1种新型冠状病毒核酸检测试剂的性能验证 被引量：7

1

作者 张云丽 王鑫 +2 位作者 邵玲 曲波 赵鸿梅 《临床检验杂志》 CAS 2020年第11期827-830,共4页

目的验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》,使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品,依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能... 目的验证一种新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测试剂盒的检测性能。方法依据CNAS-GL039《分子诊断检验程序性能验证指南》,使用2019-nCoV RNA液体性能验证参考品,依次对实时荧光RT-PCR试剂的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力进行验证及评价。结果实时荧光RT-PCR试剂检测2019-nCoV RNA的符合率为100%,检出限为125 copies/mL。该试剂检测人冠状病毒HCoV-OC43、人冠状病毒HCoV-HKU1、人冠状病毒HCoV-229E、人冠状病毒HCoV-NL63、SARS冠状病毒、中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肠道病毒、肺炎支原体、EB病毒、人巨细胞病毒和结核分枝杆菌无交叉反应;2.0×10^3 copies/mL和2.0×105 copies/mL的精密度参考品N基因检测的批内变异系数(CV)为0.70%及1.36%,批间CV为1.17%及1.72%;ORF1ab基因的批内CV为0.48%及0.52%,批间CV为1.36%及2.39%;加入内源性干扰物血红蛋白及清蛋白、外源性干扰物利巴韦林及阿奇霉素对2019-nCoV RNA的检测结果无影响。结论该试剂检测2019-nCoV RNA的符合率、检出限、交叉反应、精密度和抗干扰能力均符合临床分子生物学扩增检验的要求,可为临床提供可靠依据。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 核酸检测 性能验证 实时荧光聚合酶链反应

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柯萨奇病毒A组5型实时荧光RT-PCR检测方法的建立与评价 被引量：1

2

作者 罗娟 田维霞 +8 位作者 李永文 宋光敏 姚淼 陈佳丽 胡雨萌 刘娇阳 罗南宁 艾远航 吴凯峰 《国际检验医学杂志》 CAS 2023年第7期803-807,共5页

目的建立柯萨奇病毒A组5型(CVA5)特异的一步法实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测方法。方法以流行于遵义地区的CVA5病毒株和NCBI基因库中随机下载的CVA5 VP1基因序列作为参考序列,分析这些序列的保守区域,在其保守区设计特异... 目的建立柯萨奇病毒A组5型(CVA5)特异的一步法实时荧光反转录聚合酶链反应(RT-PCR)核酸检测方法。方法以流行于遵义地区的CVA5病毒株和NCBI基因库中随机下载的CVA5 VP1基因序列作为参考序列,分析这些序列的保守区域,在其保守区设计特异性的引物与Taqman探针,建立检测CVA5的一步法实时荧光RT-PCR。通过构建含CVA5 VP1保守区域的重组质粒,绘制标准曲线,并对检测方法的灵敏度、特异性、重复性及临床样本检出限进行评价。利用该方法对遵义地区273份未明确分型的肠道病毒阳性样本进行检测,将检出的部分CVA5阳性产物进行测序。结果成功建立一种基于实时荧光RT-PCR的CVA5检测方法,该方法在10^(4)~10^(9)copy/mL范围内具有良好的线性关系(R 2>0.999),平均扩增效率为102.26%。灵敏度高,对临床样本的检出限为103copy/mL。该方法的特异性强,与柯萨奇病毒A组2型(CVA2)、柯萨奇病毒A组4型(CVA4)、柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、丙型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒和鼻病毒等均不发生交叉反应。重复性实验的变异系数低于1.5%。273份未明确分型肠道病毒阳性样本中共检出25份CVA5,占未明确分型阳性样本的9.16%。结论该研究建立的一步法CVA5RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于CVA5的检测。 展开更多

关键词 柯萨奇病毒A5 实时荧光反转录聚合酶链反应 肠道病毒 手足口病 疱疹性咽峡炎

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新型冠状病毒核酸提取方法的性能评价及临床应用 被引量：2

