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大豆连作土壤线虫群落结构的影响 被引量：16
1
作者 王进闯 王敬国 《植物营养与肥料学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1022-1031,共10页
【目的】由根系活动引起的根际微生态系统的改变,特别是病原生物数量的增加是导致作物产生连作障碍的主要因素。其中,植生性病原线虫的危害是大豆连作障碍产生的重要原因之一。由于植生性病原线虫的存在往往受到其它营养类型线虫的影响... 【目的】由根系活动引起的根际微生态系统的改变,特别是病原生物数量的增加是导致作物产生连作障碍的主要因素。其中,植生性病原线虫的危害是大豆连作障碍产生的重要原因之一。由于植生性病原线虫的存在往往受到其它营养类型线虫的影响,因而从线虫群落结构进行分析,不仅可以更好地反映不同营养类型的线虫之间的相互关系,而且能全面了解土壤的健康状况。本文利用末端限制性片段长度多态性分析（T-RFLP）和实时荧光定量PCR（q PCR）等分子生物学的方法,比较短期连作和长期连作线虫群落的差异,揭示长期连作大豆土壤线虫群落的变化规律,理解线虫群落与植物健康的关系,阐明线虫群落的变化在大豆连作障碍中的作用。【方法】首先,基于16sr DNA的T-RFLP指纹图谱,分析土壤中线虫的物种丰富度和不同大小的末端限制性片段（T-RF）的相对丰度。然后,通过构建克隆文库和系统发育树,鉴定T-RF片段对应的线虫种类。最后,利用q PCR,采用绝对定量的方法确定线虫群落的大小。【结果】线虫的物种丰富度随着连作年限的增加呈逐渐降低的趋势。第1年物种丰富度最高,第3年的丰富度显著低于第1年,之后逐渐降低,9年之后保持不变。大豆根际土中共检测到16个TRF,且大多数T-RF能从克隆文库中鉴定。其中,食细菌线虫（Acrobeloides）是最为丰富的线虫种类。在连作2~3年后,植物寄生线虫相对丰度增加,而在连作后期,植物寄生线虫相对丰度减少。非度量多维尺度分析（NMDS）示,第1年线虫群落与其余年限分开,而第2和第3年聚集较近,而连作9、11和13年后聚集较近。另外,线虫群落结构与p H、土壤有机质（SOM）、速效磷（AP）、细菌数量和真菌数量相关。线虫群落总丰度呈先增后降的趋势,最高值出现在第6年。线虫的基因拷贝数与土壤NH＋4和染料木因浓度呈显著� 展开更多
关键词 连作 大豆 线虫群落 T-RFLP 定量pcr
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哈维氏弧菌浸浴后凡纳滨对虾肠道组织病理变化及转录水平的免疫应答 被引量：9
2
作者 夏青 王宝杰 +2 位作者 刘梅 蒋克勇 王雷 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1521-1529,共9页
为研究凡纳滨对虾在不同浓度哈维氏弧菌的浸浴攻毒作用下肠道损伤的动态发展过程及肠道免疫基因表达水平,采用组织切片探究对虾肠道组织形态,采用实时荧光定量PCR测定抗脂多糖因子基因（ALF）、对虾素基因（Pen-4c）和Crustin基因（Cru... 为研究凡纳滨对虾在不同浓度哈维氏弧菌的浸浴攻毒作用下肠道损伤的动态发展过程及肠道免疫基因表达水平,采用组织切片探究对虾肠道组织形态,采用实时荧光定量PCR测定抗脂多糖因子基因（ALF）、对虾素基因（Pen-4c）和Crustin基因（Cru）以及溶菌酶基因（LZM）、脂肪酸结合蛋白基因（Fabp）的表达水平变化,并对肠道及水体中的弧菌数目进行监测。结果表明,哈维氏弧菌侵染后,在低浓度组侵染32 h、中浓度组侵染16 h及高浓度组侵染8 h后出现轻度感染,在低、中浓度组侵染40 h后及高浓度组侵染16 h后发生重度感染。Cru在低、中浓度组侵染24 h和高浓度组侵染16~24 h出现显著表达;ALF在低浓度组侵染24 h,中浓度组侵染8和16 h,高浓度组侵染16 h显著上升后;Pen-4c在中、低浓度组侵染8 h,高浓度组侵染8~16 h达到其表达量最大值;LZM在低浓度组侵染24 h,中、高浓度组侵染8 h有显著提高。攻毒后,3种攻毒剂量下弧菌数目均处下降趋势,弧菌在侵染0~8 h经口大量进入对虾肠道,至侵染32 h菌数回落。结论：随着弧菌浓度的提高和攻毒时间的延长,中肠组织损伤情况逐渐加重,上皮细胞形态改变直至溃散,黏膜褶皱形态发生皱缩及脱落,肌层发生损伤。肠道受到哈维氏弧菌侵染后,抗菌肽ALF、Pen-4c、Cru基因及LZM基因表达量迅速上调,能够及时做出免疫应答反应,从而阻止致病菌的侵染;Fabp表达量未显著增加。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 哈维氏弧菌 浸浴攻毒 免疫基因 q pcr 组织病理
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人参总皂苷对γ射线照射后大鼠肝P450酶调节作用研究 被引量：8
