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红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响 被引量:1
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作者 王娇 桂艳玲 +1 位作者 韩洁 赵杰宏 《中国农学通报》 2023年第12期93-98,共6页
为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测... 为研究红曲霉过表达orf5基因对洛伐他汀含量的影响,丰富洛伐他汀代谢调控机制。用ATMT和REMI法将gus-orf5融合基因转化红曲霉,并对ATMT法的共培养条件和REMI法的内切酶进行优化筛选,对获得的潮霉素抗性菌株进行GUS染色和PCR鉴定,并检测阳性菌株的洛伐他汀含量变化。结果筛选出20μg/mL潮霉素的培养基作为转基因红曲霉的抗性筛选浓度,补充1/10 LB的Co-IM共培养基有利于ATMT法转化,在REMI法中Xba I介导的转化效果较好。用ATMT和REMI法均获得抗性菌落,经PCR检测表明orf5和hyg基因均已导入红曲霉,GUS染色呈蓝色。过表达菌株的洛伐他汀含量比对照明显提高,高达36.89%。红曲霉过表达orf5有利于增加洛伐他汀的积累,为深入研究红曲霉orf5基因的功能提供参考。 展开更多
关键词 紫色红曲霉 ORF5基因 农杆菌介导遗传转化(ATMT) 限制性内切酶介导基因整合(remi) 洛伐他汀
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木霉菌REMI转化体对番茄灰霉病的防治及其机理的研究 被引量:4
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作者 刘限 郭培磊 +1 位作者 高增贵 赵岩 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期80-85,共6页
研究不同木霉菌转化体对番茄灰霉病防治效果及机理,为木霉菌生物防治的合理利用奠定基础。利用限制性内切酶介导基因整合技术(restriction enzyme-mediated integration,REMI),通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(Botrytis ... 研究不同木霉菌转化体对番茄灰霉病防治效果及机理,为木霉菌生物防治的合理利用奠定基础。利用限制性内切酶介导基因整合技术(restriction enzyme-mediated integration,REMI),通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(Botrytis cinerea)效果优于出发菌T21菌株(出发菌)的3个木霉菌转化体Ttrm31、Ttrm34和Ttrm55,对侵染花器和叶片的灰霉病防效分别比原生物防治木霉菌株提高了16.9%和8%。木霉菌转化体的产孢能力、分生孢子的萌发率、对碳氮源的利用能力及对高温的抵抗能力都有所提高;木霉菌转化体本身产生的几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性均比出发菌高,因此通过REMI技术可以获得新的有益木霉菌转化体,在一定程度上提高了生物菌株防治番茄灰霉病的水平。说明REMI技术可以用于改良生防木霉菌株的功能,提高生物防治效果。 展开更多
关键词 限制性内切酶介导整合技术 木霉菌转化体 番茄灰霉病 生防机理
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利用限制性内切酶技术获得木霉菌插入变异 被引量:2
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作者 陈捷 刘限 +3 位作者 徐书法 刘海南 黄玉茜 周晓瑛 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1918-1923,1928,共7页
利用限制性内切酶介导整合(REM I)技术,通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(B otry tis cinerea)效果优于初发菌T richod erm a v irid e T 21菌株(初发菌)的3个变异株T trm 31、T trm 34和T trm 55.变异株本身产生的和诱... 利用限制性内切酶介导整合(REM I)技术,通过插入线性化质粒DNA获得了生物防治番茄灰霉病(B otry tis cinerea)效果优于初发菌T richod erm a v irid e T 21菌株(初发菌)的3个变异株T trm 31、T trm 34和T trm 55.变异株本身产生的和诱导番茄植株产生的几丁质酶和-β1,3-葡聚糖酶的活性均比初发菌高,因此,通过REM I技术可以获得新的有益变异株,在一定程度上提高了生物菌株防治番茄灰霉病的水平,尤其是提高诱导番茄抗病水平.对侵染花器和叶片的灰霉病防效分别比原生物防治木霉菌株提高了16.9%和8%,说明REM I技术可以用于改良生防木霉菌株的功能,提高生物防治效果. 展开更多
关键词 限制性内切酶介导整合 生物防治 木霉菌 番茄灰霉病
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尖孢镰刀菌黄瓜专化型的限制酶介导整合转化 被引量:6
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作者 王政逸 李德葆 《浙江农业学报》 CSCD 2001年第5期309-311,共3页
关键词 尖孢镰刀菌 限制酶介导整合 遗传转化 黄瓜枯萎病菌
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限制性内切酶介导的玫烟色拟青霉原生质转化体系构建 被引量:5
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作者 杨旭芬 应盛华 冯明光 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期606-612,共7页
丝孢类害虫生防真菌的生态适应性和环境抗逆性决定着生防菌剂的田间适用性,兼具多个抗逆性状的菌株一般只能通过相关功能基N的遗传操作和定向选育而获得,但这类真菌遗传操作的可行方法目前相当有限,本文利用限制性内切酶介导插入法... 丝孢类害虫生防真菌的生态适应性和环境抗逆性决定着生防菌剂的田间适用性,兼具多个抗逆性状的菌株一般只能通过相关功能基N的遗传操作和定向选育而获得,但这类真菌遗传操作的可行方法目前相当有限,本文利用限制性内切酶介导插入法将含有草丁膦抗性标记的Bar基因的质粒pAN52-1N-Bar转入玫烟色拟青霉Pfr116菌株的原生质体中,转化效率约为6~13个转化子μg^-1质粒DNA.通过对Pfr116菌株突变转化子的基因组DNA进行PCR产物检测及基因组DNA单酶切片段的Southern杂交分析,证明Bar基因已整合到随机抽取的转化子基因组中,且都在基因组上单位点插入,转化子对草丁膦的抗性具有遗传稳定性,由此构建的原生质体转化体系具有低拷贝、转化率较高,遗传稳定强的特点,不失为一种丝孢类生防真菌遗传操作的有效方法. 展开更多
