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鸡胚来源的外泌体不同提取方法比较 被引量:1
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作者 李莹 瞿浩 +5 位作者 何静怡 刘天飞 王劼 王艳 舒鼎铭 罗成龙 《广东农业科学》 CAS 2020年第5期93-101,共9页
【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,... 【目的】鸡胚蛋可用于改善机体免疫功能,研究不同提取方法对鸡胚组织中外泌体的分离效果,有利于深入解析鸡胚蛋生理功能。【方法】收集13胚龄惠阳胡须鸡胚蛋12枚(3组,4枚/组),通过酶消化、差速离心及过滤等前处理后将所获样品分为4份,通过超速离心法(UC)、蔗糖垫超速离心法(SDUC)、膜亲和法(exoEasy)以及聚乙二醇沉淀法(ExoQuick)4种方法分离提取外泌体,分别标记A^D。比较BCA蛋白浓度测定、透射电镜、纳米流式和标志蛋白流式检测等4种方法获得的外泌体蛋白浓度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况。【结果】4种方法均能获得符合外泌体直径分布(40~200 nm)、具有外泌体典型微囊结构特征的囊泡物质,外泌体蛋白浓度和颗粒浓度由高到低依次为D>C>A>B,但D样品中含有其他聚团杂质蛋白;表面标志蛋白CD63、CD81阳性率变化趋势为B>D>C>A。【结论】综合考量外泌体的纯度、形态、大小及其标志性蛋白表达情况,根据供试组织样品来源、试验条件和目的可优选蔗糖垫超速离心法或膜亲和法,如需高纯度外泌体可首选蔗糖垫超速离心法,样品稀有或不具备超速离心设备则选用膜亲和法。 展开更多
关键词 外泌体 超速离心 蔗糖密度 商业化试剂盒 鸡胚 分离方法
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从感染小鼠获得微小隐孢子虫卵囊方法的改进 被引量:14
2
作者 黄克和 杨世广 唐建霞 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期360-362,共3页
目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、... 目的 建立从感染C5 7BL/ 6N小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法。方法 在饮水中添加不同浓度的地塞米松对人工感染小鼠进行免疫抑制 ,探讨获得最多卵囊数的药物添加量 ;比较不同纯化方法得到的卵囊回收率和纯度 ;探讨来自不同动物、不同纯化方法的卵囊在牛输卵管上皮细胞培养系统的感染情况。结果 地塞米松加入量为 2 0 μg/ml的第 3组获得的卵囊量高达 4 .16× 10 9/ 30个小鼠 ;用饱和盐水漂浮法与用蔗糖密度梯度离心法纯化得到的卵囊具有相同的回收率和纯度 ;从感染小鼠与犊牛中获得的卵囊在感染性上差异不显著。结论 成功地建立了从感染小鼠获得大量微小隐孢子虫卵囊的方法 ,具有简单、方便、快速等优点 ,并且不影响活力。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫卵囊 饱和盐水漂浮法 蔗糖密度梯度离心法 细胞培养 隐孢子虫病
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两种方法纯化流感病毒的比较 被引量:10
3
作者 杜丽娟 王世光 +3 位作者 张立 陈尔佳 杨喆 包永明 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期216-218,共3页
目的比较两种方法纯化流感病毒的效果。方法取病毒原液,经超滤浓缩后,分别用Sepharose 4FF凝胶层析和蔗糖密度梯度离心法进行纯化,并对纯化产物进行检定。结果层析法的纯度、卵清蛋白及杂蛋白去除率略高于蔗糖密度梯度离心法,而蔗糖密... 目的比较两种方法纯化流感病毒的效果。方法取病毒原液,经超滤浓缩后,分别用Sepharose 4FF凝胶层析和蔗糖密度梯度离心法进行纯化,并对纯化产物进行检定。结果层析法的纯度、卵清蛋白及杂蛋白去除率略高于蔗糖密度梯度离心法,而蔗糖密度梯度离心法的病毒回收率优于层析法。结论两种方法均可用于流感病毒的纯化。 展开更多
关键词 流感病毒 凝胶层析 蔗糖密度梯度离心
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蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯度分析及与层析法的比较 被引量:5
4
作者 杨立清 张晋 +2 位作者 卢立新 李红 石男 《微生物学免疫学进展》 2004年第4期11-13,共3页
通过对蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯化工艺进行分析,发现现行工艺中收取的病毒组分中,不同蔗糖浓度中病毒的纯度是不同的,而呈峰型且与病毒效力峰及蛋白浓度峰不重合。实验结果对今后工艺的改进具有指导意义。另外应用Sephac... 通过对蔗糖梯度离心法纯化Vero细胞乙脑疫苗的纯化工艺进行分析,发现现行工艺中收取的病毒组分中,不同蔗糖浓度中病毒的纯度是不同的,而呈峰型且与病毒效力峰及蛋白浓度峰不重合。实验结果对今后工艺的改进具有指导意义。另外应用Sephacry1s1000凝胶层析法对乙脑病毒进行了纯化研究和分析,发现蔗糖梯度离心法和层析法纯化的病毒的纯度及回收率分别为291.46u/mg、96.01%和309.41u/mg65.08%,Sephacry1s1000凝胶层析法同样可以获得较高的纯度和收率。 展开更多