3
作者 易剑峰 吴波 +1 位作者 刘苍龙 高月 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第20期4037-4043,共7页
该研究用5.5 Gy的γ射线照射大鼠,用Cocktail探针法结合液质联用、q PCR和Western blot法检测P450各个同工酶的酶活性、mRNA和蛋白表达来评价人参总皂苷对γ射线照射后大鼠肝P450酶调节作用。结果发现,辐射组CYP1A2,2B1,2E1,3A4与空白... 该研究用5.5 Gy的γ射线照射大鼠,用Cocktail探针法结合液质联用、q PCR和Western blot法检测P450各个同工酶的酶活性、mRNA和蛋白表达来评价人参总皂苷对γ射线照射后大鼠肝P450酶调节作用。结果发现,辐射组CYP1A2,2B1,2E1,3A4与空白组相比,表达增加;人参总皂苷组CYP1A2,2B1,2E1,3A4与辐射组相比,表达下降。表明人参总皂苷对辐射诱导大鼠P450酶上调起到反向干预作用。 展开更多
关键词 人参总皂苷 Γ射线 CYP450 COCKTAIL q pcr Western BLOT
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北京市4种不同污水处理系统中病原菌变化研究 被引量：7
4
作者 易鑫 李娟 +1 位作者 黄京 刘新春 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1759-1767,共9页
采用定量PCR技术,对北京市4种不同污水处理系统中大肠杆菌、军团菌和沙门氏菌随工艺及四季的数量变化进行了追踪研究,以评估病原菌的去除效果及污水回用的健康风险.结果发现,大肠杆菌在夏季进水和出水中的浓度分别在107~108copies·... 采用定量PCR技术,对北京市4种不同污水处理系统中大肠杆菌、军团菌和沙门氏菌随工艺及四季的数量变化进行了追踪研究,以评估病原菌的去除效果及污水回用的健康风险.结果发现,大肠杆菌在夏季进水和出水中的浓度分别在107~108copies·m L-1和105copies·m L-1左右;G-A/O系统对大肠杆菌的去除率最高,平均去除率达99.88%.军团菌在4个污水处理系统中进水浓度为104~105copies·m L-1,出水浓度约为104copies·m L-1,其在剩余污泥样品中浓度较高,达到105~106copies·m L-1.沙门氏菌进水浓度较低,为102~103copies·m L-1,且其在多个工艺段样品中未检出.季节变化对于病原菌的去除具有较大影响.研究表明,大肠杆菌在各污水处理系统中均可检出,且其分布具有一定的季节性,夏季的进出水中浓度相对较高;而军团菌和沙门氏菌浓度在各工艺中则并未呈现出明显的季节性变化.G-A/O系统对3种细菌的整体去除效果最为稳定,去除率较高.大肠杆菌在污水处理厂的出水及剩余污泥中浓度仍然较高,此外,冬季出水中也能检测到沙门氏菌的存在,因此,污水处理厂的出水和污泥排放仍存在一定的生态和健康风险. 展开更多
关键词 污水处理 定量聚合酶链式反应 病原菌 健康风险
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同步半硝化-厌氧氨氧化-反硝化一体式反应器的运行条件和微生物丰度研究 被引量：7
5
作者 范强 刘国华 +3 位作者 徐相龙 罗雅谦 齐鲁 王洪臣 《环境工程》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期6-10,40,共6页
通过小试考察了同步半硝化-厌氧氨氧化-反硝化(SNAD)系统的运行条件以及各种细菌的丰度变化情况。结果表明:通过控制温度等运行参数可以成功启动SNAD系统。在启动阶段,细菌的丰度基本保持不变;在稳定化运行阶段,氨氧化细菌(AOB)的丰度为... 通过小试考察了同步半硝化-厌氧氨氧化-反硝化(SNAD)系统的运行条件以及各种细菌的丰度变化情况。结果表明:通过控制温度等运行参数可以成功启动SNAD系统。在启动阶段,细菌的丰度基本保持不变;在稳定化运行阶段,氨氧化细菌(AOB)的丰度为(2.95E+07)copies/g(每克污泥,下同)、亚硝酸盐氧化细菌(NOB)中的Nitrospira和Nitrobacter的丰度分别为(5.87E+05),(3.95E+06)copies/g,厌氧氨氧化(Anammox)细菌的丰度达到了(7.85E+09)copies/g。对于整个系统而言,AOB和Anammox是系统中的优势细菌。 展开更多
关键词 一体化厌氧氨氧化 半硝化 条件控制 丰度 qpcr
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非特殊型浸润性乳腺癌HER-2检测方法的对比研究 被引量：6
6
作者 成玉霞 赫淑倩 +1 位作者 董贺 孙青 《分子诊断与治疗杂志》 2016年第5期308-315,共8页