3

作者 吴永彬 万颖 +2 位作者 蒋红玲 张晶 辛杰 《检验医学与临床》 CAS 2021年第6期725-728,共4页

目的评价3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法采用目前临床常用的裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸,通过实时荧光反转录聚合酶链反应及自建检测系统检测SARS-CoV-2核酸[开放阅读框(ORF)1a... 目的评价3种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸提取方法的分析性能及临床应用价值。方法采用目前临床常用的裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸,通过实时荧光反转录聚合酶链反应及自建检测系统检测SARS-CoV-2核酸[开放阅读框(ORF)1ab、核衣壳蛋白(N)],评价3种核酸提取方法下的检测精密度、正确度、最低检测限等性能指标。将3种核酸提取方法应用于17份新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例标本的检测,分析其临床应用价值。结果3种核酸提取方法下检测结果的重复性精密度和中间精密度、正确度均通过验证,可满足临床需求。采用裂解法、柱提法、磁珠法提取核酸时的最低检测限(Ct值)分别是37.42、37.87、39.61,均符合厂家声明的最低检测限。在应用于临床标本检测时,3种核酸提取方法下的检测结果两两之间均呈良好的线性关系(P<0.05),其中,采用柱提法和磁珠法提取核酸时的检测结果相关性最好(r=0.905,P<0.001)。3种核酸提取方法下的靶标(ORF1ab+/N-、ORF1ab-/N+、ORF1ab+/N+)检出率比较,差异无统计学差异(P>0.05)。结论裂解法、柱提法和磁珠法提取SARS-CoV-2核酸在自建检测系统中的分析性能可接受,均可满足临床对SARS-CoV-2的检测需求。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 核酸提取 实时荧光反转录聚合酶链反应

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基于COVID-19确诊患者临床多种生物样本监测2019-nCoV RNA比对研究

4

作者 张弛 宋玉霞 +5 位作者 李远达 屈晓娟 蔺志强 易嘉敏 王珂 林国跃 《新疆医学》 2021年第7期776-779,824,共5页

目的探讨冠状病毒病(corona virus disease 2019,COVID-19)患者不同部位核酸检测阳性率及其影响因素。方法应用2019-nCoV ORF1ab/N基因双重实时荧光PCR技术对新疆维吾尔自治区第六人民医院2020年1月31日-2月19日定点收治住院的46例COVID... 目的探讨冠状病毒病(corona virus disease 2019,COVID-19)患者不同部位核酸检测阳性率及其影响因素。方法应用2019-nCoV ORF1ab/N基因双重实时荧光PCR技术对新疆维吾尔自治区第六人民医院2020年1月31日-2月19日定点收治住院的46例COVID-19患者不同部位样本进行2019-nCoV核酸检测,分析比较咽拭子、痰液、粪便的病毒核酸检测阳性率。结果46例COVID-19患者共检测咽拭子246人次,痰液18人次,粪便15人次,其核酸检测阳性率咽拭子43.90%(108/246)、痰液33.33%(5/15)、粪便38.89%(7/18),咽拭子检出阳性率高于痰液及粪便,但三者阳性率差异无统计学意义(P>0.05);对疑难危重型患者有针对性的重点同时采集2种不同生物样本进行2019-nCoV核酸检测,发现10例咽拭子/粪便样本检测阳性率80.00%(8/10)/70.00%(7/10),比4例咽拭子/痰液样本75.00%(3/4)/50.00%(2/4)和2例粪便/痰液样本0.0%(0/2)/50.00%(1/2)同时检测效果明显的高,经Fisher精确检验组内比较无统计学意义(P>0.05)。结论重点监测COVID-19患者选择咽拭子或痰液样本就可以及时明确临床诊断、预估病情进展及预后,对已确诊的COVID-19患者同时采集不同部位样本反复监测2019-nCoV RNA其临床诊断意义不大。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 新型冠状病毒肺炎 实时荧光逆转录聚合酶链反应 核酸 痰液 咽拭子 粪便

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持家基因作为相对定量内标物的稳定性比较 被引量：24

5

作者 朱芷葳 董常生 《生物技术通讯》 CAS 2006年第5期807-809,共3页

定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,定量检测时常用编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、28S和18SrRNA等的持家基因作为内部参照,这些基因被认为在某些类型细胞中的表达是恒定的。近年来,很多研究者发现上述持家... 定量PCR是在PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,定量检测时常用编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶、β-肌动蛋白、28S和18SrRNA等的持家基因作为内部参照,这些基因被认为在某些类型细胞中的表达是恒定的。近年来,很多研究者发现上述持家基因的表达水平并不稳定,利用它们作为内标来定量并不准确。因此,在进行定量实验时应选择适当的2种或2种以上的内参基因,以减少检测标本间的差异。 展开更多

