基因的相对表达量在高温胁迫和低温胁迫处理6 h分别达最高,显著高于处理0 h(P<0.05,下同);茎中DcNAC1基因在盐胁迫处理48 h的相对表达量达最高,显著高于处理0 h。将构建的重组质粒pGBKT7-DcNAC1转化酵母菌株Y2HGold,结果发现该重组质粒无毒性,DcNAC1蛋白具有自激活活性。【结论】DcNAC1基因表达受到茉莉酸、低温、干旱、光信号和逆境胁迫等多种信号的调控。DcNAC1蛋白具有自激活活性,通过激活下游基因的表达,参与到植物生长发育和逆境胁迫响应的转录调控过程中。 展开更多
关键词 铁皮石斛 NAC转录因子 基因克隆 转录自激活活性 逆境胁迫
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菠萝AcMADS14的克隆及其在成花转变中的表达分析
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作者 潘晓璐 廖媛 +3 位作者 欧阳嫣惟 衣德宝 张秀梅 张红娜 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第5期1446-1454,共9页
MIKC型MADS-box家族成员SVP参与植物开花时间和花发育的调控。本研究从‘巴厘’菠萝中克隆到成花抑制蛋白SVP亚家族的一个同源基因AcMADS14,其开放阅读框长度为897 bp,编码299个氨基酸。序列分析发现AcMADS14蛋白包含1个高度保守的MADS-... MIKC型MADS-box家族成员SVP参与植物开花时间和花发育的调控。本研究从‘巴厘’菠萝中克隆到成花抑制蛋白SVP亚家族的一个同源基因AcMADS14,其开放阅读框长度为897 bp,编码299个氨基酸。序列分析发现AcMADS14蛋白包含1个高度保守的MADS-box结构域和1个半保守的K-box结构域。系统进化分析表明AcMADS14蛋白序列与油棕EgSVP和椰子CnSVP具有较高的同源性。通过RT-qPCR分析组织特异性发现AcMADS14在叶片、根等营养器官中表达较高,在花分生组织、雄蕊和雌蕊等生殖器官中表达量较低;外源喷施乙烯利抑制了AcMADS14在花芽分化阶段的表达,特别是在花器官分化期表达量显著下降。此外,转录激活活性分析表明Ac MADS14蛋白具有转录激活活性,可激活或抑制下游靶基因。综上,AcMADS14可能响应乙烯处理在菠萝营养生长转变为生殖生长的过程中发挥抑制作用,为探究菠萝成花分子机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 菠萝(Ananas comosus L.Merr) AcMADS14 克隆 表达分析 转录激活
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高粱镉胁迫响应基因 sbbHLH168 的表达特征及生物信息学分析
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作者 于文慧 郑佳 +5 位作者 李杨华 杨明川 王雅利 张子路 龚利娟 康振辉 《安徽农业科学》 CAS 2023年第24期86-92,96,共8页
[目的]以高梁基因sbbHLH168为研究对象,探究其耐镉胁迫发热分子机制,对培育耐镉高粱提供了理论参考。[方法]从高粱品种“BTx623”镉胁迫下转录组数据(RNA-seq)中筛选出一个受镉胁迫后显著上调表达的基因sbbHLH168,使用在线软件对其生物... [目的]以高梁基因sbbHLH168为研究对象,探究其耐镉胁迫发热分子机制,对培育耐镉高粱提供了理论参考。[方法]从高粱品种“BTx623”镉胁迫下转录组数据(RNA-seq)中筛选出一个受镉胁迫后显著上调表达的基因sbbHLH168,使用在线软件对其生物信息进行分析;通过洋葱表皮侵染进行亚细胞定位;构建pGBKT7-sbbHLH168载体验证sbbHLH168基因的转录激活活性;将水培至四叶一心的高粱置于NaCl、PEG、ABA、ACC、GA和JA溶液处理,分别在0、1、12、24和48 h提取RNA,通过RT-qPCR检测sbbHLH168基因的相对表达量。[结果]sbbHLH168基因的开放阅读框长度为567 bp,编码189个氨基酸残基,蛋白分子量为20.55 kD,理论等电点(PI)为8.86,为碱性带正电的蛋白,定位于细胞核,具有较强的转录激活活性。sbbHLH168基因在盐、干旱和植物激素胁迫下表达量整体呈上升趋势,但表达量在不同处理时间存在明显差异。对sbbHLH168基因在不同组织中的表达发现,该基因在高粱的根和叶中均有表达,其中在盐、干旱、ABA、GA和JA胁迫下,sbbHLH168基因在处理12 h时表达量最高。而在ACC处理时,则在处理24 h时表达量最高。[结论]sbbHLH168基因是一个定位在细胞核有转录激活活性的转录因子,属于bHLH家族。 展开更多
关键词 高粱 sbbHLH168 生物信息学分析 表达特征 转录激活活性
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蒙古沙冬青AmNAC2蛋白转录激活活性及其编码基因表达分析 被引量:2