目的应用实时定量PCR技术(quantitive real-time PCR,q PCR)检测石蜡包埋非特殊型浸润性乳腺癌标本的HER-2表达状况,与免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)相应检... 目的应用实时定量PCR技术(quantitive real-time PCR,q PCR)检测石蜡包埋非特殊型浸润性乳腺癌标本的HER-2表达状况,与免疫组织化学技术(immunohistochemistry,IHC)和荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)相应检测结果进行比较,以验证q PCR技术检测HER-2方法的可靠性和实用性。方法采用FISH和q PCR技术对IHC检测结果分别为HER-2(0、1+、2+、3+)的乳腺癌标本各100例进行检测,用kappa检验分析三者的一致性。结果 100例HER-2(0)和HER-2(1+)的标本FISH和q PCR的检测结果均无扩增,符合率100%;IHC检测HER-2(2+)的标本,FISH和q PCR检测结果之间k=0.731(P<0.001),二者一致性强;IHC检测HER-2(3+)的标本,FISH与q PCR检测结果 k=0.634(P<0.001),二者具有较好的一致性,与IHC检测结果也具有较强的一致性。三者对乳腺癌患者的临床病理指标反应具有较好的一致性。结论 q PCR方法简便、实用、有效,检测乳腺癌HER-2基因状况可与FISH法互为补充。 展开更多
关键词 非特殊型浸润性乳腺癌 HER-2 IHC FISH qpcr
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橘小实蝇nAChR α9亚基基因的鉴定及其时空表达 被引量：5
7
作者 袁国瑞 杨文佳 +1 位作者 许抗抗 王进军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1189-1198,共10页
【目的】橘小实蝇Bactrocera dorsalis是世界性分布的危害果蔬的重要检疫性农业害虫,目前已对包括新烟碱类在内的多种杀虫剂产生了抗性。本研究在克隆鉴定橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体（n AChR）α9亚基基因c DNA的基础上,对其分子特性... 【目的】橘小实蝇Bactrocera dorsalis是世界性分布的危害果蔬的重要检疫性农业害虫,目前已对包括新烟碱类在内的多种杀虫剂产生了抗性。本研究在克隆鉴定橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体（n AChR）α9亚基基因c DNA的基础上,对其分子特性和系统发育进行生物信息学分析,并检测了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式,为进一步研究其潜在功能及在抗药性中的作用奠定基础。【方法】通过高通量测序技术对橘小实蝇进行转录组测序,对高质量序列拼接组装、基因鉴定及同源性比对分析,预测橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体候选基因。采用RTPCR和RACE（rapid-amplification of c DNA ends）技术克隆该基因的c DNA全长序列,利用生物信息学分析软件分析其基本生物信息;以α-tubulin为内参基因,利用q PCR研究该基因mRNA在橘小实蝇不同发育阶段及成虫头、胸、腹等组织中的表达模式。【结果】根据预测的基因序列,设计特异性引物进行RACE扩增,从橘小实蝇中克隆获得一条烟碱型乙酰胆碱受体基因的全长序列,c DNA全长1 486 bp,完整开放阅读框1 281 bp,编码426个氨基酸,推测其蛋白质分子量为49.1 k D,理论等电点6.56。该基因经序列比对命名为Bdα9,Gen Bank登录号为JQ178254。氨基酸同源性及系统进化树分析显示,该基因的编码蛋白具有n AChRα亚基的典型特征,并与Agα9和Dmβ3聚类在一起,与其他昆虫n AChRα9亚基具有22%-27%的氨基酸序列一致性。q PCR结果表明,Bdα9mRNA在橘小实蝇整个发育阶段均有表达,成虫期的表达量显著高于卵、2龄幼虫、3龄幼虫和蛹期;Bdα9在橘小实蝇成虫头部中表达量最高,且显著高于胸部和腹部中的表达量。【结论】鉴定了橘小实蝇烟碱型乙酰胆碱受体基因Bdα9,明确了该基因在橘小实蝇不同发育阶段及成虫不同组织中的表达模式。根据q PCR的结果,推测 展开更多
关键词 橘小实蝇 烟碱型乙酰胆碱受体 基因克隆 序列分析 表达谱 实时定量pcr
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基于产毒基因sxtA的qPCR方法在长江口邻近海域有毒藻类检测中的应用初探 被引量：4