关键词 实时荧光定量反转录PCR 持家基因 定量检测

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2014年厦门地区市售牡蛎诺如病毒污染状况调查分析 被引量：7

6

作者 柯明月 王坤明 +3 位作者 陈佳璐 蔡尽忠 曾妍 李蓉 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第10期1634-1637,共4页

目的调查2014年厦门地区市售牡蛎中GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的污染状况,为食用诺如病毒污染的牡蛎引起的胃肠炎提供预警信息和防控建议。方法 2014年1月-2014年11月对厦门地区市售牡蛎进行连续采样,利用实时荧光定量RT-PCR法对样品中诺如... 目的调查2014年厦门地区市售牡蛎中GⅠ型、GⅡ型诺如病毒的污染状况,为食用诺如病毒污染的牡蛎引起的胃肠炎提供预警信息和防控建议。方法 2014年1月-2014年11月对厦门地区市售牡蛎进行连续采样,利用实时荧光定量RT-PCR法对样品中诺如病毒进行检测,确定牡蛎中诺如病毒污染状况及基因型分布状况。结果 198份牡蛎样品中诺如病毒总检出率为22.7%,GⅠ型No Vs检出率为6.1%,GⅡ型No Vs检出率为9.1%,GⅠ型和GⅡ型No Vs同时检出率为7.1%;消化腺中诺如病毒RNA载量水平为400 copy/g^485 000 copy/g,均值为9 500 copy/g。结论 2014年厦门地区市售牡蛎的诺如病毒污染情况较严重,GⅠ型和GⅡ型No Vs均有污染,建议相关部门采取措施,降低人群感染诺如病毒的风险。 展开更多

关键词 厦门 市售牡蛎 诺如病毒 实时荧光定量反转录-聚合酶链式反应 污染状况 基因分型

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基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法的建立

7

作者 李浪 古莉冰 +6 位作者 朱丽 何建安 叶颖 张然 李华文 李福缘 顾大勇 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第3期358-364,共7页

目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果... 目的建立基于直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术的寨卡病毒快速检测方法。方法采用特殊功能的DNA聚合酶,以及优选PCR增强剂,以此建立直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测5种样本(全血、血清、唾液、咽拭子和尿)的方法。结果5种样本检测限分别为血清103 PFU/mL,尿、咽拭子和唾液102 PFU/mL,全血104 PFU/mL,标准曲线的拟合优度的可决系数均在0.98以上,扩增效率均在90%~110%;寨卡病毒核酸成功扩增,非寨卡病毒核酸均未能扩增;尿、全血和唾液样本的重复性实验中106 PFU/mL和102 PFU/mL两个浓度的6个重复Ct值的变异系数均<5%。该研究建立的直扩RT-PCR技术的寨卡病毒检测方法与常规RT-PCR技术的检测结果一致,8个寨卡病毒样本,均只检测出2个血清样本,其余62个非寨卡病毒样本及12个阴性样本均未得到扩增。结论成功建立基于直扩RT-PCR技术的寨卡病毒快速检测方法,该方法简便快捷且灵敏度高、特异度强。 展开更多

关键词 寨卡病毒 直扩实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术 DNA聚合酶

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阿龙山病毒及松岭病毒多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立

8

作者 李德 殷启凯 +10 位作者 侯泽英 王瑞晨 张维嘉 付士红 何英 聂凯 梁国栋 许松涛 李樊 李兴洲 王环宇 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第1期74-78,共5页

目的 建立一种多重实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(多重实时qRT-PCR)法,用于阿龙山病毒(Alongshan virus,ALSV)及松岭病毒(Songling virus,SGLV)核酸的快速检测。方法 针对ALSV NS 3基因和SGLV S基因保守区设计特异性引物及TaqMan探... 目的 建立一种多重实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(多重实时qRT-PCR)法,用于阿龙山病毒(Alongshan virus,ALSV)及松岭病毒(Songling virus,SGLV)核酸的快速检测。方法 针对ALSV NS 3基因和SGLV S基因保守区设计特异性引物及TaqMan探针,建立针对2种病毒的多重实时qRT-PCR检测方法,评价方法的特异性、灵敏度和重复性,并应用蜱标本对该方法进行应用评价。结果 该检测方法与森林脑炎病毒等其他6种虫媒病毒无交叉反应,灵敏度达1×101拷贝/μl,重复性检测的循环阈值(Ct)变异系数均<2.00%;运用该方法,从2019年黑龙江省采集的30组蜱标本中检出2组ALSV阳性,1组SGLV阳性。经验证,该方法与普通PCR方法检测结果的一致性为100%。结论 建立了敏感性高、特异性好的ALSV和SGLV多重实时qRT-PCR快速检测方法。 展开更多