关键词 乙脑疫苗 纯化 层析法 梯度离心
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蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒工艺的优化 被引量:6
5
作者 顾建阳 刘旭光 +9 位作者 郭占龙 孙志伟 杜金东 徐文 孙宇 曹海丹 刘燕 曾亮 王思燕 王亚军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2015年第8期848-851,855,共5页
目的优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法在不同进样量(600、700和800 ml)时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1∶480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝... 目的优化蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的工艺参数。方法在不同进样量(600、700和800 ml)时,检测经蔗糖密度梯度离心纯化后各紫外检测峰的糖浓度、血凝滴度及卵清蛋白含量,并对血凝滴度大于1∶480的检测峰样品进行蛋白质含量和血凝素含量检测,确定最佳收峰位置、糖度范围及病毒浓缩液进样量;在不同比例的30%和50%的蔗糖溶液、不同离心时间(2、3和4 h)条件下对流感病毒浓缩液进行蔗糖密度梯度离心纯化,检测纯化后的病毒纯化液蛋白质、血凝素及卵清蛋白含量,计算蛋白质含量与血凝素含量比值及血凝素回收率,确定最佳离心时间。结果确定最佳收峰位置为第三峰,糖度范围为30%~50%之间;当病毒浓缩液进样量为600~700 ml时,30%蔗糖溶液进液量为450~550 ml,55%蔗糖溶液进液量为400~500 ml,转速为90 639×g离心3 h后,可获得最佳纯化效果。结论确定了蔗糖密度梯度离心法纯化流感病毒的最佳工艺参数,为进一步提高流感病毒的纯化效果提供了参考。 展开更多
关键词 流感病毒 蔗糖密度梯度离心 纯化
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甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析 被引量:4
6
作者 刘杨 赵向绒 +2 位作者 郭春艳 胡军 余鹏博 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期897-900,共4页
目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取... 目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 蔗糖密度梯度超速离心 免疫原性
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H9N2亚型禽流感病毒纯化及病毒HA蛋白定量方法研究 被引量:4
7
作者 彭成成 吴熠潇 +1 位作者 刘旭平 谭文松 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2069-2078,共10页
为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯... 为实现H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)疫苗上下游过程的控制,本研究结合蔗糖密度梯度离心和SDS-PAGE灰度分析建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法。首先将收获的病毒原液经差速离心、PEG6000沉淀和蔗糖密度梯度离心分别进行澄清、浓缩和分离纯化;其次,采用改装过的高效液相色谱仪系统(HPLC)准确定位和收集病毒离心区带,并对该区带进行SDS-PAGE和Western blotting分析,同时考察该收集方式的线性和重复性;然后,在此基础上优化病毒液的澄清工艺以提高病毒回收率;最后,观察还原SDS-PAGE分离的H9N2亚型AIV蛋白条带的共迁移情况并确定糖苷酶PNGase F脱糖基处理的最佳条件,采用Image J软件分析SDS-PAGE图谱中4个主要病毒蛋白条带(NP、HA1、M1和HA2)的灰度以确定流感病毒血凝素的含量。结果表明,HPLC收集的病毒离心区带的蛋白浓度与PEG6000浓缩的上清体积在8~32 mL范围内具有良好的线性关系(R^2=0.994),且该收集方式重复性好,批内和批间变异系数分别为1.29%和4.11%。病毒液经过澄清、浓缩和分离纯化后,最终的病毒回收率为79.55%。纯化的H9N2亚型AIV的蛋白浓度为1 000μg/mL时,经糖苷酶PNGase F脱糖基处理后便能得到条带清晰平整且分离良好的SDS-PAGE图谱。经灰度分析,HA含量占总病毒蛋白含量的46.18%。本研究初步建立了H9N2亚型AIV纯化和病毒HA蛋白定量的方法,为H9N2亚型AIV全病毒灭活疫苗的研发和生产提供了简单、准确的检测手段。 展开更多
