一氧化氮参与铁负荷肾小管细胞毒作用的机制及其防治 被引量：5

1

作者 裘莲群 吴兆龙 许迅辉 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期177-181,共5页

目的探讨一氧化氮（ＮＯ）参与铁负荷肾小管细胞毒作用的可能机制，评价氧自由基清除剂在铁肾小管细胞毒中的防治作用及其与ＮＯ的关系。方法在建立原代鼠肾近端小管上皮细胞培养体系的基础上，以孵育液中ＮＯ２－产量（Ｇｒｉｅｓｓ反... 目的探讨一氧化氮（ＮＯ）参与铁负荷肾小管细胞毒作用的可能机制，评价氧自由基清除剂在铁肾小管细胞毒中的防治作用及其与ＮＯ的关系。方法在建立原代鼠肾近端小管上皮细胞培养体系的基础上，以孵育液中ＮＯ２－产量（Ｇｒｉｅｓｓ反应）和小管细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放率改变为线索，比较不同剂量铁剂、各氧自由基清除剂、Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）和ＣＯ合成酶抑制剂，左旋硝基精氨酸甲酯（Ｌ－ＮＡＭＥ）分别作用 １２ ｈ后在非脂多糖（ＬＰＳ）组和 ＬＰＳ组（１０ ｕｇ／ｍｌ）中对小管细胞毒作用及与ＮＯ代谢的影响；同时用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测不同剂量铁剂与ＬＰＳ的联用下诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）ｍＲＮＡ的表达改变。结果ＮＴＡ－Ｆｅ可以剂量依赖的方式同步增加ＬＤＨ释放（Ｐ＜０．００１）及孵育液中Ｎ０２－的产量（Ｐ＜０．００１）；但在ＬＰＳ组中细胞毒作用的增加（Ｐ ＜０．００１）并不伴随Ｎ０２－的明显改变（Ｐ＞０．０５）。ＬＰＳ诱导的ｉＮＯＳ转录上调可为ＮＴＡ－Ｆｅ增强，但仅限于５００ｕｍｏｌ／Ｌ（Ｐ＜０．０１）。在ＬＰＳ组中，加入Ｌ－精氨酸及不同剂量Ｌ－ＮＡＭＥ可分别加重和缓解铁的细胞毒作用；然而。 展开更多

关键词 细胞毒作用 一氧化氮 氧自由基 肾近端小管细胞

原文传递

尿本周蛋白促进肾小管上皮细胞凋亡的体外研究 被引量：6

2

作者 周振海 李小银 +3 位作者 李娟 罗绍凯 李幼姬 洪文德 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期274-278,共5页

多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周蛋白(BJP)对肾近端小管上皮细胞(PTC)具有直接毒性,本研究通过体外观察BJP对PTC的凋亡作用以探讨BJP对PTC的部分毒性机制。将自MM患者尿中提取并经免疫固定法琼脂糖凝胶电泳进行鉴定的4例κ和λ型BJP以不同... 多发性骨髓瘤(MM)患者尿本周蛋白(BJP)对肾近端小管上皮细胞(PTC)具有直接毒性,本研究通过体外观察BJP对PTC的凋亡作用以探讨BJP对PTC的部分毒性机制。将自MM患者尿中提取并经免疫固定法琼脂糖凝胶电泳进行鉴定的4例κ和λ型BJP以不同浓度与大鼠NRK52E株PTC共同培养12～48h,用原位末端标记法、流式细胞仪及透射电镜检测凋亡。结果显示:①BJPκ组与BJPλ组BJP为10mg/ml与20mg/ml时诱导PTC凋亡的比例明显高于对照组及5mg/ml,两组诱导PTC凋亡的比例随着培养时间的延长而显著增加且明显高于空白对照组;②BJPκ组与BJPλ组之间诱导PTC凋亡的比例无明显差异。结果表明,κ与λ型BJP均可诱导PTC凋亡,且随着BJP浓度及培养时间增加而增强。 展开更多