关键词 阿龙山病毒 松岭病毒 多重实时荧光定量反转录聚合酶链式反应 核酸检测

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实时荧光定量PCR测定食管癌VEGF-C和VEGFR-3基因表达 被引量：3

9

作者 卢培 陆慧琦 +3 位作者 韩焕兴 朱学源 黄秋芳 龚炜 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第5期355-360,共6页

目的建立测定血管内皮生长因子-C（VEGF-C）mRNA和血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）,探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平。方法分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD1... 目的建立测定血管内皮生长因子-C（VEGF-C）mRNA和血管内皮生长因子受体-3（VEGFR-3）mRNA的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）,探讨其在食管癌组织及其癌旁组织中的表达水平。方法分别以自行构建和克隆的pMD18-VEGF-C和pMD18-VEGFR-3质粒作为定量模板,用循环阈值（Ct）定量起始的模板,在荧光TaqMan方法的基础上建立了测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR,并分别测定了40例食管癌组织及其癌旁组织中VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平。结果VEGF-CmRNA和VEGFR-3 mRNA测定的线性范围均为10^3-10^8拷贝/μg总RNA;VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA高、低值的批内、批间变异系数（CV）在7.07%-12.49%之间。VEGF-C mRNA主要表达在癌组织中,而VEGFR-3mRNA在癌组织与癌旁组织中表达无差异;VEGF-C mRNA与VEGFR-3 mRNA在癌组织与癌旁组织中表达存在相关性;24例淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA水平与16例无淋巴结转移食管癌患者癌组织及其癌旁组织存在显著差异,提示有淋巴结转移的食管癌组织及其癌旁组织VEGF-C和VEGFR-3基因表达水平上调。VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的表达水平与食管癌临床病理分期有密切关系。结论我们建立的测定VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA的实时FQ-RT-PCR灵敏、稳定、重现性好,可供VEGF-C、VEGFR-3基因表达的临床检测和研究。VEGF-C mRNA和VEGFR-3 mRNA基因表达水平可作为食管癌淋巴结转移的预测指标,亦可作为分子水平上判定食管癌临床分期的辅助指标之一。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3 食管癌 淋巴结转移 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

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实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测结肠癌中Syndecan-1 mRNA和HPA-1 mRNA的表达及临床意义 被引量：3

10

作者 王贺 司君利 +3 位作者 张修振 亓玉琴 钮自宇 周长宏 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第3期310-315,共6页

背景与目的:侵袭转移是导致结肠癌死亡率增加的主要原因,如何阻断肿瘤的侵袭转移成为目前研究的热点。本研究旨在检测Syndecan-1基因和HPA-1基因在结肠癌组织中的表达水平,探讨二者与结肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:用实时荧光定量... 背景与目的:侵袭转移是导致结肠癌死亡率增加的主要原因,如何阻断肿瘤的侵袭转移成为目前研究的热点。本研究旨在检测Syndecan-1基因和HPA-1基因在结肠癌组织中的表达水平,探讨二者与结肠癌侵袭转移及预后的关系。方法:用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测49例结肠癌、49例配对的癌旁组织(距癌2cm)和49例配对远离结肠癌的手术切缘正常组织(距癌5cm以上)的Syndecan-1和HPA-1基因的表达水平,分析二者与结肠癌临床病理特征的关系。结果:结肠癌中HPA-1mRNA的表达水平(40.56±11.75)显著高于癌旁组织(18.28±11.33)和正常组织(10.80±10.20)(P均<0.001),癌旁组织明显高于正常组织(P<0.05);正常结肠组织中Syndecan-1mRNA表达水平(61.21±12.96)显著高于癌旁组织(14.35±11.06)和结肠癌组织(10.12±8.58)(P均<0.001),癌旁组织明显高于结肠癌组织(P<0.05)。Syndecan-1mRNA的表达减弱和HPA-1的表达增强与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期显著相关(P均<0.05)。Spearman等级相关分析证明了Syndecan-1mRNA和HPA-1的表达呈明显负相关(r=-0.405,P<0.05)。结论:Syndecan-1mRNA在结肠癌组织中呈低表达,HPA-1mRNA在结肠癌组织中呈高表达,且Syndecan-1mRNA的表达减弱与HPA-1的表达增强可促进结肠癌的侵袭转移。联合检测Syndecan-1mRNA及HPA-1mRNA对于指导结肠癌临床治疗及判断预后有重要价值。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 肿瘤侵袭转移 预后 SYNDECAN-1 HPA-1 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