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作者 张宇 周克伟 +5 位作者 任美艳 马利 唐宽刚 郭慧琴 庞新跃 王茅雁 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3576-3583,共8页
NAC转录因子家族与植物抗逆性和生长发育关系密切。本研究利用酵母自激活体系对克隆自强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)的AmNAC2基因的编码蛋白进行了转录激活活性分析,同时利用RT-qPCR技术检测了该基因在不同逆境胁迫... NAC转录因子家族与植物抗逆性和生长发育关系密切。本研究利用酵母自激活体系对克隆自强抗逆植物蒙古沙冬青(Ammopiptanthus mongolicus)的AmNAC2基因的编码蛋白进行了转录激活活性分析,同时利用RT-qPCR技术检测了该基因在不同逆境胁迫和不同器官中的表达变化。结果显示,AmNAC2的完整蛋白产物(含292个氨基酸)及其C端部位(第159~292位氨基酸)具有转录激活活性,而其N端部位(第1~158位氨基酸)无此活性;室内培养的蒙古沙冬青幼苗中AmNAC2的表达水平受低温、高盐和高温胁迫诱导迅速显著上调,而其在干旱胁迫下的表达上调较为迟缓;野外蒙古沙冬青成株嫩叶中,该基因的转录水平在秋季和冬季明显高于春、夏两季,而在春季野生成株的不同器官中,其表达量在根中最高,其他依次为叶片、嫩枝、未成熟果荚和花蕾。本研究结果为深入分析AmNAC2的生理功能和作用机理提供了依据。 展开更多
关键词 蒙古沙冬青 NAC转录因子 转录激活活性 表达分析
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大豆转录因子GmMYB52的克隆、表达及结合功能分析 被引量:2
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作者 许玲 王元琮 +4 位作者 何晓兰 黄益洪 徐照龙 邵宏波 张大勇 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1458-1467,共10页
MYB类转录因子在植物的生长发育和逆境响应中有重要的调控作用。依据课题组前期获得的盐胁迫相关的数字表达谱(DGEP)数据,获得盐胁迫响应显著上调基因GmMYB52,利用RT-PCR方法从栽培大豆(Williams 82)中克隆该基因片段,并与已公布的Willi... MYB类转录因子在植物的生长发育和逆境响应中有重要的调控作用。依据课题组前期获得的盐胁迫相关的数字表达谱(DGEP)数据,获得盐胁迫响应显著上调基因GmMYB52,利用RT-PCR方法从栽培大豆(Williams 82)中克隆该基因片段,并与已公布的Williams 82基因组数据库序列比对,该基因与GmMYB52序列一致。生物信息学分析表明,GmMYB52编码区(CDS)全长1083 bp,编码360个氨基酸。其编码的氨基酸序列具有MYB类转录因子的共同特征,其距N端110~160氨基酸残基处有MYB结构域;系统进化树分析表明,该基因编码的蛋白与GmMYB62、拟南芥AtMYBSt1、苜蓿Mt MYB52、水稻Os MYBS3及木豆Cc MYB-like protein J的亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果表明,大豆根部GmMYB52的转录水平受外界非生物逆境的调控,用脱落酸(ABA)和低温(4℃)处理后12 h明显上调,用氯化钠和PEG处理0.5~24.0 h后检测到GmMYB52的转录水平在50%~600%区间内呈现出先上调后下调再上调的趋势。GmMYB52为组成型表达,在大豆的幼苗期和开花期表达较多,在成熟期表达相对较低。GmMYB52在茎叶与开花期的花中表达较强,在根的表达较弱,而在成熟期的豆荚中几乎不表达。亚细胞定位的结果表明,GmMYB52定位于细胞核,符合典型转录因子的定位特征。酵母杂交系统检测表明,GmMYB52具有转录激活特征,并且能够与MYB相关顺式作用元件基序相结合。本研究结果表明,GmMYB52编码典型的MYB转录因子,具有转录激活活性及DNA结合活性,在大豆中的表达可能与大豆的非生物胁迫和ABA信号转导途径有关,推测其可能参与了大豆对非生物胁迫的响应。 展开更多
关键词 大豆 GmMYB52 表达分析 转录激活功能 结合功能
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大鼠糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及功能研究 被引量:1
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作者 张芳 钱桂生 +3 位作者 钱频 陈龙 李树钧 陈维中 《西北国防医学杂志》 CAS 2005年第1期1-3,F003,共4页