关键词 尿本周蛋白 肾近端小管上皮细胞 细胞培养 凋亡

下载PDF 职称材料

虫草素对脂多糖诱导大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用 被引量：5

3

作者 杨永丽 项辉 肖志英 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期203-206,共4页

目的探讨虫草素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以1×10^(5)/mL接种于细胞培养板,并将传至第3代的细胞分为正常对照组(Ctrl组)、LPS组(1 mg/L的LPS刺激细胞)、10μmo... 目的探讨虫草素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以1×10^(5)/mL接种于细胞培养板,并将传至第3代的细胞分为正常对照组(Ctrl组)、LPS组(1 mg/L的LPS刺激细胞)、10μmol/L和20μmol/L虫草素干预组(LPS+C 10组、LPS+C 20组)。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞活性;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色法检测细胞内活性氧(ROS)水平;用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测炎症相关因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)以及核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白表达。结果与Ctrl组比较,LPS可明显抑制NRK-52E细胞活性,增加细胞内ROS含量,上调ICAM-1、VCAM-1、IL-1β以及NF-κB的蛋白表达。与LPS组比较,经10μmol/L或20μmol/L虫草素处理后,NRK-52E细胞活性明显升高(以Ctrl组为1:0.717±0.017、0.916±0.036比0.554±0.046),细胞内ROS水平明显降低(以Ctrl组为1:1.527±0.165、1.098±0.168比2.543±0.127),同时ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB的蛋白表达均明显下调〔以Ctrl组为1:ICAM-1/GAPDH为2.364±0.097、1.561±0.074比3.101±0.121,VCAM-1/GAPDH为2.866±0.135、1.920±0.098比4.170±0.119,IL-1β/GAPDH为2.358±0.107、1.563±0.179比3.301±0.210,磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)/GAPDH为2.559±0.166、1.596±0.148比3.183±0.098〕,差异均有统计学意义(均P<0.05);且与LPS+C 10组比较,LPS+C 20组细胞活性更为显著(0.916±0.036比0.717±0.017,P<0.01),ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB蛋白表达下调更加明显(ICAM-1/GAPDH:1.561±0.074比2.364±0.097,VCAM-1/GAPDH:1.920±0.098比2.866±0.135,IL-1β/GAPDH:1.563±0.179比2.358±0.107,NF-κB p-p65/GAPDH:1.596±0.148比2.559±0.166,均P<0.05)。结论虫草素可显著增加LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的细胞活性,降低细胞内ROS水平,抑制细胞炎症,其抑制炎症作用可能与NF-κB通路相关。 展开更多

关键词 虫草素 脂多糖 肾小管上皮细胞 核转录因子-ΚB

原文传递

缺氧-复氧对肾小管上皮细胞内DRP1及OPA1表达的影响 被引量：3

4

作者 邹礼乐 韩艺 +3 位作者 徐福翠 彭柯 雷小平 董文斌 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2012年第17期2655-2658,共4页

目的:探讨缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内动力相关蛋白1(Dynamin related protein 1,DRP1)及视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy,OPA1)表达的变化。方法:以人近曲肾小管上皮细胞株为研究对象,将培... 目的:探讨缺氧-复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)后人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)内动力相关蛋白1(Dynamin related protein 1,DRP1)及视神经萎缩症蛋白1(optic atrophy,OPA1)表达的变化。方法:以人近曲肾小管上皮细胞株为研究对象,将培养细胞随机分为正常对照组和H/R组。正常对照组常规培养,H/R组先缺氧24h,然后复氧培养6h。光镜观察细胞形态变化,CCK-8检测细胞活力,透射电子显微镜观察线粒体形态改变,免疫组织化学法检测细胞内DRP1和OPA1蛋白表达。结果:H/R组与对照组相比,细胞活力下降,线粒体出现凋亡相关改变,OPA1表达减少而DRP1的表达增加。结论:缺氧-复氧可导致HK-2细胞发生凋亡相关改变,其机制可能与诱导线粒体形态相关蛋白DRP1、OPA1的表达改变相关。 展开更多

关键词 缺氧-复氧 肾小管上皮细胞DRP1 OPA1 线粒体

原文传递

尿本周氏蛋白及转化生长因子β_1对肾近端小管上皮细胞增殖的影响 被引量：2

5

作者 周振海 李幼姬 +5 位作者 陈运贤 李小银 余学清 李娟 罗绍凯 原耀光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期1257-1260,共4页

目的 :研究多发性骨髓瘤 (MM)患者尿本周氏蛋白 (BJP)及转化生长因子 β1(TGF - β1)在体外对肾近端小管上皮细胞 (PTC)增殖的影响。方法 :将自MM患者尿中提取的λ型BJP和 /或TGF - β1与大鼠NRK .5 2E株PTC共同培养 ,用 [3 H]TdR掺入研... 目的 :研究多发性骨髓瘤 (MM)患者尿本周氏蛋白 (BJP)及转化生长因子 β1(TGF - β1)在体外对肾近端小管上皮细胞 (PTC)增殖的影响。方法 :将自MM患者尿中提取的λ型BJP和 /或TGF - β1与大鼠NRK .5 2E株PTC共同培养 ,用 [3 H]TdR掺入研究PTC增殖。并用ELISA法测定BJP与PTC培养上清液中的TGF - β1含量。结果 :①10 0 - 80 0 μmol/LBJP以浓度依赖方式抑制PTC增殖 ,当浓度≥ 4 0 0 μmol/L与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 ) ,当加入 2 μg/LTGF - β1共同培养 ,在BJP浓度为 4 0 0 μmol/L时 ,[3 H]TdR掺入低于单用BJP(P <0 .0 5 ) ,但与单用BJP浓度为 80 0 μmol/L无显著差异 ;② 10 0 - 80 0 μmol/LBJP与PTC共同培养液中的TGF - β1含量均增加 ,尤以BJP为 4 0 0μmol/L明显大于对照组 (P <0 .0 5 ) ;③外源性 0 .5 - 10 μg/LTGF - β1与PTC共同培养 ,[3 H]TdR掺入随TGF - β1浓度增加而减少。结论 :MM患者λ型BJP可抑制PTC的增殖 ,其部分机理可能与其促进对PTC增殖也有抑制作用的TGF- 展开更多