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IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在多囊卵巢综合征大鼠模型卵巢组织中的表达及意义 被引量：3

11

作者 刘莉 熊露 +1 位作者 胡雅君 李金丽 《中国妇幼保健》 CAS 2019年第5期1152-1155,共4页

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型的卵泡发育过程中的作用。方法采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,测定卵巢相对质量、卵巢HE染色、血清性激素水平,实时荧光逆转录... 目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型的卵泡发育过程中的作用。方法采用硫酸普拉睾酮钠诱导大鼠PCOS模型,测定卵巢相对质量、卵巢HE染色、血清性激素水平,实时荧光逆转录PCR方法分析IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ在PCOS模型的卵巢组织中表达情况。结果实时荧光逆转录PCR结果显示,模型组IGF-ⅠmRNA的相对表达量为(1. 261±0. 299),对照组的表达量为(1. 627±0. 110),差异有统计学意义(P<0. 05);模型组IGF-ⅡmRNA的表达量为(1. 104±0. 102),对照组组织为(1. 460±0. 281),差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 PCOS卵泡成熟障碍可能与IGF-Ⅰ表达增多而IGF-Ⅱ表达减少有关,IGF-Ⅱ在卵泡成熟过程中可能发挥重要作用。 展开更多

关键词 多囊卵巢综合征 动物模型 大鼠 胰岛素样生长因子-Ⅰ 胰岛素样生长因子-Ⅱ 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

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2种检测VEGF-C和VEGFR-3基因表达的方法在诊断食管癌淋巴结转移中的价值 被引量：2

12

作者 卢培 陆慧琦 +3 位作者 韩焕兴 朱学源 黄秋芳 龚炜 《检验医学》 CAS 北大核心 2009年第6期446-449,共4页

目的评价实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)测定食管癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)基因表达在诊断食管癌淋巴结转移中的意义。方法分别采用实时FQ-RT-PCR和IHC... 目的评价实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)和免疫组织化学法(IHC)测定食管癌组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)基因表达在诊断食管癌淋巴结转移中的意义。方法分别采用实时FQ-RT-PCR和IHC检测食管癌组织中VEGF-C/VEGFR-3 mRNA和VEGF-C/VEGFR-3蛋白。结果有淋巴结转移组食管癌组织VEGF-C/VEGFR-3 mRNA和蛋白的表达均显著高于无淋巴结转移组;实时FQ-RT-PCR检测VEGF-C mRNA诊断食管癌淋巴结转移的敏感性、特异性以及与病理学诊断的符合率与IHC检测VEGF-C蛋白差异无统计学意义;实时FQ-RT-PCR检测食管癌组织VEGFR-3 mRNA诊断食管癌淋巴结转移的敏感性、特异性以及与病理学诊断的符合率均明显高于IHC(P<0.05)。结论实时FQ-RT-PCR检测VEGF-C/VEGFR-3 mRNA可较好地反映食管癌淋巴结转移状况。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3 食管癌 淋巴结转移 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应 免疫组织化学法

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宫颈鳞癌脱落细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的表达及意义

13

作者 张淑婷 张江宇 +3 位作者 曾俐琴 陈伟芳 张畅斌 罗喜平 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期616-619,共4页