关键词 H9N2亚型禽流感病毒 血凝素 蔗糖密度梯度离心 纯化 SDS-PAGE 定量
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Ⅰ型鸭肝炎病毒间接ELISA方法的建立 被引量:4
8
作者 孙凤萍 高骏 +2 位作者 胡建华 王胜昌 高诚 《上海农业学报》 CSCD 北大核心 2011年第4期70-73,共4页
采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异... 采用Ⅰ型鸭肝炎病毒通过SPF鸡胚进行病毒培养和增殖,反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法纯化后作为ELISA包被抗原,建立了鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒全病毒间接ELISA诊断方法。试验表明:此方法具有敏感性高、特异性好的优点,为快速诊断鸭病毒性肝炎-Ⅰ型病毒感染提供了一条方便的途径。 展开更多
关键词 鸭病毒性肝炎 间接ELISA 蔗糖密度梯度离心
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Extraction and purification of magnetic nanoparticles from strain of Leptospirillum ferriphilum
9
作者 高健 谢建平 +3 位作者 丁建南 康健 程海娜 邱冠周 《Transactions of Nonferrous Metals Society of China》 SCIE EI CAS CSCD 2006年第6期1417-1420,共4页
The magnetic nanoparticles were extracted from Leptospirillum ferriphilum,strain YSK,isolated from acid mine drainages by treatment with sodium dodecyl sulfate(SDS)and centrifugation through a sucrose density gradient... The magnetic nanoparticles were extracted from Leptospirillum ferriphilum,strain YSK,isolated from acid mine drainages by treatment with sodium dodecyl sulfate(SDS)and centrifugation through a sucrose density gradient.Transmission electron microscopy(TEM)indicates that the nanoparticles are approximately spherical with a mean diameter of 44 nm,and magnetite crystals in this size range are single magnetic domains.Energy-dispersive X-ray analysis shows that the nanoparticles primarily contain two kinds of elements,iron and oxygen.Thus it can be concluded that the magnetic particles are magnetosomes.Generally,it is thought that cellular magnetotaxis is a direct consequence of the cell possessing magnetosomes.The discovery of magnetosomes in strain YSK can provide the theoretical basis for screening efficient bioleaching bacteria which are specific to different magnetic minerals under an outer magnetic field. 展开更多
关键词 LEPTOSPIRILLUM ferriphilum STRAIN YSK SDS sucrose density GRADIENT MAGNETOSOMES magnetotaxis
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小鼠腹水瘤病毒(SRSV)及其核糖核酸的纯化和某些性质的研究 被引量:3
10
作者 单易非 纪宏 +4 位作者 吴正泉 吕妹珍 郑葆芬 程立 孔宪寿 《病毒学杂志》 CSCD 1989年第4期350-358,共9页
从感染NIH3T3小鼠成纤维细胞上清液中分离小鼠腹水瘤病毒,用蔗糖密度梯度离心法纯化。从新鲜病毒中取小鼠腹水瘤病毒RNA,并用酚-氯仿抽提和蔗糖梯度分离。各组分的沉降系数(S)和分子量通过超速离心凝胶电泳分析测定。SRSV RNA主要由两... 从感染NIH3T3小鼠成纤维细胞上清液中分离小鼠腹水瘤病毒,用蔗糖密度梯度离心法纯化。从新鲜病毒中取小鼠腹水瘤病毒RNA,并用酚-氯仿抽提和蔗糖梯度分离。各组分的沉降系数(S)和分子量通过超速离心凝胶电泳分析测定。SRSV RNA主要由两组分组成,一是沉降系数约60~70S(热处理后约35S),还有少量18S和28S,另一是4~5S。35S组分在体外能指导无细胞蛋白的合成。 展开更多