关键词 本周蛋白 转化生长因子Β 近端肾小管上皮细胞

下载PDF 职称材料

非诺贝特对游离脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响 被引量：1

6

作者 佐楠 杨爽 王力宁 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期127-131,142,共6页

目的探讨非诺贝特对游离脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。方法通过MTT法检测细胞的增殖,分光光度法检测细胞MDA表达和SOD活性;ELISA法检测细胞上清中的MCP-1和IL-8;Real-time PCR法及Western blot分别检测Bax和Bcl-2的m RN... 目的探讨非诺贝特对游离脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。方法通过MTT法检测细胞的增殖,分光光度法检测细胞MDA表达和SOD活性;ELISA法检测细胞上清中的MCP-1和IL-8;Real-time PCR法及Western blot分别检测Bax和Bcl-2的m RNA和蛋白表达水平。结果游离脂肪酸的刺激呈剂量和时间依赖性抑制HK-2细胞的增殖,并使细胞Bax的m RNA与蛋白表达显著上升,Bcl-2的m RNA和蛋白的表达显著下降。非诺贝特的加入显著减轻游离脂肪酸对HK-2细胞增殖的抑制作用;并使细胞bax的m RNA与蛋白表达下降,而Bcl-2的m RNA与蛋白的表达上升。同时细胞SOD表达水平上升,MDA的表达水平下降;炎性介质MCP-1和IL-8表达水平均下降。结论游离脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有时间和剂量依赖性,非诺贝特可通过减少氧化应激,抑制炎性反应,上调Bcl-2以及下调Bax的表达来抑制游离脂肪酸诱导的细胞凋亡,从而减少其肾毒性。 展开更多

关键词 非诺贝特 游离脂肪酸 肾小管上皮细胞 凋亡

下载PDF 职称材料

绞股蓝对体外培养肾小管细胞庆大霉素毒性的保护作用

7

作者 黄云剑 廖立生 袁发焕 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期99-101,368-369,共5页

目的:研究绞股蓝(GP)对庆大霉素(GM)引起的近端肾小管细胞(PTC)毒性的保护作用。方法:采用原代培养的 PTC 制作 GM 损伤模型,观察丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-氨基葡萄糖酶(NAG)、过氧化氢酶(catalase)、DNA 合... 目的:研究绞股蓝(GP)对庆大霉素(GM)引起的近端肾小管细胞(PTC)毒性的保护作用。方法:采用原代培养的 PTC 制作 GM 损伤模型,观察丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、N-乙酰-β-氨基葡萄糖酶(NAG)、过氧化氢酶(catalase)、DNA 合成以及形态学变化,同时观察 GP 的保护作用。结果:GP 能激活并保护 ALT、LDH、Catalase 酶活力,降低 NAG酶活力增高、促进 DNA 合成等机制,减轻 GM 的肾毒性损伤。结论:GP 能有效保护 GM 对PTC 损伤。 展开更多

关键词 绞股蓝 庆大霉素 近端肾小管细胞

下载PDF 职称材料

缺氧-复氧后HK-2细胞内OPA1的表达变化及rhEPO干预的影响

8

作者 廖凯男 邹礼乐 董文斌 《中国儿童保健杂志》 CAS 2016年第2期134-136,共3页

目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)干预对缺氧复氧后HK-2细胞内视神经萎缩症蛋白(optic atrophy 1,OPA1)表达变化及细胞凋亡率的影响。方法体外培养HK-2细胞随机分为正常对照组、H/R组和rhEPO干预... 目的探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,rhEPO)干预对缺氧复氧后HK-2细胞内视神经萎缩症蛋白(optic atrophy 1,OPA1)表达变化及细胞凋亡率的影响。方法体外培养HK-2细胞随机分为正常对照组、H/R组和rhEPO干预组。然后免疫组化检测各组细胞胞质内OPA1蛋白表达变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡数量差异。结果与正常对照组比较,H/R组细胞数量减少,细胞凋亡率显著增加,同时细胞内OPA1表达减少;而与H/R组相比,rhEPO干预组细胞数量增加,细胞凋亡率下降,OPA1表达明显增强,但各指标仍未恢复至正常对照组水平。结论rhEPO对缺氧-复氧所致肾小管上皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能通过抑制细胞内OPA1蛋白表达而实现。 展开更多

