猪垂体中猪生长激素基因的克隆和部分序列分析 被引量：11

1

作者 杨青 朱宝利 +1 位作者 周顺伍 齐顺章 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第4期318-323,共6页

从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作载体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southorn印迹,表明它含有全长猪生长激素基因;将S... 从猪垂体中提取出DNA,以EMBL3噬菌体作载体,构建了染色体基因文库。用全长的猪生长激素(pGH)cDNA作探针,经原位杂交,筛选出5个阳性克隆。提取其中一个阳性克隆的DNA,通过斑点杂交,酶解和Southorn印迹,表明它含有全长猪生长激素基因;将Sma Ⅰ酶解后Southorn印迹为阳性的两个片段进行了亚克隆,对其中含有猪生长激素基因Sma Ⅰ位点上游序列的片段进行了部分序列分析,并和已发表的相应序列进行了比较。 展开更多

关键词 猪垂体 序列分析 生长激素基因

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猪生长激素基因表达质粒的构建及其转基因动物研究 被引量：6

2

作者 陈清轩 曹颉 +2 位作者 宋德秀 陈永福 魏庆信 《生物化学杂志》 CSCD 1997年第5期540-545,共6页

将猪生长激素基因（ＰＧＨ）克隆到质粒ｐＵＣ１９上，经酶切分析，确定其酶切图谱．把ＰＧＨ转录起始位点以前的序列切掉，换上羊ＭＴ－１ａ基因的启动子，构建成可以调控的表达载体ｐＳＭＴＰＧＨ，用于转基因动物的研究．采用微注射... 将猪生长激素基因（ＰＧＨ）克隆到质粒ｐＵＣ１９上，经酶切分析，确定其酶切图谱．把ＰＧＨ转录起始位点以前的序列切掉，换上羊ＭＴ－１ａ基因的启动子，构建成可以调控的表达载体ｐＳＭＴＰＧＨ，用于转基因动物的研究．采用微注射法将线状ｐＳＭＴＰＧＨ导入猪、鼠和金鱼的受精卵中，得到了相应的转基因动物．对这些动物鉴定分析表明，外源基因整合率因动物不同而异，但该基因在这３种动物中的整合率均在９％以上，其生长速度都高于对照组． 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 表达载体 转基因动物 质粒

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pGH基因全序列ApaⅠ酶切位点多态性与生产性能的相关分析 被引量：5

3

作者 刘海峰 帅素容 +1 位作者 邢晋 侯万儒 《四川师范学院学报（自然科学版）》 2003年第3期330-334,共5页

本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位... 本实验利用PCR-RFLP技术分析了约克夏和长白猪pGH基因ApaⅠ酶切位点多态性及其与生产性能的关系.结果表明,在pGH基因序列中共检测到5种基因型,4种等位基因,基因型频率和等位基因频率在2个猪品种间分布差异不显著;约克夏ApaⅠ酶切多态位点中,AC基因型个体在165日龄体重和70-165日龄日增重上显著高于AA基因型个体(P<0.1);但长白猪ApaⅠ多态位点不同基因型在这两个生产性状上的差异不显著. 展开更多

关键词 猪生长激素基因 pGH基因全序列 ApaⅠ酶切位点多态性 生产性能 PCR-RFLP技术 品种选育

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猪生长激素基因ApaⅠ酶切位点多态性分析 被引量：7

4

作者 邢晋祎 帅素容 +1 位作者 李学伟 乔绍权 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2002年第5期44-46,共3页

利用 PCR- RFL P技术 ,分析了大约克猪和长白猪 GH基因的 Apa 酶切位点多态性。结果表明 ,在p GH基因序列中共检测到 5种基因型和 4种等位基因 ;基因型频率和等位基因频率在 2个猪种间分布差异不显著。

关键词 猪 生长激素 基因 APA I酶 切位点 多态性分析

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香猪生长激素基因不同基因型对生长性能的影响 被引量：6

5

作者 俞沛初 郭传甲 +2 位作者 华修国 朱淑文 顾金辉 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2006年第4期326-329,共4页

利用PCR-RFLPs技术,检测香猪生长激素基因ApaI酶切位点多态性,并分析不同基因型对个体初生重、2月龄体重、4月龄体重、平均日增重、4月龄体长和4月龄胸围等生长性能的影响。结果表明,香猪生长激素基因ApaI酶切后产生3种基因型和2种等位... 利用PCR-RFLPs技术,检测香猪生长激素基因ApaI酶切位点多态性,并分析不同基因型对个体初生重、2月龄体重、4月龄体重、平均日增重、4月龄体长和4月龄胸围等生长性能的影响。结果表明,香猪生长激素基因ApaI酶切后产生3种基因型和2种等位基因,AB基因型和AA基因型香猪的4月龄体重、0￣4月龄平均日增重均极显著地低于BB基因型香猪(P<0.01),4月龄体长也显著低于BB基因型香猪(P<0.05),提示AB和AA基因型可能是香猪矮小性的有利基因型。 展开更多