关键词 SRSV RNA 沉降系数 纯化
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蓝隐藻叶绿素蛋白复合物的圆二色谱特性 被引量:3
11
作者 梁源 陈敏 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 CAS 2014年第3期177-183,共7页
采用蔗糖密度梯度离心分离的方法,从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中稳定分离到了4种活性的叶绿素蛋白复合物,分别为2种捕光复合物、1种PSⅡ颗粒和1种PSⅠ颗粒.采用圆二色谱技术对分离到的复合物进行了全波段(190~750 nm)光谱测定,结果... 采用蔗糖密度梯度离心分离的方法,从蓝隐藻(Chroomonas placoidea)中稳定分离到了4种活性的叶绿素蛋白复合物,分别为2种捕光复合物、1种PSⅡ颗粒和1种PSⅠ颗粒.采用圆二色谱技术对分离到的复合物进行了全波段(190~750 nm)光谱测定,结果显示:①远紫外区:二级结构预测表明各复合物的无规卷曲比例相近,约占30%左右;PSⅠ颗粒和1种PSⅡ和捕光复合物含有更高比例的α-螺旋和β-转角,但几乎不存在β-折叠.②近紫外区:在芳香族氨基酸的三级结构信号区,各复合物均未观测到Tyr的信号峰.③可见光区:690 nm附近信号峰的有无是隐藻捕光复合物和中心复合物的一个区别.实验结果不仅给出了隐藻叶绿素蛋白复合物性质的新信息,也为今后叶绿素蛋白复合物的分析和鉴定提供了新的光谱鉴定依据. 展开更多
关键词 蓝隐藻 叶绿素蛋白复合物 蔗糖密度梯度离心 圆二色谱
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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原超速离心纯化方法的建立 被引量:3
12
作者 戴新宪 陈蕾 +5 位作者 郝春生 温智恒 吴蕴怡 马淑花 张晨 李秀玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第11期1191-1195,共5页
目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)抗原的超速离心纯化方法。方法将SFTSV工作种子库毒种接种至Vero细胞,病毒培养物经灭活及浓缩后制备病毒浓缩液。病毒浓缩液... 目的建立发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)抗原的超速离心纯化方法。方法将SFTSV工作种子库毒种接种至Vero细胞,病毒培养物经灭活及浓缩后制备病毒浓缩液。病毒浓缩液通过20%蔗糖超速离心富集分离,再经60%、50%、40%、30%、20%、10%蔗糖密度梯度超速离心进一步纯化,将病毒抗原富集的组分进行合并,经SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果病毒抗原富集于组分22~26中,合并后经SDS-PAGE分析可见相对分子质量约60 000及28 000的糖蛋白(GP)及核蛋白(NP)条带,纯度约90%,浓度为2.58 mg/ml,且可与兔抗SFTSV全病毒多克隆抗体发生特异性结合。结论成功建立了SFTSV的超速离心纯化方法,纯化制备出了高纯度的病毒抗原,为SFTSV灭活疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒 病毒纯化 蔗糖密度梯度超速离心
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麻疹病毒的纯化及其在麻疹IgG EIA诊断试剂中的应用 被引量:3
13
作者 詹曦菁 秦晓勇 +1 位作者 刘丽英 孔健 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第4期618-621,共4页
目的:摸索纯化麻疹病毒的方法,并以其为包被抗原,制备麻疹IgG酶联免疫(EIA)诊断试剂。方法:将L4株麻疹病毒液先后用超滤、PEG沉淀的方法进行浓缩,再分别用连续和不连续蔗糖密度梯度超速离心法进行纯化,比较不同方法纯化后的效果,最终建... 目的:摸索纯化麻疹病毒的方法,并以其为包被抗原,制备麻疹IgG酶联免疫(EIA)诊断试剂。方法:将L4株麻疹病毒液先后用超滤、PEG沉淀的方法进行浓缩,再分别用连续和不连续蔗糖密度梯度超速离心法进行纯化,比较不同方法纯化后的效果,最终建立制备高纯度麻疹病毒包被抗原的方法,并在此基础上制备麻疹IgG酶联免疫(EIA)诊断试剂。结果:用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心纯化后的麻疹病毒的比活性为775.76 HAU/mg,SDS-PAGE及Western-blot证明纯化产物的纯度符合要求,电镜结果显示纯化物中含大量麻疹病毒。以该纯化抗原制备的EIA检测试剂与血凝抑制实验(HI)相比,该试剂的灵敏度为99.46%,特异度为81.82%,一致性为97.58%。与SIGMA麻疹IgG EIA诊断试剂盒的一致率为95.12%。结论:采用超滤、PEG沉淀及连续蔗糖密度梯度超速离心的方法可制备满足麻疹IgG EIA诊断试剂要求的包被抗原。 展开更多