关键词 缺氧复氧 促红细胞生成素 视神经萎缩症蛋白 人近曲肾小管上皮细胞 凋亡

原文传递

多毛孢菌菌粉含药血清对LLCPK细胞损伤的保护作用研究 被引量：5

9

作者 杨汝春 毛俐婵 +3 位作者 程晚霞 王军 朱晓玲 王永钧 《中医药学刊》 2004年第12期2256-2257,2260,共3页

肾小管上皮细胞是肾脏固有细胞之一,在结构上与肾间质紧密相连,既是肾脏损伤的受害者,也是直接参与者。肾小管间质疾病是肾脏病学研究的重点,肾间质损伤程度直接关系到肾脏疾病的预后,有关它对肾病进程的影响已引起了广泛重视。目的:研... 肾小管上皮细胞是肾脏固有细胞之一,在结构上与肾间质紧密相连,既是肾脏损伤的受害者,也是直接参与者。肾小管间质疾病是肾脏病学研究的重点,肾间质损伤程度直接关系到肾脏疾病的预后,有关它对肾病进程的影响已引起了广泛重视。目的:研究多毛孢菌菌粉不同提取物含药血清对庆大霉素所致的肾小管上皮细胞的损伤、凋亡的影响。方法:培养猪肾小管上皮细胞株LLCPK,用庆大霉素刺激,同时加多毛孢菌的不同提取物含药血清干预。用MTT法测定存活细胞数;生化显色检测NAG酶活性;流式细胞法测定细胞凋亡。结果:实验结果显示,与正常组细胞相比,庆大霉素可显著降低细胞MTT实验的OD值、细胞上清液中NAG酶活性,并显著增强细胞表面Annexin V的表达;菌粉水提物或醇提物含药血清均能够显著增强细胞的OD值,降低细胞上清液中NAG水平,抑制庆大霉素诱导的细胞表面Annexin V的表达。结论:实验结果表明,多毛孢菌菌粉含药血清可以拮抗庆大霉素的肾小管细胞毒性,促进损伤细胞的修复,抑制细胞凋亡:除了传统水提物外,醇提物也对庆大霉素引起的肾小管上皮细胞损伤有显著的保护作用。 展开更多

关键词 多毛抱菌 庆大霉素 肾小管上皮细胞 细胞凋亡

下载PDF 职称材料

多毛孢菌菌粉含药血清对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子基因表达的影响 被引量：5

10

作者 程晓霞 杨汝春 +3 位作者 毛俐婵 王军 鲁盈 王永钧 《中国中西医结合肾病杂志》 2005年第1期10-12,共3页

目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反... 目的 :研究多毛孢菌菌粉不同提取物对肾小管上皮细胞增殖及纤维生长因子 (FGF)mRNA表达的影响。方法 :培养猪肾小管上皮细胞株 (LLCPK) ,用庆大霉素刺激 ,同时加多毛孢菌的不同提取物干预。MTT法检测LLCPK细胞增殖 ;逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)测定纤维生长因子mRNA的表达。结果 :研究发现多毛孢菌水提物及醇提物均可显著增高LLCPK细胞OD值 ;庆大霉素刺激的肾小管上皮细胞纤维生长因子mRNA的表达显著增高 ,而经多毛孢菌菌粉水提物和醇提物干预后 ,纤维生长因子mRNA的表达显著下降。结论 :多毛孢菌菌粉可以促进LLCPK细胞增殖和拮抗庆大霉素对细胞的损伤 。 展开更多

