表达传染性法氏囊病毒超强毒流行株VP2基因重组新城疫病毒LaSota疫苗株的构建 被引量：11

1

作者 葛金英 温志远 +5 位作者 高宏雷 王永 胡森 鲍恩东 王笑梅 步志高 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期243-251,共9页

【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重... 【目的】重组新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)作为新型的活病毒载体疫苗具有巨大的优势和应用前景,本研究旨在探讨新城疫病毒作为防制传染性法氏囊病超强毒(very virulent infectious bursal disease virus,vvIBDV)及新城疫重组二联活病毒载体疫苗的可行性。【方法】采用单股负链RNA病毒反向遗传操作技术,救获野生型NDV LaSota疫苗株rLaSota及表达vvIBDV Gx株VP2基因的重组疫苗株rLaSota-VP2,分别经滴鼻点眼途径免疫SPF雏鸡,免疫后21d分别以vvIBDVGx超强毒和新城疫强毒进行攻击。【结果】rLaSota及表达vvIBDV-VP2基因平均鸡胚致死时间均大于120h,脑内致病指数(ICPI)分别为0.4和0.36,静脉内致病指数(IVPI)均为0;接种后72～96h每毫升尿囊液EID50则分别达到109.0以上。rLaSota-VP2以106.0EID50一次免疫7日龄SPF鸡雏,免疫后3周对新城疫强毒致死攻击100%保护,对vvIBDV攻击免疫保护率达90%以上。【结论】重组病毒rLaSota-VP2保持了LaSota亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病性及遗传稳定性,免疫雏鸡对新城疫强毒和传染性法氏囊病毒超强毒株的致死均形成有效免疫保护。本研究为研制传染性法氏囊病-新城疫重组二联活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 LaSota疫苗株 反向遗传操作 传染性法氏囊病超强毒株 VP2基因

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重组新城疫病毒rL-RVG抑制Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡

2

作者 贡克文 田仪督 +2 位作者 何瑛珏 李洋 步雪峰 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期1485-1493,共9页

目的探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡。方法培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS溶液(对照组)处理HGC-2... 目的探讨重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus,rL-RVG)是否通过Nrf2-GCLC-GPX4通路引发胃癌细胞铁死亡。方法培养人胃癌HGC-27细胞,分别用rL-RVG、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、PBS溶液(对照组)处理HGC-27细胞后,用CCK-8、Transwell侵袭、细胞划痕实验检测胃癌HGC-27细胞的增殖、侵袭、迁移能力。加入铁死亡促进剂(erastin)、核因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)促进剂(TBHQ)及抑制剂(ML385)作为干预组,脂质氧化试剂盒检测各组丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;DCFH-DA荧光探针及流式细胞仪检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量;Western blot、免疫荧光法检测Nrf2-GCLC-GPX4通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,rL-RVG和NDV处理后,细胞的存活率均下降,呈剂量、时间依赖性,且rL-RVG处理组较为显著(P<0.05);NDV和rL-RVG处理组胃癌HGC-27细胞迁移、侵袭能力均受到抑制,后者较前者抑制更明显(P<0.05);与对照组比较,病毒组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量上升(P<0.05),rL-RVG组上升或下降的趋势较NDV组明显,且erastin组SLC7A11、GPX4蛋白表达下降(P<0.05);与对照组比较,TBHQ组、ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05);与rL-RVG组比较,rL-RVG+TBHQ组、rL-RVG+ML385组Nrf2、GCLC、SLC7A11、GPX4蛋白表达分别上升、下降(P<0.05),MDA水平、ROS相对表达量分别下降、上升(P<0.05)。结论重组新城疫病毒(rL-RVG)可通过Nrf2-GCLC-GPX4通路诱导胃癌细胞铁死亡的发生,抑制肿瘤细胞的生长。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 胃癌细胞 铁死亡 核因子E2相关因子2 谷胱甘肽过氧化物酶4

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鸡传染性法氏囊病病毒超强株VP2基因重组新城疫病毒胚胎免疫安全性及效力试验 被引量：5

3

作者 王琪 葛金英 +6 位作者 焦利红 曹有才 李晓艳 马良 马吉飞 王笑梅 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期695-698,共4页