关键词 IA株麻疹病毒 酶联免疫(EIA) 包被抗原 蔗糖密度梯度超速离心
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堆型艾美耳球虫子孢子纯化 被引量:3
14
作者 黄芳 韦铮 +1 位作者 王黎霞 安健 《北京农学院学报》 2009年第2期44-46,共3页
笔者通过比较不同成分脱囊液的子孢子脱囊效果和不同蔗糖密度梯度分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的纯化效果来探索较佳的分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的条件。通过试验证明10%鸡胆汁+0.75%(W/V)胰酶脱囊效果最好。75%(W/V)和20%(W/V)蔗... 笔者通过比较不同成分脱囊液的子孢子脱囊效果和不同蔗糖密度梯度分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的纯化效果来探索较佳的分离纯化堆型艾美耳球虫子孢子的条件。通过试验证明10%鸡胆汁+0.75%(W/V)胰酶脱囊效果最好。75%(W/V)和20%(W/V)蔗糖密度梯度离心得到的子孢子回收率最高,且纯度最好,染色证明纯化后的堆型艾美耳球虫子孢子仍具有较高的活性。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 子孢子纯化 梯度离心
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新城疫病毒纯化方法的比较研究 被引量:3
15
作者 余祖华 丁轲 朱巧艳 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期135-138,共4页
为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝(HA)效价。结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000... 为了比较研究红细胞吸附释放法、PEG-6000沉淀法和超速离心法对新城疫病毒的纯化效果,将含有NDV的鸡胚尿囊液分别用上述3种方法处理,并测定血凝(HA)效价。结果表明,红细胞吸附释放法中采用50%的醛化红细胞纯化病毒效果最佳;PEG-6000沉淀法中,用9%的PEG-6000加1%NaCl处理病毒后再沉淀2-4 h效果最佳;采用超速离心法纯化的病毒主要分布在40%和50%蔗糖区带之间。3种方法比较,以超速离心法效果最好,红细胞吸附释放法和PEG-6000沉淀法纯化效果差异不大。 展开更多
关键词 新城疫病毒 纯化 红细胞吸附释放法 PEG沉淀法 超速离心法
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狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发 被引量:3
16
作者 刘珍珍 田大勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期25-33,共9页
目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质... 目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150~200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。 展开更多
关键词 狂犬病病毒疫苗 纯化工艺 连续流蔗糖密度梯度离心
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三种方法检测口蹄疫146S抗原含量及抗原稳定性的比较研究 被引量:2
17
作者 杨生海 柴静 +6 位作者 郭建荣 王富强 刘西兰 董金杰 张军 翟国元 张勇 《中国兽药杂志》 2020年第6期33-41,共9页
为比较三种口蹄疫146S抗原含量检测方法,分别用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦Cary 100紫外分光光度计定量法、蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法及高效液相体积排阻色谱法三种检测方法,对口蹄疫灭活抗原中的146S含量进行检... 为比较三种口蹄疫146S抗原含量检测方法,分别用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦Cary 100紫外分光光度计定量法、蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法及高效液相体积排阻色谱法三种检测方法,对口蹄疫灭活抗原中的146S含量进行检测,对三种检测方法的数据进行统计分析。将口蹄疫A型抗原和O型抗原各一株分别4℃放置12个月以及反复多次冷冻处理;口蹄疫抗原用全能核酸酶处理,然后用蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法检测处理前后的146S抗原含量变化。结果显示,三种检测方法的检测数值相关性极显著,呈正相关性;4℃放置12个月后的抗原含量没有变化,而反复多次冷冻处理后的抗原含量降解非常多;全能核酸酶处理后的抗原含杂蛋白少。本研究表明,基于临床需求,蔗糖密度梯度离心结合安捷伦1260液相色谱仪定量法更适合口蹄疫抗原检测;口蹄疫抗原适合于4℃保存;全能核酸酶能有效去除杂蛋白干扰,提高色谱纯化效率。 展开更多