目的探讨宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及其在宫颈鳞癌早期诊断中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌Hela细胞株(细胞组)以及2008年4-10月广东省妇幼保健院经临床和病理证实的31例宫颈鳞癌(... 目的探讨宫颈鳞癌脱落细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达及其在宫颈鳞癌早期诊断中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术,检测人宫颈癌Hela细胞株(细胞组)以及2008年4-10月广东省妇幼保健院经临床和病理证实的31例宫颈鳞癌(病例组)、21例正常或宫颈炎症(对照组)宫颈脱落细胞中hTERT mRNA的表达,以细胞组hTERT mRNA的表达作为定性、定量参照;对病例组及对照组同时采用液基薄层细胞学(TCT)检查。结果 (1)在病例组和对照组宫颈脱落细胞中hTERT mRNA阳性表达率分别为80.6%和9.5%,其相对定量表达水平NhTERT分别为0.4646～13.7823和0.0093～0.0816,差异均有统计学意义(P<0.05);(2)采用宫颈脱落细胞hTERT mRNA表达进行宫颈鳞癌筛查的灵敏度和特异度分别为80.6%和90.5%。结论宫颈鳞癌患者脱落细胞hTERT mRNA的阳性表达率及表达水平均异常增高,检测宫颈脱落细胞hTERT mRNA的表达,有助于宫颈鳞癌的早期诊断。 展开更多

关键词 人端粒酶逆转录酶 宫颈肿瘤 宫颈脱落细胞 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应

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耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的耐药机制研究 被引量：19

14

作者 季萍 朱震宏 张朝霞 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1061-1063,共3页

目的探讨新疆地区临床分离的铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶、外排泵Mex AB-oprM和外膜蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗菌药物耐药性之间的关系。方法聚合酶链反应（PCR）和测序法分别检测1~4组铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶;RT-... 目的探讨新疆地区临床分离的铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶、外排泵Mex AB-oprM和外膜蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗菌药物耐药性之间的关系。方法聚合酶链反应（PCR）和测序法分别检测1~4组铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶;RT-PCR检测1、2、4组铜绿假单胞菌外排泵Mex AB-oprM和孔蛋白OprD2的表达水平。结果含亚胺培南耐药和美罗培南耐药组均有≥42.9%检出亚胺培南（IMP）、VIM金属酶基因型;OprD2显著低于表达在亚胺培南与美罗培南同时耐药组（87.5%）,高于亚胺培南与美罗培南同时敏感组（20.0%）,差异有统计学意义;Mex AB-oprM在各组中分别有60.0%、57.1%、37.5%的高表达,差异无统计学意义。结论外膜的低通透性、金属β-内酰胺酶的水解和主动外排泵过度表达,三者相互协同作用是该地区耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌的主要机制。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 金属Β-内酰胺酶 外排泵 外膜孔蛋白 实时荧光定量反转录聚合酶链反应

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碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵和外膜孔蛋白表达水平的研究 被引量：12

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作者 李红玲 廖康 +2 位作者 陈亚岗 俞云松 李兰娟 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2008年第6期414-418,共5页

目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外... 目的探讨我国临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM和外膜孔蛋白OprD2表达水平及其与碳青霉烯类抗生素耐药性之间的关系。方法收集我国15个省市28所医院临床分离的铜绿假单胞菌655株,琼脂稀释法测定该菌加入外排泵抑制剂羟基氰氯苯腙(CCCP)前后对亚胺培南和美罗培南的MIC;RT-PCR检测外排泵MexAB-OprM和孔蛋白OprD2的表达水平;十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western-blot)检测外膜孔蛋白OprD2。结果收集到的655株铜绿假单胞菌菌株对亚胺培南和美罗培南敏感率分别为52.5%和59.2%,加入CCCP前后其对亚胺培南和美罗培南的敏感率无明显变化;52.0%(51/98)美罗培南耐药株MexAB-OprM显著高表达(P<0.05),43.7%(59/135)亚胺培南耐药株OprD2显著低表达(P<0.05),14.8%(20/135)亚胺培南耐药株OprD2表达缺失;SDS-PAGE和Western-blot显示与标准菌株PAO1相比,OprD2表达水平减低菌株ZZ20显影减低,表达缺失菌株BJ1不显影。结论MexAB-OprM表达升高和OprD2表达降低甚至缺失是我国铜绿假单胞菌对美罗培南和亚胺培南耐药的重要机制。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 外排泵 外膜孔蛋白 羟基氰氯苯腙 实时荧光定量反转录聚合酶链反应

