目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株...目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株与XPF正常表达细胞株的顺铂敏感性;通过β-半乳糖苷酶染色法,检测细胞的衰老程度。结果在肾癌细胞786-0、ACHN和Caki-1中,ACHN细胞的XPF表达水平最高,其顺铂耐药程度也最高。shRNA干扰获得稳定低表达XPF的ACHN细胞,顺铂处理后,其克隆形成率低于对照(P<0.05),细胞凋亡率高于对照,衰老细胞比例也显著高于对照(P<0.01)。结论肾癌化疗不敏感可能与其高表达DNA损伤修复蛋白XPF有关,干预并下调肾癌ACHN细胞XPF表达,可增强顺铂的凋亡诱导效应并加速衰老,从而提高其顺铂敏感性。展开更多
【目的】明确真菌次级代谢产物rasfonin影响舒尼替尼(Sunitinib,ST)诱导的肾癌细胞自噬和凋亡作用机理。【方法】应用MTS(Methanethiosulfonate assay)和克隆形成实验检测rasfonin和舒尼替尼对肾癌细胞ACHN活性和增殖的影响,通过透射电...【目的】明确真菌次级代谢产物rasfonin影响舒尼替尼(Sunitinib,ST)诱导的肾癌细胞自噬和凋亡作用机理。【方法】应用MTS(Methanethiosulfonate assay)和克隆形成实验检测rasfonin和舒尼替尼对肾癌细胞ACHN活性和增殖的影响,通过透射电子显微镜、荧光显微镜、蛋白免疫印迹、免疫荧光方法检测rasfonin和舒尼替尼处理的ACHN细胞自噬、凋亡情况和相关信号通路的变化。【结果】Rasfonin和舒尼替尼能够抑制肾癌细胞ACHN活性和细胞增殖;免疫印迹结果表明,两者均可以引起caspase依赖的凋亡。在rasfonin存在的情况下,不仅舒尼替尼所引起的凋亡和细胞活性丢失明显增加,而且其诱导的自噬流显著提高。无论是rasfonin还是舒尼替尼均明显地抑制哺乳雷帕霉素靶蛋白m TOR(Mammal target of rapamycin)磷酸化,而两者均能促进细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)活性增加。【结论】rasfonin促进了舒尼替尼诱导的细胞自噬和凋亡,提高了舒尼替尼抑制肾癌细胞增殖的活性。展开更多
文摘目的探索DNA损伤修复蛋白XPF表达水平影响肾癌细胞顺铂耐药的作用与机制。方法 Western blot法检测不同肾癌细胞株的XPF蛋白水平;采用shRNA干扰技术,筛选稳定低表达XPF的细胞株;采用克隆形成实验及细胞凋亡检测实验,比较XPF低表达细胞株与XPF正常表达细胞株的顺铂敏感性;通过β-半乳糖苷酶染色法,检测细胞的衰老程度。结果在肾癌细胞786-0、ACHN和Caki-1中,ACHN细胞的XPF表达水平最高,其顺铂耐药程度也最高。shRNA干扰获得稳定低表达XPF的ACHN细胞,顺铂处理后,其克隆形成率低于对照(P<0.05),细胞凋亡率高于对照,衰老细胞比例也显著高于对照(P<0.01)。结论肾癌化疗不敏感可能与其高表达DNA损伤修复蛋白XPF有关,干预并下调肾癌ACHN细胞XPF表达,可增强顺铂的凋亡诱导效应并加速衰老,从而提高其顺铂敏感性。
文摘【目的】明确真菌次级代谢产物rasfonin影响舒尼替尼(Sunitinib,ST)诱导的肾癌细胞自噬和凋亡作用机理。【方法】应用MTS(Methanethiosulfonate assay)和克隆形成实验检测rasfonin和舒尼替尼对肾癌细胞ACHN活性和增殖的影响,通过透射电子显微镜、荧光显微镜、蛋白免疫印迹、免疫荧光方法检测rasfonin和舒尼替尼处理的ACHN细胞自噬、凋亡情况和相关信号通路的变化。【结果】Rasfonin和舒尼替尼能够抑制肾癌细胞ACHN活性和细胞增殖;免疫印迹结果表明,两者均可以引起caspase依赖的凋亡。在rasfonin存在的情况下,不仅舒尼替尼所引起的凋亡和细胞活性丢失明显增加,而且其诱导的自噬流显著提高。无论是rasfonin还是舒尼替尼均明显地抑制哺乳雷帕霉素靶蛋白m TOR(Mammal target of rapamycin)磷酸化,而两者均能促进细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)活性增加。【结论】rasfonin促进了舒尼替尼诱导的细胞自噬和凋亡,提高了舒尼替尼抑制肾癌细胞增殖的活性。