8
作者 高岩 于仁成 +6 位作者 柳阳 林佳宁 张清春 孔凡洲 王云峰 颜天 周名江 《海洋环境科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期279-287,共9页
麻痹性贝毒(paralytic shellfish toxins)包括石房蛤毒素(saxitoxin)及其同系物,是一类具有神经毒性的生物毒素,主要由甲藻和蓝藻产生。近年来,在蓝藻和甲藻中相继发现了一些与石房蛤毒素合成密切相关的基因,并建立了基于特定产毒基因... 麻痹性贝毒(paralytic shellfish toxins)包括石房蛤毒素(saxitoxin)及其同系物,是一类具有神经毒性的生物毒素,主要由甲藻和蓝藻产生。近年来,在蓝藻和甲藻中相继发现了一些与石房蛤毒素合成密切相关的基因,并建立了基于特定产毒基因的有毒藻类检测方法。长江口邻近海域是我国近海有害藻华的高发区,本研究尝试应用基于麻痹性贝毒产毒基因sxt A的q PCR检测方法,与有毒塔玛亚历山大藻复合种(I型和IV型)的q PCR检测方法和麻痹性贝毒的高效液相色谱方法相结合,对2013年春季长江口邻近海域两条断面上有毒藻和藻毒素的分布及变动情况进行了分析。结果表明,基于sxt A的q PCR检测结果与IV型塔玛亚历山大藻复合种的数量存在较好的相关性(r2=0.52,P<0.05),说明IV型塔玛亚历山大藻复合种是采样期间长江口邻近海域麻痹性贝毒的主要来源;而样品中藻毒素含量与两种q PCR方法得到的有毒藻数量之间并没有明显相关性。可见,基于产毒基因的检测方法在长江口邻近海域有毒藻类检测中具有一定优势,但不足以准确反映该海域藻毒素的水平。 展开更多
关键词 麻痹性贝毒 亚历山大藻 SXT A4 q pcr 长江口邻近海域
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应用FCM-qPCR方法定量检测水中常见病原体 被引量：4
9
作者 王明星 柏耀辉 +3 位作者 梁金松 霍旸 杨婷婷 袁林江 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第1期384-390,共7页
以往对水体病原体的研究主要是通过监测粪大肠杆菌作为指示,然而研究表明粪大肠杆菌与水中病毒和细菌病原体呈现出较差的相关性.因此,选取水中典型病原体并对其进行定量检测是当前需要解决的技术问题.为此本研究建立了流式细胞术和定量... 以往对水体病原体的研究主要是通过监测粪大肠杆菌作为指示,然而研究表明粪大肠杆菌与水中病毒和细菌病原体呈现出较差的相关性.因此,选取水中典型病原体并对其进行定量检测是当前需要解决的技术问题.为此本研究建立了流式细胞术和定量PCR联合使用方法,用于快速获取水环境中总病毒、细菌以及几种典型病原体(大肠杆菌、军团菌、腺病毒、贾第虫和隐孢子虫等)的浓度水平,并将该方法应用到污水处理厂进出水及受纳河流上下游的病原体检测中.结果表明,该污水处理厂对总细菌和总病毒以及几种典型病原体都具有较高的去除率(>93%);污水处理厂排水对受纳水体病原体浓度水平基本没有负面影响.研究为评估污水处理厂处理效果及排水对受纳水体的生态影响提供了技术支持. 展开更多
关键词 流式细胞术(FCM) q pcr 细菌 病毒 典型病原体
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基因组步移技术克隆思茅松α-蒎烯合成酶基因及表达分析 被引量：4
10
作者 王毅 朱金鑫 +2 位作者 原晓龙 陈伟 李江 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期2699-2705,共7页
蒎烯合成酶(α-pinene synthase, APS)是α-蒎烯生物合成的关键酶。本研究利用同源克隆及基因组步移法从思茅松中克隆得到一个α-蒎烯合成酶基因,命名为PkAPS (GenBank登录号为KX394684),基因全长3 523 bp,含有10个内含子,其c DNA全长1 ... 蒎烯合成酶(α-pinene synthase, APS)是α-蒎烯生物合成的关键酶。本研究利用同源克隆及基因组步移法从思茅松中克隆得到一个α-蒎烯合成酶基因,命名为PkAPS (GenBank登录号为KX394684),基因全长3 523 bp,含有10个内含子,其c DNA全长1 956 bp,编码651个氨基酸残基。生物信息学分析显示PkAPS属于萜烯合成酶家族蛋白;系统进化树分析显示PkAPS与马尾松α-蒎烯合成酶亲缘关系最近。基因表达分析显示:PkAPS在高产脂思茅松个体各组织的表达量均高于低产产脂思茅松个体;而在高产脂思茅松不同组织中的表达比较中,PkAPS在小枝中的表达量最高。本研究将有利于进一步研究思茅松α-蒎烯合成酶调控机理及培育高产α-蒎烯思茅松新品种的研究。 展开更多
关键词 思茅松(Pinus kesiya VAR. langbianensis) α-蒎烯合成酶 基因组步移法 荧光定量 pcr高产脂