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胃癌术中腹腔游离癌细胞检测方法的对比研究 被引量：11

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作者 刘振芳 韩晓鹏 +2 位作者 刘宏斌 朱万坤 苏琳 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2010年第8期803-807,共5页

目的探讨检测腹腔游离癌细胞的方法及临床意义。方法应用细胞学检查(PLC)、流式细胞术(FCM)、实时荧光定量RT-PCR分别检测50例胃癌患者术中腹腔冲洗液(腹水)中游离癌细胞、CK20蛋白和CK20mRNA表达阳性率,比较三种方法对腹腔游离癌细胞... 目的探讨检测腹腔游离癌细胞的方法及临床意义。方法应用细胞学检查(PLC)、流式细胞术(FCM)、实时荧光定量RT-PCR分别检测50例胃癌患者术中腹腔冲洗液(腹水)中游离癌细胞、CK20蛋白和CK20mRNA表达阳性率,比较三种方法对腹腔游离癌细胞检测的敏感度。结果 50例胃癌患者腹腔冲洗液(腹水)中,PLC检测腹腔游离癌细胞阳性率为20.0%(10/50),FCM检测CK20蛋白表达阳性率为36.0%(18/50),实时荧光定量RT-PCR检测CK20mRNA表达阳性率为58.0%(29/50);实时荧光定量RT-PCR检测腹腔冲洗液(腹水)中CK20mRNA表达阳性率高于FCM检测CK20蛋白表达阳性率及PLC检测腹腔游离癌细胞阳性率(P<0.05或P<0.001);FCM检测腹腔冲洗液(腹水)中CK20蛋白表达阳性率与PLC检测游离癌细胞阳性率相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。腹腔冲洗液(腹水)中检测CK20mRNA表达阳性率与肿瘤浸润深度、分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR检测CK20mRNA表达是检测腹腔游离癌细胞的有效方法。 展开更多

关键词 胃癌 腹腔冲洗液 细胞学检测 流式细胞术 实时荧光定量RT-PCR

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EZH2在子宫内膜癌中表达的意义 被引量：6

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作者 李全香 刘君 +1 位作者 王志芳 贾云昀 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2009年第10期1403-1406,共4页

目的:探讨EZH2基因在增生子宫内膜、非典型增生子宫内膜、子宫内膜癌中的表达及其与子宫内膜癌发生、发展及预后的关系。方法:采用RT-PCR方法检测21例增生子宫内膜、27例子宫内膜不典型增生及46例子宫内膜癌组织中EZH2 mRNA的表达,并对... 目的:探讨EZH2基因在增生子宫内膜、非典型增生子宫内膜、子宫内膜癌中的表达及其与子宫内膜癌发生、发展及预后的关系。方法:采用RT-PCR方法检测21例增生子宫内膜、27例子宫内膜不典型增生及46例子宫内膜癌组织中EZH2 mRNA的表达,并对结果进行统计学分析。结果:EZH2 mRNA在增生子宫内膜、不典型增生子宫内膜、子宫内膜癌组织中的表达分别为0.326±0.163、0.548±0.291、0.817±0.126,呈逐渐增高趋势,统计学分析显示各组间差异有统计学意义(P<0.05);子宫内膜癌组中EZH2表达水平与临床各病理参数密切相关,随着组织分化程度降低、肌层浸润加深和手术-病理分期增高EZH2表达逐渐增加(P<0.05);与淋巴结转移无关(P>0.05)。结论:EZH2在子宫内膜腺癌的发生、发展过程中起一定作用,EZH2的过表达促进了肿瘤的发生,它的检测对子宫内膜腺癌的早期诊断、恶性程度的判定有积极意义。 展开更多

关键词 EZH2基因 子宫内膜癌 实时荧光定量RT—PCR

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脊灰病毒分离和鉴定新检测流程的应用 被引量：5

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作者 陈玫 崔志强 +7 位作者 郭玉 赵娜 丛艳丽 张俊棉 张振国 张富斌 杜慧 李琦 《医学动物防制》 2015年第3期269-272,共4页