为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指... 为研制能够同时预防传染性法氏囊病(IBD)和新城疫(ND)的疫苗,本研究选用表达IBD病毒(IBDV)超强毒株(vvIBDV)VP2基因的重组ND病毒(NDV)LaSota疫苗株(rL-VP2),测定其半数鸡胚感染量、平均鸡胚致死时间、脑内接种指数和静脉内致病指数等指标,按不同剂量接种18胚龄SPF鸡胚,分别于出雏后第9d、第14d和第21d采血,用微量凝集法和ELISA方法测定血清中抗NDV抗体和抗IBDV抗体水平,并于出雏后28d用NDV强毒(F48E9株)和vvIBDVGx株攻毒,评估重组疫苗的胚胎免疫效果。结果显示:按104EID50/枚剂量进行免疫不会影响SPF鸡胚出雏率和出雏后21d存活率,并且该免疫组雏鸡能够对NDV强毒和vvIBDV攻毒提供安全的免疫保护。 展开更多

关键词 胚胎免疫 重组新城疫病毒 传染性法氏囊病毒超强毒株 VP2基因

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表达传染性喉气管炎病毒gB主要抗原表位区域重组新城疫病毒的构建 被引量：5

4

作者 孙娜娜 王琪 +1 位作者 李慧昕 刘胜旺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期414-417,共4页

为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克... 为构建以新城疫病毒(NDV)为活病毒载体表达传染性喉气管炎病毒(ILTV)g B主要抗原表位区域的重组病毒,本研究以ILTV LJS09株的DNA为模板,通过PCR技术扩增1 323 bp ILTV编码g B主要抗原表位的基因片段(1 bp^440 bp),将其插入到NDV感染性克隆p BR-FL中,构建含有ILTV g B主要抗原基因的NDV c DNA克隆p BR-FL-g B1-440。利用磷酸钙转染法,在辅助质粒p CI-neo-NP、p CI-neo-P和p CI-neo-L的共同作用下,将重组质粒转染于表达T7聚合酶重组痘病毒预感染的BSR-T7/5细胞,获得重组病毒r L-g B1-440。采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明重组病毒中含有相应的外源基因。利用g B的抗血清检测重组病毒中g B的表达,间接免疫荧光试验表明,在感染重组病毒的BSR-T7/5细胞中目的蛋白得到表达。本研究为研制和开发传染性喉气管炎重组新城疫二联活疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 传染性喉气管炎病毒 gB蛋白 主要抗原表位基因

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rNDVIL-29对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响 被引量：5

5

作者 严玉兰 刘沙 +4 位作者 李米 赵英海 金惠 尹超云 步雪峰 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期510-515,共6页

目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,r NDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响。方法:实验分为r NDV IL-29组(r NDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(... 目的:探讨表达IL-29的重组新城疫病毒(recombinant Newcastle disease virus IL-29,r NDV IL-29)对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和细胞凋亡的影响。方法:实验分为r NDV IL-29组(r NDV IL-29感染A549细胞)、NDV组(NDV感染A549细胞)和对照组(PBS)。用Western blotting、RT-PCR、免疫荧光法检测IL-29蛋白及其mRNA的表达;MTT、克隆形成实验及划痕实验检测r NDV IL-29对A549细胞增殖、迁移能力的影响;流式细胞术及Western blotting检测r NDV IL-29对A549细胞凋亡的影响。结果:与NDV组和对照组相比,r NDV IL-29组细胞:(1)IL-29蛋白及其mRNA表达水平显著升高;(2)细胞增殖抑制率明显升高[(56.48±11.89)%vs(42.18±6.18)%,P<0.05],细胞迁移率明显下降[(5.00±4.00)%vs(32.43±3.71)%、(84.57±3.96)%,均P<0.05];(3)Caspase3表达水平明显上调[(29.67±1.53)%vs(18.33±3.06)%、(7.00±6.08)%,均P<0.05],Bcl-2/bax表达水平明显下调[(12.00±2.65)%vs(42.33±5.86)%、(67.00±6.25)%,均P<0.05],细胞凋亡增多。结论:r NDV IL-29抑制肺腺癌A549细胞增殖、迁移,并且促进其凋亡,提示r NDV IL-29可能成为一种很有潜力的抗癌药物。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 白细胞介素-29 肺腺癌 凋亡

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表达鸡传染性支气管炎病毒S基因的重组新城疫病毒构建 被引量：4