关键词 香猪 生长激素基因 多态性 生长性能

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外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究 被引量：3

6

作者 张志红 刘桂生 +1 位作者 张玉廉 陈清轩 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期227-229,共3页

外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究张志红刘桂生张玉廉陈清轩（中国科学院发育生物学研究所北京１０００８０）自１９８２年Ｐａｌｍｉｔｅｒ［１］等人给小鼠受精卵雄原核注射大鼠生长激素基因培养成功“超级”鼠以来，由... 外源猪生长激素基因在金鱼体内的整合与表达研究张志红刘桂生张玉廉陈清轩（中国科学院发育生物学研究所北京１０００８０）自１９８２年Ｐａｌｍｉｔｅｒ［１］等人给小鼠受精卵雄原核注射大鼠生长激素基因培养成功“超级”鼠以来，由于人们认识到转基因技术导致动植物品... 展开更多

关键词 猪生长激素 生长激素 基因整合 基因表达 金鱼

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猪GH基因全序列PCR-RFLPs研究 被引量：3

7

作者 帅素容 李学伟 邢晋祎 《四川农业大学学报》 CSCD 2003年第4期334-337,共4页

实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富... 实验利用PCR-RFLPs技术分析了大约克猪和长白猪GH基因的BstⅪ和HhaⅠ两种内切酶酶切位点多态性。结果表明,在所检约克夏猪和长白猪两个品种中,pGH基因全序列内仅有1个BstⅪ酶切位点,未发现BstⅪ酶切位点多态性;pGH基因全序列中存在丰富的HhaⅠ酶切位点多态性,约克夏猪中有10种带型,长白猪中检出了8种带型,其中B带型频率最高,长白猪中为41 67%,约克夏猪中占31 11%,二者差异极显著(P<0 01)。其他各带型频率分布在两品种间差异不显著。 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 PCR-RFLPS GH基因 大约克猪 长白猪

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SYBR GreenⅠ荧光定量PCR法检测转双基因猪pGH基因与IGF-1基因的表达 被引量：2

8

作者 胡义洁 吴明明 +1 位作者 朱艳菲 孙金海 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2014年第13期16-21,共6页

为确定猪生长激素基因(pGH)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况,利用SYBR GreenⅠReal-time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pGH基因与IGF-1基因的... 为确定猪生长激素基因(pGH)与胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在F0代保育期转双基因猪和同窝非转基因猪体内mRNA水平的表达差异情况,利用SYBR GreenⅠReal-time PCR法检测精子介导纳米基因载体法获得的F0代2月龄转基因猪pGH基因与IGF-1基因的mRNA表达水平,根据荧光定量结果绘制熔解曲线和扩增曲线图谱,分析图谱并用F=(1+E)-ΔΔCt公式计算其相对表达量。结果表明:F0代转双基因猪pGH基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.2倍,IGF-1基因的mRNA表达量是同期非转基因猪的1.53倍,说明这2种外源基因均成功导入,并能在猪体内表达。本实验建立了能够稳定测评家猪生长激素与胰岛素样生长因子-1基因表达水平的方法,为进一步分析pGH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响及转基因的实际应用提供了分子生物学方面的资料。 展开更多

关键词 转双基因 猪生长激素基因 胰岛素样生长因子-1基因 实时荧光定量PCR

原文传递

猪生长激素启动子的克隆及功能分析 被引量：1

9

作者 阮楠 张明军 +2 位作者 鞠辉明 白立景 赵为民 《安徽农业科学》 CAS 2012年第6期3356-3358,共3页

[目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧... [目的]克隆猪生长激素启动子,确定其启动子核心序列和主要的顺式作用元件。[方法]根据NCBI上公布的序列设计引物,PCR扩增了猪生长激素5’端-1 821～+61 bp的序列,并通过移步缺失的方法,获得9段长短不一的启动子序列,将其分别构建到双荧光素酶表达载体pGL3-basic上。通过重组质粒瞬时转染大鼠垂体瘤细胞(GH3)、猪髋动脉血管内皮细胞(PIEC)和猪肾细胞(PK15)和转染后细胞荧光素酶活性的测定,检测这些5’末端缺失质粒在垂体及非垂体细胞中的相对转录活性。[结果]成功扩增了猪GH基因5’上游启动区1 882 bp的片段,并构建了9个pGL3-mGH promoter报告基因载体;双荧光素酶报告基因检测系统证实插入报告基因载体中的启动子具有非常强的细胞特异性。[结论]猪生长激素特异性在垂体细胞中表达,其最小启动子位于-110 bp以内,启动子区-218～-110 bp和-429～-218 bp间存在正向调控元件。 展开更多

关键词 猪生长激素启动子 基因表达 调控

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转基因猪体内外源基因的整合鉴定 被引量：1

10

作者 刘桂生 陈清轩 +2 位作者 王菁 魏庆信 陈永福 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第3期279-280,共2页

