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梯棱羊肚菌凝集素MIL的外源表达及生物活性 被引量：5
1
作者 舒芳 刘伟 +2 位作者 张倩倩 龚钰华 边银丙 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期19-25,F0003,共8页
对梯棱羊肚菌(Morchella importuna)凝集素编码基因MIL及其编码蛋白进行生物信息学分析,并采用qRT-PCR分析MIL基因在梯棱羊肚菌不同生长发育阶段(菌丝期、白色菌核期、黄色菌核期、原基期、幼菇期、成熟子囊果期)的表达量;构建pET28a-MI... 对梯棱羊肚菌(Morchella importuna)凝集素编码基因MIL及其编码蛋白进行生物信息学分析,并采用qRT-PCR分析MIL基因在梯棱羊肚菌不同生长发育阶段(菌丝期、白色菌核期、黄色菌核期、原基期、幼菇期、成熟子囊果期)的表达量;构建pET28a-MIL表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21中外源表达获得了凝集素蛋白MIL-His,测定其生物活性。研究表明,梯棱羊肚菌MIL基因序列为426 bp,其中含有一个RicinB lectin保守结构域,与RicinB-like lectin同源性达95%;qRT-PCR定量分析显示,在从菌丝到子囊果的生长发育过程中,梯棱羊肚菌MIL基因在白色菌核阶段的表达量最高,其次为黄色菌核阶段,幼菇、成熟子囊果和原基阶段次之,在菌丝阶段表达量最低,表明MIL基因可能在梯棱羊肚菌菌核形成中起到重要的调控作用;兔红细胞凝血实验结果显示重组蛋白MIL-His凝集兔红细胞的最小浓度为0.32 mg/mL,同时发现MIL-His具有提高小鼠脾脏淋巴细胞增殖率的活性,与对照相比增殖率达35.3%。 展开更多
关键词 异源表达 血凝集活性 免疫活性 菌核发育
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药用真菌猪苓4种小GTPase基因的克隆和表达分析
2
作者 刘蒙蒙 宋超 +1 位作者 邢咏梅 郭顺星 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1186-1191,共6页
利用RACE-PCR技术首次从药用真菌猪苓中分离得到猪苓菌核的4个小GTPase基因。这4个基因分别命名为Pu Rho A1、Pu Rho A2、Puypt1及Pu Ras,Pu Rho A1全长698 bp,编码区共585 bp,编码194个氨基酸,推测分子量为21.75 k D,理论等电点为6.44;... 利用RACE-PCR技术首次从药用真菌猪苓中分离得到猪苓菌核的4个小GTPase基因。这4个基因分别命名为Pu Rho A1、Pu Rho A2、Puypt1及Pu Ras,Pu Rho A1全长698 bp,编码区共585 bp,编码194个氨基酸,推测分子量为21.75 k D,理论等电点为6.44;Pu Rho A2全长837 bp,其中编码区长585 bp,可编码194个氨基酸,计算其分子量为21.75 k D,理论等电点为6.33;Puypt1为一条896 bp的c DNA,编码区为615 bp,可编码204个氨基酸,经计算分子量为22.556 k D,理论等电点为5.75。Pu Ras的c DNA全长为803 bp,其中编码区长639 bp,编码212个氨基酸,推测分子量为23.821 k D,理论等电点为5.2。Pu Rho A1具有法尼酰转移酶催化位点(FT-Caa X)和香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-Caa X),而Pu Rho A2仅具有香叶烯基转移酶催化位点(GGT1-Caa X);Puypt1具有小GTPase家族中Rab1-Ypt1的完整保守结构域;Pu Ras具有法尼酰转移酶催化位点(FT-Caa X)。系统进化树结果显示猪苓的4个小GTPase都隶属于担子菌类群。实时荧光定量PCR分析结果表明在菌核形成初期Puypt1、Pu Ras、Pu Rho A1在菌核中表达量显著高于菌丝,而Pu Rho A2在菌核中的表达量显著低于菌丝,说明这4个小GTPase基因可能参与了猪苓菌核的形态发生。 展开更多
关键词 猪苓 小GTPase 菌核发育
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杭白菊白绢病的研究 被引量：7
3
作者 王建伟 吕中平 +1 位作者 单德芳 柳穆燕 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 1989年第3期81-87,共7页
杭白菊白绢病是浙江省杭白菊上的一种严重病害。常年发病率达29.6％～84.1％。该病主要危害杭白菊茎基部,引起皮层腐烂,进而全株青枯死亡。病原菌经鉴定为罗氏白绢小菌核菌Sclerotium rolfsii Saccardo.菌核在10～40℃内生长,以25～30... 杭白菊白绢病是浙江省杭白菊上的一种严重病害。常年发病率达29.6％～84.1％。该病主要危害杭白菊茎基部,引起皮层腐烂,进而全株青枯死亡。病原菌经鉴定为罗氏白绢小菌核菌Sclerotium rolfsii Saccardo.菌核在10～40℃内生长,以25～30℃生长最好;菌核萌发的pH值范围为2～12。杭白菊产区桐乡县白绢病从6月中旬开始发生,一直持续到11月中旬的收获期,其中8月上旬和8月下旬至9月上旬的压条摘心时期为发病高峰期。压条、摘心和后期偏施氮肥等栽培措施是病害严重的重要因素,高温高湿有利于白绢病发生。防治试验表明:植物生长前期用3％井冈霉素或20％稻脚青,中后期用3％井冈霉素或50％多菌灵防治能控制病害蔓延,在杭白菊生长季节应防治4～6次。 展开更多
关键词 菊花白绢病 罗氏白绢小菌核菌 发病特点 药剂防治
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基于转录组测序挖掘人工培养冬虫夏草僵虫颜色变化相关基因 被引量：1
4
作者 邓小书 谭发银 +4 位作者 卫秋阳 郭连安 贺元川 黄俊丽 陈仕江 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2023年第1期17-26,共10页