目的 :构建大鼠糖皮质激素受体变异体表达载体 ,研究其表达和功能。方法 :运用RT -nestedPCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD结构域的cDNA序列 ,将PCR产物定向克隆至pEGFP -N2质粒载体 ,测序筛选重组质粒 ;荧光显微镜观察重组质粒转染... 目的 :构建大鼠糖皮质激素受体变异体表达载体 ,研究其表达和功能。方法 :运用RT -nestedPCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD结构域的cDNA序列 ,将PCR产物定向克隆至pEGFP -N2质粒载体 ,测序筛选重组质粒 ;荧光显微镜观察重组质粒转染后的表达情况 ;相对荧光素酶法检测转录激活活性。结果 :扩增出长 16 12bp的cDNA序列 ,测序证实 :克隆片段与Genebank该基因序列同源性为 10 0 % ;重组质粒表达产物定位于细胞核 ;转染组细胞转录激活活性增强。结论 :成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体 ,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性
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薰衣草LaMYB1转录因子的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 周迪 李田田 +3 位作者 龙遗磊 严中建 买尔孜亚古丽·阿不来克木 苏秀娟 《新疆农业大学学报》 CAS 2022年第2期94-100,共7页
本研究获得了薰衣草转录因子MYB基因,并探究了该基因在薰衣草不同组织、花器官不同时期的表达特性和转录激活活性。采用RACE和RT-PCR技术克隆了薰衣草(Lavandula angustifolia Mill.)LaMYB1转录因子,该基因全长729 bp,编码242个氨基酸,... 本研究获得了薰衣草转录因子MYB基因,并探究了该基因在薰衣草不同组织、花器官不同时期的表达特性和转录激活活性。采用RACE和RT-PCR技术克隆了薰衣草(Lavandula angustifolia Mill.)LaMYB1转录因子,该基因全长729 bp,编码242个氨基酸,蛋白分子量为27.60 kDa,等电点为9.01。该基因与白桦BpMYB21基因亲缘关系较近。薰衣草LaMYB1基因在‘杂花’和‘法国蓝’两个品系不同组织和花器官不同时期的表达规律具有相似性,该基因在雄蕊的表达量最高,在衰败期的表达量最高。α-蒎烯、乙酸薰衣草酯、氧化石竹烯、莰烯和柠檬烯在雄蕊中的含量最高,这些萜类物质在两个品系不同组织中的含量变化规律与LaMYB1基因在不同组织中的相对表达量变化规律一致;LaMYB1基因在‘法国蓝’薰衣草中的相对表达量最高,右旋樟脑和柠檬烯的含量在‘法国蓝’薰衣草衰败期最高。薰衣草LaMYB1基因具有转录激活活性。 展开更多
关键词 薰衣草 MYB转录因子 萜类物质 表达分析 转录激活活性
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薄荷McHD-Zip3基因的克隆及其调控腺毛发育的功能分析 被引量:1
12
作者 陈泽群 亓希武 +3 位作者 房海灵 于盱 李莉 梁呈元 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1-10,共10页
以薄荷(Mentha canadensis Linn.)cDNA为模版,克隆获得1个HD-Zip转录因子基因,对该基因的组织表达特性以及对转基因烟草(Nicotiana tabacum Linn.)叶片腺毛发育的影响效应进行分析,并对该基因编码的氨基酸序列的特性及其与其他植物的同... 以薄荷(Mentha canadensis Linn.)cDNA为模版,克隆获得1个HD-Zip转录因子基因,对该基因的组织表达特性以及对转基因烟草(Nicotiana tabacum Linn.)叶片腺毛发育的影响效应进行分析,并对该基因编码的氨基酸序列的特性及其与其他植物的同源性和亲缘关系以及亚细胞定位和转录激活活性进行研究。结果显示:该基因被命名为McHD-Zip3,其编码区(CDS)全长2226 bp,编码741个氨基酸残基;该基因编码的氨基酸序列的理论相对分子质量为81375.67,理论等电点为pI 5.92。McHD-Zip3基因编码的氨基酸序列与其他植物HD-Zip转录因子的氨基酸序列具有一定的序列相似性,且均具有保守的Homeodomain、bZip motif、START domain和SAD domain,其与同科植物一串红(Salvia splendens Ker-Gawl.)的SsHD-Zip转录因子的序列相似度最高(82.57%)。在系统树上,McHD-Zip3转录因子与其他植物的多个腺毛发育相关的HD-Zip转录因子聚为一支,同属于HD-ZipⅣ亚家族,其与黄花蒿(Artemisia annua Linn.)的AaHD7转录因子的亲缘关系最近。McHD-Zip3转录因子定位于细胞核中,为核定位蛋白,且具有转录激活活性。McHD-Zip3基因的相对表达量在薄荷不同组织中差异显著,其在幼叶和老叶中较高,但在根和茎中较低;McHD-Zip3转基因烟草叶片的腺毛密度明显高于野生型烟草。研究结果表明:McHD-Zip3基因主要在薄荷叶片中表达,McHD-Zip3转录因子属于HD-ZipⅣ亚家族,对薄荷腺毛发育具有调控功能。 展开更多
关键词 薄荷 McHD-Zip3基因 表达特性 亚细胞定位 转录激活活性 腺毛发育
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人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究 被引量:1