关键词 蔗糖密度梯度离心 口蹄疫146S 安捷伦Cary 100紫外分光光度计 安捷伦1260液相色谱仪 高效体积排阻色谱 全能核酸酶
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喉癌Hep-2细胞来源的exosomes提取方法的比较 被引量:2
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作者 梁俊毅 吉晓滨 +1 位作者 刘启才 谢景华 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2015年第17期1522-1526,共5页
目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考。方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理。收集90ml培养上清液,... 目的:对分离提取喉癌Hep-2细胞来源的exosomes 2种方法进行对比,展现不同方法的优缺点,为选择分离提取包括喉癌Hep-2细胞在内的肿瘤细胞来源exosomes的方法提供参考。方法:大量培养喉癌Hep-2细胞,42℃热休克处理。收集90ml培养上清液,先通过3/0.8μm深层过滤小型滤芯对上清液进行预处理,去除直径较大的颗粒和杂质,再利用蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法,将上清液浓缩提纯;收集培养上清液4ml,依次加入Exosome Isolation Kit内试剂,通过exosomes提取专用过滤柱,收集浓缩液。用高倍透射电子显微镜对2种方法所得的exosomes浓缩液分别鉴定,作出评价。结果:2种方法均能成功地从喉癌Hep-2细胞培养上清液中分离提取出exosomes。单个高倍视野下,蔗糖密度梯度离心联合超滤离心法提取exosomes分散性较好,但密度较低,背景见杂质较多;Exosome Isolation Kit所提取exosomes排列紧密,密度较高,背景杂质较少。结论:2种方法各具特点,均是较理想的exosomes分离提取方法。利用Exosome Isolation Kit分离提取exosomes具有样本量少、提取时间短、步骤简单、产物量大等优点,为喉癌Hep-2来源exosomes的分离提取提供了较好的选择。 展开更多
关键词 EXOSOMES 蔗糖密度梯度离心 超滤离心 EXOSOME ISOLATION KIT
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登革病毒3型病毒样颗粒在酵母体内的表达与鉴定 被引量:2
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作者 付春云 方丹云 +4 位作者 刘岩 喻治准 江汉宁 江丽芳 周俊梅 《热带医学杂志》 CAS 2011年第6期613-616,656,共5页
目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-... 目的探讨登革病毒3型病毒样颗粒(DENV3-VLPs)的免疫原性。方法用PCR法扩增登革病毒3型prME基因,插入载体pGAPZaA构建重组质粒pGAPZaA-prME-D3,将其转化毕赤酵母X33构建转化子pGAPZaA-prME-D3/X33。对转化子表达上清和细胞裂解液进行SDS-PAGE和Western blotting分析。用蔗糖密度梯度离心纯化表达的DENV3-VLPs并进行鉴定和电镜观察。结果成功构建重组载体pGAPZaA-prME-D3,获得酵母转化子pGAPZaA-prME-D3/X33,并应用毕赤酵母表达了DENV3-VLPs,表达蛋白约50000Mr,电镜观察VLPs直径为20~50nm。结论应用酵母表达系统成功表达了DENV-3VLPs,经鉴定表明其具有免疫反应性,为后续免疫原性研究及四价登革VLPs疫苗的构建奠定了基础。 展开更多
关键词 登革病毒 病毒样颗粒 蔗糖密度梯度离心 毕赤酵母
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脑组织细胞膜的制备和鉴定 被引量:1
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作者 何涛 蒋灵芝 +1 位作者 吴民泸 邱明均 《泸州医学院学报》 1998年第5期376-378,共3页
目的:研究脑组织细胞膜的制备和鉴定方法。方法:采用匀浆及蔗糖密度梯度离心法制备脑组织细胞膜,通过质膜标志酶活性测定及电镜观察对所得之膜制品进行鉴定。结果;经密度梯度离心后的膜制品具较高的5’-核苷酸酶活性,电镜照片显示... 目的:研究脑组织细胞膜的制备和鉴定方法。方法:采用匀浆及蔗糖密度梯度离心法制备脑组织细胞膜,通过质膜标志酶活性测定及电镜观察对所得之膜制品进行鉴定。结果;经密度梯度离心后的膜制品具较高的5’-核苷酸酶活性,电镜照片显示清晰的膜相结构。结论:该方法的制备物为较为纯化的脑组织细胞质膜。 展开更多
关键词 细胞膜 脑组织 密度梯度离心 鉴定
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