为探讨人工培育冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)颜色较野生冬虫夏草更黑的原因,以人工培养冬虫夏草僵虫和野生冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序,通过DESeq筛选获得890个差异表达基因,其中上... 为探讨人工培育冬虫夏草(Ophiocordyceps sinensis)颜色较野生冬虫夏草更黑的原因,以人工培养冬虫夏草僵虫和野生冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序,通过DESeq筛选获得890个差异表达基因,其中上调表达基因479个,下调表达基因411个。GO富集分析结果显示:在生物过程中,差异表达基因主要富集于细胞过程、代谢过程、单一生物过程、生物调节、生物过程调节、响应刺激等二级单元;在细胞组成中,差异表达基因主要富集于细胞、细胞器、膜、大分子复合物等二级单元;在分子功能中,差异表达基因主要富集于结合、催化活性、运输活性等二级单元。KEGG通路富集分析结果显示,差异表达基因主要富集于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、翻译、糖代谢、脂代谢、转运和分解代谢等途径。筛选到49个与活性氧代谢、酚氧化酶类、氧化还原酶类、过氧化物酶类、黑化反应相关的差异表达基因,其中tyr1可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键酶基因。 展开更多
关键词 冬虫夏草 僵虫 色素沉积 褐变
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基于高通量测序的人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化转录组分析
5
作者 邓小书 卫秋阳 +4 位作者 谭发银 郭连安 王嘉 邢康康 陈仕江 《中国现代中药》 CAS 2023年第8期1635-1645,共11页
目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础。方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选... 目的:探索人工培殖冬虫夏草Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.外观品质形成的分子基础。方法:以重庆和康定人工培殖冬虫夏草僵虫为材料,利用Illumina Hiseq 2500高通量测序技术进行转录组测序分析,基于差异倍数(FC)和错误发现率(FDR)筛选差异表达基因,具体筛选条件为|log2FC|>1、FDR<0.05。结果:共获得21942个转录本,利用DEGSeq筛选获得1575个差异表达基因,其中上调表达基因626个、下调表达基因949个;基因本体(GO)数据库和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析结果显示,这些差异表达基因主要集中于氨基酸代谢、折叠-分选-降解、糖代谢、转运和分解代谢、辅酶因子和微生物代谢等途径;筛选到66个颜色变化差异表达基因,包含46个氧化还原酶活性相关基因、12个过氧化物酶体相关基因、3个单加氧酶活性调节相关基因、3个黑化反应相关基因、2个活性氧代谢相关基因,其中tyr1、TYR基因可能是冬虫夏草僵虫颜色变化的关键功能基因。结论:利用高通量测序技术和生物信息分析获得了人工培殖冬虫夏草僵虫转录组信息特征,为阐明人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化的调控机制研究提供参考。 展开更多
关键词 冬虫夏草 僵虫 高通量测序 转录组
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人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化初探
6
作者 邓小书 卫秋阳 +3 位作者 贺元川 石萍 邢康康 陈仕江 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1339-1346,共8页
【目的】分析人工培殖冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis颜色变化的成因,为提升人工培殖冬虫夏草商品规格等级奠定基础。【方法】以野生冬虫夏草僵虫、人工培殖冬虫夏草僵虫为试验材料,利用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,... 【目的】分析人工培殖冬虫夏草Ophiocordyceps sinensis颜色变化的成因,为提升人工培殖冬虫夏草商品规格等级奠定基础。【方法】以野生冬虫夏草僵虫、人工培殖冬虫夏草僵虫为试验材料,利用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosinstaining,HE)结合光学显微镜观察组织细胞学变化,采用ELISA方法测定冬虫夏草僵虫的丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)含量以及多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、胰蛋白酶(TRY)、淀粉酶(AMY)、蔗糖酶(INV)、脂肪酶(LIP)、抗菌肽(ATT)酶活性变化。【结果】组织细胞学鉴定发现,与野生虫草僵虫(WT)相比,重庆室内培殖虫草僵虫(CQ)和饲喂胡萝卜虫草僵虫(H)的组织细胞及细胞密度均变大。人工培殖虫草活性氧代谢相关酶活性、免疫耐受力相关酶活性及MDA和H2O2含量变化具有显著差异。与野生虫草僵虫(WT)相比,重庆室内培殖虫草僵虫(CQ)和饲喂胡萝卜虫草僵虫(H)的PPO、SOD、POD酶活性增加,而CAT酶活性降低,其中SOD酶活力显著增加;H的活性氧代谢相关酶酶活性变化最显著,尤其是PPO与SOD酶活性分别增加37.19%、23.98%;CQ和H的MDA和H2O2含量显著降低;CQ和H的TRY、AMY、INV、LIP、ATT酶活性均增加,其中AMY与LIP酶活力显著增加。【结论】人工培殖冬虫夏草僵虫颜色变化与活性氧代谢、免疫耐受力代谢相关,为提高人工培殖冬虫夏草的商品规格等级提供了理论指导。 展开更多
关键词 冬虫夏草 僵虫 活性氧 免疫耐受力 色素沉积 褐变
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