关键词 玫烟色拟青霉 原生质体转化 限制性内切酶 草丁膦抗性基因
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REMI介导红曲霉遗传转化条件的优化 被引量:4
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作者 周礼红 陈平 +3 位作者 赵永霞 荆雯雯 李祝 葛永仪 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第18期4129-4133,共5页
为了构建限制性内切酶介导的整合(REMI)技术介导的红曲霉(Monascus anka)遗传转化系统,以潮霉素B作为抗性筛选标记,pBC-Hygro、pCB1003、pAN7-1作为转化质粒,采用REMI技术转化红曲霉。结果表明,用REMI技术介导红曲霉转化时,质粒pBC-Hygr... 为了构建限制性内切酶介导的整合(REMI)技术介导的红曲霉(Monascus anka)遗传转化系统,以潮霉素B作为抗性筛选标记,pBC-Hygro、pCB1003、pAN7-1作为转化质粒,采用REMI技术转化红曲霉。结果表明,用REMI技术介导红曲霉转化时,质粒pBC-Hygro和pCB1003适合于红曲霉的转化。环状质粒与线性质粒的转化率无显著差别;在用REMI技术介导转化时添加酶切缓冲液不利于转化;原生质体浓度为1×107~1×108个/mL时,每微克质粒可获得的潮霉素B抗性转化子为2800~3200个;HindⅢ介导转化时的最佳酶用量为105~120U;在质粒用量为8μg/100μL时转化率最高。 展开更多
关键词 红曲霉(Monascus anka) 遗传转化 限制性内切酶介导的整合(remi)
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三种捕食线虫真菌的REMI转化 被引量:2
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作者 徐进 莫明和 张克勤 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第2期27-30,共4页
采用REMI(restriction enzyme-mediated integration)技术,成功地用潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)转化了捕食线虫真菌白色单顶孢(Monacrosporium candidum)、球状单顶孢(M. sphaeroides)和蠕虫节丛孢(Arthrobotrys vermicola)。这三种菌... 采用REMI(restriction enzyme-mediated integration)技术,成功地用潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)转化了捕食线虫真菌白色单顶孢(Monacrosporium candidum)、球状单顶孢(M. sphaeroides)和蠕虫节丛孢(Arthrobotrys vermicola)。这三种菌的转化率分别为10~18、25~35和0.2~3个转化子/μg DNA;它们的转化子的潮霉素抗性稳定性分别为12.5%、82.5%和87.5%。三种菌的野生型的生长在含有150μg/ml潮霉素的PDA培养基上完全被抑制,而它们的转化子一般都能在含有700μg/ml潮霉素的PDA培养基上正常生长。从每种菌中随机选择了40个转化子,在生长速率、菌丝形态、捕器形态及对线虫的捕食能力方面与野生型进行了比较,没有发现有明显差异。 展开更多
关键词 捕食线虫真菌 转化 remi 潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)
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稻瘟病菌致病突变体的REMI诱变与鉴定 被引量:5
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作者 刘树俊 魏荣宣 +1 位作者 有江力 山口勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期254-258,共5页
以水稻“爱知旭”(Aichiashahi)为寄主,将带选择标记的质粒pCSN43和pBF101为外源DNA,利用限制酶诱导整合(REMI)这种新方法转化稻瘟病菌原生质体,从筛选到的数百个转化体中分离出3个与致病能力... 以水稻“爱知旭”(Aichiashahi)为寄主,将带选择标记的质粒pCSN43和pBF101为外源DNA,利用限制酶诱导整合(REMI)这种新方法转化稻瘟病菌原生质体,从筛选到的数百个转化体中分离出3个与致病能力密切相关的突变体R2H65、R2H69和R2B1565。其中,R2H65和R2H69只产生畸形分生孢子,分生孢子的发育和附着胞的形成以及黑色素的合成均受到极大影响,致病性测试证明完全丧失致病能力;R2B1565的许多表型与野生型的相似,但致病能力却大大降低。 展开更多
关键词 致病性 稻瘟病菌 限制酶诱导整合 杀稻瘟菌素
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木霉菌REMI突变菌株在降解敌敌畏中的作用(英文)
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作者 元旭 菅丽萍 陈捷 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2016年第1期85-90,共6页
本研究对木霉菌T30野生株和限制性内切酶介导的DNA整合技术(REMI)构建的突变株进行降解敌敌畏能力和最佳条件的研究。结果表明,野生株和几个REMI突变株均能降解有机磷农药敌敌畏,但以突变株TK-3降解活性最高,其降解效率达98%。TK-3突变... 本研究对木霉菌T30野生株和限制性内切酶介导的DNA整合技术(REMI)构建的突变株进行降解敌敌畏能力和最佳条件的研究。结果表明,野生株和几个REMI突变株均能降解有机磷农药敌敌畏,但以突变株TK-3降解活性最高,其降解效率达98%。TK-3突变株降解有机磷农药效率取决于葡萄糖剂量、敌敌畏初始浓度、初始pH等。突变株降解敌敌畏的葡萄糖最佳浓度为1 000μg/mL,最适pH为7.0,敌敌畏浓度500μg/mL。敌敌畏浓度超过1 000μg/mL则会抑制木霉菌降解能力。 展开更多
关键词 康氏木霉 限制性内切酶介导基因合技术(remi) 敌敌畏 降解
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