关键词 多毛孢菌 肾小管上皮细胞细胞增殖 纤维生长因子 肾小球肾炎

下载PDF 职称材料

去甲斑蝥素对白蛋白刺激肾小管上皮细胞增殖及上调纤维连接蛋白表达的影响 被引量：4

11

作者 叶琨 刘伏友 +3 位作者 李瑛 彭佑铭 段绍斌 刘虹 《中国血液净化》 2008年第6期325-328,共4页

目的观察去甲斑蝥素(NCTD)对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及上调FN表达的影响,初步探讨NCTD延缓肾间质纤维化的体外作用机制。方法通过细胞毒性实验筛选出对HK-2细胞无明显损伤的NCTD适合浓度。将HK-2细胞随机分为5组:... 目的观察去甲斑蝥素(NCTD)对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞株(HK-2)增殖及上调FN表达的影响,初步探讨NCTD延缓肾间质纤维化的体外作用机制。方法通过细胞毒性实验筛选出对HK-2细胞无明显损伤的NCTD适合浓度。将HK-2细胞随机分为5组:对照组(1640培基组),白蛋白组(1640+白蛋白5g/L),各浓度NCTD组(1640+白蛋白5g/L+NCTD 0.5,1,2.5mg/L)。在各组HK-2细胞中加入相应干预液孵育24h后,采用细胞增殖法(MTT法)检测NCTD对白蛋白刺激HK-2细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组细胞上清中FN的蛋白含量;RT-PCR法半定量分析HK-2细胞中FN mRNA的表达。结果①比较对照组及NCTD(0.5,1.0,2.5 mg/L)各组的乳酸脱氢酶(LDH)浓度,各组间的差异无统计学意义(P>0.05);②白蛋白组MTT值(0.438±0.073)明显高于对照组(0.330±0.060)(P<0.05),而NCTD(2.5 mg/L)组MTT值(0.327±0.080)较白蛋白组降低(P<0.05);③与白蛋白组比较,NCTD(2.5mg/L)组HK-2细胞上清中FN蛋白含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);NCTD(1mg/L和2.5mg/L)组细胞上清中FN mRNA的表达较白蛋白组明显下调,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白蛋白(5g/L)诱导HK-2细胞增殖及FN过表达,一定浓度去甲斑蝥素可抑制白蛋白对HK-2细胞的活化作用。 展开更多

关键词 斑蝥素 人近端肾小管上皮细胞 MTT法 纤维连接蛋白

下载PDF 职称材料

益肾抗纤复方对HK-2细胞转分化过程作用的基因组学研究 被引量：2

12

作者 孙世竹 孙伟 +5 位作者 秦雪梅 鲍军 陈燕 蒋娟娟 申志祥 高雪燕 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1129-1134,共6页

目的通过基因芯片研究中药益肾抗纤复方与苯那普利含药血清对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质成肌纤维细胞转分化(renal tubular epithelial cells to mesenchymal myofibroblasts transdif-ferentiation,TEMT)过程中的影响。方... 目的通过基因芯片研究中药益肾抗纤复方与苯那普利含药血清对人肾近端小管上皮细胞(HK-2细胞)向间质成肌纤维细胞转分化(renal tubular epithelial cells to mesenchymal myofibroblasts transdif-ferentiation,TEMT)过程中的影响。方法制备SD大鼠含药血清,观察含药血清对HK-2细胞在5ng/mL转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)诱导下TEMT过程的阻抑作用。HK-2细胞随机分为空白对照组、模型组、苯那普利组和中药组。采用IlluminaBeadChip的人全基因组基因表达芯片(HumanHT-12v4),提取总RNA分离纯化后,经过逆转录、合成、杂交、洗片和扫描获得差异表达基因,并进行差异基因相关分析。结果通过基因芯片技术成功筛选差异表达基因,苯那普利组与模型组比较差异表达基因227个,其中上调表达基因118个,下降表达基因109个;中药组与模型组比较差异表达基因97个,其中上调表达基因69个,下降表达基因28个。通过基因本体论分析,益肾抗纤复方较苯那普利在细胞损伤、凋亡、生长、NF-κB、蛋白激酶、神经元及血管生长等生物过程中有更多调控作用。结论益肾抗纤复方与苯那普利对HK-2细胞TEMT过程均有阻抑作用,但益肾抗纤复方对TEMT过程早期的细胞应对损伤、凋亡、生长等有更多途径的参与。 展开更多