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牡蛎疱疹病毒对魁蚶的致病性 被引量：4
11
作者 汪清晨 白昌明 +3 位作者 张天文 王崇明 邱兆星 黄倢 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期468-474,共7页
为探明牡蛎疱疹病毒（Os HV-1）对魁蚶的致病性,本研究使用发病魁蚶组织制作病毒悬液进行感染实验。感染实验分为空白组、阴性悬液注射组和病毒悬液注射组,并使用实时定量PCR法对感染后魁蚶体内病毒的时空分布进行检测。实验结果显示,... 为探明牡蛎疱疹病毒（Os HV-1）对魁蚶的致病性,本研究使用发病魁蚶组织制作病毒悬液进行感染实验。感染实验分为空白组、阴性悬液注射组和病毒悬液注射组,并使用实时定量PCR法对感染后魁蚶体内病毒的时空分布进行检测。实验结果显示,空白组和阴性悬液组魁蚶感染后未检测到病毒粒子,病毒悬液注射组魁蚶经人工感染后,各部位病毒含量均呈先上升再下降随后又上升的趋势,最终达到10^6拷贝/ng DNA左右。通过电镜观察,在感染魁蚶的鳃、肝胰腺、外套膜中出现染色质边缘化甚至消失,细胞核肿胀、溶解,核仁消失,核膜扩张、不清晰,线粒体肿大,脊崩解,核糖体脱落等一系列细胞病理变化。在其细胞核和细胞质中均能发现大量直径为90～110 nm球形病毒粒子,该病毒粒子具囊膜,囊膜内可见均匀高电子密度的核衣壳,与自然发病魁蚶负染电镜中的病毒粒子形态相同。研究结果表明,Os HV-1可以感染魁蚶并与魁蚶大规模死亡有直接相关关系;魁蚶感染Os HV-1后机体产生应激反应,对Os HV-1有一定抑制作用,但其作用机制还有待进一步实验验证。 展开更多
关键词 牡蛎疱疹病毒 魁蚶 致病性 实时定量pcr 电镜
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杭菊DFR基因克隆及其在花中表达特征分析 被引量：2
12
作者 陈璐 汪涛 +2 位作者 郭巧生 张晓明 宋玲珊 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1187-1192,共6页
目的克隆杭菊Chrysanthemum morifolium二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并研究其在花芽分化期及开花期不同时期的表达特征。方法根据已报道的菊花Chrysanthemum morifolium DFR基因序列设计引物,通过荧光定量PC... 目的克隆杭菊Chrysanthemum morifolium二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并研究其在花芽分化期及开花期不同时期的表达特征。方法根据已报道的菊花Chrysanthemum morifolium DFR基因序列设计引物,通过荧光定量PCR(RT-PCR)技术从杭菊头状花序中扩增出目的基因片段,连接、转化、挑取阳性克隆测序并拼接;采用基于内参基因的相对定量PCR方法,分析该基因表达量特征。结果得到全长1 152 bp的杭菊DFR基因,最大开放阅读框1 029 bp,共编码342个氨基酸。NCBI上进行Blast比对,该基因与其他植物的DFR基因有很高的同源性。RT-PCR表明该基因在花芽分化时期不同阶段以及开花期不同时期花不同部位中表达量均有差异。花芽分化时期杭菊DFR基因在50 d表达量最高;开花期该基因在时期I的管状花中表达量最高,在时期II的花序托中表达量最低。结论克隆得到杭菊DFR基因c DNA序列,该基因表达存在时间和空间上的差异,表达量在花蕾膨大成熟到舌状花开放30%的时间段内最高。该结果为进一步进行该基因在杭菊中的表达与催化产物的关系和调控机制研究奠定了基础。 展开更多
关键词 杭菊 DFR基因 实时定量pcr 荧光定量pcr 基因克隆
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猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用 被引量：2
13
作者 秦秋英 速雪丽 +7 位作者 黄诗婷 秦毅斌 何颖 卢冰霞 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期1373-1378,共6页