6

作者 焦利红 葛金英 +2 位作者 王琪 马文芝 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期334-337,共4页

为构建以新城疫病毒(NDV)为活毒载体表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S基因的重组病毒,本研究利用RT-PCR技术,以IBV的Massachusetts41株RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到IBV S基因(3534bp),将其插入到NDV感染性克隆pBRN-FL中,构建了含有IBV ... 为构建以新城疫病毒(NDV)为活毒载体表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S基因的重组病毒,本研究利用RT-PCR技术,以IBV的Massachusetts41株RNA为模板,通过RT-PCR扩增得到IBV S基因(3534bp),将其插入到NDV感染性克隆pBRN-FL中,构建了含有IBV S基因的重组NDV cDNA克隆pBRN-FL-IBVS。利用磷酸钙转染法,在辅助质粒pBS-NP、pBS-P和pBS-L的共同作用下,将pBRN-FL-IBVS转染表达T7聚合酶重组痘病毒感染的BSR细胞,救获重组NDV(rL-IBVS)。采用RT-PCR检测接种重组病毒的鸡胚尿囊液,结果表明rL-IBVS中含有相应外源基因。IFA试验表明,rL-IBVS可与鸡抗IBV的高免血清发生特异性反应,证明S蛋白在感染的BSR细胞中得到表达。其鸡胚平均致死时间、脑内致病指数和静脉内致病指数等指标显示rL-IBVS保持了亲本疫苗株高滴度的鸡胚生长特性和低致病力特性。本研究采用反向遗传操作技术构建了表达IBV S蛋白的重组NDV,为进一步研制IBV和NDV的重组基因工程活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 传染性支气管炎病毒 S基因

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基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究 被引量：4

7

作者 何金娇 刘雪莹 +6 位作者 吴云舟 郭茉 韩晓辉 尹杰超 安莹 任桂萍 李德山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期485-489,共5页

为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-V P2-IRES-V P2),同时构建表达单拷贝V P2基因的重组NDV(rClo... 为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-V P2-IRES-V P2),同时构建表达单拷贝V P2基因的重组NDV(rClone30-V P2)作为对照。间接免疫荧光试验表明V P2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达。Real-time PCR检测结果表明rClone30-VP2-IRES-V P2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2。生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota(Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制。重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白。本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBD V双拷贝V P2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 VVIBDV VP2基因 IRES

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重组新城疫病毒rNDV-IL15在黑色素瘤治疗中的效果 被引量：3

8

作者 牛泽杉 白福良 +8 位作者 孙田 田辉 尹杰超 曹宏伟 于丹 田贵游 吴云舟 李德山 任桂萍 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期310-315,共6页

为了提高重组新城疫病毒抑制肿瘤的效果,本实验拯救获得了重组新城疫病毒rNDV-IL15。构建prNDV-IL15重组质粒,转染BHK21细胞后,拯救重组病毒rNDV-IL15,并测定病毒生长曲线;rNDV-IL15以0.1 MOI感染B16F10细胞,ELISA法检测细胞上清液中IL1... 为了提高重组新城疫病毒抑制肿瘤的效果,本实验拯救获得了重组新城疫病毒rNDV-IL15。构建prNDV-IL15重组质粒,转染BHK21细胞后,拯救重组病毒rNDV-IL15,并测定病毒生长曲线;rNDV-IL15以0.1 MOI感染B16F10细胞,ELISA法检测细胞上清液中IL15的表达量;MTT法比较rNDV-IL15和rNDV在体外抑制B16F10细胞的效果,并比较了两者在黑色素瘤肿瘤模型中对荷瘤小鼠的治疗效果。结果表明,rNDV-IL15构建并成功拯救;病毒生长曲线表明,插入IL15后对病毒的生长无影响;IL15在细胞上清液中有较高的表达,达到(1 044.3±27.7)ng·mL-1;rNDV-IL15和rNDV对B16F10细胞的抑制率呈时间依赖性,但两者的抑制率无显著差异;与rNDV相比,rNDV-IL15在体内能较明显地抑制肿瘤生长。结果提示,rNDV-IL15是一种更有效的抗肿瘤制剂。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 IL15 rNDV-IL15 黑色素瘤 B16F10 抗肿瘤制剂