13
作者 张方 钱桂生 +3 位作者 吴学玲 谢永宏 王兴友 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期50-52,共3页
目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重... 目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强。结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性
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新疆野苹果MsCBF1基因的克隆及表达分析 被引量:1
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作者 张克闯 李心悦 +2 位作者 张一弓 张道远 王玉成 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期803-811,共9页
新疆野苹果是现代栽培苹果的祖先,对非生物胁迫具有很强的适应性,是非常珍贵的天然基因资源库。本研究以新疆野苹果RNA为模板,RT-PCR扩增出CBF1基因c DNA序列,命名为Ms CBF1。Ms CBF1基因完整开放阅读框ORF长660 bp,编码219位氨基酸,具... 新疆野苹果是现代栽培苹果的祖先,对非生物胁迫具有很强的适应性,是非常珍贵的天然基因资源库。本研究以新疆野苹果RNA为模板,RT-PCR扩增出CBF1基因c DNA序列,命名为Ms CBF1。Ms CBF1基因完整开放阅读框ORF长660 bp,编码219位氨基酸,具有CBFs类转录因子典型的AP2保守结构域。亚细胞定位显示Ms CBF1蛋白作用于细胞核;转录激活活性分析显示Ms CBF1蛋白具有转录激活活性,其激活活性区域位于C端第166~219位氨基酸之间。基因表达分析显示,Ms CBF1基因响应盐(200 mmol·L^(-1 )Na Cl)和冷(4°C)胁迫诱导,不响应干旱(300 mmol·L^(-1)甘露醇)胁迫诱导。 展开更多
关键词 新疆野苹果 MsCBF1 转录激活活性 表达分析
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日本结缕草ZjERF2基因的克隆、转录激活活性、亚细胞定位和表达分析 被引量:1
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作者 张蕊 姜红岩 +4 位作者 滕珂 檀鹏辉 汪呈 刘凌云 常智慧 《草业科学》 CAS CSCD 2019年第5期1255-1265,共11页
采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825 bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ER... 采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825 bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ERF亲缘关系最近。利用染色体步移的方法克隆ATG上游1 549 bp的启动子序列,PLACE预测其含有多个响应激素和胁迫处理的作用元件。构建了pGBKT7-ZjERF2载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S??ZjERF2?YFP载体,本生烟草(Nicotiana tabacum)瞬时表达结果证明ZjERF2定位于细胞核。利用实时荧光定量的方法分析了ZjERF2的表达特征,结果表明ZjERF2基因在日本结缕草不同部位及不同发育时期表达量均有差异,在成熟叶片表达量最高。此外ZjERF2表达受ET、MeJA的诱导,但受ABA、PEG和NaCl的抑制。本研究表明ZjERF2是一个参与多种信号转导途径的转录因子。 展开更多
关键词 日本结缕草 ZjERF2转录因子 转录激活活性 亚细胞定位 表达分析
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缺失激素结合区的人糖皮质激素受体突变体的研究 被引量:1
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作者 张方 施毅 +5 位作者 辛晓峰 钱桂生 罗向东 宋勇 赵明 李子玲 《医学研究生学报》 CAS 2007年第5期474-476,489,I0002,共5页
目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;... 目的:构建缺失激素结合区(LBD)的人糖皮质激素受体突变体表达载体,并研究其表达和功能。方法:运用RT-nested PCR扩增人糖皮质激素受体(GR)基因不含编码LBD的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选编码正确的重组质粒;荧光显微镜观察GR突变体重组质粒转染人巨噬细胞株U937后的表达情况;相对荧光素酶法检测转染后细胞GR转录激活活性。结果:扩增出长1601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genebank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞GR转录激活活性增强。结论:成功构建缺失LBD的GR突变体表达载体,该突变体具有不依赖激素的GR转录激活活性。 展开更多