针对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的N基因建立检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并验证了其特异性、敏感性和重复性等。结果显示,本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪肠病毒、伪狂犬病病毒、猪... 针对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的N基因建立检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并验证了其特异性、敏感性和重复性等。结果显示,本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪肠病毒、伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪星状病毒等病原无交叉反应。本方法C_(t)值与标准模板浓度在10^(8.5)~10^(3.5)PFU/mL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9949,直线方程为y=-3.5949x+41.006,最低检测限为10^(2.50)PFU/mL。运用该方法检测PDCoV感染不同来源细胞系的病毒载量,发现的PDCoV感染宿主谱广,能感染不同来源的细胞,且在LLC-PK细胞上的复制能力最强。本研究建立的方法为PDCoV的防控提供了技术支持。 展开更多
关键词 猪德尔塔冠状病毒 N基因 荧光定量pcr LLC-PK细胞
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miR-630在OSF及伴OSF的OSCC组织中的表达研究 被引量：1
14
作者 伍靖 张胜 +1 位作者 陈林 陈克勤 《临床口腔医学杂志》 2016年第1期17-21,共5页
目的:研究微小RNA-630(mi R-630)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)和伴OSF口腔鳞癌组织中的表达,初步探讨mi R-630在口腔鳞癌及OSF癌变发生发展过程中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time q-PCR)检测13例正常黏膜组织(A1组)、12例OSF... 目的:研究微小RNA-630(mi R-630)在口腔黏膜下纤维性变(OSF)和伴OSF口腔鳞癌组织中的表达,初步探讨mi R-630在口腔鳞癌及OSF癌变发生发展过程中的作用。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time q-PCR)检测13例正常黏膜组织(A1组)、12例OSF组织(A2组)、22例伴OSF口腔癌癌旁组织(A3组)及相对应伴OSF口腔癌组织(A4组)中mi R-630表达,用SPSS 19.0分析比较mi R-630的表达含量。结果:伴OSF口腔癌组织与正常口腔黏膜组织相比,mi R-630的表达升高(P<0.05);伴OSF口腔癌癌旁组织与正常口腔黏膜组织相比,mi R-630的表达升高(P<0.05);伴OSF口腔癌组织与OSF黏膜组织相比,mi R-630的表达升高(P<0.05);伴OSF口腔癌癌旁组织与OSF黏膜组织相比,mi R-630的表达有升高(P<0.05);伴OSF口腔癌组织与伴OSF口腔癌癌旁组织相比,mi R-630的表达有升高的趋势,但未见显著统计学差异(P>0.05);OSF黏膜组织与正常口腔黏膜组织相比,mi R-630的表达无统计学差异(P>0.05)。结论:mi R-630在伴OSF口腔鳞癌组织中表达较正常黏膜组织及OSF组织均显著增加,其异常高表达可能与口腔癌及OSF癌变的发生、发展相关。 展开更多
关键词 口腔黏膜下纤维性变 口腔癌 MI R-630 q pcr
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CRYAB在喉癌中的表达变化及临床意义 被引量：2
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作者 许里 徐新宇 林振中 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1095-1100,共6页
目的:检测晶状体蛋白-αB(crystallin-alpha B,CRYAB)在人喉癌中的表达情况,同时研究CRYAB表达与喉癌重要临床指标之间的关系。方法:在10例新鲜喉癌及癌旁组织上进行一步法定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription-polymerase... 目的:检测晶状体蛋白-αB(crystallin-alpha B,CRYAB)在人喉癌中的表达情况,同时研究CRYAB表达与喉癌重要临床指标之间的关系。方法:在10例新鲜喉癌及癌旁组织上进行一步法定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测,在组织芯片上(80例喉癌标本及20例癌旁对照标本)进行免疫组化检测,使用Cox回归法及Kaplan-Meier生存分析法进行喉癌患者的预后评估。