外源猪生长激素基因被导入湖北白猪．为避免羊、猪之间在金属硫蛋白启动上的同源性而造成ＰＣＲ检测结果的假阳性，分别将ＰＣＲ合成反应的两个引物设计在羊金属硫蛋白基因启动子一侧和猪生长激素一侧，使ＰＣＲ合成反应的结果特异地反... 外源猪生长激素基因被导入湖北白猪．为避免羊、猪之间在金属硫蛋白启动上的同源性而造成ＰＣＲ检测结果的假阳性，分别将ＰＣＲ合成反应的两个引物设计在羊金属硫蛋白基因启动子一侧和猪生长激素一侧，使ＰＣＲ合成反应的结果特异地反映外源基因的整合性，准确地鉴定出转基因猪．ＤＮＡ印迹分析结果表明，４３头待检仔猪中有６头呈外源基因整合阳性． 展开更多

关键词 猪 生长激素基因 转基因猪 整合 鉴定

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猪垂体总cDNA的合成和编码猪生长激素成熟肽DNA序列的PCR扩增

11

作者 王建荣 杨颐 +3 位作者 龚晓磊 张平 顾朝旭 赵洪兴 《上海农业学报》 CSCD 1994年第2期17-21,共5页

以猪垂体ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（１２～１８）为反转录引物，在ＡＭＶ－ＲＴ的催化下，先合成ｃＤＮＡ第一链，再以ＲＮａｓｅＨ降解的ｍＲＮＡ小分子为引物、ｓｓ－ｃＤＮＡ为模板，在Ｅ．ｃｏｌｔＤＮＡＰｏｌ．Ｉ的催... 以猪垂体ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）（１２～１８）为反转录引物，在ＡＭＶ－ＲＴ的催化下，先合成ｃＤＮＡ第一链，再以ＲＮａｓｅＨ降解的ｍＲＮＡ小分子为引物、ｓｓ－ｃＤＮＡ为模板，在Ｅ．ｃｏｌｔＤＮＡＰｏｌ．Ｉ的催化下合成ｃＤＮＡ第二链，并用Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡｌｉｇａｓｅ连接缺口和Ｔ４ＤＮＡＰｏｌ补齐末端，以获得长度完整的ｄｓ－ＣＤＮＡ分子。根据已知的ｐＧＨ基因序列，设计并合成了一对特异引物分子，以总ｃＤＮＡ为模板，进行ＰＣＲ扩增，分子杂交证明，获得的扩增片段即为侧翼带有重组位点和附加密码的编码ｐＧＨ成熟肽的ＤＮＡ序列。 展开更多

关键词 反转录 DNA 猪 生长激素基因

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注射pGRF基因质粒对猪血液生理生化指标和肉品质的影响 被引量：2

12

作者 张金霞 周占琴 +4 位作者 唐湘方 张宏福 刘雨田 卫星辉 丁国庆 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2010年第3期45-49,共5页

通过检测注射pGRF基因质粒(pig growth hormone-releasing factor gene plasmid)后生长猪血液生化指标与肌肉品质指标,探讨该制剂对生长猪的健康水平、肉品质和安全性的影响。将8头二元杂交、60日龄左右的阉后公猪随机分为两组,一组注射... 通过检测注射pGRF基因质粒(pig growth hormone-releasing factor gene plasmid)后生长猪血液生化指标与肌肉品质指标,探讨该制剂对生长猪的健康水平、肉品质和安全性的影响。将8头二元杂交、60日龄左右的阉后公猪随机分为两组,一组注射pGRF基因质粒,一组注射等量生理盐水,进行了60 d对比试验,于处理后第7、14、28、56天早晨空腹采血制备血清,测定生化指标。结果表明:注射pGRF基因质粒后第14天,除血清尿素氮提高39.88%外,血糖、尿素氮、肌酐、甘油三酯、胆固醇浓度变化均不显著。由此可见,注射pGRF基因质粒后,除血清尿素氮升高外,生长猪的其他生化指标都没有明显变化。于处理后第60天,每组随机选3头屠宰,称量器官质量,并采样测定肉品质。与对照组相比,试验组猪肉剪切力下降7.28%(P>0.05),滴水损失降低20.86%(P>0.05),而熟肉率提高4.38%(P>0.05);但肌间脂肪比对照组提高68.83%(P<0.05);肉色a*值降低14.30%(P>0.05),b*、L*值有所提高,但差异均未达到显著水平;pGRF基因质粒对胴体pH影响不明显,器官与胴体的比值差异均未达显著水平(P>0.05),其中从平均值看心脏质量比例略有增加,脾、肾比例有所下降。从本试验结果看,注射pGRF基因质粒对各项猪肉品质指标无不良影响,还可改善肌肉嫩度,降低滴水损失和提高肌间脂肪含量。 展开更多

关键词 PGRF基因质粒 猪 生化指标 肉品质

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