关键词 益肾抗纤复方 苯那普利 人肾近端小管上皮细胞 肾小管上皮细胞向间质成肌纤维细胞转分化

下载PDF 职称材料

复肾颗粒对脂多糖诱导下人肾小管上皮细胞TRAF6表达的影响 被引量：2

13

作者 刘明龙 刘天喜 +4 位作者 安海倩 崔雪 李燕 周森 王凤丽 《中国中西医结合肾病杂志》 2017年第7期578-581,共4页

目的:探讨复肾颗粒含药血清对脂多糖(L)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)的增殖及肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为正常组,LPS诱导组(10μg/ml)、对照组(LPS 10μg/ml+等体... 目的:探讨复肾颗粒含药血清对脂多糖(L)诱导下人肾小管上皮细胞(HK-2)的增殖及肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)表达的影响。方法:体外培养HK-2细胞并制备复肾颗粒含药血清,分为正常组,LPS诱导组(10μg/ml)、对照组(LPS 10μg/ml+等体积正常组血清)、复肾颗粒小剂量组(LPS 10μg/ml+复肾颗粒100μg/ml)、复肾颗粒中剂量组(LPS 10μg/ml+复肾颗粒500μg/ml)、复肾颗粒大剂量组(LPS 10μg/ml+复肾颗粒1 mg/ml)。培养6、12和24 h后,用MTT法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞上清中IL-6、TNF-α的含量,RT-PCR法检测α-SMA mRNA和TRAF6 mRNA的含量,Western bolt法检测α-SMA和TRAF6蛋白的表达。结果:LPS诱导组较对照组细胞的增殖水平、胞质中IL-6和TNF-α的含量及α-SMA和TRAF6的表达水平均增加,而不同剂量复肾颗粒干预后细胞增殖水平、IL-6和TNF-α的含量以及α-SMA和TRAF6的表达水平均减低,呈现一定的浓度依赖性,结果差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:复肾颗粒可抑制LPS诱导的HK-2细胞增殖水平和炎性因子的释放,发挥抑制肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转变的纤维化过程,其机制可能与抑制TRAF6蛋白的表达有关。 展开更多

关键词 复肾颗粒 人肾小管上皮细胞 细胞增殖 肾纤维化 肿瘤坏死因子受体相关因子6

下载PDF 职称材料

SREBP-1基因过表达促进人肾小管上皮细胞甘油三酯形成 被引量：2

14

作者 郝军 郑书深 +5 位作者 赵建德 刘青娟 赵松 刘淑霞 刘巍 段惠军 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2010年第3期252-256,共5页

目的 SREBP-1重组质粒转染人肾小管上皮细胞(HKC)检测SREBP-1基因表达和细胞内脂滴的关系。方法体外培养人肾小管上皮细胞并随机分为空白对照组、pcDNA3.1空质粒对照组和pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组,采用阳离子脂质体法将SREBP-1特异性... 目的 SREBP-1重组质粒转染人肾小管上皮细胞(HKC)检测SREBP-1基因表达和细胞内脂滴的关系。方法体外培养人肾小管上皮细胞并随机分为空白对照组、pcDNA3.1空质粒对照组和pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组,采用阳离子脂质体法将SREBP-1特异性质粒pcDNA3.1-SC1及pcDNA3.1空质粒转染到细胞内并培养48小时,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果 pcDNA3.1-SC1重组质粒转染的细胞内SREBP-1mRNA表达呈现明显升高,扩增条带积分光密度值分别是空白对照组和阴性对照组的6.158倍和4.194倍,SREBP-1蛋白也出现明显上调,条带积分光密度值为3.092±0.254。空白对照组和pcDNA3.1阴性对照组细胞内均未见有红染脂滴颗粒,而pcDNA3.1-SC1重组质粒转染组中出现了清晰的红染颗粒。结论 SREBP-1表达可增加人肾小管上皮细胞脂肪合成证实HKC细胞中SREBP-1表达和脂滴形成之间存在有直接关系。 展开更多

关键词 固醇调节元件结合蛋白-1 人肾小管上皮细胞 脂滴形成 质粒转染

下载PDF 职称材料

川芎嗪对TGF-β_1诱导人胚肾近端小管上皮细胞转分化影响的实验研究 被引量：1

15

作者 王俊然 郑素琴 邢红英 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期578-580,F0004,共4页

目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近... 目的利用原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞作为研究对象,探讨川芎嗪(TMP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肾近端小管上皮细胞转分化的影响。方法采用胶原酶消化后系列网筛过滤,再用密度梯度离心分离纯化细胞的方法,进行人胚肾近端小管上皮细胞的原代培养。原代培养的人胚肾近端小管上皮细胞传至第2代后分为5组,空白对照组、10ng/mL TGF-β1刺激组、5ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组、10ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组及20ng/mLTMP+10ng/mL TGF-β1刺激组。刺激48h后,采用倒置相差显微镜、透射电子显微镜、酶化学染色和免疫细胞化学方法检测细胞的转分化情况。结果 TGF-β1刺激人胚肾近端小管上皮细胞后细胞拉长呈梭形,细胞间隙加大;电子显微镜下细胞失去极性,微绒毛减少直至消失;碱性磷酸酶染色阴性;细胞角蛋白18(CK-18)表达减弱,波形蛋白(Vimentin)表达增强,并表达α平滑肌肌动蛋白抗体(α-SMA)。各浓度TMP+10ng/mL TGF-β1刺激组细胞的上述变化均有不同程度的减弱,减弱程度与TMP浓度呈正比。结论 TMP能以浓度依赖方式阻止TGF-β1诱导的人胚肾近端小管上皮细胞的转分化。 展开更多