原文传递

表达禽腺病毒4型中国流行株Fiber2蛋白重组新城疫病毒的构建与鉴定 被引量：3

9

作者 田开月 张玉菡 +6 位作者 杨盼盼 郭慧芳 李宁 杨霞 边传周 王增 赵军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1697-1702,共6页

利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结... 利用NDV LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,将禽腺病毒4型(FAdV-4)中国流行株的全长Fiber2基因插入到NDV基因组的P和M基因之间,构建并拯救出重组病毒rLaSota-Fiber2。利用RT-PCR和序列测定,以及Western blot对重组病毒进行了鉴定。结果显示,Fiber2基因插入位置和方向正确,Fiber2蛋白得到正确表达,表达形式为可溶的游离形式而非嵌入到NDV颗粒中。第10代重组病毒的鸡胚致病性试验和在鸡胚中的生长特性研究结果显示,重组病毒的半数鸡胚感染量(EID50)最高可达108.5/100μL,鸡胚平均致死时间(MDT)为120 h, 1日龄雏鸡脑内接种指数(ICPI)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)均为0,重组病毒保持了LaSota弱毒疫苗亲本毒株的低致病特性和对鸡胚良好的高滴度生长适应性。重组病毒与亲本LaSota株生长滴度在相近时间达到峰值,生长动力学特性与亲本株无明显差异。本试验构建的表达FAdV-4中国流行株Fiber2基因的重组病毒rLaSota-Fiber2有望为同时防控NDV和FAdV-4的感染提供安全、廉价和高效的辅助工具。 展开更多

关键词 禽腺病毒4型 Fiber2蛋白 重组新城疫病毒 疫苗

原文传递

重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL对人肝癌细胞的协同作用及其机制探讨 被引量：3

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作者 孙田 牛泽杉 +10 位作者 刘雪莹 田贵游 白银 白福良 尹杰超 于丹 吴云舟 李德山 于庆忠 李思明 任桂萍 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期985-992,共8页

为研究重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL蛋白对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用及其机制,首先将pee12.4-hDR5转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选,建立了细胞表面稳定高效表达DR5的HepG2细胞系。利用MTT法检测TRAIL对该细胞和对照HepG2... 为研究重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL蛋白对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用及其机制,首先将pee12.4-hDR5转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选,建立了细胞表面稳定高效表达DR5的HepG2细胞系。利用MTT法检测TRAIL对该细胞和对照HepG2细胞的抑制率,表明TRAIL对该细胞的抑制率显著高于对照HepG2细胞(P<0.01),证明了克隆的hDR5具有生物学活性;与rClone30-hDR5组和TRAIL组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL在体外能更好地抑制HepG2细胞的生长。Annexin V-FITC/PI染色和Quantitative Real-time PCR结果表明,与其他组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL显著提高caspase 3和caspase 8的mRNA表达水平并协同诱导细胞凋亡。以1 MOI感染HepG2细胞,流式细胞仪检测证明,与rClone30相比,rClone30-hDR5能显著诱导hDR5的表达上调,从而增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。综上所述,rClone30-hDR5联合TRAIL在肿瘤治疗方面存在潜在的应用价值。 展开更多

关键词 DR5 TRAIL 重组新城疫病毒 肿瘤治疗

原文传递

置换HN基因对新城疫病毒LaSota株致病力的影响 被引量：2

11

作者 王永 葛金英 +2 位作者 丁玉林 解希帝 步志高 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期638-643,共6页