关键词 糖皮质激素受体 激素结合区 转录激活活性
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一氧化氮调节脂多糖致炎大鼠肺泡巨噬细胞糖皮质激素受体功能的研究
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作者 钱频 张芳 +1 位作者 钱桂生 陈维中 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1223-1225,共3页
目的 研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法 将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光... 目的 研究肺泡巨噬细胞在脂多糖(LPS)作用条件下一氧化氮供体(SNP)对糖皮质激素受体(GR)功能的调节作用。方法 将GR荧光表达质粒pGFP GR转染大鼠肺泡巨噬细胞,经LPS和SNP作用后,荧光显微镜观察质粒表达产物GFP GR核移位情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性;EMSA检测检测细胞NF κB活性。结果 5 0 0 μmol LSNP作用2h出现GFP GR核移位,同时GR转录激活活性显著增强,NF κB活性被显著抑制。运用GR特异性拮抗剂RU486后,NF κB活性抑制现象消失。结论 肺泡巨噬细胞在致炎因子作用条件下,一氧化氮供体(5 0 0 μmol LSNP )通过活化GR发挥抗炎活性。 展开更多
关键词 一氧化氮供体 糖皮质激素受体 NF-κB 转录激活活性
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十字花科植物ABI4序列演化与转录激活活性分析
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作者 张文晶 杨晓萌 +5 位作者 高侃 魏欣仪 石雪彤 王瑞瑄 武凤霞 康菊清 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期676-686,共11页
转录因子ABI4参与植物激素ABA的绝大多数生物学功能,它不仅是ABA和GA在植物体内含量平衡的核心调控因子,同时还连接ABA与植物细胞内多个信号通路。利用拟南芥(Arabidopsisthaliana)ABI4序列在十字花科其它19种植物(除拟南芥外)中检索得... 转录因子ABI4参与植物激素ABA的绝大多数生物学功能,它不仅是ABA和GA在植物体内含量平衡的核心调控因子,同时还连接ABA与植物细胞内多个信号通路。利用拟南芥(Arabidopsisthaliana)ABI4序列在十字花科其它19种植物(除拟南芥外)中检索得到27个同源基因,通过序列多态性分析、系统发生重建、染色体共线性分析和转录激活活性比较,探讨了该基因在十字花科植物中的演化历史。结果表明,ABI4蛋白质序列和结构在十字花科植物中具有较高的保守性,暗示了其功能的重要性;单独的ABI4蛋白并不具备显著的转录激活活性,说明其生物学功能的具体分子机制可能相对复杂,需要进一步探讨。 展开更多
关键词 ABI4 十字花科 序列演化 转录激活活性
原文传递
Smads转录激活检测系统的建立
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作者 郭宁 宗利丽 +3 位作者 严景华 丁丽华 朱建华 叶棋浓 《生物技术通讯》 CAS 2007年第2期189-192,共4页
目的:构建Smads转录激活检测系统,以研究Smad2、Smad3、Smad4的功能。方法:将Smad2/3/4编码序列以正确读码框与pRC-lac载体中的Lac阻遏蛋白编码序列融合构建重组质粒,将重组质粒与受Lac操纵子调控的荧光素酶报告基因质粒共转染293T细胞... 目的:构建Smads转录激活检测系统,以研究Smad2、Smad3、Smad4的功能。方法:将Smad2/3/4编码序列以正确读码框与pRC-lac载体中的Lac阻遏蛋白编码序列融合构建重组质粒,将重组质粒与受Lac操纵子调控的荧光素酶报告基因质粒共转染293T细胞,检测荧光素酶活性,其活性的强弱即代表转录活性的强弱。结果:Smad2和Smad3具有较强的依赖于TGF-β1的转录活性;Smad4全长没有检测到转录活性,但其SAD结构域有不依赖于TGF-β1的转录活性,MH2结构域有依赖于TGF-β1的转录活性。结论:构建的Smads转录激活检测系统能有效地用于Smad2、Smad3、Smad4功能的研究。 展开更多
关键词 SMADS 转录激活 荧光素酶活性
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