关键词 细胞转分化 转化生长因子Β1 川芎嗪 人胚肾近端小管上皮细胞 肾间质纤维化

下载PDF 职称材料

LRRC19识别肿瘤坏死因子α等炎症因子参与肾脏的免疫应答 被引量：1

16

作者 柴立民 张园 +1 位作者 车永哲 杨荣存 《南开大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期60-65,共6页

研究一个已鉴定的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白家族成员LRRC19,确定其组织分布及在肾组织中的表达和定位,并对其功能进行初步研究.通过RT-PCR技术检测LRRC19 mRNA在小鼠各组织中的分布;利用特异性探针mRNA杂交技术对该基因在肾组织中的表... 研究一个已鉴定的富亮氨酸重复结构(LRR)蛋白家族成员LRRC19,确定其组织分布及在肾组织中的表达和定位,并对其功能进行初步研究.通过RT-PCR技术检测LRRC19 mRNA在小鼠各组织中的分布;利用特异性探针mRNA杂交技术对该基因在肾组织中的表达进行精确定位;免疫荧光实验分析该蛋白的亚细胞定位;通过分泌型碱性磷酸酶(Secreted Alkaline Phosphatase SEAP)检测技术,观察转染LRRC19后细胞中转录因子核因子(NuclearFactor NF)-κB和激活蛋白(Activator Protein AP)-1的活性改变,并探讨肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor TNF)α识别LRRC19对NF-κB信号通路的影响.RT-PCR和mRNA原位杂交实验结果显示,LRRC19 mRNA主要在肾组织中表达,并集中于肾小管上皮细胞,在脾和小肠组织中亦有表达;免疫荧光结果显示,FITC标记的LRRC19-V5融合蛋白位于细胞膜上,确定其为跨膜蛋白;LRRC19在细胞内异位表达可以不同程度的增强NF-κB和AP-1的活性,TNFα和IL-1β刺激后,NF-κB活性明显升高,TNFa刺激后表现尤为显著.作为存在于肾小管上皮细胞中的跨膜受体LRRC19,可通过识别病原体分子和致炎细胞因子,介导信号传导,启动相关细胞因子转录,调节肾组织的免疫防御作用. 展开更多

关键词 LRRC19 跨膜蛋白受体 肾小管上皮细胞 肿瘤坏死因子Α 免疫应答

下载PDF 职称材料

大鼠骨髓间质干细胞来源的外切体抑制顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡 被引量：1

17

作者 祝源 杨芳 +6 位作者 张娇 薛建国 尹磊 俞静 贾浩源 纪成 钱晖 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第3期203-206,211,共5页

目的:观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)来源的外切体(exosome)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:原代培养大鼠骨髓MSC并提取外切体鉴定。构建顺铂损伤NRK-52E细胞模型,损伤组为5μmol/L顺铂处理6 h后正... 目的:观察大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)来源的外切体(exosome)对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法:原代培养大鼠骨髓MSC并提取外切体鉴定。构建顺铂损伤NRK-52E细胞模型,损伤组为5μmol/L顺铂处理6 h后正常营养液培养48 h,处理组为顺铂损伤后以100μg/m L外切体共培养48 h。未经任何处理的NRK-52E细胞为对照组。TUNEL-FITC,凋亡双染流式细胞术,蛋白质免疫印迹技术检测各组细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,损伤组NRK-52E细胞肿大,胞核不规则样改变,凋亡细胞增多,凋亡相关蛋白Bax上调而Bcl-2下调;处理组NRK-52E细胞肿大较损伤组缓解,胞核形态改善,凋亡细胞减少,Bax下调且Bcl-2上调。结论:大鼠骨髓MSC来源的外切体对顺铂诱导的NRK-52E细胞凋亡有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 外切体 顺铂 肾小管上皮细胞 损伤 凋亡

下载PDF 职称材料

C3a-C3aR在尿酸促进人肾小管上皮细胞MCP-1表达中的作用 被引量：1

18

作者 尤丹瑜 罗丛伟 万建新 《福建医科大学学报》 北大核心 2015年第6期355-359,共5页

目的探讨尿酸(UA)对人肾小管上皮细胞单核趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及其机制。方法体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2),以不同浓度UA分别作用不同时间,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCP-1的mRNA水平。在UA诱导下,通过针... 目的探讨尿酸(UA)对人肾小管上皮细胞单核趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及其机制。方法体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2),以不同浓度UA分别作用不同时间,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCP-1的mRNA水平。在UA诱导下,通过针对补体C3的小干扰RNA(C3siRNA)转染下调HK-2细胞内源性C3的表达、小分子C3aR阻断剂SB290157阻断C3a-C3aR作用、外源性C3a刺激促进C3aR激活3种方式抑制或激活C3aR的信号通路,并通过实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测其对于MCP-1mRNA表达的影响。结果 150μmol/L UA干预HK-2细胞12h可上调MCP-1mRNA转录水平;C3siRNA转染或C3aR阻断能够抑制被UA上调的MCP-1mRNA的表达;C3a与UA共同进行干预时,显著增强UA对MCP-1mRNA的诱导作用。结论 UA可上调HK-2细胞MCP-1mRNA的表达,其机制可能与UA激活C3或C3aR有关。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 单核趋化蛋白-1 尿酸