结果 :qPCR及免疫组化结果均显示喉癌组织中的CRYAB表达明显高于癌旁对照组织中CRYAB的表达(P均<0.05)。CRYAB的表达与喉癌患者的肿瘤分化程度(P=0.022)、TNM分期(P=0.013)、淋巴结转移(P=0.026)及生存情况(P=0.001)有重要关联。生存分析显示CRYAB表达(P=0.036)与喉癌患者预后关系密切,CRYAB高表达提示患者预后不良。结论 :CRYAB在喉癌组织中异常高表达,且与喉癌患者的数种恶性表型相关,可作为喉癌患者预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 喉癌 CRYAB qpcr 免疫组化 预后
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pVLT-EGFP载体构建及其在巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)的表达研究
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作者 巩涛 王继雯 +6 位作者 杨文玲 甄静 刘莹莹 李冠杰 刘莉 岳丹丹 陈国参 《中国农学通报》 2015年第5期96-101,共6页
为了研究巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)在植物体内的定殖,利用酶切连接的方法,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与表达载体p VLT-33为基本元件,构建了重组表达载体p VLT-EGFP,电转巴西固氮... 为了研究巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)在植物体内的定殖,利用酶切连接的方法,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因与表达载体p VLT-33为基本元件,构建了重组表达载体p VLT-EGFP,电转巴西固氮螺菌R7细胞,并利用实时荧光定量PCR(q PCR)研究了不同温度、不同时间EGFP m RNA的表达情况。酶切及测序结果表明,成功构建了p VLT-EGFP载体,并在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达;q PCR结果显示:30℃,诱导9 h EGFP基因的表达水平最高。本研究成功构建了重组表达载体p VLT-EGFP,为实现p VLT-EGFP的可控表达及研究固氮菌在植物体内的定殖规律及促生长机理提供了一种有效的途径。 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 表达载体 实时荧光定量pcr(q pcr)
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MUCT工艺反硝化除磷效率与Candidatus Accumulibacter的群落演替
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作者 曾薇 李超 +1 位作者 孟庆安 马晨阳 《北京工业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1243-1251,共9页
以处理实际生活污水的连续流MUCT工艺为基础,探究了全程硝化和短程硝化状态下优势聚磷菌Candidatus Accumulibacter的群落动态与系统反硝化除磷效果之间的相互联系.流式细胞仪定量检测结果表明,系统中聚磷菌占全菌的比例为22.1%,Accumul... 以处理实际生活污水的连续流MUCT工艺为基础,探究了全程硝化和短程硝化状态下优势聚磷菌Candidatus Accumulibacter的群落动态与系统反硝化除磷效果之间的相互联系.流式细胞仪定量检测结果表明,系统中聚磷菌占全菌的比例为22.1%,Accumulibacter是处于全程硝化状态下的优势聚磷菌,对系统中氮磷的去除起到重要作用.q PCR定量结果表明,短程硝化状态下的优势种IIC和IIC(ppk1 excluding OTU NS D3)以及IIF的增长率较快,占总Accumulibacter比例分别为11.53%、34.31%和17.97%,其利用亚硝进行反硝化除磷的能力比其他分支强,对系统化中亚硝的去除起到重要作用.IID分支在反应器整个运行阶段一直处于优势地位,是系统内氮磷去除最重要的分支.其在全程硝化状态下占Accumulibacter分支总和的80%,但在短程状态下的竞争能力不如其他的TypeⅡ型分支. 展开更多
关键词 实际生活污水 反硝化除磷 聚磷菌 Accumulibacter 实时荧光定量pcr 流式细胞仪