【目的】新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)在病毒装配、出芽、释放及侵入宿主细胞的过程中发挥关键作用,但HN对病毒致病力的影响程度尚不完全清楚。【方法】为探讨这一问题,本研究以中等毒力毒株Mukteswar的HN基因替换... 【目的】新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)和融合蛋白(F)在病毒装配、出芽、释放及侵入宿主细胞的过程中发挥关键作用,但HN对病毒致病力的影响程度尚不完全清楚。【方法】为探讨这一问题,本研究以中等毒力毒株Mukteswar的HN基因替换我国广泛应用的LaSota疫苗株HN基因,通过反向遗传操作技术拯救出嵌合病毒(rL-MuHN)。【结果】rL-MuHN红细胞吸附能力较亲本株rLaSota无显著升高,具有相似的细胞融合活性;嵌合病毒ICPI由rLaSota株的0.36降为0,MDT≥90,IVPI=0与rLaSota株相同,保持典型低致病力缓发型特点不变。进一步以Mukteswar株F基因替换rL-MuHN的F基因,拯救出F和HN双基因替换嵌合病毒rL-MuFHN,尽管该病毒的细胞融合能力显著提高,但其MDT、ICPI和IVPI分别为98h,0.59和0,显示F和HN双基因替换仍未能使嵌合新城疫病毒rL-MuFHN的致病力达到中等毒力毒株Mukteswar(MDT、ICPI及IVPI分别为46h、1.32和0.64)的水平。【结论】试验结果表明,F及HN囊膜蛋白基因之外的病毒基因组骨架背景对病毒的致病性同样具有重要的决定性意义,不同HN蛋白对嵌合病毒的致病能力的影响不同,与供体毒株毒力无关;以流行野毒株HN替代rLaSota疫苗株构建抗原针对性更强的弱毒疫苗株存在技术可行性。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 F蛋白 HN蛋白 致病力

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新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展 被引量：2

12

作者 李新生 闫若潜 +2 位作者 陈红英 郝慧芳 夏春 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期1-5,共5页

在综述新城疫病毒(NDV) 的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的感染性克隆的基础上,着重介绍了以NDV作载体,将报告基因、功能基因包括鸡传染性法氏囊病毒VP2基因及流感病毒HA基因等插入NDV基因组的不... 在综述新城疫病毒(NDV) 的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的感染性克隆的基础上,着重介绍了以NDV作载体,将报告基因、功能基因包括鸡传染性法氏囊病毒VP2基因及流感病毒HA基因等插入NDV基因组的不同位置构建重组新城疫病毒,并对外源基因进行成功表达的研究进展。同时对DNV作为新的疫苗载体表达外源基因的可行性及未来应用前景进行了初探。 展开更多

关键词 新城疫病毒 研究进展 疫苗载体 鸡传染性法氏囊病毒 分子生物学特征 外源基因 感染性克隆 VP2基因 NDV 操作技术 反向遗传 报告基因 HA基因 流感病毒 功能基因 基因组 DNV 表达

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重组新城疫病毒IL29抑制人胃癌细胞系BGC的增殖与迁移 被引量：2

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作者 尹超云 张垚 +4 位作者 陈振威 张安伟 张旋风 张日亭 步雪峰 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第3期368-373,共6页

目的探讨表达IL-29的重组新城疫病毒Lo Sota株(rL-IL29)对人胃癌BGC细胞增殖及迁移的影响及其机制。方法将体外培养的人胃癌BGC细胞分为对照组、rL-IL29组和Lo Sota株新城疫病毒(NDV)组,分别经PBS、rL-IL29及NDV感染处理后进行下一步实... 目的探讨表达IL-29的重组新城疫病毒Lo Sota株(rL-IL29)对人胃癌BGC细胞增殖及迁移的影响及其机制。方法将体外培养的人胃癌BGC细胞分为对照组、rL-IL29组和Lo Sota株新城疫病毒(NDV)组,分别经PBS、rL-IL29及NDV感染处理后进行下一步实验。蛋白质印迹检测BGC细胞中IL-29、NDV、P-ERK、MMP2、p-AKT蛋白的表达;CCK8法、划痕试验及Transwell小室法侵袭实验检测胃癌BGC细胞的增殖、迁移能力。结果IL-29蛋白仅在rL-IL29组表达,NDV蛋白在IL-29组及NDV组均稳定表达,且明显高于PBS组(P<0.05);rL-IL29感染BGC细胞后BGC细胞的增殖及迁移能力明显减弱,且rL-IL29的抑制较NDV组作用更强;BGC细胞经rL-IL29感染后P-ERK、MMP2(66 ku/72 ku)、p-AKT蛋白表达较对照组及NDV组明显减弱(P<0.05)。结论rL-IL29抑制胃癌BGC细胞的增殖、侵袭及迁移可能与ERK,AKT等信号通路相关。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 白细胞介素-29 胃癌BGC细胞 增殖 迁移

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重组新城疫病毒对肺癌荷瘤鼠的治疗效果研究 被引量：2

14

作者 李德山 张旭 +4 位作者 刘云野 田贵游 孙田 安莹 陈睿 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1-8,17,共9页