下载PDF 职称材料

自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用 被引量：1

19

作者 杨姗 李冠胜 陈雪梅 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期431-438,共8页

目的:探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)凋亡中的作用。方法:培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组(21%O_2)和低氧组(1%O2);根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为:低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚... 目的:探讨自噬在低氧诱导人肾小管上皮细胞株(HK-2)凋亡中的作用。方法:培养HK-2细胞,根据培养环境氧浓度不同分为对照组(21%O_2)和低氧组(1%O2);根据低氧培养时间不同,低氧处理细胞进一步分为:低氧6 h亚组、低氧12 h亚组、低氧18 h亚组和低氧24 h亚组。Western blot检测HK-2细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和凋亡相关蛋白活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase3)表达水平,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡情况;采用低氧诱导稳定表达GFP-LC3的HK-2细胞18 h,在荧光显微镜下观察GFP-LC3自噬小体的变化;进一步采用低氧联合自噬诱导剂雷帕霉素(rapamycin,RP)或自噬抑制剂巴弗洛霉素A1(bafilomycin A1,BAf A1)处理HK-2细胞,细胞分为常氧对照组、常氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组、低氧对照组、低氧+雷帕霉素/或巴弗洛霉素组。Western blot检测Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、P62和cleaved-caspase3表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:与对照组(0.161±0.043)相比较,低氧12 h[(0.315±0.060),P=0.019]、18 h[(0.586±0.063),P=0.000]、24 h[(0.698±0.085),P=0.000]亚组HK-2细胞cleaved-caspase3蛋白表达明显增多;低氧12 h、18 h、24 h亚组HK-2细胞凋亡率分别为(23.633±5.346)%、(25.200±4.782)%、(38.567±8.046)%,较对照组(11.800±3.966)%明显增多(P=0.036,P=0.021,P=0.000)。同时,低氧18 h、24 h亚组HK-2细胞表达Beclin1蛋白[(0.557±0.071),(0.897±0.074)[较对照组(0.249±0.040)明显上调(P=0.001,P=0.000);低氧6 h、12 h、18 h、24 h亚组细胞表达LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白[(1.795±0.143),(2.873±0.078),(3.029±0.089),(3.735±0.059)]较对照组(1.322±0.191)明显上调(P=0.036,P=0.000,P=0.000,P=0.000);细胞表达自噬底物P62蛋白[(0.776±0.061),(0.602±0.119),(0.419±0.117),(0.384±0.068)]较对照组(0.957±0.035)明显下调(P=0.028,P=0.001,P=0.000,P=0.000);低氧组细胞GFP-LC3斑点计数相对值为(40.667±6.028),较对照组(18.667±5.508)明显增� 展开更多

关键词 低氧 人肾小管上皮细胞 自噬 凋亡

下载PDF 职称材料

同位素标签技术在人肾小管上皮细胞蛋白质组学研究中的应用 被引量：1

20

作者 陈永熙 李娅 +5 位作者 张文 陈晓农 王伟铭 张群业 黄秋花 陈楠 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期513-516,共4页

目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴... 目的建立并优化人肾小管上皮细胞蛋白质组学分析所需的相对和绝对定量的同位素标签试剂(iTRAQ)标记技术,为进一步研究奠定基础。方法将人肾小管上皮细胞株HK-2通过细胞裂解、丙酮沉淀、蛋白变性、还原及酶解,最后进行iTRAQ标记和质谱鉴定,研究iTRAQ在HK-2细胞的标记情况和蛋白质组学。结果通过质谱检测,检测到带有iTRAQ标记肽段。随机选取20个前体离子,通过3次重复试验,鉴定出iTRAQ标记多肽肽段分别为17、15和18个,标记效率在75.5%～90.0%,且组间标记效率差异无统计学意义(P>0.05)。结论iTRAQ可以在HK-2细胞中标记效果满意,且重复性较好,为进一步研究肾脏疾病的蛋白质组学奠定了基础。 展开更多

关键词 相对和绝对定量的同位素标签试剂 定量蛋白质组学 人肾小管上皮细胞

下载PDF 职称材料