目的缩短检测脊灰病毒的时限,及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV)。方法对河北省2013年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者的粪便标本用L20B和RD两种细胞进行病毒分离,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fl... 目的缩短检测脊灰病毒的时限,及时发现河北省可能出现的脊灰疫苗衍生病例(VDPV)。方法对河北省2013年急性弛缓性麻痹(AFP)病例及其密切接触者的粪便标本用L20B和RD两种细胞进行病毒分离,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Real Time Fluorescent Quantitative Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,rRTPCR)对分离到的L20B阳性分离物进行型内鉴定和血清型鉴定。结果从送检的334例AFP病例及接触者粪便标本中检测出L20B阳性分离物26株,用real-time PCR法进行了病毒血清型鉴定和型内鉴定,共监测到脊灰疫苗类似株(sabin-like,SL)19株,其中Ⅰ型9株、Ⅱ型1株、Ⅲ型6株、混合型3株;将混合型进行单型分型后共得24株,进行VP1区核苷酸序列测定,发生高变异的两株出现在Ⅰ型,均为6个核苷酸变异。结论 2013年分离到的脊灰疫苗病毒有部分变异,没有发现疫苗衍生脊灰病毒。 展开更多

关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 疫苗衍生脊灰病毒 疫苗类似株

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FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达及其与幽门螺杆菌感染的相关性 被引量：4

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作者 刘爱群 葛莲英 +2 位作者 罗小玲 罗元 林思彤 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第23期2422-2426,共5页

目的:探讨FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达水平及其临床意义以及与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的相关性.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者及相应正常胃黏膜组织中的FAF1mRNA进行定量检... 目的:探讨FAF1 mRNA在胃癌组织中的表达水平及其临床意义以及与幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)感染的相关性.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者及相应正常胃黏膜组织中的FAF1mRNA进行定量检测,以β-actin为内参照.H.pylori采用HE染色、甲苯胺蓝染色和Warthin-Starry银染法进行检测.结果:胃癌组织中FAF1 mRNA的表达明显低于相应正常胃黏膜组织(0.27±0.12vs0.48±0.08,P<0.05).高、中分化的胃癌组织FAF1mRNA表达值明显高于低、未分化的胃癌组织(0.39±0.06vs0.19±0.06,t=9.966,P<0.01).有远处转移的胃癌组织FAF1 mRNA表达值低于无远处转移的胃癌组织(0.25±0.11vs0.34±0.14,t=-2.753,P<0.01),而FAF1 mRNA表达水平在浸润深度、有无淋巴结转移、肿瘤大小及临床分期不同的胃癌组织中无显著性差异.FAF1 mRNA表达量在H.pylori阳性胃癌组织中明显低于H.pylori阴性(0.18±0.06vs0.29±0.12,P<0.05).FAF1表达量在H.pylori阳性正常胃黏膜组织中与H.pylori阴性比较无显著差异(0.49±0.08vs0.47±0.11,t=0.6515,P>0.05).结论:FAF1基因的表达异常可能与胃癌的发生发展有关,H.pylori感染可能通过下调FAF1基因的表达而发挥致癌作用. 展开更多

关键词 胃癌 Fas相关因子1mRNA 适时荧光定量逆转录聚合酶链反应 幽门螺杆菌

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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应脊灰型内鉴定新方法在脊灰实验室的应用 被引量：4

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作者 陈玫 赵娜 +2 位作者 郭玉 崔志强 张振国 《实用预防医学》 CAS 2013年第11期1389-1392,共4页

目的在河北省脊髓灰质炎(脊灰)实验室首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)对脊灰病毒(PV)进行鉴定,并对该方法进行评估,为进行常规... 目的在河北省脊髓灰质炎(脊灰)实验室首次应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,rRT-PCR)对脊灰病毒(PV)进行鉴定,并对该方法进行评估,为进行常规rRT-PCR型内鉴定方法做准备。方法采用世界卫生组织(WHO)推荐的rRT-PCR方法,对河北省既往分离的PV和WHO发放的PV株进行型内鉴定(intratypic differentiation,ITD)和疫苗衍生PV(vaccine-derived PV,VDPV)筛选。结果 ITD rRT-PCR的实验结果与毒株的VP1编码区序列测定结果完全相符,VDPV rRT-PCR的结果与VP1编码区序列测定结果不能完全相符,有2株Ⅱ型脊灰病毒被错判为NSL,假阳性率为6.9%(2/29)。结论 Real time PCR脊灰型内鉴定方法可以在河北省脊灰实验室用于脊灰病毒的常规监测。 展开更多

关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 疫苗衍生脊灰病毒 疫苗类似株

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