新城疫病毒用于肿瘤治疗具有良好靶向性和安全性,在众多溶瘤制剂中有独特优势。试验通过反向遗传操作技术成功拯救3株重组新城疫病毒r Clone30-IL2、r Clone30-P53和r Clone30-P53-IL2。经RT-PCR鉴定,表明插入新城疫病毒基因组中IL2、P5... 新城疫病毒用于肿瘤治疗具有良好靶向性和安全性,在众多溶瘤制剂中有独特优势。试验通过反向遗传操作技术成功拯救3株重组新城疫病毒r Clone30-IL2、r Clone30-P53和r Clone30-P53-IL2。经RT-PCR鉴定,表明插入新城疫病毒基因组中IL2、P53基因和P53-IL2双基因均插入预期位置,未发生突变。重组新城疫病毒在DF-1细胞中生长曲线表明,其与原代毒株生长特征相同。重组病毒在鸡胚中增殖稳定性试验表明,外源基因插入未影响重组病毒在鸡胚中增殖能力。体外肿瘤细胞生长抑制试验表明,与空载体r Clone30相比,r Clone30-IL2、r Clone30-P53和r Clone30-P53-IL2对LLC肺肿瘤细胞生长抑制效果更显著(P<0.01),呈剂量依赖性。体内抑瘤试验结果表明,r Clone30-IL2、r Clone30-P53和r Clone30-P53-IL2与尿囊液相比对肿瘤抑制效果差异极显著(P<0.01)。r Clone30-P53-IL2与r Clone30-IL2和rClone30-P53相比,对肿瘤抑制效果差异显著(P<0.05)。小鼠生存率结果表明,经rClone30-P53-IL-2治疗小鼠存活率最高,与其他组相比差异极显著(P <0.01)。综上所述,联合P53和IL2重组新城疫病毒对肺肿瘤治疗效果优于单一抗肿瘤相关因子。研究为筛选先导病毒治疗肺癌奠定基础。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 反向遗传操作技术 肺肿瘤

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重组新城疫病毒对肝癌肺转移鼠的治疗效果 被引量：1

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作者 李德山 杨甲瑞 +5 位作者 苏明雪 吴红松 刘天艳 张宇 刘涵 王凯 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期62-70,共9页

文章利用重组新城疫病毒(rNDA)治疗肝癌肺转移鼠,将免疫调节基因白细胞介素2(IL2)插入rNDV基因组,拯救获得rNDV-IL2。MTT法检验rNDV-IL2对肝癌HepG2细胞体外抑制效果。通过小鼠尾静脉注射H22肝癌细胞,构建肝癌细胞肺转移模型,腹腔注射r... 文章利用重组新城疫病毒(rNDA)治疗肝癌肺转移鼠,将免疫调节基因白细胞介素2(IL2)插入rNDV基因组,拯救获得rNDV-IL2。MTT法检验rNDV-IL2对肝癌HepG2细胞体外抑制效果。通过小鼠尾静脉注射H22肝癌细胞,构建肝癌细胞肺转移模型,腹腔注射rNDV和rNDV-IL2,治疗肝癌肺转移模型小鼠。结果表明,rNDV-IL2有效感染HepG2细胞,表达外源基因IL2并抑制HepG2细胞增殖。重组新城疫病毒rNDV-IL2治疗试验动物后,体内IL2基因表达量提高,重组新城疫病毒有效控制转移灶形成,且显著促进T细胞增殖,提高试验动物存活率,未治疗组、rDNV载体治疗组和rNDV-IL2治疗组30d成活率分别为0、50%和77.8%。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 IL2 H22 肝癌肺转移模型

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新城疫病毒疫苗株F蛋白裂解位点改造对诱导HepG2细胞发生自噬的影响 被引量：1

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作者 吴云舟 安莹 +11 位作者 孙田 何金娇 王卉 朱升龙 田贵游 尹杰超 张天援 牛泽杉 倪霁 曲素素 刘畅 李德山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期698-701,共4页