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大肠杆菌araE基因对典型苯丙素类化合物转运过程的影响
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作者 王奎 周景文 李江华 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期856-863,共8页
为了研究阿拉伯糖转运蛋白对大肠杆菌转运典型苯丙类素化合物的能力,采用基因过量表达和基因沉默技术,实现对蛋白质表达量进行控制,从而研究Ara E对苯丙类素化合物的转运过程机制。同时,用定量PCR技术在转录水平考察并验证了ara E基因... 为了研究阿拉伯糖转运蛋白对大肠杆菌转运典型苯丙类素化合物的能力,采用基因过量表达和基因沉默技术,实现对蛋白质表达量进行控制,从而研究Ara E对苯丙类素化合物的转运过程机制。同时,用定量PCR技术在转录水平考察并验证了ara E基因的过量表达水平和基因抑制程度。通过测定菌体的生长动力学参数,衡量菌体对典型苯丙素类化合物的转运能力。结果表明,大肠杆菌ara E基因只参与了大肠杆菌对白藜芦醇的转运,对其他种类的苯丙素类化合物作用不明显。 展开更多
关键词 ARA E 大肠杆菌 苯丙素类化合物 基因沉默 定量pcr 转运
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微塑料对河口沉积物抗生素抗性基因的影响 被引量：30
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作者 黄福义 杨凯 +3 位作者 张子兴 苏建强 朱永官 张娴 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第5期2234-2239,共6页
微塑料和抗生素抗性基因都是环境中的新兴污染物,也是近年来的研究热点.为探究微塑料对河口沉积物抗生素抗性基因的影响,在沉积物中添加3种不同的微塑料进行培养实验,主要采用高通量定量PCR方法研究河口沉积物抗性基因种类、丰度、多样... 微塑料和抗生素抗性基因都是环境中的新兴污染物,也是近年来的研究热点.为探究微塑料对河口沉积物抗生素抗性基因的影响,在沉积物中添加3种不同的微塑料进行培养实验,主要采用高通量定量PCR方法研究河口沉积物抗性基因种类、丰度、多样性及其变化情况.结果表明,微塑料显著改变了沉积物中抗生素抗性基因结构组成,两种难降解微塑料PVC和PE使得沉积物抗生素抗性基因组成结构显著改变,而可溶性微塑料PVA使得沉积物抗生素抗性基因种类数显著减少;添加PVC、PE和PVA微塑料的沉积物抗生素抗性基因的绝对丰度显著增加,分别为4. 1×10~9、8. 1×10~9和2. 0×10~9copies·g^(-1),添加PE微塑料的沉积物抗生素抗性基因丰度增加了近一个数量级,微塑料显著增加了沉积物抗生素抗性基因的绝对丰度; OLS回归分析显示,抗生素抗性基因丰度与转座子、整合子基因显著正相关,表明可移动遗传元件可能促进了抗生素抗性基因的迁移、传播和扩散. 展开更多
关键词 微塑料 抗生素 超高通量定量pcr 沉积物 抗性基因(ARGs)
原文传递
冬虫夏草菌在寄主钩蝠蛾幼虫中的潜伏侵染过程研究 被引量：11
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作者 雷桅 彭青云 +1 位作者 张古忍 刘昕 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期387-392,共6页
冬虫夏草是青藏高原的特色名贵药材,是冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis寄生于钩蝠蛾幼虫后形成的虫生子囊真菌,其发生机理和侵染途径至今未知。本文利用real-time q PCR实时定量技术检测了寄主蒲氏钩蝠蛾Thitarodes pui幼虫表皮、脂... 冬虫夏草是青藏高原的特色名贵药材,是冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis寄生于钩蝠蛾幼虫后形成的虫生子囊真菌,其发生机理和侵染途径至今未知。本文利用real-time q PCR实时定量技术检测了寄主蒲氏钩蝠蛾Thitarodes pui幼虫表皮、脂肪体、血淋巴和肠壁等组织中冬虫夏草菌定殖量,分别建立了起始于表皮的侵染路径(R20.678)和起始于肠道的侵染路径(R20.271)两种Holt数学模型,经比较分析后,推论冬虫夏草菌随口腔摄食侵染寄主幼虫的方式具有一定合理性和可行性,揭示冬虫夏草菌可以通过进食途径实现其对钩蝠蛾幼虫的带菌生长、侵染和寄生,从而为深入阐释冬虫夏草菌与寄主钩蝠蛾幼虫相互作用关系提供重要参考。 展开更多
关键词 冬虫夏草菌 蒲氏钩蝠蛾 REAL-TIME q pcr 侵染 青藏高原
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