新城疫病毒(NDV)通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解... 新城疫病毒(NDV)通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR↓L突变为强毒株的GRRQRR↓F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF。分别将Clone30野生型病毒株rC30-wt与rC30-FmF感染HepG2肝癌细胞,通过透射电镜检测细胞超微结构显示,rC30-FmF感染4 h后细胞内出现大量自噬小体及自噬溶酶体。通过western blot检测自噬标志蛋白LC-3 II表明,rC30-FmF感染4 h后LC3II表达量显著上调,与rC30-wt对照组相比差异极显著(p<0.01)。研究表明,rC30-FmF可以在感染早期增加HepG2细胞自噬程度。从而初步证明F蛋白的裂解位点在诱导HepG2细胞自噬过程中具有关键作用。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 F蛋白 自噬

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荷IL-12新城疫病毒治疗结肠癌的实验及其机制探讨 被引量：1

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作者 王凤娇 韩继武 王大秀 《现代肿瘤医学》 CAS 北大核心 2021年第5期761-765,共5页

目的:探讨荷IL-12新城疫病毒rClone30-IL-12瘤内注射治疗结肠癌的作用效果及可能机制。方法:RT-PCR法鉴定病毒中IL-12;构建荷CT26细胞的结肠癌模型,将荷瘤小鼠随机分为rClone30-IL-12组、奥沙利铂(OXA)组、磷酸盐缓冲液(PBS)组;给药后... 目的:探讨荷IL-12新城疫病毒rClone30-IL-12瘤内注射治疗结肠癌的作用效果及可能机制。方法:RT-PCR法鉴定病毒中IL-12;构建荷CT26细胞的结肠癌模型,将荷瘤小鼠随机分为rClone30-IL-12组、奥沙利铂(OXA)组、磷酸盐缓冲液(PBS)组;给药后隔天记录瘤体直径(mm)、小鼠质量(g)和日常生活状态等;解剖脾脏、瘤体并记录瘤体质量(g);流式检测荷瘤小鼠脾脏NK细胞的表达情况。结果:病毒含IL-12基因;rClone30-IL-12组和OXA组荷瘤小鼠平均瘤体体积、瘤体质量相较于PBS组明显下降(P<0.01、P<0.01,P<0.01、P<0.05);OXA组荷瘤小鼠平均质量相较于rClone30-IL-12组和PBS组明显下降(P<0.01、P<0.01);rClone30-IL-12组荷瘤小鼠脾脏中NK细胞的比例显著高于PBS组和OXA组。结论:瘤内注射rClone30-IL-12可有效抑制结肠癌细胞的生长,其机制可能与新城疫病毒自身溶瘤作用及rClone30-IL-12释放活性IL-12刺激NK细胞的活化有关系;与化疗药物OXA相比,在相似临床效果的前提下, rClone30-IL-12的毒副反应更小。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 结肠癌 白介素-12 NK细胞

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携带CD自杀基因NDV重组病毒对小鼠肝癌细胞转移模型的治疗效果 被引量：1

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作者 尹杰超 苏明雪 +9 位作者 刘天艳 杨甲瑞 尹祺 黄鹤 张宇 曹玉凯 胡爽 孙锐 李思雨 李德山 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期28-39,共12页

采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,CD)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-FC)条件... 采用反向遗传操作技术构建新城疫病毒基因组NP/P 位点表达胞嘧啶脱氨酶(Cytosine deaminase,CD)基因弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD和中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD。MTT检测结果表明,在协同5-氟胞嘧啶(5-Fluorocytosine,5-FC)条件下,两株重组新城疫病毒可在体外有效杀伤人肝癌细胞HepG2。通过Balb/c鼠尾静脉注射小鼠肝癌细胞H22构建小鼠肝癌细胞转移模型,经重组病毒协同5-FC联合治疗,荷瘤小鼠转移肿瘤体积显著缩小、肿瘤组织出现明显凋亡与坏死。体内试验结果表明,中毒力重组新城疫病毒rAnhinga-CD抑瘤效果优于弱毒力重组新城疫病毒rClone30-CD。 展开更多

关键词 肝癌 肿瘤转移 重组新城疫病毒 CD/5-FC系统 反向遗传操作技术

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表达IBDV鸡源中和抗体的重组NDV的构建及免疫效果的探究

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作者 孙锐 姜明 +10 位作者 曹玉凯 刘天艳 郭笑辰 孙旭 周金鑫 王楠 康凯 尹杰超 任桂萍 肖伟 李德山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期479-486,共8页

为研制预防新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)两种病毒病的疫苗,本研究通过基因工程抗体和病毒反向遗传操作技术,以NDV LaSota株为载体,在病毒基因组的不同部位,分别或同时插入具有中和活性的鸡源IBDV抗体重链(H)或轻链(L)片段,... 为研制预防新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)两种病毒病的疫苗,本研究通过基因工程抗体和病毒反向遗传操作技术,以NDV LaSota株为载体,在病毒基因组的不同部位,分别或同时插入具有中和活性的鸡源IBDV抗体重链(H)或轻链(L)片段,构建并拯救出重组病毒,分别命名为rNDV-IRES-H-L(P/M)、rNDV-H(NP/P)-L(P/M)、rNDV-L(NP/P)-H(P/M)、rNDV-H(P/M)、rNDV-H(NP/P),并对其进行HA、TCID50、EID50、MDT、ICPI等试验以检测上述重组病毒的生物活性。结果显示,重组病毒不仅保持了其亲本病毒(NDV LaSota株)的感染能力而且还保持了其弱毒株的生物学特性。生长曲线结果显示,重组病毒与亲本NDV生长特性基本一致,表明外源基因的插入对病毒的复制能力无影响。ELISA和western blot结果显示rNDV-H(NP/P)、rNDV-H(P/M)中的H基因,rNDV-IRES-H-L(P/M)、rNDV-H(NP/P)-L(P/M)、rNDV-L(NP/P)-H(P/M)中的H和L基因均获得了表达,且rNDV-H(P/M)中的H基因和rNDV-L(NP/P)-H(P/M)中的H和L基因表达量高。用表达量高的重组病毒接种14日龄SPF鸡,分别检测其诱导SPF鸡NDV和IBDV抗体的产生情况。结果显示,在NDV抗体水平方面:HI实验结果表明重组病毒抗体效价均能在14 d达到保护临界值(4 log2);在IBDV抗体水平方面:ELISA结果表明重组病毒均能产生IBDV抗体。利用上述表达量高的重组病毒对人工感染IBDV(经典株BC6/85)的SPF鸡进行免疫保护试验,结果表明rNDV-H(P/M)的免疫保护效果要好于卵黄抗体和rNDV-L(NP/P)-H(P/M)。本研究获得了表达IBDV抗体的重组NDV即rNDV-H(P/M),为利用NDV载体表达本动物源抗体提供了实验依据。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 IBDV抗体 卵黄抗体

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rL-RVG通过α7烟碱型乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制

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作者 步雪峰 章安伟 +4 位作者 尹超云 张烜烽 陈正威 张日婷 严玉兰 《基础医学与临床》 CSCD 2019年第5期623-629,共7页

目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑... 目的探讨表达狂犬病毒疫苗糖蛋白的重组新城疫病毒(rL-RVG)通过乙酰胆碱受体诱导胃癌细胞凋亡的可能机制。方法将对数增殖期的胃癌细胞系SGC随机分成rL-RVG、新城疫病毒(NDV)组、PBS组,并同时分别设α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)抑制剂(MLA)及激动剂(ACB)预处理组。病毒感染24 h后,CCK8法测定病毒对SGC增殖影响;蛋白印迹检测α7-nAChR、RVG、NDV;凋亡蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2;P-ERK、ERK的表达。免疫荧光法测定P-ERK表达。结果随着rL-RVG、NDV病毒液浓度增加,胃癌细胞活力下降,rL-RVG在10^(-2)稀释倍数时抗增殖作用显著(P<0.05);病毒组凋亡相关蛋白cleved-caspase-3、BAX/BCL-2相对表达量较PBS组明显升高,且rL-RVG组较NDV组及PBS组升高明显,乙酰胆碱受体抑制剂预处理后rL-RVG组、NDV组及PBS组凋亡蛋白水平明显增高,胆碱受体激动剂预处理组凋亡蛋白表达水平明显下降(P<0.05);P-ERK在病毒组表达下降,且rL-RVG组较NDV组更低,乙酰胆碱受体抑制剂、激动剂预处理后分别下降、上升(P<0.05)。结论rL-RVG通过α7-nAChR诱导胃癌细胞系SGC凋亡的机制之一是抑制ERK通路。 展开更多

关键词 重组新城疫病毒 狂犬疫苗糖蛋白 胃癌 烟碱型乙酰胆碱受体 ERK

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